CN109825566A

CN109825566A - 基因cyp11b2外显子的pcr引物组、试剂盒、扩增体系和检测方法

Info

Publication number: CN109825566A
Application number: CN201811606230.7A
Authority: CN
Inventors: 汪进平; 罗俊峰; 陈云弟
Original assignee: Review Genetic Technology (suzhou) Co Ltd
Current assignee: Review Genetic Technology (suzhou) Co Ltd
Priority date: 2018-12-26
Filing date: 2018-12-26
Publication date: 2019-05-31
Anticipated expiration: 2038-12-26
Also published as: CN109825566B

Abstract

本发明涉及遗传病基因检测领域，具体涉及基因CYP11B2外显子的PCR引物组、试剂盒、扩增体系和检测方法。公开了一种扩增人类CYP11B2(Gene ID：1585)基因1‑9号外显子的14个PCR引物的核苷酸序列，共7对，包含该引物组的试剂盒或者扩增体系可以用于醛固酮合成酶缺陷症致病基因CYP11B2基因突变的直接检测，也可用于对二代测序结果中CYP11B2基因突变的验证，具有特异性强，快速高效等优点。

Description

基因CYP11B2外显子的PCR引物组、试剂盒、扩增体系和检测方法

技术领域

本发明涉及遗传病基因检测领域，具体涉及基因CYP11B2外显子的PCR引物组、试剂盒、扩增体系和检测方法。

背景技术

多囊卵巢综合症(polycystic ovarian syndrome，PCOS)属于女性内分泌症候群疾病之一，在育龄女性中较为常见，患者常表现为慢性无排卵以及分泌高雄激素，导致月经异常或不孕。PCOS的发病机制目前尚不清楚，但有文献报道与高雄性激素的调控基因CYP11B2 有关。

CYP11B2基因位于8号染色体长臂上，共有9个外显子(uc003yxk.1)，负责编码醛固酮合成酶，目前，遗传筛查的应用趋势越来越趋向于使用多个基因的中大型panel，以往的这种通过长片段PCR(Polymerase Chain Reaction，多聚酶链式反应)和巢式PCR将CYP11B2基因扩增出来再进行测序的方式。

但是普通PCR以及高通量测序技术很难区分与CYP11B2基因相似的基因，给临床诊断带来了困扰，且上述测序方式不能很好与现有的二代测序基因相互配合，也不符合目前遗传筛查的技术发展趋势。

发明内容

针对现有技术中存在不足，本发明所提供的技术方案是：

基因CYP11B2外显子的PCR引物组，所述引物组包括7对引物，详述如下：

基因CYP11B2外显子1的引物组为正向引物SEQ(Sequence，序列表)ID(Identity，身份标识)NO：1和反向引物SEQ ID NO：2；

基因CYP11B2外显子2的引物组为正向引物SEQ ID NO：3和反向引物SEQ ID NO：4；

基因CYP11B2外显子3-4的引物组为正向引物SEQ ID NO：5和反向引物SEQ ID NO：6；

基因CYP11B2外显子5的引物组为正向引物SEQ ID NO：7和SEQ ID反向引物NO：8；

基因CYP11B2外显子6的引物组为正向引物SEQ ID NO：9和反向引物SEQ ID NO：10；

基因CYP11B2外显子7-8的引物组为正向引物SEQ ID NO：11和反向引物SEQ IDNO：12；

基因CYP11B2外显子9的引物组为正向引物SEQ ID NO：13和反向引物SEQ ID NO：14；

上述引物的核苷酸序列分别如下所示：

SEQ ID NO：1GCAGGTCCAGAGCCAGTTCTCC，

SEQ ID NO：2GGCAGCACCACAGACCAGCATGTGCG，

SEQ ID NO：3CTGTGAAGCCGCTAATCCAGGAGCAGGGAC，

SEQ ID NO：4TGCAGACGCGACCCCACAGGATGGA，

SEQ ID NO：5CCTGCTTAGACCTGAGTGGCCTTTGCCCAGA，

SEQ ID NO：6CCAGCCTCGCACCAATCTCCCCGGCAC，

SEQ ID NO：7GGAGAATTTGGGATGAGAGCAGGGAGATTTGGC，

SEQ ID NO：8CCTGTAGCCTGGGGATGGGGAACGTC，

SEQ ID NO：9CTGTTTTTGCTCAGGGCATGGATGTCTCCACCA，

SEQ ID NO：10GCCCCACGTTAATCCCCAGGGTGTTGT，

SEQ ID NO：11GGGCTCAGCAGGTGCAAGGAAGTACTTA，

SEQ ID NO：12GCTCCACCCCACTCCCCTAGTCCCCAG，

SEQ ID NO：13TCAGCATAATTGTTGCACCTGGGACGATGGGT，

SEQ ID NO：14GAGCCAGCGCTGGGAGTAGAGTCAAGA。

所述引物的碱基的修饰，具体包括：

荧光基团、RNA碱基、2F-RNA碱基、XNA碱基、C3 spacer、C6 Spacer、Spacer 9、Spacer 18、PO3、Biotin、SH C6或5-硝基吲哚中的一种或多种。

所述试剂盒和反应体系含有权利要求1所述的PCR引物组。

所述反应体系还包括DNA聚合酶，缓冲液，Rnase(核糖核酸)酶， dNTP(deoxy-ribonucleotide triphosphate，脱氧核糖核苷酸)混合物；所述dNTP混合物为dATP (腺嘌呤脱氧核糖核苷酸)、dTTP(胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸)、dGTP(鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸)和dCTP(胞嘧啶脱氧核糖核苷酸)。

所述DNA聚合酶为ABI amplitaq DNA聚合酶(ABI扩增型耐热DNA聚合酶)，NEBvent DNA聚合酶，TaKaRa LA Taq DNA聚合酶或Clontech Titanium Taq DNA聚合酶中的一种或几种。

基因CYP11B2外显子的PCR检测方法，包括以下步骤：

获取样本，并从所述样本中提取基因组DNA，并采用Nanodrop(超微量分光光度计)测定DNA浓度和A260/A280(核酸纯度的指示值)的比值；所述样品为血液样品、唾液样本、精液样本、细胞或组织中的任一一种；

按照预定的配制方法配制包含上述PCR引物组的PCR反应体系；

将所述PCR反应体系混合离心后，在预设的扩增程序下进行PCR反应，获得PCR扩增产物；

将所述PCR扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳法和Sanger(双脱氧链终止法)测序法进行检测。

所述按照预定的配制方法配制PCR反应体系的方法具体包括：

选取所述A260/280比值在1.8-2.0的基因组DNA，用去核酸酶水稀释至10ng/μL；

选取权利要求1所述的引物组，用去核酸酶水稀释至10μmol/L；

按照预定的配比将所述基因组DNA，PCR引物组，DNA聚合酶，缓冲液，Rnase酶，dNTP混合物混合获得PCR反应体系；

所述配比具体包括：gDNA(10ng/μL)1份，10×Titanium Taq PCR Buffer 2份，10mmol/L dNTP混合物0.4份，正向引物(10μmol/L)0.4份，反向引物(10μmol/L)0.4份， Rnase酶(5mU/μL)2份，50×Titanium Taq DNA聚合酶0.4份，去核酸酶水13.4份。

所述预设的扩增程序为：

第一步，94℃热启动和预变性1min；第二步，94℃变性30s；第三步65℃退火和延伸1min；

循环所述第二、三步40次，4℃保存。

有益效果：

本发明开发的基因CYP11B2外显子的PCR引物组、试剂盒、扩增体系及其检测方法具有特异性强的特性，其临床应用广泛，可用于检测和验证CYP11B2基因突变，应用于一代Sanger测序、高通量测序、PCR扩增、分子杂交、酶联免疫等技术领域。

附图说明

图1为CYP11B2基因1-9号外显子PCR扩增产物电泳图；

图2为CYP11B2基因1号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果；

图3为CYP11B2基因2号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果；

图4为CYP11B2基因3-4号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果；

图5为CYP11B2基因5号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果

图6为CYP11B2基因6号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果

图7为CYP11B2基因7-8号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果；

图8为CYP11B2基因9号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果；

图9为CYP11B2基因2，5，6号外显子PCR扩增产物电泳图；

图10为实施例六给出的CYP11B2基因2号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果；

图11为实施例六给出的CYP11B2基因5号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果；

图12为实施例六给出的CYP11B2基因6号外显子部分扩增产物的Sanger测序结果。

具体实施方式

为了更加清楚阐述本发明的技术内容，在此结合具体实施例予以详细说明，显然，所列举的实施例只是本技术方案的优选实施方案，本领域的技术人员可以根据所公开的技术内容显而易见地得出的其他技术方案仍属于本发明的保护范围。

实施例1

本发明通过引物设计原则和多种计算机程序，设计获得了多种基因CYP11B2的PCR引物组，并通过大量实验筛选出特异性高的引物序列，共有7对引物，每对引物组对应基因CYP11B2不同的外显子，具体如下所述：

基因CYP11B2外显子1的引物组为正向引物SEQ ID NO：1和反向引物SEQ ID NO：2；

上述引物的核苷酸序列分别如下所示：

SEQ ID NO：1 GCAGGTCCAGAGCCAGTTCTCC，

SEQ ID NO：2 GGCAGCACCACAGACCAGCATGTGCG，

SEQ ID NO：3 CTGTGAAGCCGCTAATCCAGGAGCAGGGAC，

SEQ ID NO：4 TGCAGACGCGACCCCACAGGATGGA，

SEQ ID NO：5 CCTGCTTAGACCTGAGTGGCCTTTGCCCAGA，

SEQ ID NO：6 CCAGCCTCGCACCAATCTCCCCGGCAC，

SEQ ID NO：7 GGAGAATTTGGGATGAGAGCAGGGAGATTTGGC，

SEQ ID NO：8 CCTGTAGCCTGGGGATGGGGAACGTC，

SEQ ID NO：9 CTGTTTTTGCTCAGGGCATGGATGTCTCCACCA，

SEQ ID NO：10 GCCCCACGTTAATCCCCAGGGTGTTGT，

SEQ ID NO：11 GGGCTCAGCAGGTGCAAGGAAGTACTTA，

SEQ ID NO：12 GCTCCACCCCACTCCCCTAGTCCCCAG，

SEQ ID NO：13 TCAGCATAATTGTTGCACCTGGGACGATGGGT，

SEQ ID NO：14 GAGCCAGCGCTGGGAGTAGAGTCAAGA。

其中引物碱基上的修饰包括但不限于：荧光基团(6-FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas Red、Quasar 670、Cy5、CY5.5、Methylene Blue、BHQ1、BHQ2、 Dabcyl)修饰、RNA碱基、2F-RNA碱基、XNA碱基、C3spacer、C6Spacer、Spacer 9、 Spacer 18、PO3、Biotin、SH C6和5-硝基吲哚等。

实施例2

本发明公开了含有上述PCR引物组的试剂盒和PCR反应体系，其中反应体系包括以下成分：实施例1中所述的引物组中的任一一组引物组，DNA聚合酶，缓冲液，Rnase酶，dNTP混合物，其中DNA聚合酶为ABI amplitaq DNA聚合酶，NEB vent DNA聚合酶， TaKaRa LATaq DNA聚合酶或Clontech Titanium Taq DNA聚合酶中的一种或几种；dNTP 为dATP、dTTP、dGTP和dCTP脱氧核糖核苷。

实施例3

本实施例包括基因CYP11B2外显子的PCR检测方法，具体包括：

基因组DNA提取：

本实施例以从血液中提取基因组DNA为例，本血液抽提试剂盒购自天根生化科技有限公司，具体步骤如下：

1)取200μL血液样本到2.0mL的离心管中。若提取小于200μL血液样品时，可加入缓冲液GS补足体积至200μL，再进行下一步实验。

2)加入200μL Buffer GB和20μL蛋白酶K溶液至上述样品中，充分振荡混匀。

3)在56℃孵育10min，期间颠倒混匀数次，溶液应变清亮(若溶液未彻底变清亮，请延长裂解时间至溶液清亮为止)。

4)室温放置2-5min后加入350μL Bufier BD，充分颠倒混匀，短暂离心将反应液收集至管底。

5)将所有溶液分转移到离心柱中(离心柱放入收集管中)，12000rpm(～13400×g)离心 30sec，弃废液，将离心柱放回收集管中。

6)加入500μL Buffer GDB，12000rpm(～13400×g)离心30sec，弃废液，将离心柱放回收集管中。

7)加入600μL Buffer PWB，12000rpm(～13400×g)离心30sec，弃废液，将离心柱放回收集管中。

8)重复上一步骤。

9)12000rpm(～13400×g)离心2min，将离心柱转入一个新的1.5mL离心管中，开盖室温放置5min，以彻底风干吸附膜上的残余的缓冲液。

10)向离心柱的吸附膜中心悬空加入50μL洗脱液TE，室温放置2min，12000rpm(～13400 ×g)离心2min，将洗脱液收集到离心管中。

将所述获得基因组DNA用Nanodrop测定DNA浓度和A260/A280的比值。应当说明，本发明公开的扩增人类CYP11B2基因外显子的PCR引物组、试剂盒和扩增体系不仅仅适用于从血液样本中抽提得到的DNA，还包括从唾液，精液，细胞，组织，FFPE(石蜡包埋)等样本中抽提合格的DNA。

PCR反应体系的配制：

按照以下体系在灭菌PCR管中配制PCR反应体系，其中基因组DNA(gDNA)， A260/280比值在1.8-2.0之间，用去核酸酶水稀释至10ng/μL；正向引物和反向引物为如 SEQ IDNO：1-18所示碱基序列的引物，用去核酸酶水稀释至10μmol/L。其中20μL PCR 反应体系配制比例如表1所示。

表1 PCR反应体系各原料比例

PCR扩增：

将PCR管混匀离心后放置在PCR热循环仪中，设置如下扩增程序并启动PCR反应，其扩增程序为：第一步，94℃热启动和预变性1min；第二步，94℃变性30s；第三步65℃退火和延伸1min；循环第二步和第三步共40次；4℃保存。

实施例4

本实施例具体公开了采用琼脂糖凝胶电泳分析实施例3获得的PCR扩增产物，其具体步骤如下：

1)琼脂糖凝胶的配制：称取1.5g的琼脂糖，放入200mL的锥形瓶中，加入100mL 的TAE缓冲液(1x)，在微波炉中以中高火加热2-3min至溶液清亮，室温冷却8-10min(约 65℃)，加入GelRed染料10μL，倒胶，插入齿梳，室温冷却20min后即可使用。

2)点样和电泳：吸取1μL实施例3PCR扩增的产物，混合1μL 6×loading buffer和4μL 超纯水，加入上样孔，并点上6μL Marker；盖上电泳槽盖，以120V电泳30min，电泳完后于凝胶成像系统中拍照保存。

其检测结果如附图1所示，其中8泳道为1500bp Marker，片段长度由上而下依次为1500bp，1000bp，900bp，800bp，700bp，600bp，500bp，400bp，300bp，200bp，100bp；1泳道为外显子1的扩增产物，大小为503bp；2泳道为外显子2的扩增产物，大小为447 bp；3泳道为外显子3-4的扩增产物，大小为896bp；4泳道为外显子5的扩增产物，大小为383bp；5泳道为外显子6的扩增产物，大小为491bp；6泳道为外显子7-8的扩增产物，大小为729bp；7泳道为外显子9的扩增产物，大小为515bp。

由图1可见，采用本发明的引物扩增产物特异性高，无非特异性扩增条带产生。

实施例5

将PCR产物委托铂尚生物技术有限公司进行Sanger测序，并分析测序结果，其检测结果如图2-图8所示，可见扩增产物与CYP11B2基因参考序列一致，而非CYP11B2基因的同源基因序列，说明采用本发明的引物扩增产物特异性高。

实施例6

通过在基因组中加入高比例的CYP11B2同源基因模板进一步检验引物对的特异性，具体方法如下：

随机选取CYP11B2基因的外显子2，外显子5和外显子6，在苏州金唯智生物科技有限公司合成对应的同源基因外显子PE2，PE5，PE6并克隆到pUC57质粒载体中。

按照实施例3所述从血液中提取正常人gDNA，在PCR反应体系中分别按照真基因∶同源基因＝1∶1000和真基因∶同源基因＝1∶10000的比例加入CYP11B2基因的外显子2，外显子5和外显子6的同源基因PE2，PE5，PE6质粒模板。按照以下体系在灭菌PCR管中配制PCR反应体系。

20μL PCR反应体系如表2所示：

将PCR管混匀离心后放置在PCR热循环仪中，设置如下扩增程序并启动PCR反应。

扩增程序：

94℃热启动和预变性1min；94℃变性30sec，65℃退火和延伸1min，共40个循环； 4℃保存。

按照实施例4所述方法对上步扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，由图9所示，其中 1泳道为4500bp Marker，片段长度由上而下依次为4500bp，3000bp，2000bp，1200bp，800bp，500bp，200bp；2，3泳道为外显子2的扩增产物，大小为447bp；4，5泳道为外显子5的扩增产物，大小为383bp；6，7泳道为外显子6的扩增产物，大小为491bp。 2，4，6泳道PCR产物模板为真基因∶同源基因＝1∶1000；3，5，7泳道PCR产物模板为真基因∶同源基因＝1∶10000。扩增产物大小和预期目的片段大小一致，并对PCR产物进行sanger测序和NGS测序。

通过对sanger测序结果进行分析，发现在真基因∶同源基因＝1∶1000和真基因∶同源基因＝1∶10000的外显子2，外显子5以及外显子6的PCR产物峰图单一(如图10-12)，并且均为真基因序列，说明所使用的引物对特异性高，在一万倍的同源基因干扰下也能准确扩增目标基因。图10中图中第一行碱基序列CYP11B2基因参考序列，第二行碱基序列为CYP11B2真基因∶同源基因＝1∶1000的Sanger测序结果，第三行碱基序列为CYP11B2 真基因∶同源基因＝1∶10000的Sanger测序结果，第四行碱基序列为同源基因参考序列。图11中第一行碱基序列为CYP11B2基因参考序列，第二行碱基序列为CYP11B2真基因∶同源基因＝1∶1000的Sanger测序结果，第三行碱基序列为CYP11B2真基因∶同源基因＝1∶ 10000的Sanger测序结果，第四行碱基序列为同源基因参考序列。图12中第一行碱基序列为CYP11B2基因参考序列，第二行碱基序列为CYP11B2真基因∶同源基因＝1∶1000 的Sanger测序结果，第三行碱基序列为CYP11B2真基因∶同源基因＝1∶10000的Sanger 测序结果，第四行碱基序列为同源基因参考序列。

对NGS测序结果进行分析，在CYP11B2的外显子2，外显子5，外显子6各区域分别统计真基因和同源基因的reads数(如表3)。在真基因∶同源基因＝1∶1000的比例中， CYP11B2的外显子2，外显子5，外显子6在PCR扩增产物中的比例分别为95.27％，99.81％， 99.46％，富集倍数分别为953倍，998倍，995倍。在真基因∶同源基因＝1∶10000的比例中，CYP11B2的外显子2，外显子5，外显子6在PCR扩增产物中的比例分别为：84.69％， 86.04％，87.42％，富集倍数分别为8469倍，8604倍，8742倍。此结果更加充分地说明了本发明引物对特异性高，在高浓度同源基因的干扰下，也可以高效地富集真基因序列。

表3 CYP11B2外显子2，5，6及其同源基因reads数

根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行适当的变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式，对本发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。

。

序列表

<110> 阅尔基因技术（苏州）有限公司

<120> 基因CYP11B2外显子的PCR引物组、试剂盒、扩增体系和检测方法

<160> 14

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 1

gcaggtccag agccagttct cc 22

<210> 2

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 2

ggcagcacca cagaccagca tgtgcg 26

<210> 3

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 3

ctgtgaagcc gctaatccag gagcagggac 30

<210> 4

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 4

tgcagacgcg accccacagg atgga 25

<210> 5

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 5

cctgcttaga cctgagtggc ctttgcccag a 31

<210> 6

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 6

ccagcctcgc accaatctcc ccggcac 27

<210> 7

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 7

ggaagaattt gggatgagag cagggagttt ggc 33

<210> 8

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 8

cctgtagcct ggggatgggg aacgtc 26

<210> 9

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 9

ctgtttttgc tcagggcatg gatgtctcca cca 33

<210> 10

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 10

gccccacgtt aatccccagg gtgttgt 27

<210> 11

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 11

gggctcagca ggtgcaagga agtactta 28

<210> 12

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 12

gctccacccc actcccctag tccccag 27

<210> 13

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 13

tcagcataat tgttgcacct gggacgatgg gt 32

<210> 14

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工引物(Artificial)

<400> 14

gagccagcgc tgggagtaga gtcaaga 27

Claims

1.基因CYP11B2外显子的PCR引物组，其特征在于，所述引物组包括7对引物，详述如下：

基因CYP11B2外显子7-8的引物组为正向引物SEQ ID NO：11和反向引物SEQ ID NO：12；

上述引物的核苷酸序列分别如下所示：

SEQ ID NO：1 GCAGGTCCAGAGCCAGTTCTCC，

SEQ ID NO：2 GGCAGCACCACAGACCAGCATGTGCG，

SEQ ID NO：3 CTGTGAAGCCGCTAATCCAGGAGCAGGGAC，

SEQ ID NO：4 TGCAGACGCGACCCCACAGGATGGA，

SEQ ID NO：5 CCTGCTTAGACCTGAGTGGCCTTTGCCCAGA，

SEQ ID NO：6 CCAGCCTCGCACCAATCTCCCCGGCAC，

SEQ ID NO：7 GGAGAATTTGGGATGAGAGCAGGGAGATTTGGC，

SEQ ID NO：8 CCTGTAGCCTGGGGATGGGGAACGTC，

SEQ ID NO：9 CTGTTTTTGCTCAGGGCATGGATGTCTCCACCA，

SEQ ID NO：10 GCCCCACGTTAATCCCCAGGGTGTTGT，

SEQ ID NO：11 GGGCTCAGCAGGTGCAAGGAAGTACTTA，

SEQ ID NO：12 GCTCCACCCCACTCCCCTAGTCCCCAG，

SEQ ID NO：13 TCAGCATAATTGTTGCACCTGGGACGATGGGT，

SEQ ID NO：14 GAGCCAGCGCTGGGAGTAGAGTCAAGA。

2.根据权利要求1所述的基因CYP11B2外显子的PCR引物组，其特征在于，所述引物的碱基的修饰，具体包括：

荧光基团、RNA碱基、2F-RNA碱基、XNA碱基、C3 spacer、C6 Spacer、Spacer 9、Spacer18、PO3、Biotin、SH C6或5-硝基吲哚中的一种或多种。

3.基因CYP11B2外显子的PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1或2所述的PCR引物组。

4.基因CYP11B2外显子的PCR反应体系，其特征在于，所述反应体系含有权利要求1或2所述的PCR引物组。

5.根据权利要求4所述的PCR反应体系，其特征在于，所述反应体系还包括DNA聚合酶，缓冲液，Rnase酶，dNTP混合物；所述dNTP混合物包括dATP、dTTP、dGTP和dCTP。

6.根据权利要求5所述的PCR反应体系，其特征在于，所述DNA聚合酶为ABI amplitaqDNA polymerase，NEB vent DNA polymerase，TaKaRa LA Taq DNA聚合酶或ClontechTitanium Taq DNA聚合酶中的一种或几种。

7.基因CYP11B2外显子的PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取样本，并从所述样本中提取基因组DNA，并采用Nanodrop测定DNA浓度和A260/A280的比值；所述样品为血液样品、唾液样本、精液样本、细胞或组织中的任一一种；

按照预定的配制方法配制权利要求4-6任一所述的PCR反应体系；

将所述PCR扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳法和Sanger测序法进行检测。

8.根据权利要求7所述的基因CYP11B2外显子的PCR检测方法，其特征在于，所述按照预定的配制方法配制PCR反应体系的方法具体包括：

选取所述A260/280比值在1.8-2.0的基因组DNA，用缓冲液稀释至10ng/μL；

选取权利要求1所述的引物组，用缓冲液稀释至10μmol/L；

所述配比具体包括：gDNA(10ng/μL)1份，10×Titanium Taq PCR Buffer 2份，10mmol/L dNTP混合物0.4份，正向引物(10μmol/L)0.4份，反向引物(10μmol/L)0.4份，Rnase酶(5mU/μL)2份，50×Titanium Taq DNA聚合酶0.4份，去核酸酶水13.4份。

9.根据权利要求7所述的基因CYP11B2外显子的PCR检测方法，其特征在于，所述预设的扩增程序为：

循环所述第二、三步40次，4℃保存。

10.权利要求1或2所述的PCR引物组在检测和验证CYP11B1基因突变上的应用。