CN109825509B - 一种柞蚕抗菌肽基因、工程菌、工程菌筛选方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种柞蚕抗菌肽Moricin C4基因、工程菌、工程菌筛选方法及其应用，属于分子生物学、酶学、基因工程技术领域。本发明所述柞蚕抗菌肽的核苷酸序列如SEQ NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ NO.2所示，本发明通过诱导巴斯德毕赤酵母菌对柞蚕抗菌肽Moricin C4基因的成熟肽进行表达，并公开了一种快速筛选高效表达抗菌肽的酵母转化子的方法。本发明对于丰富抗菌肽种类、增加抗菌肽的应用、增加抗菌肽产量、降低成本，开发针对革兰氏阳性菌，特别是金黄色葡萄球菌的抗菌药物具有重要的意义。

Description

一种柞蚕抗菌肽基因、工程菌、工程菌筛选方法及其应用

技术领域

本发明属于分子生物学、酶学、基因工程技术领域。具体涉及一种柞蚕抗菌肽基因、工程菌、工程菌筛选方法及其应用。

背景技术

柞蚕等昆虫在被外界病原微生物入侵时，机体会产生一类叫做抗菌肽的活性小分子多肽。这类多肽在昆虫的先天性免疫防御机制中具有非常重要的作用，是昆虫抵抗外界侵害，保护自身机体的主要工具之一。自从1981年第一种抗菌肽(Cecropin)被从惜古比天蚕体内发现以来[Steiner,H.,et al.,Nature 1981,292(5820),246-8]，陆续有各种不同类型的抗菌肽被发现，其中包括Cecropins、Attacins、Moricins、Drosocins、Defensins等[Boman,H.G.,J Intern Med 2003,254(3),197-215；Zasloff,M.,Nature2002,415(6870),389-95]。

目前包括Moricin在内的昆虫抗菌肽蛋白正以其分子量小、抗菌谱广泛、作用迅速、对哺乳动物细胞不敏感、对温度和pH变化具有较好的耐受性而越来越受到重视[Haine,E.R.,et al.,Science 2008,322(5905),1257-9]。更为有特点的是抗菌肽在杀灭细菌时是通过电荷相互吸引而附着在细菌表面，造成细胞膜穿孔进而杀灭细菌的，这与抗生素需要识别细菌特异性靶位点的机制不同。而细胞的带电性能和表面结构不像靶位点那样容易发生改变，因此细菌很难对抗菌肽产生耐药性[Pandey,B.K.,et al.,Biochem J 2011,436(3),609-20]。这些特点使得抗菌肽被认为可以成为抗生素的替代品和有益补充，是一类很有发展前途的新型抗菌药物。

Moricin是1995年在研究家蚕血淋巴对金黄色葡萄球菌的抑制作用时被分离得到的[Hara,S.et al.,J Biol Chem 1995,270(50),29923-7]。一经发现，就以其针对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的强烈抑制作用，特别是针对革兰氏阳性菌具有比其它抗菌肽更高的活性而备受关注[Meister,M.et al.,Bioessays 1997,19(11),1019-26]。随着研究的深入，有越来越多不同亚型的Moricin被陆续发现，如：Moricin A1，Moricin B2，Moricin B3等。逐渐形成了一个新的抗菌肽家族[Oizumi,Y.,et al.,Biochim Biophys Acta 2005,1752(1),83-92]。

天然的抗菌肽来源虽多，但获取困难。目前化学合成与生物工程技术依然是生产抗菌肽的主要方法。对于Moricin等抗菌肽的制备来说，化学合成多采用多肽固相合成法。该方法成本高、稳定性差，合成过程中使用的DCM、DMF、哌啶等有机试剂用量大、毒性高，对周边环境有污染。而且合成的多肽产品很可能会有药物残留，存在着使用风险[陈心等,《生物技术》2006,16(1),81-83]。还有报道指出Moricin的羧基末端会形成特殊结构，化学方法合成困难[Hara,S.,et al.,Biochem Biophys Res Commun 1996,220(3),664-9]。

在用大肠杆菌制备抗菌肽的方法中，由于抗菌肽所具有的杀菌能力会对宿主菌产生抑制作用，通常需要采用融合表达的方式。载体构建时在抗菌肽上添加一段标签序列，表达结束后再切除标签，恢复抗菌活性。该方法步骤多、效率低，不适宜抗菌肽的大量表达。而且在重组蛋白的变性、复性操作及标签蛋白的切割过程中，抗菌肽的活性及安全性得不到保证[冯兴军等，《中国生物工程杂志》2006,26(03),68-72]。

巴斯德毕赤酵母作为一种应用广泛的真核表达系统，具有生长周期短、表达水平高、可对外源基因进行修饰和分泌表达的特点[Staley,C.A.,et al.,Gene 2012,496(2),118-27]，抗菌肽的大量制备可以利用该系统作为优选表达系统。

发明内容

针对现有技术在制备昆虫抗菌肽过程中的不足，本发明利用真核表达系统生长周期短、表达水平高、可对外源基因进行修饰和分泌表达的特点，提供了一种柞蚕抗菌肽Moricin C4基因、工程菌、工程菌筛选方法及其应用。

本发明的首要目的是，提供一种柞蚕抗菌肽Moricin C4的如SEQ NO.1所述的基因序列及如SEQ NO.2所述的氨基酸序列，具体的：

SEQ NO.1:

具体的，上述SEQ NO.1中大写字母(79-255bp)表示柞蚕抗菌肽Moricin C4编码区的碱基序列，有下划线的部分(79-147bp)为柞蚕抗菌肽Moricin C4信号肽碱基序列，黑体大写字母部分(148-255bp)为柞蚕抗菌肽Moricin C4成熟肽碱基序列。其余小写字母部分(1-78bp)为柞蚕抗菌肽Moricin C4基因的非编码区碱基序列。

SEQ No.2:

具体的，上述SEQ NO.2中非黑体大写字母部分(前23个氨基酸序列)为柞蚕抗菌肽Moricin C4信号肽氨基酸序列，黑体大写字母部分(第24-第58个氨基酸序列)为柞蚕抗菌肽Moricin C4成熟肽氨基酸序列。

本发明的另一目的是提供一种高效表达柞蚕抗菌肽Moricin C4的毕赤酵母工程菌的制备方法。具体的，通过如下技术方案予以实现：

用大肠杆菌诱导柞蚕蛹，恒温培养2d后，取脂肪体钢珠振荡破碎提取总RNA，并反转录为cDNA。分析柞蚕抗菌肽Moricin C4的基因序列，设计毕赤酵母工程菌构建用引物，PCR扩增得到Moricin C4的成熟肽基因序列。

具体的，上述技术方案中所述柞蚕抗菌肽Moricin C4基因的克隆，具体为：使用75％的乙醇-水溶液对柞蚕蛹进行体表消毒。以20～100μL/头的剂量注射新鲜的大肠杆菌菌液(E.Coli K12D31,)。室温诱导24～72h后，解剖柞蚕蛹，取脂肪体50～100mg转入无RNase离心管中。同时放入研磨钢珠，在液氮中制冷3～5分钟后，迅速转入研磨仪中，研磨2～6分钟，得到脂肪体粉末。加入适量TRIZOL(Invitogen，USA)试剂，按照试剂说明书要求提取柞蚕蛹脂肪体总RNA。反转录合成柞蚕脂肪体cDNA第一链。以此cDNA为模板进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳分析扩增结果。回收约170bp的特异性片段。

具体的，酵母表达载体的构建方法为：设计酵母表达载体构建引物。通过PCR扩增，得到柞蚕抗菌肽Moricin C4成熟肽基因片段。限制性内切酶Xho I和EcoR I酶解这一基因片段，与用同样酶酶解的酵母表达载体pPIC9K相连接。转化大肠杆菌DH5α，挑选重组质粒。提取质粒DNA，用SalI进行线性化酶切处理。取1～10μg线性化片段与50～100μL的GS115感受态细胞混合，冰浴10min后，迅速转入预冷的0.2cm电转杯中。以1.5～2.0kV、25μF、200Ω的条件电击，随即加入500～1000μL 1mol/L的预冷山梨醇。28～30℃静止孵育1～4h，再涂布到缺少组氨酸的MD固体培养基平板，28～30℃静止培养2-3d。

本发明的另一目的是提供一种快速筛选高效表达抗菌肽Moricin C4的酵母转化子的方法。具体的，通过如下技术方案予以实现：

将抗菌肽Moricin C4序列克隆至酵母表达载体pPIC9K，线性化处理后，电转化至毕赤酵母GS115体内。随机选取上述MD培养基上的酵母转化菌株接种于含有梯度浓度G418(0.25～4mg/mL)的YPD固体培养基上，28～30℃培养2～3d。挑选能够在含浓度大于1mg/mLG418的培养基上生长的酵母菌株，制备PCR模板，以pPIC9K质粒的通用鉴定引物，进行转化子的PCR鉴定。将鉴定正确的转化子分别接种到含有溶壁微球菌或金黄色葡萄球菌的YPM固体培养基上，倒置培养皿,每24h在培养皿的盖子上添加纯甲醇进行熏蒸，28～30℃培养5～7天，观察酵母菌落周围的抑菌圈情况。

挑选抑菌圈明显的转化子接种于BMGY培养基中，摇瓶培养2d后，更换BMMY培养基。以0.5％的甲醇浓度继续诱导培养5d。收集不同时间点的发酵上清用于柞蚕抗菌肽MoricinC4的分析。琼脂扩散法分析抗菌肽Moricin C4的抗菌活性和表达时相，Tricin-SDS-Page对分泌表达的抗菌肽Moricin C4进行检测。

进一步地，本发明提供了柞蚕抗菌肽在制备抗菌剂中的应用。

优选的，所述抗菌剂为金黄色葡萄球菌的抗菌剂。

具体应用方法如下：

将挑选出的酵母转化子，接种于BMGY培养基中。28～30℃振荡培养直至OD₆₀₀达到2-6左右。低速离心，收集菌体。将菌体重新悬浮于BMMY培养基中，28～30℃持续振荡培养6～9d。培养期间每24h添加甲醇一次，终浓度为0.5～1％。每24h取样一次，低温保存备用。

制备混有金黄色葡萄球菌的LB培养基平板。在平板上打孔，添加不同取样时间点的发酵上清，测定表达产物的活性。挑选抑菌圈直径最大时间点的发酵上清，冷冻干燥，体积浓缩至原来的1/20，进行20％浓度的Tricine-SDS Page检测，鉴定上清液中的目标蛋白。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

(1)本发明首次从柞蚕体内克隆得到了抗菌肽Moricin C4基因，该基因序列未见公开报道。它的公布对于丰富抗菌肽种类、增加抗菌肽的应用，开发针对革兰氏阳性菌，特别是耐药型金黄色葡萄球菌的抗菌药物，具有参考和应用的价值。

(2)本发明通过诱导巴斯德毕赤酵母对柞蚕抗菌肽Moricin C4基因的成熟肽进行表达，相比较于化学合成和大肠杆菌表达抗菌肽的方法，利用酵母表达成本低廉、有毒物质残留低，无需表达后再加工。而且宿主菌背景清楚，便于培养，蛋白后期修饰功能完善，特别适用于抗菌肽的大规模制备。这对于增加抗菌肽产量，降低相关产品的使用成本具有积极的作用。

(3)本发明提供了一种可快速筛选高效表达抗菌肽的酵母转化子的方法。利用指示菌与酵母菌共生的培养基，以甲醇熏蒸的方式对表达抗菌蛋白的酵母转化子进行快速筛选。甲醇的熏蒸诱导,使酵母转化子开始分泌表达抗菌肽，在指示菌平板上形成抑菌圈，以此为参照，可以快速直观的从大量的酵母转化子中挑选出高效表达抗菌肽的工程菌。相比较于传统的转化子要经过摇瓶培养、诱导表达，取不同时间点发酵液上清进行抗菌能力测定的方法。本方法取消了菌株培养、诱导和抗菌蛋白活性测定的过程。方法简单易操作，缩短筛选时间的同时提高检测通量，可以节省大量的人力、物力和设备使用。同时，观察抑菌圈的大小也可以对转化子活力的初筛起到参考作用。适用于抗菌肽、溶菌酶等抗菌蛋白的酵母转化子筛选工作。

附图说明

图1柞蚕抗菌肽Moricin C4基因扩增结果电泳图(1：Moricin C4基因扩增结果；2：Marker)；

图2酵母转化子的菌落PCR扩增结果电泳图(1、2泳道为pPIC9K空质粒酵母转化子的PCR扩增结果；3、4泳道为Moricin C4酵母转化子的PCR扩增结果；5泳道为Moricin C4的成熟肽；6泳道为Marker)；

图3表达柞蚕抗菌肽Moricin C4的酵母转化子的快速筛选结果图(A：酵母转化子对金黄色葡萄球菌的作用结果；B：酵母转化子对溶壁微球菌的作用结果)；

图4柞蚕抗菌肽Moricin C4对金黄色葡萄球菌的抑制作用结果图(1：pPIC9K空质粒转化子的发酵上清；2-6：分别为24h、48h、72h、96h、120h的酵母发酵上清；7：抗菌肽标准品)；

图5柞蚕抗菌肽Moricin C4的Tricine-SDS-Page检测结果图(1：抗菌肽标准品Cecropin P1；M：Marker；2：箭头所指处为毕赤酵母表达的柞蚕抗菌肽Moricin C4；3：空质粒转化酵母的发酵上清)。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步描述。应该指出，以下说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语与本发明所属技术领域人员通常理解的含义相同。

本发明实施例所涉及的材料、试剂和实验设备，如无特别说明，均为市售产品。

实施例1柞蚕抗菌肽Moricin C4基因的克隆和序列分析

使用75％的乙醇-水溶液对柞蚕蛹进行体表消毒。以50μL/头的剂量注射新鲜的大肠杆菌菌液(E.Coli K₁₂D₃₁,OD₆₀₀＝0.6)到柞蚕蛹腹部第一腹节处。室温诱导48h后，解剖柞蚕蛹，取脂肪体约100mg转入无RNase离心管中。同时放入2颗直径5mm的研磨钢珠，在液氮中制冷3～5分钟后，迅速转入研磨仪中，1600rpm研磨4分钟，得到脂肪体粉末。加入1mLTRIZOL(Invitogen，USA)试剂，按照试剂说明书要求提取柞蚕蛹脂肪体总RNA。

利用PrimeScript^TMII 1st Strand cDNA Synthesis Kit(TaKaRa)合成柞蚕脂肪体cDNA第一链。以SEQ NO.1所示序列设计引物。

Ap-Moricin C4F1:5'ATGAAAGGTTTGAATTTGAT 3'

Ap-Moricin C4R1:5'CTATCCTTGCTTCTTGTTCT 3'

以cDNA为模板进行PCR扩增，对扩增产物进行2.0％的琼脂糖凝胶电泳，结果如图1所示。利用

Gel Extraction Kit(Omega)回收约170bp的特异性片段，连接至pMDT18载体(TaKaRa)中，转化大肠杆菌DH5α菌株。在含有100μg/mL氨苄青霉素的固体LB培养基上生长过夜。挑取转化菌落，利用Plasmid Extraction Mini Kit(Solarbio)提取质粒DNA，进行序列分析，测序工作委托上海生工生物工程有限公司完成。

结果显示，柞蚕抗菌肽Moricin C4基因ORF序列为177bp，共编码58个氨基酸，其中前23个氨基酸为信号肽序列，成熟肽部分为35个氨基酸。成熟肽部分分子量为3665.18，等电点pI＝10.30，GRAVY＝-0.460，预测该蛋白为亲水蛋白。在氨基酸序列的第40位可能存在一个糖基化位点。

实施例2表达柞蚕抗菌肽Moricin C4的酵母工程菌的构建与筛选

设计一对扩增柞蚕抗菌肽Moricin C4基因成熟肽序列的引物。

SEQ NO.3:Moricin C4F2:5'CCGCTCGAGAAAAGAGCGCCAAAGG GTGTTGGA3'；其中CTCGAG为引入的酶切位点Xho I，AAAAGA为引入的Kex2蛋白酶切割位点，使酵母最终翻译表达时可以切割掉α-factor信号肽序列，获得具有天然的N端结构的重组蛋白。

SEQ NO.4:Moricin C4R2:5'CGGAATTCCTATCCTTGCTTCTTGTTC T 3'；其中GAATTC为引入的酶切位点EcoR I。

利用上述引物，通过PCR扩增，得到柞蚕抗菌肽Moricin C4成熟肽基因片段。用限制性内切酶Xho I和EcoR I酶(TaKaRa)解这一基因片段，与用同样酶酶解的酵母表达载体pPIC9K相连接。转化大肠杆菌DH5α，挑选重组质粒。

提取质粒DNA，用SalI(TaKaRa)进行线性化酶切处理。取5μg线性化片段与80μL的毕赤酵母GS115感受态细胞混合，冰浴10min后，迅速转入预冷的0.2cm电转杯中。以2.0kV、25μF、200Ω的条件电击，随即加入800μL 1mol/L的预冷山梨醇。30℃静止孵育2h，再涂布到缺少组氨酸的MD固体培养基平板，30℃静止培养2-3d。

随机选取MD培养基上的酵母转化菌株接种于含0.5mg/mL遗传霉素G418的YPD固态培养基上，30℃培养2d。再从中选择生长良好的菌落，依次接种于含有不同浓度G418(1、2、4mg/mL)的YPD固体培养基上，30℃培养2d。挑选在高浓度G418培养基上生长较好的酵母菌株，制备PCR模板,以pPIC9K质粒的通用鉴定引物，进行转化子的PCR鉴定。

5'AOX1：GACTGGTTCCAATTGACAAGC

3'AOX1：AGGATGTCAGAATGCCATTTGCC

结果如图2所示：1、2泳道为pPIC9K空质粒酵母转化子的pcr扩增结果；3、4泳道为Moricin C4酵母转化子的PCR扩增结果；5泳道为Moricin C4的成熟肽。结果说明：酵母转化子扩增出了大约700bp大小的特异性条带，为目的基因和a-factor信号肽片段(大约为500bp)的序列之和。此结果表明，目的基因整合到毕赤酵母基因组的His4位点上。

将筛选出的转化菌株分别接种到含有溶壁微球菌或金黄色葡萄球菌的酵母与指示菌的共生培养基上(1％酵母膏、2％蛋白胨、2％甲醇、10⁵CFU/mL指示菌、0.05mol/L磷酸钾缓冲液、1.5％琼脂，调整pH＝6.0)。培养皿倒置,每24h在培养皿的盖子上添加200μL纯甲醇进行熏蒸，30℃培养1周，观察酵母菌落周围的抑菌圈情况。

结果如图3所示，A图：酵母转化子对金黄色葡萄球菌的作用效果；B图：酵母转化子对溶壁微球菌的作用效果。结果说明：在指示菌与酵母菌共生的培养基上，甲醇的熏蒸诱导,使酵母转化子开始逐渐分泌表达抗菌肽，在指示菌平板上形成了抑菌圈，以此为参照，可以直观、快速的从大量的酵母转化子中挑选出高效表达抗菌肽的工程菌。同时，观察抑菌圈的大小也可以对转化子的初筛起到参考作用。

实施例3柞蚕抗菌肽Moricin C4的检测

选取具有较大抑菌圈的酵母菌株，接种于25mL BMGY培养基中。30℃，200rpm振荡培养16-18h。以4℃，2000rpm离心5min，收集菌体。将菌体重新悬浮于25mL BMMY培养基中，30℃，200rpm持续振荡培养6d。培养期间每24h添加甲醇一次，终浓度为0.5％。同时取200μL培养物，离心回收上清。

制备混有金黄色葡萄球菌(10⁵CFU/mL)的LB培养基平板。在平板上打孔，添加不同时间点的发酵上清(10μL/孔)，测定表达产物的活性。

结果如图4所示，2～6孔分别添加的是24～120小时的酵母发酵上清；1号孔添加的是pPIC9K空质粒转化子的发酵上清，作为阴性对照；7号孔添加的是抗菌肽标准品。结果说明：通过巴斯德毕赤酵母表达的柞蚕抗菌肽Moricin C4蛋白对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性。在诱导表达的72h时可以检测抗菌活性，诱导96～120h时表现出较好的作用效果。

挑选抑菌圈直径最大时间点的发酵上清，冷冻干燥，体积浓缩至原来的1/20，进行20％浓度的Tricine-SDS Page检测，鉴定上清液中的目标蛋白。

结果如图5所示，1号泳道为抗菌肽标准品Cecropin P1；2号泳道箭头所指处为毕赤酵母表达的柞蚕抗菌肽Moricin C4；3号泳道为空质粒转化酵母的发酵上清。结果表明：通过Tricine-SDS-Page检测，柞蚕抗菌肽Moricin C4酵母转化子的发酵上清浓缩液在约3.7KDa处明确的检测到了特异性条带。同样处理的空质粒转化酵母的发酵上清浓缩液在该处无条带，此结果与活性测试结果相吻合。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员明显能在不脱离本发明内容、精神的范围内，对本文所述内容在形式上和细节上作出改动或适当变更与组合来实现本发明技术，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们被视为包括在本发明精神、范围和内容中。

SEQUENCE LISTING

<110> 辽宁省海洋水产科学研究院

<120> 一种柞蚕抗菌肽基因、工程菌、工程菌筛选方法及其应用

<130> 2019

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 255

<212> DNA

<213> 柞蚕蛹（Antheraea pernyi Geurin Meneville）

<400> 1

agcaacaaca aatctaatcg tagtattcca ctccttctat tgagactcat cgtactgaat 60

aactgtttta ttatcaaaat gaaaggtttg aatttgatcg ttcttatttt gtcgatcctt 120

gcgatgttta caaatacgtg tgacgcagcg ccaaagggtg ttggatctgc tgtgaaaaca 180

gggttccgtg tgatcagtgc tgctggaaca gcacacgacg tctaccatca ctttaagaac 240

aagaagcaag gatag 255

<210> 2

<211> 58

<212> PRT

<213> 柞蚕蛹（Antheraea pernyi Geurin Meneville）

<400> 2

Met Lys Gly Leu Asn Leu Ile Val Leu Ile Leu Ser Ile Leu Ala Met

1 5 10 15

Phe Thr Asn Thr Cys Asp Ala Ala Pro Lys Gly Val Gly Ser Ala Val

20 25 30

Lys Thr Gly Phe Arg Val Ile Ser Ala Ala Gly Thr Ala His Asp Val

35 40 45

Tyr His His Phe Lys Asn Lys Lys Gln Gly

50 55

<210> 3

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列（Artifical Sequence）

<400> 3

ccgctcgaga aaagagcgcc aaagggtgtt gga 33

<210> 4

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列（Artifical Sequence）

<400> 4

cggaattcct atccttgctt cttgttct 28

Claims (5)

1.一种柞蚕抗菌肽，其特征在于，所述柞蚕抗菌肽的氨基酸序列如SEQ NO.2所示；所述柞蚕抗菌肽为用于制备金黄色葡萄球菌的抗菌剂。

2.一种含有权利要求1所述柞蚕抗菌肽的重组工程菌。

3.根据权利要求2所述的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌为毕赤酵母工程菌。

4.根据权利要求2所述的重组工程菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤a、将柞蚕抗菌肽基因克隆至酵母表达载体pPIC9K，线性化处理后，电转化至酵母GS115体内；

步骤b、随机选取酵母转化菌株接种于含有梯度浓度为0.25～4mg/mL G418的YPD固体培养基上，28～30℃培养2～3天；

步骤c、挑选能够在含浓度大于1mg/mL G418的培养基上生长的酵母菌株，制备PCR模板，以pPIC9K质粒的通用鉴定引物进行转化子的PCR鉴定；

步骤d、将筛选出的转化菌株接种到含有溶壁微球菌或金黄色葡萄球菌的YPM固体培养基上，倒置培养基，每24h在培养皿的盖子上添加纯甲醇进行熏蒸，28～30℃培养5～7天，挑选菌落周围抑菌圈明显的转化菌株。

5.根据权利要求1所述的柞蚕抗菌肽的应用，其特征在于，为在制备金黄色葡萄球菌的抗菌剂中的应用。

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