CN109793770A - 佛甲草正丁醇提取物在制备治疗肝纤维化药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了佛甲草正丁醇提取物在制备治疗肝纤维化药物中的应用。本发明将佛甲草正丁醇提取物用于治疗肝纤维化,证明佛甲草正丁醇提取物可有效降低硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠的肝组织损伤程度和减少胶原蛋白生成,缓解ATP酶功能的异常,抑制氧化应激和TGF‑β1信号,降低HSC的活化增殖,减少ECM的形成和沉积,对肝纤维化大鼠起治疗作用。佛甲草正丁醇提取物是一种有开发前景的治疗肝纤维化的药物。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体涉及佛甲草正丁醇提取物在制备治疗肝纤维化药物中的应用。
背景技术
佛甲草为景天科植物佛甲草的全草,味甘、寒、无毒,具有清热、解毒、消肿、利胆等功效,传统中医用于治疗咽喉肿痛、痈肿、疔疮、烫伤、蛇咬伤、黄疸、迁延性肝炎等。现代研究发现,佛甲草具有抗肿瘤、抗炎、抗肝损伤等作用。
肝纤维化是病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、自身免疫性疾病等各种原因所致慢性肝病发展至肝硬化的必经阶段。所以,从某种意义上讲,慢性肝病的治疗就是抗肝纤维化的治疗。临床上,肝纤维化导致肝脏的结构和功能出现一系列变化,从而出现以门静脉高压和肝功能减退为特征的一系列肝硬化症状,且常因并发消化道出血、肝性脑病、继发感染等而死亡。流行病学资料表明:肝硬化影响全球数亿人,它占全世界成年人死亡的常见原因的第14位(肝硬化导致每年死亡约103万人)。因此积极探索肝纤维化发病机制,寻求有效治疗措施对降低肝硬化发病率和死亡率具有重要意义。肝纤维化主要是肝星状细胞(hepaticstellate cell,HSC)在各种致病因子作用下,发生了活化、增殖、变性,从而对胶原类物质的合成异常增加,导致细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中的各种成分(尤其是各类胶原)代谢紊乱,最终ECM在肝脏内过度增生、沉积而发生病变。并且有研究证明该病理过程是可逆的,因此逆转肝纤维化是治疗各种慢性肝病的关键。
发明内容
本发明的目的是提供佛甲草正丁醇提取物在制备治疗肝纤维化药物中的应用。
本发明经过实验发现,佛甲草正丁醇提取物(30.0mg/kg,100mg/kg及300mg/kg)可显著降低肝纤维化大鼠肝脏羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量和Collagen I,III,IV的mRNA表达,提示SLNP具有良好的抗肝纤维化功能;SLNP降低肝纤维化大鼠血清MDA的含量,说明SLNP可通过抑制氧化应激达到抗纤维化作用;SLNP可提高肝纤维化大鼠肝组织钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性,提示SLNP可缓解肝纤维化所致ATP酶功能的异常;SLNP降低肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1,α-SMA的mRNA表达,提示SLNP可能通过抑制TGF-β1信号,降低HSC的活化,减少ECM的形成和沉积,从而减缓肝纤维化的发生发展
因此,本发明提供了佛甲草正丁醇提取物在制备治疗肝纤维化药物中的应用。
本发明的第二个目的是提供一种治疗肝纤维化药物,其特征在于,含有佛甲草正丁醇提取物作为活性成分。
所述的治疗肝纤维化药物还含有药学上可接受的载体和/或稀释剂。
所述的佛甲草正丁醇提取物是将佛甲草全草用水浸提,浸提液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,取正丁醇萃取物,经干燥后得到佛甲草正丁醇提取物。
所述的干燥优选为冷冻干燥。
所述的肝纤维化是指肝硬化前期。
优选,所述的治疗肝纤维化药物是指有效降低肝组织损伤程度和减少胶原蛋白生成,缓解ATP酶功能的异常,抑制氧化应激和TGF-β1信号,降低HSC的活化增殖,减少ECM的形成和沉积的药物。
本发明将佛甲草正丁醇提取物用于治疗肝纤维化,证明佛甲草正丁醇提取物可有效降低硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠的肝组织损伤程度和减少胶原蛋白生成,缓解ATP酶功能的异常,抑制氧化应激和TGF-β1信号,降低HSC的活化增殖,减少ECM的形成和沉积,对肝纤维化大鼠起治疗作用。佛甲草正丁醇提取物是一种有开发前景的治疗肝纤维化的药物。
附图说明
图1是佛甲草正丁醇提取物对肝纤维化大鼠肝组织羟脯胺酸含量的影响;
图2是佛甲草正丁醇提取物对肝纤维化大鼠肝组织Collagen I,III,IV mRNA表达的影响;
图3是佛甲草正丁醇提取物对肝纤维化大鼠血清MDA含量的影响;
图4是佛甲草正丁醇提取物对肝纤维化大鼠肝组织钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性的影响;
图5是佛甲草正丁醇提取物对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1,α-SMA mRNA表达的影响。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。
实施例1:
一、SLNP(佛甲草正丁醇提取物)的制备:
佛甲草全草(干的)用体积分数70%乙醇水溶液浸提24h,浸提液再分别顺序经等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别得到石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物,剩余为浸提后的水相。正丁醇提取物经冷冻干燥后得到佛甲草正丁醇提取物。
二、SLNP(佛甲草正丁醇提取物)的药效试验:
(1)动物造模、分组与给药:SD雄性大鼠48只,体重160-180g,随机分成6组,每组8只,分组如下:正常对照组(ctrl)、模型组(Vehicle)、阳性药物联苯双酯(5mg/kg)组(Sil)、SLNP低剂量(30mg/kg)组、SLNP中剂量(100mg/kg)组、SLNP低高剂量(300mg/kg)组,每组8只。除正常组外,各组以4%硫代乙酰胺(TAA)溶液,按5mL/kg体重腹腔注射每周2次,持续8周,制备大鼠肝纤维化模型,正常组腹腔注射同体积的生理盐水。造模后第二天各给药组分别灌胃给予相应的药物;正常组和模型组灌胃给予等体积的生理盐水。每天一次,持续给药8周。末次给药禁食8h后处死动物,取相应标本待查。
(2)肝组织Hyp含量检测:取适量肝组织,用生理盐水制备成10%的肝组织匀浆,严格按试剂盒说明书操作,检测Hyp含量。
(3)MDA含量的测定:收集血液,分离血清,按试剂盒说明书操作检测MDA含量。
(4)qPCR方法检测mRNA的表达:取部分肝组织,按试剂盒说明提取总RNA用多功能酶标仪进行总RNA定量,严格按试剂盒说明进行荧光定量PCR检测,并与对照组结果进行对比。
(6)统计:采用SPSS 20.0软件统计实验数据。所有数据以均数±标准差表示,组间的总体比较采用单因素方差分析,组内的多重比较采用SNK检验,P<0.05为差异有统计学意义。
(7)实验结果如图1、2、3、4、5所示,从图中可以看出佛甲草正丁醇提取物(30.0mg/kg,100mg/kg及300mg/kg)可显著降低肝纤维化大鼠肝脏羟脯氨酸含量(图1)和CollagenI,III,IV的mRNA表达(图2),提示SLNP具有良好的抗肝纤维化功能;SLNP降低肝纤维化大鼠血清MDA的含量(图3),说明SLNP可通过抑制氧化应激达到抗纤维化作用;SLNP可提高肝纤维化大鼠肝组织钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活性(图4),提示SLNP可缓解肝纤维化所致ATP酶功能的异常;SLNP降低肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1,α-SMA的mRNA表达(图5),提示SLNP可能通过抑制TGF-β1信号,降低HSC的活化,减少ECM的形成和沉积,从而减缓肝纤维化的发生发展。
综上所述:证明佛甲草正丁醇提取物可有效降低硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠的肝组织损伤程度和减少胶原蛋白生成,缓解ATP酶功能的异常,抑制氧化应激和TGF-β1信号,降低HSC的活化增殖,减少ECM的形成和沉积,对肝纤维化大鼠起治疗作用。佛甲草正丁醇提取物是一种有开发前景的治疗肝纤维化的药物。
Claims (10)
1.佛甲草正丁醇提取物在制备治疗肝纤维化药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的佛甲草正丁醇提取物是将佛甲草用水浸提,浸提液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,取正丁醇萃取物,经干燥后得到佛甲草正丁醇提取物。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的干燥为冷冻干燥。
4.根据权利要求1、2或3所述的应用,其特征在于,所述的肝纤维化是指肝硬化前期。
5.据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的治疗肝纤维化药物是指有效降低肝组织损伤程度和减少胶原蛋白生成,缓解ATP酶功能的异常,抑制氧化应激和TGF-β1信号,降低HSC的活化增殖,减少ECM的形成和沉积的药物。
6.一种治疗肝纤维化药物,其特征在于,含有佛甲草正丁醇提取物作为活性成分。
7.根据权利要求6所述的治疗肝纤维化药物,其特征在于,所述的佛甲草正丁醇提取物是将佛甲草用水浸提,浸提液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,取正丁醇萃取物,经干燥后得到佛甲草正丁醇提取物。
8.根据权利要求7所述的治疗肝纤维化药物,其特征在于,所述的干燥为冷冻干燥。
9.根据权利要求6所述的治疗肝纤维化药物,其特征在于,所述的治疗肝纤维化药物还含有药学上可接受的载体和/或稀释剂。
10.根据权利要求6所述的治疗肝纤维化药物,其特征在于,所述的肝纤维化是指肝硬化前期。
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