CN109781902A - 一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的hplc定量检测方法 - Google Patents
一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的hplc定量检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，本发明采用反相高效液相色谱峰外标法定量分析，色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ‑C18，4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液‑0.2％辛烷磺酸钠；本发明方法在现有控制方法的基础上，通过改变流动相体系及添加离子对试剂，使甘氨酰胺盐酸盐色谱峰与奥拉西坦色谱峰良好分离，不拖尾，定量准确性好，分离方法耐用性好，便于生产过程中奥拉西坦产品质量的控制，具有简单易行，准确性及精密度高、稳定性及重现性好的优点。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体而言，涉及奥拉西坦有关物质甘氨酰胺盐酸盐的检测方法。
背景技术
奥拉西坦(Oxiracetam)，其化学名为4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺，分子式：C6H10N2O3，分子量：158.16。
其结构式为：
奥拉西坦为吡拉西坦的类似物，可改善老年性痴呆和记忆障碍症患者的记忆和学习功能。促进磷酰胆碱和磷酰乙醇胺合成，提高大脑中ATP/ADP的比值，使大脑中蛋白质和核酸的合成增加。临床上用于脑损伤及引起的神经功能缺失、记忆与智能障碍的治疗。
结合奥拉西坦工艺路线，杂质甘氨酰胺盐酸盐作为合成原料引入，须在后续精制过程中去除。
目前甘氨酰胺盐酸盐已公开的HPLC测定方法大多参考奥拉西坦药典标准征求意见稿有关物质测定方法，具体如下：
有关物质取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含1μg的溶液，作为对照溶液；精密称取奥拉西坦酸对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含3μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定，用内嵌极性基团的耐水十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐TechMateC18-ST柱，4.6mm×250mm，5μm，或效能相当的色谱柱)，以0.02mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相；检测波长为210nm。精密量取供试品溶液、对照溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱图中如有与杂质Ⅰ峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过0.3％；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积(0.1％)，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的5倍(0.5％)。供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.3倍的色谱峰忽略不计。
经研究发现，在实际操作过程中，该方法对奥拉西坦酸分离效果较好，但难以实现奥拉西坦与甘氨酰胺盐酸盐的分离，甘氨酰胺盐酸盐由于极性大，保留差，出峰快，峰型很差。
文献报道刘宪勇等使用XB-C18柱，0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH3.0)，流速0.8ml/min，波长214nm色谱条件下，实现奥拉西坦与甘氨酰胺盐酸盐的分离，但甘氨酰胺盐酸盐峰型差，拖尾严重，严重影响杂质甘氨酰胺盐酸盐的定量准确性(刘宪勇,刘世军,孙克明,etal.HPLC法测定奥拉西坦原料药中的有关物质[J].中国药房,2014(1):66-68.)。
经研究发现，在实际操作过程中，上述方法存在以下不足：
(1)通过对奥拉西坦杂质谱全面分析，采用药典标准征求意见稿色谱条件进行有关物质分析，在实际操作过程中，上述方法难以实现奥拉西坦与甘氨酰胺盐酸盐的分离，分离效果较差；
(2)甘氨酰胺盐酸盐峰型差，拖尾严重，导致甘氨酰胺盐酸盐的定量准确性差，使分析结果不可信。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测方法，以克服现有技术存在的不足，本发明公开了一种良好分离奥拉西坦与甘氨酰胺盐酸盐的高效液相色谱方法，操作简单，准确性高，精密度高，稳定性好，重现性好。与以往技术相比，主要有以下有益效果：(1)流动相通过添加离子对试剂，改善甘氨酰胺盐酸盐峰型，峰型对称不拖尾，使甘氨酰胺盐酸盐定量准确。(2)在本法最优色谱条件的基础上，发明人对柱温、波长、流动相等色谱条件进行了拓宽筛选，方法耐用性好，适合于工业大生产的需要。
本发明提供了一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，包括如下操作步骤：
(1)溶液配制：
取本品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密称取甘氨酰胺盐酸盐对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含甘氨酰胺盐酸盐0.5μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(2)将供试品溶液和杂质对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，色谱条件如下：
仪器：岛津液相色谱仪；
色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；
柱温：28～32℃；流速：0.4～0.6ml/min；检测波长：200nm～210nm；
流动相：磷酸盐缓冲液溶液-离子对试剂；
(3)测定法：精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：包括如下操作步骤：
(1)溶液配制：
取本品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密称取甘氨酰胺盐酸盐对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含甘氨酰胺盐酸盐0.5μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(2)将供试品溶液和杂质对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，色谱条件如下：
仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT；
色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm；
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl；
流动相：磷酸盐缓冲液溶液-离子对试剂；
(4)测定法：精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相磷酸缓冲液为磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或其中几种的组合溶液。
所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相磷酸缓冲液为磷酸二氢钾溶液。
所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相磷酸缓冲液添加的离子对试剂可为己烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠。
所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相磷酸缓冲液添加的离子对试剂为辛烷磺酸钠。
所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相中含辛烷磺酸钠质量比例范围为0.1％～0.5％，作为一种优选，辛烷磺酸钠质量比例为0.2％；流动相中含磷酸二氢钾浓度范围为0.02mol/L～0.1mol/L。
所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相中含磷酸二氢钾浓度范围为0.05mol/ml。
特别地，此检测方法的流动相体系及色谱条件为在本发明时间、地点、环境及操作者限制下最优，而不限于此流动相体系及色谱条件，对此流动相体系的比例、浓度及色谱条件做适当修改、调整与等同替换，并不脱离本发明的技术思想和保护范围。
本发明的优点在于：在现有控制方法的基础上，改变流动相体系及添加离子对试剂，使甘氨酰胺盐酸盐色谱峰与奥拉西坦色谱峰良好分离，不拖尾，定量准确性好，分离方法耐用性好，便于生产过程中奥拉西坦产品质量的控制，具有简单易行，准确性及精密度高、稳定性及重现性好的优点。
附图说明
图1为：奥拉西坦及甘氨酰胺盐酸盐色谱峰定位图，奥拉西坦保留时间为8.857min，甘氨酰胺盐酸盐保留时间为16.683min。其具体条件：色谱柱：Welch UltimateAQ-C18，4.6mm×250mm，5μm；流速：0.5ml/min；检测波长为205nm；柱温：30℃；进样量：20ul；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠。图一为本发明方法举例方法图之一，其他方法图不一一给出。
具体实施方式
以下通过实施例形式对上述内容作进一步补充说明，但不应该理解为本发明范围仅限于以下实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm；
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl；
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠。
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
(1)空白溶剂干扰试验
精密量取流动相20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：空白溶剂不干扰本品有关物质甘氨酰胺盐酸盐检查。
(2)杂质定位与分离度试验
溶液配制：精密称取甘氨酰胺盐酸盐约5mg，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得杂质定位溶液。精密称取奥拉西坦约20mg，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得奥拉西坦定位溶液。精密称取奥拉西坦约20mg，置20ml量瓶中，用适量流动相溶解，精密量取杂质定位溶液0.2ml加入，再用流动相稀释至刻度，摇匀，即得分离度溶液。
精密量取杂质定位溶液、奥拉西坦定位溶液、分离度溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。甘氨酰胺盐酸盐色谱峰与奥拉西坦色谱峰良好分离，简单易行，见附图1。
表1色谱峰定位及分离度试验结果
实施例2
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
溶液配制：取奥拉西坦约20mg，置20ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。称取甘氨酰胺盐酸盐对照品约5mg，分别置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品贮备液。精密量取杂质贮备液0.5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取9份奥拉西坦样品各约20mg，精密称定，分别置20ml量瓶中，分为3组，用适量流动相溶解，再分别向每组溶液中精密加入对照品贮备液80μl、100μl、120μl，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成3组不同浓度的溶液，分别作为回收率供试品溶液-80％、回收率供试品溶液-100％、回收率供试品溶液-120％。
精密量取上述样品溶液、对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；计算回收率，并计算结果的相对标准偏差。结果：奥拉西坦有关物质检查，在限度浓度的80％、100％、120％的四个浓度下，杂质的加样回收率试验结果均良好，说明本法准确性及精密度较高。
表2对照品溶液进样精密度试验结果
表3加样回收率试验结果
实施例3
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
溶液配制：称取甘氨酰胺盐酸盐对照品约5mg，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取杂质贮备液0.5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取奥拉西坦约20mg，置20ml量瓶中，用适量流动相溶解，再精密加入对照品贮备液100μl，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
分别于0、2、4、8、12小时时，精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。分别计算对照溶液和供试品溶液色谱图中甘氨酰胺盐酸盐色谱峰峰面积的相对标准偏差，对照溶液和供试品溶液在至少12小时内稳定。
表4对照品溶液稳定性试验结果
表5供试品溶液稳定性试验结果
实施例4
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
溶液配制：取奥拉西坦约20mg，置20ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。称取甘氨酰胺盐酸盐对照品约5mg，分别置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品贮备液。精密量取杂质贮备液0.5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取奥拉西坦约20mg，共取6份，分别置20ml量瓶中，用适量流动相溶解，再分别向每组溶液中精密加入对照品贮备液100μl，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
精密量取上述样品溶液、对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；计算回收率，并计算6次测定结果的相对标准偏差。有关物质检查重复性试验结果良好。
表6对照溶液进样精密度试验结果
表7奥拉西坦有关物质检查重复性试验结果
实施例5
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
在上述色谱条件的基础上，发明人对柱温进行了筛选：28℃、30℃、32℃。确认符合分离要求的柱温范围为28℃～32℃。
实施例6
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
在上述色谱条件的基础上，发明人采用PDA全波长扫描对0nm～800nm波长进行了筛选。确认符合分离条件的波长范围为200nm～210nm，其中在205nm波长下，色谱峰响应最高。
实施例7
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
在上述色谱条件的基础上，发明人对流速进行了筛选：0.4ml/mim、0.5ml/mim、0.6ml/min。
确认符合分离条件的流速范围为0.4ml/mim～0.6ml/min。
实施例8
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
在上述色谱条件的基础上，发明人对流动相中磷酸盐缓冲液的种类进行了筛选。确认符合分离条件的磷酸盐缓冲液有磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钾组合、磷酸二氢铵和磷酸氢二铵组合、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠组合，其中磷酸二氢钾缓冲液分离效果最优。
实施例9
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
在上述色谱条件的基础上，发明人对流动相中离子对试剂的种类进行了筛选。确认符合分离条件的离子对试剂有己烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠，其中辛烷磺酸钠为最优。
实施例10
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
在上述色谱条件的基础上，发明人对流动相中磷酸盐缓冲液的浓度进行了筛选：0.01mol/L、0.02mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L，确认符合分离条件的浓度范围为0.02mol/L～0.1mol/L，作为一种优选，磷酸二氢钾浓度为0.05mol/ml。
实施例11
实验器材及试剂
(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT
(2)色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-0.2％辛烷磺酸钠
(3)实验试剂：
磷酸二氢钾：国药试剂有限公司，分析纯；
辛烷磺酸钠：国药试剂有限公司，分析纯。
实施步骤：
在上述色谱条件的基础上，发明人对流动相中含辛烷磺酸钠质量比例进行了筛选：0.1％、0.2％、0.5％，确认符合分离条件的辛烷磺酸钠质量比例为0.1％～0.5％，作为一种优选，辛烷磺酸钠质量比例为0.2％。
Claims (8)
1.一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：包括如下操作步骤：
(1)溶液配制：
取本品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密称取甘氨酰胺盐酸盐对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含甘氨酰胺盐酸盐0.5μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(2)将供试品溶液和杂质对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，色谱条件如下：
仪器：岛津液相色谱仪；
色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；
柱温：28～32℃；流速：0.4～0.6ml/min；检测波长：200nm～210nm；
流动相：磷酸盐缓冲液溶液-离子对试剂；
(3)测定法：精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
2.根据权利要求1所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：包括如下操作步骤：
(1)溶液配制：
取本品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；精密称取甘氨酰胺盐酸盐对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含甘氨酰胺盐酸盐0.5μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(2)将供试品溶液和杂质对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，色谱条件如下：
仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT；
色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18，4.6mm×250mm，5μm；
柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长：205nm；进样体积：20μl；
流动相：磷酸盐缓冲液溶液-离子对试剂；
(4)测定法：精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
3.根据权利要求1所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相磷酸缓冲液为磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或其中几种的组合溶液。
4.根据权利要求1或2或3所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相磷酸缓冲液为磷酸二氢钾溶液。
5.根据权利要求1或2或3所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相磷酸缓冲液添加的离子对试剂可为己烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、癸烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠。
6.根据权利要求1或2或3所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相磷酸缓冲液添加的离子对试剂为辛烷磺酸钠。
7.根据权利要求1或2或3所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相中含辛烷磺酸钠质量比例范围为0.1％～0.5％，作为一种优选，辛烷磺酸钠质量比例为0.2％；流动相中含磷酸二氢钾浓度范围为0.02mol/L～0.1mol/L。
8.根据权利要求1或2或3所述的一种奥拉西坦中甘氨酰胺盐酸盐的HPLC定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相中含磷酸二氢钾浓度范围为0.05mol/ml。
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| CN113740476A (zh) * | 2020-05-29 | 2021-12-03 | 宜宾市南溪区红光制药有限公司 | 布瓦西坦药物中杂质l-2-氨基丁酰胺盐酸盐含量的检测方法 |
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