CN108226346A - 一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测门冬氨酸鸟氨酸中特定杂质的分析方法，属于分析化学领域；该方法采用HPLC方法进行检测，采用ProntoSIL‑Amino（德国Bischoff）氨基柱，检测波长：210‑220nm，流速：0.8‑1.2ml/min，柱温：25‑35℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾‑甲醇为流动相，采用梯度洗脱程序进行分析，本技术方案可以迅速、准确对（β‑门冬氨酸）‑（δ‑鸟氨酸）以及（β‑门冬氨酸）‑鸟氨酸进行定性和定量分析，且分离度好，检测限和定量限都较低，线性范围较宽，回收率范围在标准规定的范围内，所以该方法灵敏，能够准确计算出（β‑门冬氨酸）‑（δ‑鸟氨酸）以及（β‑门冬氨酸）‑鸟氨酸的含量，为门冬氨酸鸟氨酸中杂质的进一步监测、研究提供了技术支持。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种使用HPLC法分析检测门冬氨酸鸟氨酸中含有的(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸杂质的分析方法。
背景技术
门冬氨酸鸟氨酸，化学名称：(S)-2，5-二氨基戊酸-(S)-2-氨基丁二酸盐；是L-天门冬氨酸与L-鸟氨酸经过化学反应而形成的盐，溶于水后以离子的形式存在，进入体内后分解为门冬氨酸和鸟氨酸，能直接参与肝细胞代谢，并能激活肝脏解毒功能中的两个关键酶，因而能够协助清除对人体有害的自由基，增强肝脏的排毒功能，迅速降低过高的血氨，促进肝细胞自身的修复和再生，从而有效地改善肝功能，恢复机体能量平衡。
目前门冬氨酸鸟氨酸的制剂形式有颗粒剂和注射剂两种，本实验室技术人员在研究门冬氨酸鸟氨酸原料和制剂长期稳定性实验的过程中发现：在距离生产时间15-20个月后产生了两种杂质：(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸，该两种杂质为门冬氨酸鸟氨酸在储存过程中发生氨基和羧基的相互缩合或者由于自身降解而生成，由于以上两种杂质的存在，可能引起人体不良反应及药物刺激性，所以其含量多少直接影响门冬氨酸鸟氨酸或其制剂的质量，也决定了药品的保质期长短。
现有技术中关于门冬氨酸鸟氨酸中杂质的检测方法中没有公开相关(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的信息，如CN104807924A中提供了一种检测门冬氨酸鸟氨酸中富马酸、精氨酸、尿素、丁二酸、苹果酸、内酰胺的高效液相分析检测方法；CN102288687A提供了一种检测鸟氨酰胺的检测方法；覃婷婷等在《天津药学》杂志中采用柱后衍生化高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸颗粒剂的有关物质及含量，其中有关物质为：鸟氨酸内酰胺、赖氨酸、Ω-二鸟氨酸；所以目前现有技术中的门冬氨酸鸟氨酸中没有公开相关(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸，更没有公开两种杂质的分析方法，且现有的门冬氨酸鸟氨酸及其制剂的药品质量标准中也没有明确收录有关以上杂质的定量和定性的方法，所以为进一步研究门冬氨酸和鸟氨酸的质量标准，本申请主要针对两种杂质的定性和定量方法进行研究。
发明内容
为克服现有技术中没有公开门冬氨酸鸟氨酸原料和制剂中(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的两种杂质的检测方法，本申请采用如下技术方案：
一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，采用高效液相色谱仪测定，色谱条件为：
色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱；
检测波长：210-220nm；流速：0.8-1.2ml/min；柱温：25-35℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾-甲醇，体积比35-45：55-65；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液-甲醇，体积比为55-65：35-45；
采用梯度洗脱程序：
以上的特定杂质为(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸中的一种或两种；
优选的，流动相A用磷酸调节pH至5.6-6.0；流动相B用磷酸调节pH至4.8-5.2；
优选的，流动相A用磷酸调节pH至5.8-6.0；流动相B用磷酸调节pH至4.8-5.0；
优选的，流动相A中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为35-40：60-65；流动相B中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为60-65：35-40；
更优选的，流动相A中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为35：65；流动相B中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为65：35；流动相A用磷酸调节pH至5.8；流动相B用磷酸调节pH至5.0。
以上方法中色谱柱的规格优选为：4.6mmx250mm，5μm；检测波长优选为：210nm；流速优选为：1.0ml/min；柱温优选为：30℃；梯度洗脱程序优选为：
更优选的，一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，采用以下方法进行分析：
色谱条件：
色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱4.6mmx250mm,5μm；
检测波长：210nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾和甲醇，体积比为35：65，用磷酸调节pH至5.8；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾和甲醇，按体积比65：35，用磷酸调节pH至5.0；
采用梯度洗脱程序：
以上方法可用于检测含有门冬氨酸鸟氨酸原料的食品、保健品、药品及制剂中的(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸任何一种或两种杂质。
该发明的有益效果为：
1)本发明提供的技术方案能够将门冬氨酸鸟氨酸原料或者制剂中(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸进行有效的分离，其中门冬氨酸、(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、鸟氨酸、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸四者之间的分离度>1.5，达到了分析的要求；
2)通过对检测限和定量限进行测定，证明本申请技术方案的检测限和定量限相对较低：(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)检测限为6.80ng，浓度为0.34μg/ml；定量限为22.66ng，浓度为1.11μg/ml；
(β-门冬氨酸)-鸟氨酸检测限为4.34ng，浓度为0.71μg/ml；定量限为14.52ng，浓度为2.37μg/ml；所以本技术方案具有检测限低，灵敏度高的特点；
3)通过测定(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的线性方程，找出定量分析的依据：
(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)在1.13～13.60μg/ml之间线性关系良好，线性方程为：A＝15355C-2580.5，r为0.9994，；
(β-门冬氨酸)-鸟氨酸在2.38～14.25μg/ml之间线性关系良好，线性方程为：A＝9472C-6820，r为0.9990；
4)(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)的回收率在97.7％～103.0％间；(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的回收率在98.5％～102.4％之间，以上回收率符合验证方案规定的90.0％-108.0％标准，可以证实该方法具有极高的准确度。
所以本申请的技术方案具有灵敏度高、方法准确的优势，且其线性范围符合分析的要求，该方法为门冬氨酸鸟氨酸杂质的进一步监测、研究提供了可能。
实施例：
为便于理解发明内容，下面结合具体实施例进一步描述本发明的技术方案，但不以任何方式限制本发明。
以下实施例1-5中所采用的液相色谱方法均采用如下方法进行：
色谱条件：
色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱4.6mmx250mm,5μm；
检测波长：210nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至5.8)-甲醇(35：65)；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾(用磷酸调节pH至5.0)-甲醇(65：35)；
采用梯度洗脱程序：
实施例1：分离度检测
1)溶液的配置：
主成分对照品定位溶液：精密称取盐酸鸟氨酸、门冬氨酸、门冬氨酸鸟氨酸各100mg，分别置50ml量瓶中，加流动相B溶解并稀释至刻度，摇匀，即得主成分对照品定位溶液；
杂质对照品溶液：精密称取(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸各25mg，置100ml量瓶中，加流动相B溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸贮备液；各精密量取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加流动相B溶解并稀释至刻度，摇匀，即得杂质对照品溶液；
系统适应性溶液的配置：精密量取主成分对照品定位溶液1ml，(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸对照品溶液各2ml置10ml量瓶中，加流动相B溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2)检测结果
精密量取流动相B及上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，按照上述梯度洗脱程序进行分析，数据统计见下表：
经过检测，分离度都大于1.5，符合定性和定量分析的要求。
实施例2检测限的测定
1)溶液的配置：精密称取(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸各25mg，置100ml量瓶中，加流动相B适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各杂质储备液；
对(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸储备液进行梯次稀释，得出S/N≈3时的溶液作为检测限溶液；
2)测定结果
精密取上述检测限溶液20μl，注入液相色谱仪，连续进样3次，记录色谱图，以S/N≈3作为检测限，数据统计如下表。
经过分析：(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)检测限为6.80ng，浓度为0.34μg/ml；(β-门冬氨酸)-鸟氨酸检测限为4.34ng，浓度为0.71μg/ml，两种杂质的检测限都很低，说明本方法的灵敏度较高。
实施例3定量限的测定
1)溶液的配置：将实施例2中的各杂质储备液进行梯次稀释，得出S/N≈10时的溶液作为定量限溶液；
2)测定结果
精密取上述定量限溶液20μl，注入液相色谱仪，连续进样3次，记录色谱图，以S/N≈10作为检测限，数据统计如下表
经过分析：(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)定量限为22.66ng，浓度为1.113μg/ml；(β-门冬氨酸)-鸟氨酸定量限为14.52ng，浓度为2.3755μg/ml，两种杂质的定量限都很低，说明本方法的灵敏度较高。
实施例4线性范围检测
溶液的配置、
(1)精密称取(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸10mg，置100ml量瓶中，加流动相B适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质线性储备液；
(2)精密量取步骤(1)中的溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml，15ml分别置100ml量瓶中，加流动相B稀释至刻度，摇匀，分别作为线性溶液1、线性溶液2、线性溶液3、线性溶液4、线性溶液5、线性溶液6、线性溶液7；
(3)精密量取步骤(2)中的线性溶液1-7各20μl，注入液相色谱仪，包括定量限溶液在内，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，经过测定：(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)在1.13～13.60μg/ml之间线性关系良好，线性方程：A＝15355x-2580.5，r：0.9995，其中x为(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)浓度；
(β-门冬氨酸)-鸟氨酸在2.38～14.25μg/ml之间线性关系良好，线性方程：A＝9472x-6820，r为0.9990，其中x为(β-门冬氨酸)-鸟氨酸浓度；
实施例5回收率试验
对照品贮备液：取(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸对照品适量，精密称定，加流动相B溶解并定量稀释制成每1ml中含(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸各100μg的溶液，摇匀，即得。
对照品溶液：精密量取对照品贮备液1ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品贮备液：精密量取门冬氨酸鸟氨酸样品5ml，置50ml量瓶中，加流动相B溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
80％回收率试验：精密量取供试品贮备液2ml，置10ml量瓶中，向其中精密加入对照品贮备液0.8ml，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，同法配置三份。
100％回收率试验：精密量取供试品贮备液2ml，置10ml量瓶中，向其中精密加入对照品贮备液1.0ml，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，同法配置三份。
120％回收率试验：精密量取供试品贮备液2ml，置10ml量瓶中，向其中精密加入对照品贮备液1.2ml，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，同法配置三份。
精密量取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，结果见下表
表1(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)回收率试验结果
表2(β-门冬氨酸)-鸟氨酸回收率试验结果
结果表明：三个浓度下，(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)的回收率在97.7～103.0间；(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的回收率在98.5～102.4之间；符合验证方案规定(90.0％-108.0％)，证实了该方法具有良好的准确度。
实施例6：门冬氨酸鸟氨酸注射液中β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的测定
1)溶液的配置：
供试品溶液的配置：精密量取2ml门冬氨酸鸟氨酸注射液(距生产日期18个月)置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得；
对照品贮备液：取(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸对照品适量，精密称定，加流动相B溶解并定量稀释制成每1ml中含(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸各100μg的溶液，摇匀，即得。
对照品溶液：精密量取对照品贮备液1ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
2)色谱条件
色谱条件：
色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱4.6mmx250mm,5μm；
检测波长：210nm；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至5.6)-甲醇(35：65)；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节pH至4.8)-甲醇(65：35)；
采用梯度洗脱程序：
3)测定结果：
精密量取流动相B及上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，按照上述梯度洗脱程序进行分析，检测结果如下：
| 名称 | 保留时间(min) | 含量(μg/ml) |
| 溶剂峰 | 4.0min之前 | —— |
| 门冬氨酸 | 9.35 | -- |
| (β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸) | 16.85 | 2.3 |
| 鸟氨酸 | 19.25 | -- |
| (β-门冬氨酸)-鸟氨酸 | 22.14 | 5.6 |
实施例7：门冬氨酸鸟氨酸颗粒剂中(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的测定
1)溶液的配置：
供试品溶液的配置：精密量取门冬氨酸鸟氨酸颗粒剂(距生产日期16个月)200mg，置10ml量瓶中，加流动相B稀释至刻度，再精密量取2ml置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
对照品贮备液：取(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸对照品适量，精密称定，加流动相B溶解并定量稀释制成每1ml中含(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸各100μg的溶液，摇匀，即得。
对照品溶液：精密量取对照品贮备液1ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
2)色谱条件
色谱条件：
色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱4.6mmx250mm,5μm；
检测波长：220nm；流速：1.2ml/min柱温：35℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至6.0)-甲醇(45：55)；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节pH至5.2)-甲醇(55：45)；
采用梯度洗脱程序：
3)测定结果：
精密量取流动相B及上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，按照上述梯度洗脱程序进行分析，检测结果如下：
| 名称 | 保留时间(min) | 含量(μg/ml) |
| 溶剂峰 | 4.0min之前 | —— |
| 门冬氨酸 | 7.24 | -- |
| (β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸) | 13.96 | 3.78 |
| 鸟氨酸 | 17.24 | -- |
| (β-门冬氨酸)-鸟氨酸 | 21.25 | 3.65 |
实施例8：门冬氨酸鸟氨酸原料中(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的测定
1)溶液的配置：
供试品溶液的配置：精密量取门冬氨酸鸟氨酸原料(距生产日期15个月)200mg，置10ml量瓶中，加流动相B稀释至刻度，再精密量取2ml置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
对照品贮备液：取(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸对照品适量，精密称定，加流动相B溶解并定量稀释制成每1ml中含(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸各100μg的溶液，摇匀，即得。
对照品溶液：精密量取对照品贮备液1ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
2)色谱条件
色谱条件：
色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱4.6mmx250mm,5μm；
检测波长：220nm；流速：1.2ml/min；柱温：30℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至5.7)-甲醇(40：60)；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节pH至4.9)-甲醇(60：40)；
采用梯度洗脱程序：
3)测定结果：
精密量取流动相B及上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，按照上述梯度洗脱程序进行分析，检测结果如下：
| 名称 | 保留时间(min) | 含量(μg/ml) |
| 溶剂峰 | 4.0min之前 | —— |
| 门冬氨酸 | 7.25 | -- |
| (β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸) | 14.36 | 5.26 |
| 鸟氨酸 | 17.45 | -- |
| (β-门冬氨酸)-鸟氨酸 | 22.36 | 2.36 |
实施例9
1)溶液的配置：取实施例8中的样品按照下列色谱条件进行测定；
2)色谱条件
色谱条件：
色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱4.6mmx250mm,5μm；
检测波长：220nm；流速：1.2ml/min；柱温：30℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至5.8)-甲醇(40：60)；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节pH至5.0)-甲醇(60：40)；
采用梯度洗脱程序：
3)测定结果：
精密量取流动相B及上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，按照上述梯度洗脱程序进行分析，检测结果如下：
| 名称 | 保留时间(min) | 含量(μg/ml) |
| 溶剂峰 | 4.0min之前 | —— |
| 门冬氨酸 | 7.15 | -- |
| (β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸) | 14.12 | 5.28 |
| 鸟氨酸 | 17.35 | -- |
| (β-门冬氨酸)-鸟氨酸 | 21.96 | 2.37 |
实施例10
1)溶液的配置：取实施例8中的样品按照下列色谱条件进行测定；
2)色谱条件
色谱条件：
色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱4.6mmx250mm,5μm；
检测波长：220nm；流速：1.2ml/min；柱温：30℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至5.0)-甲醇(40：60)；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节pH至6.0)-甲醇(60：40)；
采用梯度洗脱程序：
3)测定结果：
精密量取流动相B及上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，按照上述梯度洗脱程序进行分析，检测结果如下：
| 名称 | 保留时间(min) | 含量(μg/ml) |
| 溶剂峰 | 4.0min之前 | —— |
| 门冬氨酸 | 7.15 | -- |
| (β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸) | -- | 未检测到 |
| 鸟氨酸 | 17.35 | -- |
| (β-门冬氨酸)-鸟氨酸 | -- | 未检测到 |
本实施例说明流动相的pH对测定结果有很大的影响，改变流动相的pH会导致样品中含有的(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸杂质检测不到。
Claims (10)
1.一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪测定，色谱条件为：
色谱柱：ProntoSIL-Amino（德国Bischoff）氨基柱；
检测波长：210-220nm；流速：0.8-1.2ml/min；柱温：25-35℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾-甲醇，体积比35-45：55-65；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液-甲醇，体积比为55-65：35-45；
采用梯度洗脱程序：
。
2.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述的特定杂质是（β-门冬氨酸）-（δ-鸟氨酸）、（β-门冬氨酸）-鸟氨酸中的一种或两种。
3.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述流动相A用磷酸调节pH至5.6-6.0；所述流动相B用磷酸调节pH至4.8-5.2。
4.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述流动相A用磷酸调节pH至5.8-6.0；所述流动相B用磷酸调节pH至4.8-5.0。
5.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述流动相A中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为35-40：60-65；所述流动相B中磷酸二氢钾和甲醇的体积比为60-65：35-40。
6.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述流动相A中磷酸二氢钾和甲醇的体积比优选为35：65；所述流动相B中磷酸二氢钾和甲醇的体积比优选为65：35；所述流动相A用磷酸调节pH优选至5.8；所述流动相B用磷酸调节pH优选至5.0。
7.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为：4.6mmx250mm，5μm。
8.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述检测波长优选为：210nm；流速优选为：1.0ml/min；柱温优选为：30℃；梯度洗脱程序优选为：
。
9.根据权利要求1所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，优选的，采用以下方法进行分析：
色谱条件：
色谱柱：ProntoSIL-Amino （德国Bischoff）氨基柱 4.6mmx250mm,5μm；
检测波长：210nm；流速：1.0ml/min 柱温：30℃；
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾和甲醇，体积比为35：65，用磷酸调节pH至5.8；
流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾和甲醇，按体积比65：35，用磷酸调节pH至5.0；
采用梯度洗脱程序：
。
10.根据权利要求1-9任一项所述的一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，其特征在于，所述方法用于检测含有门冬氨酸鸟氨酸原料的食品、保健品、药品及制剂中的（β-门冬氨酸）-（δ-鸟氨酸）、（β-门冬氨酸）-鸟氨酸任何一种或两种杂质。
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