CN109771469A

CN109771469A - 一种醋炙甘遂及其炮制方法

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Publication number: CN109771469A
Application number: CN201910247327.1A
Authority: CN
Inventors: 张朔生
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-03-29
Filing date: 2019-03-29
Publication date: 2019-05-21

Abstract

本发明涉及一种醋炙甘遂及其炮制方法，所述醋炙甘遂的炮制方法，包括如下步骤：称取甘遂饮片，先加入醋，搅拌均匀，然后进行闷润，之后炒制，冷却后，即得所述醋炙甘遂。本发明所述醋炙甘遂的炮制方法，对炮制步骤以及具体参数进行了大量科学严谨的试验研究，使得最终制备得到的醋炙甘遂较传统工艺药效成分含量更高，毒性更低，同时，通过优化工艺步骤以及量化具体工艺参数，为标准化、规模化生产质量稳定可靠、药理活性更高、使用安全性更高的炮制甘遂提供了重要参考价值，具有广阔的实际生产和临床应用前景。

Description

一种醋炙甘遂及其炮制方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种醋炙甘遂及其炮制方法。

背景技术

中药材甘遂为大戟科植物甘遂的干燥块根，甘遂味苦、性寒，归脾经、肺经、肾经、膀胱经、大肠经、小肠经。具有泻水逐肿，消肿散结的作用，主要用于水肿、腹水、留饮结胸、癫痫、喘咳、大小便不通等。

甘遂的主要化学成分为二萜、三萜以及甾体类化合物，其它成分包括香豆素、脂肪酸、蔗糖、鞣质、树脂等，现代实验研究表明，甘遂具有抗肿瘤、抗病毒、调节免疫系统等多种活性，但其毒性较强，生品仅限外用，内服必须炮制。

但是，甘遂传统炮制工艺参数不统一，如炮制温度主要凭借经验判断，生产效率低，批次质量不稳定，毒副作用不能有效控制，无法实现标准化规模化生产，因而限制了炮制甘遂的生产应用。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种药效成分含量更高，毒性更低，能够实现标准化、规模化生产的醋炙甘遂的炮制方法。

本发明的技术方案为：

一种醋炙甘遂的炮制方法，包括如下步骤：

称取甘遂饮片，先加入醋，搅拌均匀，然后进行闷润，之后炒制，冷却后，即得所述醋炙甘遂。

进一步地，所述加入的醋的质量为甘遂饮片质量的20-40wt％。

进一步地，所述加入的醋的质量为甘遂饮片质量的30wt％。

进一步地，所述闷润的时间为6-14h。

进一步地，所述闷润的时间为10h。

进一步地，所述炒制的温度低于329.4℃，所述炒制的时间为3-5min。

进一步地，所述炒制的温度为270℃，所述炒制的时间为3.5min。

进一步地，所述醋炙甘遂中，大戟二烯醇的含量为0.19-0.35％，醇浸出物含量为9.81-19.84％。

进一步地，所述醋炙甘遂中，大戟二烯醇的含量为0.25％，醇浸出物含量为19.56％。

本发明的有益效果为：

本发明所述醋炙甘遂的炮制方法，包括向甘遂饮片中加醋、以醋对甘遂饮片进行闷润以及炒制的步骤，为了确定最佳实施工艺参数，以大戟二烯醇和醇浸出物含量为检测指标，对加醋量、闷润时间、炒制温度、炒制时间进行了进一步的试验研究，最终确定最佳工艺参数为加醋量30wt％、闷润时间10h、炒制温度270℃、炒制时间3.5min。

本发明所述醋炙甘遂的炮制方法，对炮制步骤以及具体参数进行了大量科学严谨的试验研究，使得最终制备得到的醋炙甘遂较传统工艺药效成分含量更高，毒性更低，同时，通过优化工艺步骤以及量化具体工艺参数，为标准化、规模化生产质量稳定可靠、药理活性更高、使用安全性更高的炮制甘遂提供了重要参考价值，具有广阔的实际生产和临床应用前景。

附图说明

图1：甘遂醇提物的热解特性曲线，其中1-热失重，2-热失重速率；

图2：甘遂石油醚萃取物的热解特性曲线，其中1-热失重，2-热失重速率；

图3：甘遂氯仿萃取物的热解特性曲线，其中1-热失重，2-热失重速率；

图4：甘遂乙酸乙酯萃取物的热解特性曲线，其中1-热失重，2-热失重速率；

图5：甘遂正丁醇萃取物的热解特性曲线，其中1-热失重，2-热失重速率；

图6：大戟二烯醇对照品溶液HPLC图谱；

图7：供试品溶液HPLC谱；

图8：大戟二烯醇标准曲线；

图9：加醋量对大戟二烯醇含量的影响；

图10：加醋量对醇浸出物含量的影响；

图11：闷润时间对大戟二烯醇含量的影响；

图12：闷润时间对醇浸出物含量的影响；

图13：炒制温度对大戟二烯醇含量的影响；

图14：炒制温度对醇浸出物含量的影响；

图15：炒制时间对大戟二烯醇含量的影响；

图16：炒制时间对醇浸出物含量的影响。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

实施例1

本实施例提供一种醋炙甘遂的炮制方法，包括如下步骤：

称取甘遂饮片，先加入甘遂饮片质量20wt％的醋，搅拌均匀，然后闷润6h，之后在炮制温度为329.4℃下炒制3min，冷却后，即得所述醋炙甘遂。

实施例2

本实施例提供一种醋炙甘遂的炮制方法，包括如下步骤：

称取甘遂饮片，先加入甘遂饮片质量40wt％的醋，搅拌均匀，然后闷润14h，之后在炮制温度为270℃下炒制5min，冷却后，即得所述醋炙甘遂。

实施例3

本实施例提供一种醋炙甘遂的炮制方法，包括如下步骤：

称取甘遂饮片，先加入甘遂饮片质量30wt％的醋，搅拌均匀，然后闷润10h，之后在炮制温度为270℃下炒制3.5min，冷却后，即得所述醋炙甘遂。

试验例

一、炮制温度的试验研究

1、样品的制备

(1)甘遂粉末样品的制备

称取甘遂药材50g，粉碎，过40目筛，得到甘遂粉末，备用。

(2)甘遂醇提物样品的制备

取甘遂粉末适量，乙醇的体积分数为95％乙醇，物料比为1：10，温度为85℃，提取时间为3h，提取次数为3次，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩并蒸干，得到甘遂醇提物，备用。

(3)甘遂石油醚萃取物、甘遂氯仿萃取物、甘遂乙酸乙酯萃取物、甘遂正丁醇萃取物样品的制备

取甘遂粉末4g，95％乙醇50mL超声提取两次，每次1h，提取液浓缩至无醇味，加适量水混悬，混悬液依次用石油醚(沸程60～90℃)、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收萃取液减压浓缩并蒸干，得到甘遂石油醚萃取物、甘遂氯仿萃取物、甘遂乙酸乙酯萃取物、甘遂正丁醇萃取物。各萃取物分别研磨过40目筛，备用。

2、热重实验

以模拟空气(N₂∶O₂＝4∶1＝为载气，体积流量为60mL·min^-1；分别取试样为(30±5)mg的各种药材置于坩埚，在模拟空气的气氛下对其进行热分析，程序升温实验升温速率为10℃·min^-1，从室温升至600℃。

3、数据处理采用Origin8.0进行数据处理。

4、实验结果及分析

甘遂醇提物、石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物的热分析实验数据见表1，热解特性曲线(TG-DTG曲线)见图1～5。

表1热分析实验数据

甘遂粉末的热解特性分析：从室温升至600℃有三个明显的热失重台阶，分别为室温至160.8℃的干燥失水阶段，热失重率为11.40％；160.8℃～437.1℃范围为挥发分释放阶段，有两处热失重速率峰，挥发分释放第一阶段为160.8℃～338.1℃，此阶段热失重速率峰峰温为288.9℃，热失重率为61.70％，挥发分释放第二阶段为338.1℃～437.1℃，热失重速率峰峰温为392.6℃，热失重率为16.91％；以及从437.1℃到600℃范围的难挥发分及固定碳燃烧阶段，热失重率为13.87％。甘遂粉末的热解特性分析等同于醋制甘遂的热解特性分析。

甘遂醇提物的热解特性分析：TG曲线(热失重曲线)呈现明显的4个热失重段，与DTG曲线(热失重速率)上4个热失重速率峰有较好的对应。随着加热的进行，甘遂醇提物所含的自由水及结合水先析出并于164.8℃左右完成，即室温至164.8℃的干燥失水阶段；随着温度进一步升高，甘遂醇提物中的大分子二萜及三萜类成分吸收了大量的能量，发生一系列化学变化并逸出气体，开始了164.8～423.0℃温度段的挥发性成分释放阶段，此阶段热失重率为39.41％。这一阶段，TG曲线急剧下滑，DTG曲线出现2个热失重速率峰，即204.5℃处的4.30％·min^-1和385.3℃处的1.50％·min^-1，推测164.8～362.5℃、362.5～423.0℃失重与醇提物中药效成分的挥发成分释放有关；第三阶段从423.0℃开始，直到600℃，此阶段由较难热解及残渣的燃烧造成，即难挥发分及固定碳燃烧阶段，热失重率为7.18％。此外，DTG曲线上挥发分释放阶段253.1～362.5℃范围的肩峰可能与中药多种成分共同发挥药效及反应机制复杂有关，同时推测DTG曲线上的一个峰可能是多种物质DTG峰的拟合。

石油醚萃取物的热解特性分析：室温～141.5℃为干燥失水阶段，热失重率为0.05％，挥发分释放阶段为141.5～393.3℃，热失重率为74.62％，于366.4℃有强度为11.34％·min^-1的最大热失重速率峰，于275℃左右有一肩峰，与甘遂粉末挥发分释放阶段近似重合。

氯仿萃取物的热解特性分析：室温～172.3℃为干燥失水阶段，挥发分释放阶段为172.3～480.9℃，包括两个阶段，热失重率分别为31.95％、34.03％，并且分别于276.4℃有强度为2.70％·min-1的最大热失重速率峰，于415.6℃有强度为3.87％·min-1的最大热失重速率峰。

乙酸乙酯萃取物的热解特性分析：从室温升至600℃有三个明显的热失重台阶，分别为室温～170.4℃的干燥失水阶段，热失重率为11.27％；从170.4～471.5℃为挥发分释放阶段，有两处热失重速率峰，挥发分释放第一阶段热失重速率峰峰温为289.9℃，热失重率为32.72％，挥发分释放第二阶段热失重速率峰峰温为418.3℃，热失重率为28.12％；以及难挥发分及固定碳燃烧阶段，热失重率为23.51％。DTG曲线也出现相应的热失重速率峰，其中挥发分释放阶段包括289.9℃处强度为7.83％·min^-1的热失重速率峰及418.3℃处强度为2.85％·min^-1的热失重速率峰。

正丁醇萃取物的热解特性分析：141.0～384.6℃范围为挥发分释放阶段，其中在201.7℃处有强度为4.74％·min^-1的最大热失重速率峰。

可以看出，随着萃取溶剂极性的不同，各溶剂萃取物所含化学成分的种类及数量发生变化，石油醚萃取物主要得到游离的萜类，氯仿和乙酸乙酯萃取物得到甾体及极性相对较大的萜类等，从而导致DTG曲线热失重速率峰增大。进一步分析可知，甘遂粉末在160.8℃～338.1℃范围内的热失重主要为甘遂乙酸乙酯萃取物和正丁醇、氯仿萃取物造成，而在338.1℃～437.1℃范围内的热失重为石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物共同造成。由于甘遂的主要成分为三萜类和二萜类化合物，主要毒性成分为二萜类成分，结合文献可知，毒性部位为石油醚萃取物或氯仿萃取物，有效萃取物为乙酸乙酯萃取物。因此在保证甘遂药效成分基本不损失而毒性成分大量减少的前提下，选择氯仿萃取物挥发分释放第一阶段的最大热失重速率峰所对应的温度为最佳炮制温度，乙酸乙酯萃取物挥发分释放第一阶段结束温度为炮制温度上限，即276.4℃为最佳炮制温度，329.4℃为炮制温度上限。

二、大戟二烯醇和醇浸出物的含量测定方法以及方法学验证试验研究

1、大戟二烯醇的含量测定

1.1色谱条件

以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(98:2)为流动相；检测波长为210mn。

1.2对照品溶液的制备

精密称取大戟二烯醇对照品适量，加甲醇制成0.2mg·mL^-1的溶液，即得。

1.3供试品溶液的制备

取甘遂粉末(过四号筛)约2g，用分析天平精密称定，将其置于具塞锥形瓶中，精密量取并加入乙酸乙酯25mL，密塞，称定重量，超声40min，放至冷却，再称定重量，用乙酸乙酯补足减少的重量，轻轻摇匀，滤过，精密量取续滤液10mL，置于蒸发皿中，将上述滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，轻轻摇匀，即得。

1.4含量测定

精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪中，测定，即得，见图6～7。

1.5线性关系考察

分别配制浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg mL^-1的大戟二烯醇对照品溶液，按照“1.4”项下含量测定方法进行测定，所得峰面积分别为10.4314、20.3072、29.0608、41.9774、56.9168、67.9585，以各对照品浓度为横坐标x，以峰面积为纵坐标y，得到回归方程为：y＝111.16x-0.7297，R²＝0.9998，结果表明大戟二烯醇在0.0963～0.6160mg mL^-1范围内呈良好的线性关系，见图8。1.6精密度实验

精密吸取对照品溶液10μL，按上述色谱条件反复进样6次，随后测定大戟二烯醇的峰面积，结果见表2，大戟二烯醇峰面积平均值为55.8336，RSD＝0.79％(n＝6)，证明其精密度良好。

表2大戟二烯醇精密度实验结果

1.7稳定性实验

取上述制备的供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12、24h进样10μL，测的大戟二烯醇峰面积，结果见表3。峰面积平均值为25.6890，RSD＝1.27％，表明供试品溶液在24h内稳定。

表3大戟二烯醇稳定性实验结果

1.8重复性实验

取生甘遂粉末共6份，每份2g，精密称定，按“1.3”项下方法制备各份供试品溶液，测定大戟二烯醇峰面积，得大戟二烯醇峰面积平均值为69.4699，RSD＝0.37％(n＝6＝，表示此方法重复性好，结果见表4。

表4大戟二烯醇重复性实验结果

1.9加样回收率实验

取己知含量的生甘遂粉末共6份，每份0.1g，精密称定，分别精密加入大戟二烯醇对照品溶液1mL，按“1.3”项下方法制备供试品溶液，测定回收率，得大戟二烯醇平均回收率为98.40％，RSD为1.77％，回收率在95％～100％之间，表明本方法回收率良好，结果见表5。

表5大戟二烯醇加样回收率实验结果

2、醇浸出物含量测定

参照2015年版《中国药典》四部通则2201项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂。取本品供试品约2g，用天平精密称定，将其置于150mL锥形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，密塞，称定重量，静置1h后，回流1h。取下锥形瓶，放至冷却后，密塞，再称定其重量，用稀乙醇补足减少的重量，轻轻摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取续滤液25mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105℃干燥箱烘3h，然后置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，计算供试品中醇浸出物的含量(％)。

按照“1.4”、“2”项下方法对实施例1～3的样品进行了检测，结果见表6。

表6样品含量测定

含量/％	实施例1样品	实施例2样品	实施例3样品
				大戟二烯醇	0.19	0.35	0.25
醇浸出物	19.84	9.81	19.56

三、加醋量对大戟二烯醇和醇浸出物含量影响的试验研究

称取10g甘遂饮片，加醋量分别为2g、2.5g、3g、3.5g、4g，拌匀，闷润10h至透，270℃炒制4min，取出，放凉。分别按照上述大戟二烯醇以及醇浸出物的含量测定方法进行含量测定，考察加醋量对大戟二烯醇及醇浸出物含量的影响(见图9～10)，结果表明，最佳加醋量为甘遂饮片质量的30wt％。

四、闷润时间对大戟二烯醇和醇浸出物含量影响的试验研究

称取10g甘遂饮片，加醋量为3g，拌匀，闷润时间分别为6h、8h、10h、12h、14h，270℃炒制4min，取出，放凉。考察闷润时间对大戟二烯醇及醇溶性浸出物含量的影响(见图11～12)，结果表明，最佳闷润时间为10h。

五、炒制温度对大戟二烯醇和醇浸出物含量影响的试验研究

称取10g甘遂饮片，加醋量为3g，拌匀，闷润10h至透，炒制温度分别为230℃、250℃、270℃、290℃、310℃，炒制4min，取出，放凉。考察炒制温度对大戟二烯醇及醇溶性浸出物含量的影响(见图13～14)，结果表明，最佳炒制温度为270℃。

六、炒制时间对大戟二烯醇和醇浸出物含量影响的试验研究

称取10g甘遂饮片，加醋量为3g，拌匀，闷润10h至透，270℃温度下炒制，炒制时间分别为3min、3.5min、4min、4.5min、5min，取出，放凉。考察炒制时间对大戟二烯醇及醇溶性浸出物含量的影响(见图15～16)，结果表明，最佳炒制时间为3.5min。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims

1.一种醋炙甘遂的炮制方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的醋炙甘遂的炮制方法，其特征在于，所述加入的醋的质量为甘遂饮片质量的20-40wt％。

3.根据权利要求2所述的醋炙甘遂的炮制方法，其特征在于，所述加入的醋的质量为甘遂饮片质量的30wt％。

4.根据权利要求1所述的醋炙甘遂的炮制方法，其特征在于，所述闷润的时间为6-14h。

5.根据权利要求4所述的醋炙甘遂的炮制方法，其特征在于，所述闷润的时间为10h。

6.根据权利要求1所述的醋炙甘遂的炮制方法，其特征在于，所述炒制的温度低于329.4℃，所述炒制的时间为3-5min。

7.根据权利要求6所述的醋炙甘遂的炮制方法，其特征在于，所述炒制的温度为270℃，所述炒制的时间为3.5min。

8.根据权利要求1所述的醋炙甘遂的炮制方法，其特征在于，所述醋炙甘遂中，大戟二烯醇的含量为0.19-0.35％，醇浸出物含量为9.81-19.84％。

9.根据权利要求8所述的醋炙甘遂的炮制方法，其特征在于，所述醋炙甘遂中，大戟二烯醇的含量为0.25％，醇浸出物含量为19.56％。

10.权利要求1-9所述方法制备得到的醋炙甘遂。