CN103877161A - 一种四叶降脂咀嚼片的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种四叶降脂咀嚼片的制备方法，首先将荷叶、桑叶、银杏叶和菊叶粉碎得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于0-5℃冷藏8-12小时，抽滤、萃取、减压浓缩并真空干燥后得到干浸膏，粉碎后得到浸膏粉；然后将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎得到荷叶超微粉；将脱脂奶粉和微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀得到粉料b；将浸膏粉与粉料b混合均匀，再加入荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向混合料中加入聚乙烯吡咯烷酮制软材，制粒并整粒后加入微粉硅胶，压片后即得四叶降脂咀嚼片。本发明四叶降脂咀嚼片可有效降低小鼠体重、脂肪、肝脏重量，具有潜在的减肥降脂作用。

Description

一种四叶降脂咀嚼片的制备方法

一、技术领域

本发明涉及一种降脂减肥药物的制备方法，具体地说是一种四叶降脂咀嚼片的制备方法。

二、背景技术

四叶咀嚼片组方源于纤美减肥茶加减方，选择方中菊叶、荷叶，增加桑叶、银杏叶组成此方。方中荷叶为主药，其他三味药物为补充药。四叶均为药食两用的药材，主要含黄酮类成分。

方中荷叶是睡莲科植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn）的干燥叶，荷叶黄酮具有降脂减肥、抗自由基、抗氧化、抑菌、抗病毒等作用。银杏叶为银杏科植物银杏（Ginkgo biloba Linn）的叶，银杏叶黄酮成分具有扩张血管、抑制血小板活化因子、抗氧化、调血脂，保护心脑血管和神经系统等药理作用。桑叶为桑科植物桑（Morus alba L.）的干燥叶，桑叶黄酮成分具有降血糖、降血脂和抗氧化等药理作用。菊叶来自菊科植物菊（Chrysanthemum morifoliumRamat.）的茎上叶，菊叶提取物有抗氧化、保护心肌缺血、抗菌作用。四味药物目前在降血脂方面应用一方面以泡茶喝为主，杂质溶出较多，影响降脂活性；另一方面，以传统工艺提取制备成一定制剂，其技术以传统醇提、水提为主，受溶剂和高温影响，难以提取出高纯度的活性成分。

三、发明内容

本发明旨在提供一种四叶降脂咀嚼片的制备方法，所要解决的技术问题是遴选合适的原料进行配伍，使其具有降脂减肥的效果，降低毒副作用。本发明将四叶咀嚼片中荷叶、菊叶、银杏叶和桑叶进行超临界萃取，得到总黄酮成分，同时利用超微粉碎技术粉碎荷叶，加入辅料，制备成咀嚼片。咀嚼片运输、使用、储存方便，具有良好的口感和随从性，适合高血脂病人不同人群长期服用。

本发明四叶降脂咀嚼片是按以下方法制备得到的：

1）将干燥后的52质量份的荷叶、12质量份的桑叶、21质量份的银杏叶和35质量份的菊叶粉碎并过24目筛得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于0-5℃冷藏8-12小时，抽滤，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取4-5次，取水层减压浓缩并真空干燥，得到干浸膏；超临界二氧化碳萃取的工艺参数为：萃取时间120-140min，萃取温度45-55℃，CO₂流量为16-18L/h，夹带剂为100-200ml的95%乙醇，分离压力为6MPa，分离温度为35℃。

2）将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎，过300目筛，得到荷叶超微粉；

3）将20-30质量份的脱脂奶粉和20-30质量份的微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀，过80目筛，得到粉料b；将10-20质量份的干浸膏粉碎并过80目筛得到浸膏粉；将所述浸膏粉与所述粉料b混合均匀，再加入5-7质量份的荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向所述混合料中加入混合料体积13-15vt%的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）制软材，过18目筛制粒得粒料；将所得粒料于65℃干燥至恒重，以18目筛整粒，整粒后加入粒料质量1-3%的微粉硅胶作为润滑剂，压片后即得四叶降脂咀嚼片。每片含生药2.12g。一天服用三次，每次4-5片。

本发明制备工艺中超临界二氧化碳萃取技术可充分提取四叶（荷叶、桑叶、银杏叶和菊叶）中总黄酮成分，提取物纯度较高；另外由于荷叶自身香味和作为主药，超微粉碎技术得到的荷叶超微粉可作为填充剂，增加片剂的色素美感和原始香味，提升荷叶作为主药的药效作用。另外，本发明提取、纯化过程不使用有毒试剂，环境友好，无污染。

本发明四叶降脂咀嚼片呈浅绿色，表面光洁，颜色均匀，硬度适中。本发明方法适于开发为保健食品或药品，发挥降脂减肥作用。药理研究表明，本发明四叶降脂咀嚼片可有效降低小鼠体重、脂肪、肝脏重量，具有潜在的减肥降脂作用。与传统提取方法提取的药理研究对比，显示超临界提取物在脂体比、小鼠体重、Lee’s指数上三个方面有明显的差异，活性较强。

四、具体实施方式

实施例1：

1）将干燥后的52质量份的荷叶、12质量份的桑叶、21质量份的银杏叶和35质量份的菊叶粉碎并过24目筛得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于4℃冷藏10小时，抽滤，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取4次，取水层减压浓缩并真空干燥，得到干浸膏；超临界二氧化碳萃取的工艺参数为：萃取时间120min，萃取温度45℃，CO₂流量为16L/h，夹带剂为100ml的95vt%乙醇，分离压力为6MPa，分离温度为35℃。

2）将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎，过300目筛，得荷叶超微粉；

3）将20质量份的脱脂奶粉和20质量份的微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀，过80目筛，得到粉料b；将10质量份的干浸膏粉碎并过80目筛得到浸膏粉；将所述浸膏粉与所述粉料b混合均匀，再加入5质量份的荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向所述混合料中加入混合料体积13vt%的PVP制软材，过18目筛制粒得粒料；将所得粒料于65℃干燥至恒重，以18目筛整粒，整粒后加入粒料质量1%的微粉硅胶作为润滑剂，压片后即得四叶降脂咀嚼片。

实施例2：

1）将干燥后的52质量份的荷叶、12质量份的桑叶、21质量份的银杏叶和35质量份的菊叶粉碎并过24目筛得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于2℃冷藏8小时，抽滤，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取5次，取水层减压浓缩并真空干燥，得到干浸膏；超临界二氧化碳萃取的工艺参数为：萃取时间130min，萃取温度50℃，CO₂流量为17L/h，夹带剂为150ml的95vt%乙醇，分离压力为6MPa，分离温度为35℃。

2）将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎，过300目筛，得荷叶超微粉；

3）将25质量份的脱脂奶粉和25质量份的微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀，过80目筛，得到粉料b；将15质量份的干浸膏粉碎并过80目筛得到浸膏粉；将所述浸膏粉与所述粉料b混合均匀，再加入6质量份的荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向所述混合料中加入混合料体积14vt%的PVP制软材，过18目筛制粒得粒料；将所得粒料于65℃干燥至恒重，以18目筛整粒，整粒后加入粒料质量2%的微粉硅胶作为润滑剂，压片后即得四叶降脂咀嚼片。

实施例3：

1）将干燥后的52质量份的荷叶、12质量份的桑叶、21质量份的银杏叶和35质量份的菊叶粉碎并过24目筛得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于5℃冷藏12小时，抽滤，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取4次，取水层减压浓缩并真空干燥，得到干浸膏；超临界二氧化碳萃取的工艺参数为：萃取时间140min，萃取温度55℃，CO₂流量为18L/h，夹带剂为200ml的95vt%乙醇，分离压力为6MPa，分离温度为35℃。

2）将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎，过300目筛，得荷叶超微粉；

3）将30质量份的脱脂奶粉和30质量份的微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀，过80目筛，得到粉料b；将20质量份的干浸膏粉碎并过80目筛得到浸膏粉；将所述浸膏粉与所述粉料b混合均匀，再加入7质量份的荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向所述混合料中加入混合料体积15vt%的PVP制软材，过18目筛制粒得粒料；将所得粒料于65℃干燥至恒重，以18目筛整粒，整粒后加入粒料质量3%的微粉硅胶作为润滑剂，压片后即得四叶降脂咀嚼片。

【药效试验】

1材料与方法

1.1材料与试剂

昆明种小鼠，雄性，6-8周龄，12-14g，安徽医科大学实验动物中心，合格证号：皖医实动准字01号，为清洁普通动物。

银杏叶、桑叶、荷叶均采自合肥市蜀山植物园，菊叶由安徽滁菊开发有限公司提供，以上药材经安徽新华学院庆兆老师鉴定为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶、桑科植物桑Morus alba L.干燥叶、睡莲科植物莲Nelumbo mucifera Gaertn.干燥叶、滁菊（Chrysanthemummorifolium Ramat.）的茎上叶。

基础饲料，安徽中医学院实验动物中心；高脂饲料，本院自制（配方：基础饲料70%，猪油10%，熟鸡蛋10%，奶粉10%）。

甘油三酯检测试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号100681），总胆固醇检测试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号100491），直接高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号100381），直接低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号100661）。

1.2仪器与设备

UV-4802S型紫外-可见分光光度仪，尤尼柯（上海）仪器有限公司；日立7020全自动生化分析仪：日本日立公司；LDZ4-1.2型台式低速自动平衡离心机，北京京立离心机有限公司；FA2004型电子天平，上海民桥精密科学仪器有限公司。

1.3方法

1.3.1受试样品制备

根据预实验结果，通过提取工艺正交试验优选，分别称取菊叶35g，桑叶12g，银杏叶21g，荷叶52g，共计120g。上述原料备相同的两份，分别粉碎过24目筛得到粗粉。

一份常规提取，提取工艺为：荷叶粗粉加入60倍体积的90vt%乙醇90℃下单独提取三次（2h，1h，0.5h），菊叶粗粉、桑叶粗粉和银杏叶粗粉混合并加入50倍体积的90vt%乙醇90℃下混合提取三次（2h，1h，0.5h），冷却至室温，抽滤后将滤液混合，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取4-5次，取水层减压浓缩，真空干燥，得干浸膏，粉碎，分别加温水调成含20g生药/100ml和10g生药/100ml的混悬液，得到四叶提取物高剂量组（以下简称“常高剂量组”）和四叶提取物低剂量组（以下简称“常低剂量组”）。

另一份将荷叶粗粉、菊叶粗粉、桑叶粗粉和银杏叶粗粉混合并进行超临界二氧化碳萃取，萃取时间140min，萃取温度55℃，CO₂流量为18L/h，夹带剂95vt%乙醇为200ml，分离压力为6MPa，分离温度为35℃。萃取液经抽滤、萃取、减压浓缩、真空干燥后得干浸膏，粉碎，分别加温水调成含20g生药/100ml和10g生药/100ml的混悬液，得到四叶提取物高剂量组（以下简称“超高剂量组”）和四叶提取物低剂量组（以下简称“超低剂量组”）。

1.3.2实验设计

选取60只雄性小白鼠，随机分为正常对照组、模型组、常高剂量组、常低剂量组、超高剂量组和超低剂量组。正常对照组和模型组每天早上8:00给予蒸馏水，常高剂量组、常低剂量组、超高剂量组和超低剂量组给予相应药物，每组10只小鼠，按0.1ml/10g体重进行灌胃，每天给药1次，连续给药30d。正常对照组组给予基础饲料，其他各组给予营养饲料，实验期间小鼠自由饮水，每周称量体重一次，饲养环境为室温条件。

1.3.3实验指标

实验期间每周称取实验动物的体重、体长；实验结束剖腹取睾丸及肾周脂肪并称重，计算Lee’s指数，脂/体比；称肝重：将处死的小鼠解剖，取其新鲜肝脏置于电子天平称重，计算肝重/体重比例。小鼠断头取血，将血液离心分离血清后分别测定TC、TG、HDL-C、LDL-C的浓度。

1.3.4公式计算

1.3.5数据处理

采用SPSS13.0统计软件进行数据处理。

2结果与分析

2.1两种工艺的四叶提取物对小鼠体重、Lee’s指数、脂体比、肝体比的影响

由表1可知，30d后，正常对照组与模型组体重相比有显著性差异（P<0.01），提示本实验中小鼠饲养体重明显增加。30d后，超高剂量组、超低剂量组、常高剂量组、常低剂量组的体重与模型组相比有显著性差异（P<0.01），提示四叶提取物的不同提取物均可显著抑制小鼠的体重增长。其中，超低剂量组与常低剂量组比较，有显著性差异（P<0.01），提示就抑制体重作用来说，本发明超临界提取比常规提取好。

模型组Lee’s指数数值基本高于各组，超高剂量组、超低剂量组、常低剂量组与模型组相比，有显著差异（P<0.01）；而超低剂量组与常低剂量组相比，有显著性差异（P<0.01或P<0.05）。脂体比指标反映，模型组与超高、低剂量组均有显著性差异（P<0.05），与常高、低剂量组无显著性差异。从肝体比指标上看，模型组与超高剂量组、常高剂量组均有显著性差异（P<0.01）。

表1两种工艺的四叶提取物对小鼠体重、Lee’s指数、脂体比、肝体比的影响（n＝10）

注：与模型对照组相比，^aP<0.05，^bP<0.01；超高、低剂量组与对应常高、低剂量组相比，^△P<0.05，^△△P<0.01

2.2两种工艺的四叶提取物对小鼠体内甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）含量的影响

由表2可知，从TC、TG、HDL-C、LDL-C指标上看，模型组与超高、低剂量组均有显著性差异（P<0.01或P<0.05），与常规高剂量组有显著差异（TC组，P<0.05）和常规高、低剂量组有显著性差异（HDL-C组，P<0.05），与常规剂量的TG组、LDL-C组无明显差异。另外，在TC组和LDL-C组中，超临界高、低剂量组与常高、低剂量组均呈现明显的差异（P<0.01或P<0.05）。

表2两种工艺的四叶提取物对小鼠体内TC、TG、HDL-C、LDL-C的影响（n＝10）

注：与模型对照组相比，aP<0.05，^bP<0.01；超高、低剂量组与对应常高、低剂量组相比，^△P<0.05，^△△P<0.01

3结论

3.1超高剂量组、超低剂量组与模型组相比（除肝体比超低剂量组外），均有显著性差异（P<0.01或P<0.05），提示本实验造模成功，可检验超临界提取物的降脂减肥作用。

3.2在对小鼠体重、Lee’s指数上，超低剂量组与常低剂量组有明显差异；在脂体比上，超高、低剂量组与模型组相比具有明显差异，而常高、低剂量组无明显差异。可以初步判定，本发明超临界提取物的降脂减肥作用较强。其原因可能是常规提取温度较高，提取和浓缩反复加热煮沸，使化学成分破坏严重，而超临界二氧化碳提取过程温度低，浓缩简单，成分活性相对较高。另外，两者不同提取工艺下的活性成分可能有所差别。

Claims (2)

1.一种四叶降脂咀嚼片的制备方法，其特征在于按以下步骤操作：

1）将干燥后的52质量份的荷叶、12质量份的桑叶、21质量份的银杏叶和35质量份的菊叶粉碎并过24目筛得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于0-5℃冷藏8-12小时，抽滤，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取4-5次，取水层减压浓缩并真空干燥，得到干浸膏；

2）将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎，过300目筛，得到荷叶超微粉；

3）将20-30质量份的脱脂奶粉和20-30质量份的微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀，过80目筛，得到粉料b；将10-20质量份的干浸膏粉碎并过80目筛得到浸膏粉；将所述浸膏粉与所述粉料b混合均匀，再加入5-7质量份的荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向所述混合料中加入混合料体积13-15vt%的聚乙烯吡咯烷酮制软材，过18目筛制粒得粒料；将所得粒料于65℃干燥至恒重，以18目筛整粒，整粒后加入粒料质量1-3%的微粉硅胶作为润滑剂，压片后即得四叶降脂咀嚼片。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤1）中超临界二氧化碳萃取的工艺参数为：萃取时间120-140min，萃取温度45-55℃，CO₂流量为16-18L/h，夹带剂为100-200ml的95%乙醇，分离压力为6MPa，分离温度为35℃。