CN109735591B - 一种牛骨胶原蛋白肽及其生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于胶原蛋白肽领域，公开了一种牛骨胶原蛋白肽及其生产方法。所述牛骨胶原蛋白肽的生产方法包括：将牛骨除杂、粉碎和蒸煮，蒸煮液油水分离，高效率复配酶制剂在不调节pH值且不控制温度条件下酶解，无机纳滤陶瓷膜过滤去除不易溶解和易吸潮的成分，高温高压处理，浓缩以及干燥制粉。采用本发明提供的方法不需要调节酶解pH值、不需要控制酶解温度、酶解时间短、酶添加量少、酶解产物分子量低且集中，并且所制得的牛骨胶原蛋白肽粉末水复溶性极佳并且储藏过程中不易吸潮结块。

Description

一种牛骨胶原蛋白肽及其生产方法

技术领域

本发明属于胶原蛋白肽领域，特别涉及一种牛骨胶原蛋白肽及其生产方法。

背景技术

胶原蛋白富含人体需要的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸等氨基酸。胶原蛋白是一种高分子功能性蛋白质，它是皮肤的主要组成部分，占皮肤真皮层80％的比重，它在皮肤中构成了一张细密的弹力网，牢固锁住水分，支撑着皮肤。胶原蛋白是由三条肽链拧成的螺旋纤维状蛋白质，也是人体内含量最丰富的蛋白质，广泛分布于结缔组织、皮肤、骨骼、内脏细胞间质及肌腔、韧带、巩膜等部位，大约占人体总蛋白质的30％以上，它富含人体需要的脯氨酸、羟脯氨酸等胶原蛋白特征氨基酸，是人体细胞特别是肌肤细胞外基质中重要组成部分。胶原蛋白是大分子蛋白质，其分子量在300,000Da以上，不能被人体直接吸收。

胶原蛋白肽是胶原蛋白水解的产物，为介于氨基酸和大分子蛋白质之间的物质，两个或以上的氨基酸脱水缩合形成若干个肽键从而组成一个肽，多个肽进行多级折叠就组成一个蛋白质分子。肽是精准的蛋白质片段，其分子只有纳米大小。现代研究表明，肽较蛋白质而言，更易于消化吸收、能迅速给机体提供能量、无蛋白质变性、低过敏性、良好的水溶性等特点，并具有多重生物活性功能。

CN107998369A公开了一种牛骨胶原蛋白低聚肽制品的制备方法，包括如下步骤：选取新鲜洗净后的牛骨放入液氮中冷却，取出后用破碎机破碎后，加入提取溶液进行提取后得到固液混合物；向固液混合物中加入混合酶，得到第一酶解液；向第一酶解液中加入蛋白内切酶，得到第二酶解液；向第二酶解液中加入中药提取物，不断搅拌升温至沸腾，离心过滤后得到混合提取液；将混合提取液进行分离、浓缩和干燥后，得到牛骨胶原蛋白低聚肽制品。

CN105018554A公开了一种小分子牛骨胶原肤及其制备方法，包括依次进行的以下步骤：粉碎、提取分离、酶解、复合过滤、浓缩和干燥；所述酶解过程为：在牛骨胶原蛋白提取液中加入骨胶原蛋白酶进行一次酶解，一次酶解后，用混合酸调节一次酶解液的pH值至6～7，然后加入脯氨酸蛋白酶进行二次酶解，二次酶解时间为2～4h，脯氨酸蛋白酶的加入量为牛骨胶原蛋白质量的0.1～0.3％。

然而，上述两件发明专利申请存在的问题和缺点为：采用的酶的酶解效率低，酶解时间长，酶添加量多，需要调节最适pH值和最适温度进行酶解，操作复杂，调节最适酶解pH值会带入大量无机离子，控制最适酶解温度能耗较大；需要采用超滤膜和纳滤膜两次膜过滤，其中，超滤膜所起的作用为截留大分子物质，纳滤膜所起的作用为脱盐浓缩，步骤繁琐，并且所用膜芯为有机材料，不耐酸碱、不耐高温高压、通量小、使用寿命短，清洗不方便；此外，所制备的胶原蛋白肽粉末的水复溶性较差，储藏过程中容易吸潮结块。

发明内容

本发明的目的在于提供一种不需要调节酶解pH值、不需要控制酶解温度、酶解产物分子量低且集中、膜过滤仅需一次且运行清洗方便、所制得牛骨胶原蛋白肽粉末水复溶性极佳并且储藏过程中不易吸潮结块的牛骨胶原蛋白肽的生产方法以及由该方法生产得到的牛骨胶原蛋白肽。

具体地，本发明提供了一种牛骨胶原蛋白肽的生产方法，其中，该方法包括以下步骤：

(1)原料前处理：将牛骨先除去骨头上的杂质，再利用碎骨机粉碎至2～3cm的骨块，之后将经过粉碎后的牛骨清洗干净，再放入蒸煮罐中并加入水进行蒸煮，得到蒸煮液；

(2)油水分离：将所述蒸煮液进行油水分离，并将所得水相降温至50～55℃，得到粗胶原蛋白溶液；

(3)酶解：往所述粗胶原蛋白溶液中加入用量为原料重量0.05～0.15％的高效率复配酶制剂，混合均匀后在不调节pH值、不控制温度的自然条件下酶解0.5～2h，得到胶原蛋白肽溶液；所述高效率复配酶制剂由30～40wt％复合蛋白酶、25～30wt％风味蛋白酶、25～30wt％碱性蛋白酶、7～8wt％动物蛋白水解酶和2～3wt％酶激活剂组成，所述酶激活剂含有还原剂和二价金属离子；

(4)无机纳滤陶瓷膜过滤：将所述胶原蛋白肽溶液采用截留分子量为800Da的无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为高纯度胶原蛋白肽溶液；

(5)高温高压处理：将所述高纯度胶原蛋白肽溶液进行高温高压处理，得到处理液；

(6)浓缩：将所述处理液进行减压加热浓缩，得到浓缩液；

(7)干燥制粉：将所述浓缩液进行喷雾干燥，得到牛骨胶原蛋白肽粉末。

进一步的，所述酶激活剂中还原剂和二价金属离子的摩尔比为1:(0.5～2)。

进一步的，所述还原剂为二硫苏糖醇和/或β-巯基乙醇。

进一步的，所述二价金属离子为Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺的混合物。

进一步的，Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺的摩尔比为(0.9～1.1):(0.9～1.1):1。

进一步的，步骤(1)中，所述蒸煮步骤中牛骨与水的体积比为1:(3～5)。

进一步的，步骤(1)中，所述蒸煮的条件包括蒸煮温度为100～120℃，蒸煮压力为0.15～2MPa，蒸煮时间为2～4h。

进一步的，所述油水分离的方式为静置分层。

进一步的，所述无机纳滤陶瓷膜的滤芯采用硅质、铝质、镁质、硅铝质和硅镁质中的任意一种材料制作而成。

进一步的，所述高温高压处理的条件包括温度为110～130℃，压力为0.1～0.3MPa，时间为5～20min。

此外，本发明还提供了由上述方法生产得到的牛骨胶原蛋白肽。

本发明的关键手段是采用特定的原料前处理以及高效率复配酶制剂酶解。其中，将牛骨原料进行清洗和蒸煮处理能够去除牛骨中的杂蛋白，使其中的胶原蛋白充分溶于水。所述高效率复配酶制剂由30～40wt％复合蛋白酶、25～30wt％风味蛋白酶、25～30wt％碱性蛋白酶、7～8wt％动物蛋白水解酶和2～3wt％酶激活剂(还原剂和二价金属离子的混合物)组成，这种特定的复配酶制剂协同配合非常有利于对牛骨胶原蛋白进行酶解，能高效专一性酶解牛骨胶原蛋白，而酶激活剂中所含有的还原剂和二价金属离子能够激活这几种蛋白酶的酶活力，将以上几种蛋白酶在还原剂和二价金属离子的作用下按照以上配比复配形成的酶制剂具有极强的胶原蛋白酶解效率。采用以上高效复配酶制剂对牛骨胶原蛋白进行酶解，在不调节pH值、不控制温度的自然条件下，在添加少量蛋白酶的前提下即可实现彻底酶解胶原蛋白的目的，酶解产物分子量小且集中，酶解产物游离氨基酸含量低，分子量为1000Da以下的胶原蛋白肽比例达到了100％，介于200～1000Da的胶原蛋白肽比例达到了95％以上。

综上，本发明的有益效果如下：

(1)采用特定的原料前处理、油水分离、酶解、无机纳滤陶瓷膜过滤、高温高压处理、浓缩和干燥相配合，并采用高效率复配酶制剂进行酶解的技术手段，显著提高了酶解效率，使得在不调节最适pH值、不控制最适温度的自然条件下，添加少量蛋白酶，酶解较短时间，即可彻底酶解胶原蛋白，酶解产物分子量小且集中，酶解产物游离氨基酸含量低，分子量为1000Da以下的胶原蛋白肽比例能够达到100％，介于200～1000Da的胶原蛋白肽比例能够达到95％以上。此外，在酶解过程中，不需要采用酸碱来调节最适酶解pH值，不带入无机离子，后续不需要再采取纳滤膜去除无机离子，简化工艺步骤；在酶解过程中，也不需要调节最适酶解温度，相比于现有技术，不仅操作简单而且节省能耗。

(2)在酶解之后采用无机纳滤陶瓷膜过滤的技术手段，去除不易溶解的物质和易吸潮的糖类成分，提高最终得到的胶原蛋白肽成品的水复溶性，并且成品储藏过程中不易吸潮结块。无机纳滤陶瓷膜与有机纳滤膜相比，具有耐有机溶剂、耐高温、耐酸碱、机械强度高、通量大和寿命长的优势。本发明只需采用一次纳滤膜处理，比既需要采用超滤膜截留大分子物质、又需要采用纳滤膜脱盐浓缩的现有技术相比，显著简化工艺步骤，并且膜处理的作用不同。

(3)在无机纳滤陶瓷膜过滤之后将所得胶原蛋白肽溶液采用高温高压处理，这样能够进一步提高最终得到的胶原蛋白肽成品的水复溶性，成品更细腻，极易溶于水。

具体实施方式

以下将详细描述本发明。

在本发明中，初始原料牛骨可以为新鲜牛骨，也可以为冷冻牛骨经解冻后得到。

在本发明中，所述原料前处理的作为为去除杂蛋白，并将胶原蛋白从牛骨中提取出来。从牛骨上去除杂质是指去除肉眼可见的大颗粒杂质。在蒸煮步骤中，牛骨与水的体积比优选为1:(3～5)。此外，所述蒸煮的条件包括蒸煮温度优选为100～120℃，蒸煮压力优选为0.15～2MPa，蒸煮时间优选为2～4h。在本发明中，所述压力均指表压。

在本发明中，所述油水分离的作用为去除脂肪，得到粗胶原蛋白溶液。其中，所述油水分离的方式可以为重力分离法、机械分离法、离心分离法中的任意一种。其中，所述机械分离法是指利用筛网、膜等方式而实现油与水的分离。

在本发明中，所述酶解在不调节pH值、不控制温度下进行。所述酶解之后，从牛骨中提取的粗胶原蛋白能够降解成游离氨基酸含量低、分子量为1000Da以下的胶原蛋白肽比例能够达到100％(介于200～1000Da的胶原蛋白肽比例能够达到95％以上)的酶解产物。其中，所述高效率复配酶制剂中所含的蛋白酶均可以通过市售获得。例如，所述复合蛋白酶可以为购自诺维信公司的复合蛋白酶。所述风味蛋白酶可以为购自广西南宁庞博生物工程有限公司的源自米曲霉发酵所得的风味蛋白酶。所述碱性蛋白酶可以为购自广西南宁庞博生物工程有限公司的源自地衣芽孢杆菌发酵所得的碱性蛋白酶。所述动物蛋白水解酶可以为购自广西南宁庞博生物工程有限公司的源自复合酶的动物蛋白水解酶。

所述酶激活剂含有还原剂和二价金属离子。其中，所述还原剂优选为二硫苏糖醇和/或β-巯基乙醇。所述二价金属离子优选选自Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺中的至少一种，更优选为Mg^{2 +}、Zn²⁺和Ca²⁺的混合物，最优选为Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺按照摩尔比(0.9～1.1):(0.9～1.1):1复配得到的混合物。所述二价金属离子可以以含有以上金属离子的盐的形式存在。特别优选地，所述酶激活剂由还原剂和二价金属离子以及能够与所述二价金属离子形成盐的阴离子组成。此外，所述酶激活剂中还原剂和二价金属离子的摩尔比特别优选为1:(0.5～2)。

在本发明中，所述陶瓷膜过滤的作用为去除不易溶解的成分和易吸潮的糖类成分，提高最终得到的胶原蛋白肽成品的水复溶性，并且成品储藏过程中不易吸潮结块。无机纳滤陶瓷膜与有机纳滤膜相比，具有耐有机溶剂、耐高温、耐酸碱、机械强度高、通量大和寿命长的优势。所述无机纳滤陶瓷膜的滤芯优选采用硅质、铝质、镁质、硅铝质和硅镁质中的任意一种材料制作而成。所述无机纳滤陶瓷膜的截留分子量为800Da，当截留分子量超过800Da时，去除不易溶解的成分和易吸潮的糖类成分不彻底，当截留分子量小于800Da时，胶原蛋白肽损失率高。

在本发明中，所述高温高压处理的作用为进一步提高最终得到的胶原蛋白肽成品的水复溶性，使得成品更细腻，极易溶解，并且高纯度胶原蛋白肽溶液经过高温高压处理后，也可以起到彻底灭菌和消除过敏性的作用。优选地，所述高温高压处理在温度不低于110℃、压力不低于0.1MPa的条件下进行；更优选地，所述高温高压处理的条件包括温度为110～130℃，压力为0.1～0.3MPa，时间为5～20min。

在本发明中，所述减压加热浓缩的作用为将高温高压处理后的高纯度胶原蛋白肽中的水分部分或者全部去除。

在本发明中，所述干燥制粉的作用为将浓缩液加工成粉末。其中，所述喷雾干燥的温度可以为110～140℃。

此外，待喷雾干燥形成牛骨胶原蛋白肽粉末之后，还可以将其进行包装，以便外售。

下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

以下实施例和对比例中，所述复合蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、动物蛋白水解酶的来源及生产企业如下表1所示：

表1

酶的名称	来源	生产企业
			复合蛋白酶	复合酶	诺维信公司
风味蛋白酶	米曲霉发酵	广西南宁庞博生物工程有限公司
			碱性蛋白酶	地衣芽孢杆菌发酵	广西南宁庞博生物工程有限公司
动物蛋白水解酶	复合酶	广西南宁庞博生物工程有限公司

实施例1

(1)原料前处理：将新鲜的牛骨头先人工除去骨头上的杂质，再利用碎骨机粉碎至2～3cm的骨块，之后将经过粉碎后的牛骨清洗干净，再放入蒸煮罐中并加入水进行蒸煮，其中，牛骨与水的体积比为1:3，蒸煮温度为100℃，蒸煮压力为2MPa，蒸煮时间为4h，得到蒸煮液。

(2)油水分离：将蒸煮液采用重力分离法进行油水分离，并将所得水相降温至50～55℃，得到粗胶原蛋白溶液。

(3)酶解：往所述粗胶原蛋白溶液中加入0.1％(w/w)原料重量的高效率复配酶制剂，混合均匀后酶解1h，得到胶原蛋白肽溶液。其中，所述高效率复配酶制剂由如下质量百分含量的组分组成：复合蛋白酶30％、风味蛋白酶30％、碱性蛋白酶30％、动物蛋白水解酶7％和酶激活剂3％。所述酶激活剂由还原剂二硫苏糖醇、β-巯基乙醇以及二价金属离子Mg^{2 +}、Zn²⁺、Ca²⁺组成，所述还原剂中二硫苏糖醇和β-巯基乙醇的摩尔比为1:1，所述还原剂和二价金属离子的摩尔比为1:1，所述二价金属离子Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺的摩尔比为1:1:1。

(4)陶瓷膜过滤：将所述胶原蛋白肽溶液采用截留分子量为800Da的无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为高纯度胶原蛋白肽溶液。

(5)高温高压处理：将所述高纯度胶原蛋白肽溶液在温度为130℃、压力为0.1MPa的条件下处理5min，得到处理液。

(6)浓缩：将处理液进行减压加热浓缩，得到浓缩液。

(7)干燥制粉及包装：将浓缩液进行喷雾干燥制粉，包装后得牛骨胶原蛋白肽成品。

实施例2

(1)原料前处理：将新鲜的牛骨头先人工除去骨头上的杂质，再利用碎骨机粉碎至2～3cm的骨块，之后将经过粉碎后的牛骨清洗干净，再放入蒸煮罐中并加入水进行蒸煮，其中，牛骨与水的体积比为1:4，蒸煮温度为110℃，蒸煮压力为1MPa，蒸煮时间为3h，得到蒸煮液。

(2)油水分离：将蒸煮液采用机械分离法进行油水分离，并将所得水相降温至50～55℃，得到粗胶原蛋白溶液。

(3)酶解：往所述粗胶原蛋白溶液中加入0.1％(w/w)原料重量的高效率复配酶制剂，混合均匀后酶解1h，得到胶原蛋白肽溶液。其中，所述高效率复配酶制剂由如下质量百分含量的组分组成：复合蛋白酶35％、风味蛋白酶27.5％、碱性蛋白酶27.5％、动物蛋白水解酶7.5％、酶激活剂2.5％。所述酶激活剂由还原剂二硫苏糖醇和二价金属离子Mg²⁺、Zn²⁺、Ca²⁺复配组成，所述还原剂和二价金属离子的摩尔比为1:0.5，所述二价金属离子Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺的摩尔比为1:1:1。

(4)陶瓷膜过滤：将所述胶原蛋白肽溶液采用截留分子量为800Da的无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为高纯度胶原蛋白肽溶液。

(5)高温高压处理：将所述高纯度胶原蛋白肽溶液在温度为120℃、压力为0.2MPa的条件下处理10min，得到处理液。

(6)浓缩：将处理液进行减压加热浓缩，得到浓缩液。

(7)干燥制粉及包装：将浓缩液进行喷雾干燥制粉，包装后得牛骨胶原蛋白肽成品。

实施例3

(1)原料前处理：将新鲜的牛骨头先人工除去骨头上的杂质，再利用碎骨机粉碎至2～3cm的骨块，之后将经过粉碎后的牛骨清洗干净后，再放入蒸煮罐中并加入水进行蒸煮，其中，牛骨与水的体积比为1:5，蒸煮温度为120℃，蒸煮压力为0.15MPa，蒸煮时间为2h，得到蒸煮液。

(2)油水分离：将蒸煮液采用离心分离法进行油水分离，并将所得水相降温至50～55℃，得到粗胶原蛋白溶液。

(3)酶解：往所述粗胶原蛋白溶液中加入0.1％(w/w)原料重量的高效率复配酶制剂，混合均匀后酶解1h，得到胶原蛋白肽溶液。其中，所述高效率复配酶制剂由如下质量百分含量的组分组成：复合蛋白酶40％、风味蛋白酶25％、碱性蛋白酶25％、动物蛋白水解酶8％和酶激活剂2％。所述酶激活剂由还原剂二硫苏糖醇、β-巯基乙醇以及二价金属离子Mg^{2 +}、Zn²⁺、Ca²⁺组成，所述还原剂中二硫苏糖醇和β-巯基乙醇的摩尔比为1:1，所述还原剂和二价金属离子的摩尔比为1:1，所述二价金属离子Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺的摩尔比为1:1:1。

(4)陶瓷膜过滤：将所述胶原蛋白肽溶液采用截留分子量为800Da的无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为高纯度胶原蛋白肽溶液。

(5)高温高压处理：将所述高纯度胶原蛋白肽溶液在温度为110℃、压力为0.3MPa的条件下处理20min，得到处理液。

(6)浓缩：将处理液进行减压加热浓缩，得到浓缩液。

(7)干燥制粉及包装：将浓缩液进行喷雾干燥制粉，包装后得牛骨胶原蛋白肽成品。

对比例1

按照实施例1的方法生产牛骨胶原蛋白肽，不同的是，在酶解过程中，将高效率复配酶制剂中的复合蛋白酶采用相同重量百分含量的动物蛋白水解酶替代，其余与实施例1相同，得到参比牛骨胶原蛋白肽成品。

对比例2

按照实施例1的方法生产牛骨胶原蛋白肽，不同的是，在酶解过程中，将高效率复配酶制剂中的风味蛋白酶采用相同重量百分含量的动物蛋白水解酶替代，其余与实施例1相同，得到参比牛骨胶原蛋白肽成品。

对比例3

按照实施例1的方法生产牛骨胶原蛋白肽，不同的是，在酶解过程中，将高效率复配酶制剂中的碱性蛋白酶采用相同重量百分含量的动物蛋白水解酶替代，其余与实施例1相同，得到参比牛骨胶原蛋白肽成品。

对比例4

按照实施例1的方法生产牛骨胶原蛋白肽，不同的是，在酶解过程中，将高效率复配酶制剂中的动物蛋白水解酶采用相同重量百分含量的碱性蛋白酶替代，其余与实施例1相同，得到参比牛骨胶原蛋白肽成品。

对比例5

按照实施例1的方法生产牛骨胶原蛋白肽，不同的是，在酶解过程中，高效率复配酶制剂中所含的酶激活剂完全由二价金属离子Mg²⁺、Zn²⁺、Ca²⁺按照摩尔比为1:1:1复配组成，其余与实施例1相同，得到参比牛骨胶原蛋白肽成品。

对比例6

按照实施例1的方法生产牛骨胶原蛋白肽，不同的是，在酶解过程中，高效率复配酶制剂中所含的酶激活剂完全由二硫苏糖醇和β-巯基乙醇按照1:1的摩尔比复配组成，其余与实施例1相同，得到参比牛骨胶原蛋白肽成品。

对比例7

按照实施例1的方法生产牛骨胶原蛋白肽，不同的是，在酶解过程中，将高效率复配酶制剂中所含的酶激活剂采用相同重量百分含量的动物蛋白水解酶替代，其余与实施例1相同，得到参比牛骨胶原蛋白肽成品。

测试例

(1)高效率复配酶制剂酶解效果检测：

实施例1～3以及对比例1～7中，牛骨经过原料前处理、油水分离后，利用高效率复配酶制剂在不调节pH值、不控制温度条件下进行酶解，为了评估酶解效果，酶解结束后，采用《中华人民共和国国家标准GB/T 22729-2008》附录A中的方法进行酶解产物检测，结果如下表2所示：

表2

由表2的结果可知，实施例1～3的酶解产物分子量小且集中，酶解产物游离氨基酸含量低(小于200Da的比例小于5％)，分子量小于1000Da的胶原蛋白肽比例达到了100％，介于200～1000Da的胶原蛋白肽比例达到了95％以上，酶解产物分子量明显优于对比例1～7。由此可以说明，采用本发明提供的特定原料前处理、高效率复配酶制剂酶解的组合技术手段，能够显著提高酶解胶原蛋白的酶解效率，使得在不调节最适pH值、不控制最适温度的自然条件下，添加少量蛋白酶，酶解较短时间，即可彻底酶解胶原蛋白。

(2)牛骨胶原蛋白肽成品理化指标检测：

对实施例1～3获得的牛骨胶原蛋白肽成品粉末进行理化指标检测，其中，羟脯氨酸检测方法参照GB/T 9695.23进行，总氮检测方法参照GB 5009.5进行，灰分检测方法参照GB 5009.4进行，结果如下表3所示：

表3

由表3的结果可知，实施例1～3获得的牛骨胶原蛋白肽成品的羟脯氨酸、总氮、灰分指标均显著优于《食品安全国家标准胶原蛋白肽GB 31645-2018》的要求，说明利用本发明提供的方法所得牛骨胶原蛋白肽纯度高，品质好，尤其是灰分含量只有0.7～1.0g/100g。由此可以说明，利用本发明这种特定的高效率复配酶制剂在不调节pH值条件下进行酶解，不需要用酸碱调节pH值，从而在生产过程不会引入无机离子，可大幅度减少成品中灰分的含量。

(3)牛骨胶原蛋白肽成品的水复溶性和牛骨胶原蛋白肽溶液的透光率检测：

分别将实施例1～3获得的牛骨胶原蛋白肽成品粉末8g倒入不同杯中，用300mL 60℃左右温开水冲调，1s时间内即全部溶解，得到牛骨胶原蛋白肽溶解液，肉眼观察溶解液澄清透明、无任何沉淀。使用紫外分光光度计在620nm下检测以上几种牛骨胶原蛋白肽溶解液的透光率，结果如下表4所示：

表4

项目	透光率(％)
		实施例1	97
实施例2	95
		实施例3	96

由表4的结果可知，采用无机纳滤陶瓷膜过滤的技术手段，去除不易溶解的物质，再采用肽溶液的高温高压处理的技术手段，进一步提高成品的溶解性能，使得获得的牛骨胶原蛋白肽成品极易溶于水、水复溶性极佳，溶于水后的溶解液澄清透明、无任何沉淀、透光率高，消费者冲泡此产品时，不需搅拌，食用方便、食用体验佳，是现有技术达不到的技术效果。

(4)牛骨胶原蛋白肽成品的货架期试验：

分别将实施例1～3获得的牛骨胶原蛋白肽成品粉末8g倒入包装袋中，室温敞口放置于室内展架上，肉眼观察成品出现结块的时间，结果如下表5所示：

表5

项目	出现结块的时间(天)
		实施例1	57
实施例2	54
		实施例3	58

现有技术生产的牛骨胶原蛋白肽在贮藏过程中，容易吸潮结块，影响产品的销售。由表5的结果可知，本发明采用无机纳滤陶瓷膜过滤的技术手段，可以去除易吸潮的糖类成分，使得成品储藏过程中不易吸潮结块，易于储藏，是现有技术达不到的技术效果。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (6)

1.一种牛骨胶原蛋白肽的生产方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)原料前处理：将牛骨先除去骨头上的杂质，再利用碎骨机粉碎至2～3cm的骨块，之后将经过粉碎后的牛骨清洗干净，再放入蒸煮罐中并加入水进行蒸煮，得到蒸煮液；

(2)油水分离：将所述蒸煮液进行油水分离，并将所得水相降温至50～55℃，得到粗胶原蛋白溶液；

(3)酶解：往所述粗胶原蛋白溶液中加入用量为原料重量0.05～0.15％的高效率复配酶制剂，混合均匀后在不调节pH值、不控制温度的自然条件下酶解0.5～2h，得到胶原蛋白肽溶液；所述高效率复配酶制剂由30～40wt％复合蛋白酶、25～30wt％风味蛋白酶、25～30wt％碱性蛋白酶、7～8wt％动物蛋白水解酶和2～3wt％酶激活剂组成，所述酶激活剂含有还原剂和二价金属离子；所述还原剂为二硫苏糖醇和/或β-巯基乙醇；所述酶激活剂中还原剂和二价金属离子的摩尔比为1:(0.5～2)；所述二价金属离子为Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺的混合物；

(4)无机纳滤陶瓷膜过滤：将所述胶原蛋白肽溶液采用截留分子量为800Da的无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为高纯度胶原蛋白肽溶液；

(5)高温高压处理：将所述高纯度胶原蛋白肽溶液进行高温高压处理，得到处理液；所述高温高压处理的条件包括温度为110～130℃，压力为0.1～0.3MPa，时间为5～20min；

(6)浓缩：将所述处理液进行减压加热浓缩，得到浓缩液；

(7)干燥制粉：将所述浓缩液进行喷雾干燥，得到牛骨胶原蛋白肽粉末。

2.根据权利要求1所述的牛骨胶原蛋白肽的生产方法，其特征在于，Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺的摩尔比为(0.9～1.1):(0.9～1.1):1。

3.根据权利要求1或2所述的牛骨胶原蛋白肽的生产方法，其特征在于，步骤(1)中，所述蒸煮步骤中牛骨与水的体积比为1:(3～5)；所述蒸煮的条件包括蒸煮温度为100～120℃，蒸煮压力为0.15～2MPa，蒸煮时间为2～4h。

4.根据权利要求1或2所述的牛骨胶原蛋白肽的生产方法，其特征在于，所述油水分离的方式为重力分离法、机械分离法、离心分离法中的任意一种。

5.根据权利要求1或2所述的牛骨胶原蛋白肽的生产方法，其特征在于，所述无机纳滤陶瓷膜的滤芯采用硅质、铝质、镁质、硅铝质和硅镁质中的任意一种材料制作而成。

6.由权利要求1～5中任意一项所述的方法生产得到的牛骨胶原蛋白肽。