CN109735549A - 玉米基因在控制玉米穗行数中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，公开了玉米基因在控制玉米穗行数中的应用。申请人克隆了一个新的玉米穗行数基因ZmKRN8.03，该基因位于第八染色体8.03bin，基因编号为Zm00001d010007。此外，申请人还鉴定了ZmKRN8.03增加玉米穗行数的优异单倍型Hap1。ZmKRN8.03是一个新的增加玉米穗行数的基因，具有潜在的育种价值；其优异单倍型Hap1能够显著地增加穗行数，从而达到增产的效果。

Description

玉米基因在控制玉米穗行数中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及玉米基因ZmKRN8.03在控制玉米穗行数中的应用。

背景技术

玉米单产是由单株穗数和穗重决定的；而单穗穗重是由穗粒数和百粒重所决定的。其中 穗粒数是玉米产量的重要组成因子之一，与产量呈显著正相关。穗粒数又可以分解为穗行数 和行粒数两个产量相关因子。在这些产量相关性状中，穗行数与产量显著相关且具有很高的 广义遗传力，是决定玉米产量最为重要的性状之一。

迄今为止，科学家们依然在用QTL定位的方法尝试去解析玉米生产中重要数量性状的遗 传基础，从而服务于玉米遗传改良。近年来，玉米穗部性状相关QTL的研究成为热点。而穗 行数是一个多位点多基因控制的数量性状，为了解析其遗传基础，科研工作者已经开展了大 量的穗行数QTL定位工作。Lu等利用来源于Ye478和丹340构建的397个F_2:3家系共检测到13 个穗行数QTL位点，其中一个主效位点位于第七染色体上，可以解释17.9％的表型变异。Li 等利用5个穗行数性状发生变异的导入系与轮回亲本Zong3杂交的分离群体进行穗行数位点 定位，共检测到10个QTLs，其中两对QTL存在上位性互作。曹晓良检测到位于第一染色体 上的穗行数QTL qKRN1与第五染色体上bnl9653附近的染色体片段具有互作效应，显著影响 穗行数表型。Bommert等利用B73×Mo17来源群体在玉米第四染色体上定位到一个控制穗行 数的主效QTL，可以解释大约8.4％的表型变异，并进一步克隆到一个编码CLAVATA类响应 蛋白的基因FASCLATED EAR2。2016年，Liu等用abe2(4行)和B73(16行)构建了一个含 有300个单株的F2群体，通过对群体进行SLAF-seq(specific-locus amplifiedfragment seque ncing)构建含有4579个多态性标记的高密度全基因组遗传连锁图谱，结合群体中单株的KR N进行QTL定位，共检测到4个穗行数QTL(qKRN1，qKRN2，qKRN5和KRN8-1)，每个Q TL解释的表型变异为3.01％-15.35％，其中KRN8-1解释的表型变异为15.35％。进一步利用该 群体中KRN极端分离的单株构建两个RNA混池，利用BSR-seq(bulkedsegregant ribonuclei c acid sequencing)的方法在第8染色体上定位到两个穗行数QTL，位于10-25Mb区间内的B SR_QTL1和60-150Mb区间内的BSR_QTL2，其中KRN8-1与BSR_QTL2共定位。此外，利 用源于abe2和B73的RIL群体同样定位到KRN8-1，确定KRN8-1是一个控制KRN的主效QTL。 本实验室的Liu等克隆了一个位于玉米第四染色体的主效QTL KRN4，这是迄今为止正向遗 传学图位克隆的第一个穗行数基因。但上述公开的穗行数位点包括第八染色体上的两个QT L与本发明涉及到的qKRN8.03位点均不在同一区间内，即我们申请的qKRN8.03是通过QTL 定位克隆的一个控制玉米穗行数发育的新基因。

发明内容

本发明的目的在于提供了玉米基因ZmKRN8.03在增加玉米穗行数中的应用，所述的基因 为SEQ ID NO.1所示。

本发明还有一个目的在于提供了检测与玉米穗行数相关的单倍型的引物，所述的引物 为：KRN8-F:TCAGGCGTCCGATTTCGATC和KRN8-R:ACCGGTTGCGATTAACAACG。

本发明的最后一个目的在于提供了检测与玉米穗行数相关的单倍型的引物在玉米育种 中的应用。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

玉米基因ZmKRN8.03与玉米穗行数相关性的鉴定：

1)本发明首先通过初定位，在玉米第八条染色体8.03bin的位置检测到控制穗行数性状的新 主效QTL位点，并将其命名为qKRN8.03。

2)通过回交，并利用分子标记进行前景和背景选择，构建了ZmKRN8.03的近等基因系。

3)近等基因系遗传效应评价及幼穗IM大小统计。

4)申请人利用图位克隆的方法对ZmKRN8.03进行了精细定位，将ZmKRN8.03定位于chr8:94 795188-94945227物理区间内，并将该区间内的唯一一个基因Zm00001d010007作为ZmKRN8. 03的候选基因。

ZmKRN8.03优异单倍型的鉴定：

1)申请人通过候选基因重测序在ZmKRN8.03编码区检测到4个SNP，且其中仅SNP493导致 了氨基酸的改变。

2)通过对423份自交系进行候选基因关联分析发现编码区的4个SNP均与穗行数显著关联， 并将这423份材料分为两种单倍型，通过遗传效应分析确定了增加穗行数的优异单倍型，所 述的优异单倍型的基因型为SEQ ID NO.1所示。

3)分别构建了遗传转化载体对两种单倍型进行过表达，将SEQ ID NO.1所示序列在玉米中 过表达，可显著增加行穗数，通过对其遗传转化后代表型的考察进一步验证了ZmKRN8.03 的功能。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明鉴定了一个位于第八条染色体8.03bin的新的玉米穗行数的主效QTL，命名为qKR N8.03；通过连续多年多点的精细定位，最终成功将其克隆。ZmKRN8.03是一个新的控制玉 米穗行数的基因，单环境下可解释8.79％-14.95％的表型变异，具有很好的潜在育种价值。通 过候选基因关联分析发现，在自然群体中ZmKRN8.03分为两种单倍型，其中一种能够显著地 增加穗行数，从而达到增产的效果。

现有已发表的控制穗行数的主效QTL大多处于定位阶段，只有极少数已被克隆。而我们 不仅精细定位并成功克隆了ZmKRN8.03，且确定了其优异单倍型，最终又通过遗传转化实验 进一步验证了其功能。由此证明ZmKRN8.03作为一个新的控制玉米穗行数的基因，具有很大 的应用潜力。

附图说明

图1为KRN8.03^Lian87和KRN8.03^V54雌花序分生组织直径的大小及果穗表型示意图；

其中：A：KRN8.03^Lian87和KRN8.03^V54约5mm的幼穗照片；B：KRN8.03^Lian87和KRN8.03^V54雌花序分生组织直径统计分析，***P<0.001，样本大小50/50；C：KRN8.03^Lian87和KRN8.03^V54果穗照片。

图2为ZmKRN8.03的精细定位示意图；

白色的和黑色的框表示纯合重组系(HRs)和相对应的纯合非重组系(HNRs)的基因型。黑色表示片段来自V54基因组，白色表示片段来自Lian87基因组。R1到R8和R9到R14 交换单株衍生出的纯合重组家系和相对应的纯合非重组家系分别自2016武汉和2017海南进行穗行数表型鉴定。在纯合重组家系和相对应的纯合非重组家系间进行子代测验，分析两者 之间是否存在显著地存在KRN表型差异，并以此判断对应交换单株的导入片段是否携带有Z mKRN8.03。ZmKRN8.03精细定位于M9和M11之间的约150kb的染色体片段内，这一区段内只有一个基因，Zm00001d010007。N代表家系样本数目。P-vaule通过t-test计算得出。

图3为KRN8.03的基因结构及在QTL-NIL KRN8.03^Lian87和KRN8.03^V54间的多态性示意图；

黑盒和白盒分别代表外显子和UTR区域。垂直线代表SNP。三角形代表插入缺失(InDe l)，上三角形表示KRN8.03^Lian87(Lian87)相对于KRN8.03^V54(V54)的缺失，下三角形表示KRN8.03^V54(V54)相对于KRN8.03^Lian87(Lian87)的缺失，数字表示缺失或插入碱基的 数目。

图4为KRN8.03候选基因关联分析；

其中：A：432份玉米自交系中KRN8.03上22个DNA多态性位点(MAP>0.05)与自交系穗行数表型间的关联，圆点代表SNPs，三角形代表InDels。B：KRN8.03基因结构示意图， 黑盒和白盒分别代表外显子和UTR区域。C：22个多态性位点间的连锁不平衡。

图5为关联群体中KRN8.03两种单倍型效应值分析示意图。

图6为超表达Hap1阳性材料与阴性对照的表型观察示意图。

具体实施方式

本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案；所述试剂或材料，如未 特别说明，均来源于商业渠道，或已公开的材料。

实施例1：

玉米穗行数基因ZmKRN8.03的克隆：

1材料与方法

1.1实验材料

玉米自交系V54、Lian87、243个家系的F_2:3群体、及近等基因系构建的后代定位群体。 1.2试验方法

1.2.1目标区段分子标记开发

利用B73参考基因组序列，设计引物扩增KRN8.03区段内单拷贝的序列，扩增Lian87和V 54的基因组DNA，通过PCR产物测序结果的分析，寻找在Lian87和V54存在3个碱基以上的I nDel，并对其设计特异引物扩增，作为检测此位点的分子标记。

1.2.2田间试验及表型的鉴定

以穗行数较多的自交系Lian 87为母本，穗行数较少的自交系V54(A megabase-scale deleti on is associated with phenotypic variation of multiple traits inmaize)为父本构建了包含2 43个单株的F₂群体及其相应的F_2:3家系，并于2011年在武汉华中农业大学校内试验基地(30° N，114°E)，黄冈农科院试验田(30°N，114°E)，2012年在黄冈农科院试验田和恩施农科 院试验田(30°N，109°E)共四个试验环境种植，并进行穗行数及其它表型考察。

选取背景回复率较高的且含有杂合目标区段的单株与轮回亲本回交，构建含有大量种子的B C3F1分离群体。根据基因型分析，从自交后代中分离出纯合重组系和纯合非重组系并获得 对应的家系，同时得到大量的种子，将来源于同一重组单株的HR家系和HNR家系在2016年 种植于湖北武汉，对重组单株进行子代测验，通过调查同一重组单株对应的HR家系和HNR 家系的穗行数是否呈现显著差异，以判断HR家系和HNR家系间分离的片段是否携带ZmKRN 8.03。

1.2.3基因型分析

基因型分析涉及到DNA的提取以及PCR扩增。单株DNA的提取采用CTAB法，具体步骤：

1.在研钵中加入700μL CTAB(83.5mM Tris-HCl，pH 8.0，16.7mM EDTA pH 8.0，1.17M NaCl，1.67％CTAB)，取适量新鲜幼嫩叶片于冰上研磨至匀浆，转移至2mL的离心 管中；

2. 65℃水浴40min，期间颠倒混匀几次；

3.冷却至室温后，加入等体积的氯仿：异戊醇(24:1，V/V)，轻摇混匀15min左右后，12000rpm离心10min；

4.取200μL上清至另一新的1.5mL离心管中，加入二倍体积的冰乙醇，轻摇混匀后静置 30min；

5. 12000rpm离心10min，弃上清。用75％的乙醇洗沉淀2次；

6.离心去上清，室温放置干燥后，加入100μL ddH2O溶解，-20℃保存备用。

PCR反应体系

PCR反应程序

单株基因型检测采用聚丙烯酰胺凝胶电泳。

2结果与分析

2.1 ZmKRN8.03的初定位

申请人以V54和Lian87构建的F_2:3群体，将控制穗行数的主效QTL定位于第八染色体8.03bin的位置(表1)。qKRN8.03是一个即具有较高遗传稳定性又解释较大比例表型变异的 主效QTL位点，且是之前未被检测到的一个主效QTL位点，适合下一步的精细定位。

表1 ZmKRN8.03初定位结果

2.2 ZmKRN8.0近等基因系构建

利用ZmKRN8.0两侧的标记，对以V54为供体亲本Lian87为轮回亲本构建的含有990个单 株的BC₂F₁群体进行目标区段的前景选择，从中共筛选到89株目标区段杂合的单株。从196 个在V54和Lian87间存在多态性的分子标记中选择基本均匀分布的标记96个，标记间距约为 20cM左右，对此89株目标区段杂合的单株进行遗传背景分析，根据基因型计算目标区段杂 合单株的背景回复率，结果表明BC₂F_l代中目标区段杂合单株背景回复率介于52.31％～94.9 4％之间，平均背景回复率为82.39％，低于BC₂F_l代理论背景回复率87.5％。其中编号为C40 的单株背景回复率最高，达94.94％，高于BC₃F_l代理论背景回复率93.75％，将此单株自交两 代，结合分子标记辅助选择，获得ZmKRN8.03近等基因系，KRN8.03^V54和KRN8.03^Lian87。

对KRN8.03^V54和KRN8.03^Lian87纯合家系进行重要性状的考察分析，结果表明，近等基因 系间仅在穗行数、穗粗和轴粗方面存在极显著差异，其中KRN8.03^V54家系穗行数平均值比K RN8.03^Lian87家系穗行数平均值高约1行(表2，图1中C)，而在穗长、雄穗分枝数和百粒重方 面差异不显著(表2)。

表2 KRN8.03^V54及KRN8.03^Lian87重要农艺性状

2.3近等基因系幼穗IM大小统计

研究表明，玉米雌花序分生组织直径的大小与穗行数正相关，因此，在KRN8.03^V54和 KRN8.03^Lian87植株生长的13叶期取约5mm的幼穗，并测量雌花序分生组织(IM)的直径，结果表明，KRN8.03^V54纯合家系的雌花序分生组织直径(505.30±22.89μm)显著高于KRN8.03^Lian87纯合家系的(469.83±24.95μm)(P-vaule＝1.31E-06)(图1中A，B)。因此我们推测：幼穗IM的直径决定了穗行数，从而影响到产量的形成。

2.4 ZmKRN8.03精细定位以及连锁标记的开发

2014年山东，以ZmKRN8.03初定位区间的两侧标记(umc2571，umc2593)对3500株BC₃F₁群体进行的基因型分析，共筛选出24株交换单株并自交，利用umc2571和umc2593 区段内已有的4个和新加密的8个共12个分子标记将这24株交换单株归类为8种重组类型， 从24株重组单株中选出8株代表这8种重组类型，重组单株后代分离出的纯合重组系及纯 合非重组系再次自交得到相对应的家系，于2016年武汉试验点比较各交换单株的纯合重组 家系与纯合非重组家系穗行数表型的差异，结果显示，含有来自V54的M6-M13基因组导 入片段的重组单株(R4，R5，R6，R7，R8)对应的纯合重组系和纯合非重组系的穗行数平 均值存在显著差异，而不含有来自V54的M6-M13基因组导入片段的重组单株(R1，R2， R3)对应的纯合重组系和纯合非重组系的穗行数平均值不存在显著差异，说明M6-M13区 段内携带KRN8.03，因此，可将ZmKRN8.03定位在标记M6和M13之间约1.1Mb的区间内 (图2)。

根据以上定位结果，用ZmKRN8.03两侧的分子标记M6和M13对更大数目的约16000的F₂种子进行基因型分析，并筛选在M6-M13区段内发生重组的种子，将所有重组籽粒于2016年11月种植于海南三亚，最终得到15株交换单株，并自交。利用M6-M13区段内新 开发的7个分子标记，可将这15株交换单株归类为6种重组类型，从15株重组单株中选出 6株代表这6种重组类型，2017年武汉，从自交后代中分离出HR和HNR单株并自交，获 得对应的家系，并在2017年11月种植于海南三亚，利用同上的子代测验策略进一步精细定 位ZmKRN8.03，结果显示，含有来自V54的M9-M11基因组导入片段的重组单株(R12，R 13，R14)对应的纯合重组系和纯合非重组系的穗行数存在显著差异，而不含有来自V54的 Mx-My基因组导入片段的重组单株(R9，R10，R11)对应的纯合重组系和纯合非重组系的 穗行数不存在显著差异，说明M9-M11区段内携带ZmKRN8.03，并将ZmKRN8.03定位在M 9和M11之间的约150kb的区间内，参考B73基因组(AGPV4)，这一区段内只有一个预 测基因Zm00001d010007，将之作为ZmKRN8.03的候选基因(图2)。

实施例2：

玉米穗行数基因ZmKRN8.03优异单倍型的鉴定

1、材料与方法

1.1实验材料

玉米自交系V54、Lian87及其近等基因系、432份自交系材料。

1.2试验方法

1.2.1候选基因亲本间序列扩增和比较

根据B73参考基因组序列设计特异引物，扩增KRN8.03^V54和KRN8.03^Lian87基因组中ZmK RN8.03起始密码子(ATG)上游约2.6kb的序列，编码区以及3′-UTR区，分两段进行扩增，第一段扩增所用引物为G7-1F和G7-1R，扩增片段长度为1808bp，第二段扩增所用引物G7-2F和G7-2R，扩增片段长度为1990bp，扩增总长度为3675bp。PCR扩增产物送武汉天一辉远 生物科技有限公司进行测序，利用CLC Sequence Viewer软件进行序列的拼接和比对。对亲本材料V54和Lian87进行同样的实验。

1.2.2候选基因关联分析

根据B73参考基因组设计基因特异引物，扩增ZmKRN8.03基因的编码区、启动子区和3′- UTR区，扩增片段总长1871bp，其中编码区564bp，启动子区921bp，3′-UTR区386bp。PCR 产物直接送测序公司测序，获得包含ZmKRN8.03基因这一区段在432份自交系中的序列。使 用BioEdit软件对所测序列进行比对及人工校正，采用Tassel V3.0将最小等位基因频率(mi nor allele frequency，MAF)大于0.05的SNP和InDel抽提出来，随后利用TasselV3.0软件， 结合此自然群体的群体结构(Q)和系谱关系(K)，利用MLM Q+K模型，选取自然群体 的BLUP穗行数表型开展候选基因关联分析。多态性位点间的连锁不平衡(linkagedisequili brium，LD)分析是通过Haploview软件计算并绘图。

1.2.3转基因后代遗传学分析及表型鉴定

对转基因后代进行基因型鉴定；并利用qPCR在mRNA水平检测ZmKRN8.03表达量，确定转化阳性植株及阴性对照。对转基因转化阳性及阴性植株进行农艺性状调查，包括观察野 生型和突变体植株生育期的根、茎、叶等，并统计记录抽雄、吐丝、散粉时间，统计穗行数变化。

2、结果与分析

2.1ZmKRN8.03亲本间多态性分析

在2kb的重测序区段中，共检测到2个InDel和17个SNP，SNP中的12个位于起 始密码子上游，4个位于编码区，1个位于终止密码子下游。位于编码区的4个SNP中仅+ 493处的SNP(G/A)导致第165位氨基酸由丙氨酸(V54)变为苏氨酸(Lian87)(图3)。 此外，在起始密码子上游还检测到2个InDel，1个是V54相对于Lian87的5bp的缺失位点， 另1个是Lian87相对于V54的6bp的缺失位点(图3)。

2.2、候选基因关联分析

利用423份自然群体进行候选基因关联分析，发现处在一个LD上的4个SNP(SNP435、 SNP453、SNP493和SNP528)其中仅SNP493(G/A)的变化导致氨基酸(Ala/Thr)的变化； 且这4个显著性关联位点均在亲本V54和Lian87间表现多态性(图4)。

在423份自然群体中，4个显著性关联位点仅构成两种单倍型。两个亲本中，V54属于Ha p1(SEQ ID NO.1所示)，Lian87属于Hap2(SEQ ID NO.2所示)。进一步通过单倍型的遗传效应分析发现，含Hap1自交系的穗行数显著高于含Hap2自交系的穗行数(图5)。

实施例3：

玉米基因ZmKRN8.03在控制玉米穗行数中的应用，应用过程如下：

1、材料与方法

1.1实验材料

玉米自交系V54、Lian87、转化受体C01。

1.2试验方法

遗传转化载体的构建

对ZmKRN8.03构建超表达载体，进行遗传转化，验证基因的功能。所用载体为pZZ-ubi -EGFP-Tnos(12188bp)。首先扩增候选基因(SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示序列)的基因区获得超表达目标序列，然后将载体酶切线性化，随后利用试剂盒(Vazyme BiotechCo.,Ltd公司的ClonExpress II One Step Cloning Kit)通过同源重组的方法将两者连接， 重组载体转化大肠杆菌(E.coli)感受态，挑斑检测阳性克隆，提质粒，目标序列检测无误， 送中种集团生命科学技术中心进行转化。

遗传转化后代的鉴定及表型考察

通过PCR扩增，在超表达Hap1的遗传转化后代中共鉴定到6个阳性转化事件，在超表达 Hap2的遗传转化后代中共鉴定到3个阳性转化事件。

2018年春，将阳性植株与阴性对照种植于武汉对其进行表型考察，结果表明：超表达H ap1的阳性植株穗行数为15.51，显著高于阴性对照14.88行(P＝0.0109，N＝53/52)(图6)； 超表达Hap2的阳性植株穗行数为14.60465行，与对照相比差异不显著。通过遗传转化实验， 进一步验证了ZmKRN8.03的功能，并证实了Hap1增加穗行数的优异单倍型。

实施例4：

针对玉米基因ZmKRN8.03单倍型设计的标记在玉米穗行数筛选育种中的应用：

针对ZmKRN8.03设计的引物如下：

KRN8-F:TCAGGCGTCCGATTTCGATC

KRN8-R:ACCGGTTGCGATTAACAACG。

用该引物扩增待检测的DNA并测序。将测序结果与两种单倍型的序列进行比对，若与S EQ ID NO.1相同为hap1，若与SEQ ID NO.2相同为hap2，在育种中选用单倍型为hap1的植 株可加快多穗行数玉米育种的进度。

序列表

<110> 华中农业大学

<120> 玉米基因在控制玉米穗行数中的应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 564

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atggagaagg cggaggaggc ggcggcggcg gcggcgcagg agcagtggca gggcgtggtg 60

gaagccaacc tgccgtcgac cccggcctct gccgcgtggc cgcacatcgc gagcttctgc 120

gcgctgcacc ggtacctccc gggcatcgac gtgtgcgagc tcgcggcggg ggaggacggg 180

cggcccgggt gcgtccgcta cgtggcctcc ctggtgccgg gcaccacgac cggggaggtc 240

cgcagctggg cgcgggagaa gctgctggag atcgacgacg gcgcccggcg gctcggctac 300

gccgtcgtcg gcagcagcat ggggttcggc agctacgtcg ccactatgag cgtcgtcgct 360

ggcgacgccg acgaggggtg caggctggtc tgggcgttcg agtgccagcc cgtgcagggg 420

tggagccgcg acgggctcct cgcctacctc gacggcggcg tcagggccat cgccgcgcgg 480

atcgaggaag ccgcccgtgc cgcttacgcc gccgccaatg cgacgccgga ggaggcggcg 540

gcgtcggtcg ccgccaatgc ttga 564

<210> 2

<211> 564

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atggagaagg cggaggaggc ggcggcggcg gcggcgcagg agcagtggca gggcgtggtg 60

gaagccaacc tgccgtcgac cccggcctct gccgcgtggc cgcacatcgc gagcttctgc 120

gcgctgcacc ggtacctccc gggcatcgac gtgtgcgagc tcgcggcggg ggaggacggg 180

cggcccgggt gcgtccgcta cgtggcctcc ctggtgccgg gcaccacgac cggggaggtc 240

cgcagctggg cgcgggagaa gctgctggag atcgacgacg gcgcccggcg gctcggctac 300

gccgtcgtcg gcagcagcat ggggttcggc agctacgtcg ccactatgag cgtcgtcgct 360

ggcgacgccg acgaggggtg caggctggtc tgggcgttcg agtgccagcc cgtgcagggg 420

tggagccgcg acggactcct cgcctacctc gatggcggcg tcagggccat cgccgcgcgg 480

atcgaggaag ccacccgtgc cgcttacgcc gccgccaatg cgacgccaga ggaggcggcg 540

gcgtcggtcg ccgccaatgc ttga 564

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tcaggcgtcc gatttcgatc 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

accggttgcg attaacaacg 20

Claims (4)

1.玉米基因ZmKRN8.03在增加玉米穗行数中的应用，所述的基因为SEQ ID NO.1所示。

2.检测SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的引物。

3.根据权利要求2所述的引物，所述的引物为：KRN8-F:TCAGGCGTCCGATTTCGATC和KRN8-R:ACCGGTTGCGATTAACAACG。

4.权利要求2所述的引物或SEQ ID NO.1所示的基因在玉米育种中的应用。