CN109729973A - 一种红果冬青优株组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种红果冬青优株组培快繁方法,属于植物组培技术领域,包括获取外植体:选用红果冬青优株当年生的嫩芽芽尖,清洗、消毒、灭菌;诱导培养:外植体转入诱导培养基诱导新芽;增殖培养:新芽转入增殖培养基培养30d得到增殖的苗芽;生根培养:切取苗芽芽尖转入生根培养基,培养15d得到生根苗;炼苗移栽:将生根苗密封2‑3d后覆膜炼苗10d,随后移栽;通过本发明公开的组培快繁方法提高了红果冬青的繁殖系数,大大缩短了生根培育周期,提高了繁殖速度,相对于常规冬青属组培方法,存活率更高,适应力更强。
Description
技术领域
本发明涉及植物组培技术领域,尤其涉及一种红果冬青优株组培快繁方法。
背景技术
红果冬青(Ilex purpurea Hassk),冬青科(Aquifoliaceae)冬青属(Ilex)常绿乔木。红果冬青兼具药用价值和观赏价值,中华药典明确记载红果冬青叶可入药,较大的药用价值,也是常用中成药急支糖浆配方的主要成分。红果冬青雌雄异株,雌株入秋后红果累累,鲜艳美丽,挂果期较长,可从当年10月持续到次年4~5月,是观赏价值较高的景观树种。
长梗冬青苷属于红果冬青中药用价值较大的一种化学物质,具有清热解毒,消肿止痛的功能。可用于感冒,扁桃体炎,咽喉肿痛,急性胃肠炎,风湿骨痛;外用治跌打损伤,痈疖疮疡,外伤出血,烧烫伤。目前,红果冬青药材主要来源于野生资源,且每株药用成分含量差异大,不能稳定供应,不足以满足制药行业。现在,红果冬青主要通过种子繁殖和扦插繁殖,上述两种方法繁殖效率较低,不能满足优良品种快速繁殖的生产要求;偶见通过组培进行繁殖。但是,现有技术的组培繁殖方法在繁殖再生植株的时候,可能会出现污染率高、生根难、生长慢、组培苗存活率低等情况,不利于红果冬青组培苗的培养。
专利申请号为201410478843.2的发明专利“一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法”,经过消毒灭菌、初代培养、继代培养、壮苗培养、生根培养、炼苗、移栽步骤等繁殖金叶龟甲冬青,能够提高金叶龟甲冬青的繁殖系数,加快金叶龟甲冬青的繁殖速度,提高金叶龟甲冬青的成活率,但是,金叶龟甲冬青的繁殖方法不仅不能用于红果冬青的繁殖,而且繁殖步骤较多,周期过长,不利于红果冬青的快速繁殖,且完全没有提及组培过程中降低污染率的问题。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的是提供一种红果冬青优株组培快繁方法,通过本发明公开的组培快繁方法提高了红果冬青的增殖系数,同时还提高了繁殖速度,且污染率小,存活率高。
本发明通过以下技术手段解决上述技术问题:
一种红果冬青优株组培快繁方法,所述方法如下:
A.获取外植体:选取红果冬青优株当年生的嫩芽芽尖,清洗、消毒、灭菌,无菌水清洗滤干,得到无菌外植体;
本发明采用嫩芽芽尖进行组培,嫩芽芽尖分化能力更强,诱导率更高,芽段长势更好,更利于再生植株植株的稳定生长。
B.诱导培养:将无菌外植体转接入芽的诱导培养基,于培养温度25℃、光照强度为1800lx、光照时间为12h/d条件下培养30-40d,得到诱导的新芽;
培养温度为25℃有利于芽的诱导和芽点的生长,减少诱导时间,转接外植体后远茎段生长,变粗变高,17d后逐渐在底部以原嫩芽为中心,圆周形式诱导出新生的丛芽。且光照强度为1800lx的条件下,有利于丛芽的生长,缩短培养时间,提高芽的质量。
C.增殖培养:将诱导的新芽转入增殖培养基,于培养温度25℃、光照强度1800-2000lx、光照时间12h/d条件下培养30d,得到增殖的苗芽;
采用上述的诱导培养后,采用本发明记载的增殖条件、增殖培养基进行培养,新芽的增殖速度较快,30d左右增殖系数达到4-5,增殖苗已经十分粗壮,不需要经过壮苗阶段,有效的缩短了培育周期。
D.生根培养:将增殖的苗芽切取2-4cm芽尖,转接至生根培养基,于培养温度25℃、光照强度2000lx、光照时间12h/d条件下培养15d,得到生根苗;
通过本发明的生根培养步骤长出的芽苗生根长度在1cm左右,移栽成活率较高,且便于提高人工的移栽速度,若根部长于1cm后,在移栽过程容易伤根断根。
E.炼苗移栽:密封2-3d天后,取出生根苗洗净根部的琼脂,用1wt‰多菌灵浸泡20min后种植于基质盘中,于环境温度为25℃、基质湿度≥70%,光照强度为2000lx的条件下覆膜炼苗,同时喷施MS营养液,覆膜炼苗10d天,施薄肥,培养28d天后移栽至15孔穴盘。
通过本发明的方法进行炼苗,幼苗具有更强的适应能力,茎干更加粗壮,长势更好。覆膜炼苗10d后喷施薄肥后根系更加发达,茎叶长势更好,茎干木质化速度快。本方法不需要揭盖炼苗,可直接种植于基质盘中,不仅减少了幼苗污染的可能性,还简化了操作。
进一步,所述获取外植体步骤中,清洗、消毒、灭菌具体操作如下:洗洁精清洗芽尖后用流水冲洗3-5min,随后用75wt%酒精消毒20-25s,无菌水清洗后滤干,再用0.1wt%升汞溶液震荡消毒8min。
酒精消毒时间严格控制在20-25s内,避免伤害外植体的同时杀菌效果良好,并且还降低了外植体被污染的概率。
进一步,所述覆膜炼苗是前3d期间全天覆透明薄膜,第3-7d期间每天揭膜1-2h,第7-10d期间白天揭膜,夜间覆膜。
覆膜过久容易出现纤细苗,苗幼嫩且对环境适应能力差,经阳光斜晒后会出现日灼现象,并滋生霉菌,覆膜时间不够则易出现不可逆转的萎焉,所以采用本发明记载的覆膜炼苗操作与增殖、生根操作步骤进行结合,可以稳定幼苗的根系和加快植株适应环境,促使幼苗的生长更加稳定。
进一步,所述诱导培养基的配方如下:MS培养基+NAA0.2mg/L+6BA 1.5mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L组成,所述诱导培养基pH=5.8。
进一步,所述增殖培养基的配方如下:MS培养基+NAA 0.2mg/L+6BA2mg/L+KT0.2g/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L+活性炭0.3mg/L组成,所述增殖培养基pH=5.8。
进一步,所述生根培养基的配方如下:1/2MS培养基+IBA 0.5mg/L+IAA0.2mg/L+维H 0.5mg/L+卡拉胶6.5g/L+蔗糖30g/L组成,所述生根培养基pH=5.8。
生根培养基加入的IBA为0.25mg/L,可以大大提前根的诱导时间,加入维H以后,生长速度更快,植株翠绿,在10d即可出现根点,15d根长可达1cm。
进一步,所述基质盘中的基质由珍珠岩和草炭按照体积比为1:1的比例混合而成。
进一步,所述炼苗移栽步骤中,向基质盘中喷洒1/2MS营养液直至基质湿度≥70%。
覆膜炼苗期间喷施营养液有助于加快植株适应环境,促进生长。
进一步,所述炼苗移栽步骤中,培养28d期间,每7d喷施一次1wt‰多菌灵。
本发明的有益效果:
1、本发明公开的组培快繁方法将红果冬青的繁殖系数提升至4-5。
2、总组培时间缩短至120天左右,提高了繁殖速度,且受污染率下降,生根率和移栽成活率提高至97%以上。
具体实施方式
以下将结合具体实施例对本发明进行详细说明:
实施例1:组培快繁方法一:
A.获取外植体:选取红果冬青优质雌株当年生的200株嫩芽,剪掉多余叶片,留下芽尖,用清水洗净后再用洗洁精清洗,然后用流水冲洗4min将洗洁精洗净,随后用75wt%酒精消毒23s,用无菌水将酒精清洗干净后滤干,再用0.1wt%升汞溶液震荡消毒8min,用无菌水将升汞溶液清洗滤干,得到无菌外植体;
B.诱导培养:将无菌外植体转接入芽的诱导培养基,诱导培养基由MS培养基+NAA0.2mg/L+6BA 1.5mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L制成,pH=5.8,于培养温度为25℃、光照强度为1800lx、光照时间为12h/d的条件下培养40d,得到诱导的新芽;
C.增殖培养:将诱导的新芽转入增殖培养基,增殖培养基由MS培养基+NAA0.2mg/L+6BA 2mg/L+KT0.2g/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L+活性炭0.3mg/L制成,pH=5.8,于培养温度为25℃、光照强度为1800lx、光照时间为12h/d的条件下培养30d,得到增殖的丛芽;
D.生根培养:将增殖的苗芽切取2cm左右芽尖,转接至生根培养基,生根培养基由1/2MS培养基+IBA 0.5mg/L+IAA 0.2mg/L+维H 0.5mg/L+卡拉胶6.5g/L+蔗糖30g/L制成,pH=5.8,于培养温度为25℃、光照强度为2000lx、光照时间为12h/d的条件下培养15d,得到生根苗;
E.炼苗移栽:当经过生根培养后,生根苗的根部长度长至1cm左右,此时可进行炼苗移栽,密封3d,密封期间不可打开密封盖,密封期结束后将生根苗取出,洗净根部琼脂,用1wt‰多菌灵浸泡20min后,种植于等体积的珍珠岩和草炭混合的基质盘中,于环境温度为25℃、基质湿度≥70%,光照强度为2000lx的条件下进行覆膜炼苗,炼苗前3d期间全天覆透明薄膜,第3-7d期间每天揭膜1-2h,第7-10d期间白天揭膜,夜间覆膜,覆膜炼苗期间,当基质湿度<70%时,喷洒1/2MS营养液直至基质湿度≥70%,覆膜炼苗完成后施1wt‰由N15-P15-K15组成的复合薄肥,培养28d天移栽至15孔穴盘。
以上所有步骤均无菌操作。
实施例2:组培快繁方法二:
A.获取外植体:选取与实施例1相同的红果冬青优质雌株当年生的200株嫩芽,剪掉多余叶片,留下芽尖,用清水洗净后再用洗洁精清洗,然后用流水冲洗3min将洗洁精洗净,随后用75wt%酒精消毒20s,用无菌水将酒精清洗干净后滤干,再用0.1wt%升汞溶液震荡消毒8min,用无菌水将升汞溶液清洗滤干,得到无菌外植体;
B.诱导培养:将无菌外植体转接入芽的诱导培养基,诱导培养基由MS培养基+NAA0.2mg/L+6BA 1.5mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L制成,pH=5.8,于培养温度为25℃、光照强度为1800lx、光照时间为12h/d的条件下培养30d,得到诱导的新芽;
C.增殖培养:将诱导的新芽转入增殖培养基,增殖培养基由MS培养基+NAA0.2mg/L+6BA 2mg/L+KT0.2g/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L+活性炭0.3mg/L制成,pH=5.8,于培养温度为25℃、光照强度为2000lx、光照时间为12h/d的条件下培养30d,得到增殖的丛芽;
D.生根培养:将增殖的苗芽切取4cm左右芽尖,转接至生根培养基,生根培养基由1/2MS培养基+IBA 0.5mg/L+IAA 0.2mg/L+维H 0.5mg/L+卡拉胶6.5g/L+蔗糖30g/L制成,pH=5.8,于培养温度为25℃、光照强度为2000lx、光照时间为12h/d的条件下培养15d,得到生根苗;
E.炼苗移栽:当经过生根培养后,生根苗的根部长度长至1cm左右,此时可进行炼苗移栽,密封2d,密封期间不可打开密封盖,密封期结束后将生根苗取出,洗净根部琼脂,用1wt‰多菌灵浸泡20min后,种植于等体积的珍珠岩和草炭混合的基质盘中,于环境温度为25℃、基质湿度≥70%,光照强度为2000lx的条件下进行覆膜炼苗,炼苗前3d期间全天覆透明薄膜,第3-7d期间每天揭膜1-2h,第7-10d期间白天揭膜,夜间覆膜,覆膜炼苗期间,当基质湿度<70%时,喷洒1/2MS营养液直至基质湿度≥70%,覆膜炼苗完成后施1wt‰由N15-P15-K15组成的复合薄肥,培养28d天移栽至15孔穴盘。
以上所有步骤均无菌操作。
对比实施例3:对照组1:
消毒:选取与实施例1相同优质雌株的200株茎段,每个茎段带有芽节,使用饱和洗洁精溶液浸泡90min,用流水冲洗4min,使用75wt%的酒精溶液浸泡1min,并用0.1wt%升汞溶液消毒8min,使用无菌水清洗5次,风干后切割形成1.0-1.5cm长的带有0.5-1.0cm叶柄的茎段;
诱导培养:将处理好的茎段接种到诱芽培养基上,诱芽培养基由WPM+IBA0.50mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L制成,pH=5.8,培养温度为25℃,光照强度为1500lx,光照时间为12h/d,培养时间为40d;
增殖培养:将诱芽培养基上生长出的新芽切割成0.5-1.0cm的单芽或顶芽,然后接种到增殖培养基中,诱导培养基由MS+ZT0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30mg/L+琼脂7mg/L制成,pH=5.8,培养温度为25℃,光照强度为2200lx,光照时间为12h/d,培养时间为35d;
壮苗培养:将增殖培养的芽苗移栽至壮苗培养基,壮苗培养基由MS+ZT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30mg/L+琼脂7mg/L,pH=5.8,培养温度为25℃,光照强度为1500lx,光照时间为12h/d,培养时间为30d;
生根培养:将经过壮苗培养后嫩茎为2cm左右的芽苗移植到生根培养基中,生根培养基由1/2WPM+IBA 0.10mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L制成,pH=5.8,培养温度为25℃,光照强度为2200lx,光照时间为12h/d,培养时间为30d;
炼苗:生根培养后,打开瓶口,洗净根部,用1wt‰多菌灵浸泡20min后,移栽至等体积的泥炭、珍珠岩混合基质盘中,于环境温度为25℃、基质湿度≥70%,光照强度为2200lx的条件下进行覆膜炼苗,炼苗前3d期间全天覆透明薄膜,第3-7d期间每天揭膜1-2h,第7-10d期间白天揭膜,夜间覆膜,覆膜10d后揭膜、施1wt‰由N15-P15-K15组成的复合薄肥,培养28d天后移栽至15孔穴盘。
以上所有步骤均无菌操作。
对实施例1、实施例2和对比实施例3增殖培养阶段的增殖系数、生根率、移栽成活率进行统计,统计结果如表1所示:
表1
实施例 | 实验总株数 | 增殖系数 | 生根率 | 移栽成活率 | 组培总时间 |
实施例1 | 300株 | 5 | 100% | 100% | 126d |
实施例2 | 300株 | 4 | 100% | 100% | 115 |
对比实施例2 | 300株 | 2 | 65% | 70% | 173d |
通过表1的数据可以得出,与对比实施例3(以下简称对比例)的现有技术的组培方式进行比较,实施例1的增殖系数为5,实施例2的增殖系数为4,分别比对比例多3和2,生根率和移栽成活率均为100%,比对比例分别多35%和30%,实施例1组培总时间为126d(40d+30d+15d+3d+10d+28d),实施例2组培总时间为115d(30d+30d+15d+2d+10d+28d),分别比对比例(40d+35d+30d+30d+10d+28d)少47d和58d,说明本发明的通过嫩芽芽尖进行组培,在省略壮苗步骤的条件下减少了总组培时间,但是提高繁殖系数和生根率及移栽存活率。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。
Claims (9)
1.一种红果冬青优株组培快繁方法,其特征在于,所述方法如下:
A.获取外植体:选取红果冬青优株当年生的嫩芽芽尖,清洗、消毒、灭菌,无菌水清洗滤干,得到无菌外植体;
B.诱导培养:将无菌外植体转接入芽的诱导培养基,于培养温度25℃、光照强度为1800lx、光照时间为12h/d条件下培养30-40d,得到诱导的新芽;
C.增殖培养:将诱导的新芽转入增殖培养基,于培养温度25℃、光照强度1800-2000lx、光照时间12h/d条件下培养30d,得到增殖的苗芽;
D.生根培养:将增殖的苗芽切取2-4cm芽尖,转接至生根培养基,于培养温度25℃、光照强度2000lx、光照时间12h/d条件下培养15d,得到生根苗;
E.炼苗移栽:密封2-3d天后,取出生根苗洗净根部的琼脂,用1wt‰多菌灵浸泡20min后种植于基质盘中,于环境温度为25℃、基质湿度≥70%,光照强度为2000lx的条件下覆膜炼苗,同时喷施MS营养液,覆膜炼苗10d天,施薄肥,培养28d天后移栽至15孔穴盘。
2.根据权利要求1所述的一种红果冬青优株组培快繁方法,其特征在于,所述获取外植体步骤中,清洗、消毒、灭菌具体操作如下:洗洁精清洗芽尖后用流水冲洗3-5min,随后用75wt%酒精消毒20-25s,无菌水清洗后滤干,再用0.1wt%升汞溶液震荡消毒8min。
3.根据权利要求2所述的一种红果冬青优株组培快繁方法,其特征在于,所述覆膜炼苗是前3d期间全天覆透明薄膜,第3-7d期间每天揭膜1-2h,第7-10d期间白天揭膜,夜间覆膜。
4.根据权利要求3所述的一种红果冬青优株组培快繁方法,其特征在于,所述诱导培养基的配方如下:MS培养基+NAA0.2mg/L+6BA 1.5mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L组成,所述诱导培养基pH=5.8。
5.根据权利要求4所述的一种红果冬青优株组培快繁方法,其特征在于,所述增殖培养基的配方如下:MS培养基+NAA 0.2mg/L+6BA 2mg/L+KT0.2g/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L+活性炭0.3mg/L组成,所述增殖培养基pH=5.8。
6.根据权利要求5所述的一种红果冬青优株组培快繁方法,其特征在于,所述生根培养基的配方如下:1/2MS培养基+IBA 0.5mg/L+IAA 0.2mg/L+维H 0.5mg/L+卡拉胶6.5g/L+蔗糖30g/L组成,所述生根培养基pH=5.8。
7.根据权利要求6所述的一种红果冬青优株组培快繁方法,其特征在于,所述基质盘中的基质由珍珠岩和草炭按照体积比为1:1的比例混合而成。
8.根据权利要求7所述的一种红果冬青优株组培快繁方法,其特征在于,所述炼苗移栽步骤中,向基质盘中喷洒1/2MS营养液直至基质湿度≥70%。
9.根据权利要求8所述的一种红果冬青优株组培快繁方法,其特征在于,所述炼苗移栽步骤中,培养28d期间,每7d喷施一次1wt‰多菌灵。
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CN109729973B (zh) | 2020-12-11 |
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