CN109722480A - 一种非小细胞肺癌检测试剂盒及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于肿瘤生物标志物及肿瘤诊断领域，具体涉及一种非小细胞肺癌检测试剂盒及其应用。本发明首次发现，FGF19和β‑klotho可各自或联合作为生物标志物用于非小细胞肺癌的早期诊断、治疗方案选择、预后评估，特异性高、灵敏度好。可实现非小细胞肺癌早期体外诊断，克服原有非小细胞肺癌检测大多为活体组织检测的局限，克服现有非小细胞肺癌血清检测操作繁琐，假阳性多的缺点。

Description

一种非小细胞肺癌检测试剂盒及其应用

技术领域

本发明属于肿瘤生物标志物及肿瘤诊断领域，具体涉及一种非小细胞肺癌检测试剂盒及其应用。

背景技术

肺癌根据病理学特点的不同分为多种组织类型，肺癌组织类型不同，其治疗措施和预后效果也不同。常见肺癌组织病理学分型分为非小细胞癌(NSCLC)和小细胞癌(SCLC)。非小细胞癌又分为鳞状细胞癌(SCC)、腺癌(AC)和大细胞癌(LCC)，其中非小细胞肺癌是最常见的肺癌种类，占原发性肺癌的80-85％。非小细胞肺癌一经发现，一般为中晚期，手术治疗效果不佳。因此，非小细胞肺癌的早期诊断对其治疗有重要意义。同时，研究表明吸烟及环境质量下降与非小细胞肺癌发病密切相关，因此非小细胞肺癌的早期筛查具有较强的靶向性。

目前肺癌的检测手段包括影像学技术、组织活检和体外检测。目前，低剂量CT检查【Low-dose computed tomography(LDCT)】是较为推荐的用于肺癌及肺部结节的筛查。但由于高误报率、潜在的过度诊断可能、过高的成本以及可能造成的辐射暴露危害等原因导致其使用受到一定限制。而组织活检，如基于肺癌标志物，如SALL4(专利号CN105044348A)、EIF4G1(CN105624275A)等检测，对肺癌的治疗有积极意义，但对患者创伤大，无法进行肺癌的早期诊断。新兴的肺癌体外检测大多基于血清中肺癌标志物micRNA含量，如miR-106a、miR-20a、(CN106350582A)miR 3613(CN105603117A)等，进而实现肺癌的早期诊断和高风险人群筛查，但利用核酸检测的检测机制较为复杂，对样本要求较高且容易出现假阳性。综上，目前的肺癌检测方法存在较大缺陷，临床上尚无有效手段进行肺癌早期诊断及高危人群的筛查。

发明内容

为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种非小细胞肺癌检测试剂及其应用。

为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面提供FGF19用于制备或筛选非小细胞肺癌检测试剂的用途。

在一种实施方式中，FGF19作为生物标志物。

在一种实施方式中，FGF19作为血清生物标志物。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

需要说明的是，所述非小细胞肺癌检测试剂并不限定为必须为液体形式。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂为特异性识别FGF19的试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19的试剂选自特异性识别FGF19基因的试剂或特异性识别FGF19蛋白的试剂。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的基因序列，制备或筛选特异性识别FGF19基因的试剂，从而作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增FGF19基因或转录本的引物；

(2)特异识别FGF19基因或转录本的探针。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的蛋白序列，制备或筛选特异性识别FGF19蛋白的试剂，从而作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19蛋白的试剂为FGF19蛋白的抗体或配体。

在一种实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明的第二方面，提供β-klotho用于制备或筛选非小细胞肺癌检测试剂的用途。

在一种实施方式中，β-klotho作为生物标志物。

在一种实施方式中，β-klotho作为血清生物标志物。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

需要说明的是，所述非小细胞肺癌检测试剂并不限定为必须为液体形式。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂为特异性识别β-klotho的试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别β-klotho的试剂选自特异性识别β-klotho基因和特异性识别β-klotho蛋白的试剂。

在一种实施方式中，基于所述的β-klotho的基因序列，制备或筛选特异性识别β-klotho基因的试剂，作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，特异性识别β-klotho基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增β-klotho基因或转录本的引物；

(2)特异识别β-klotho基因或转录本的探针。

在一种实施方式中，基于所述的β-klotho的蛋白序列，制备或筛选特异性识别β-klotho蛋白的试剂，作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别β-klotho蛋白的试剂为β-klotho蛋白的抗体或配体。

在一种实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明的第三方面，FGF19和β-klotho联合用于制备或筛选非小细胞肺癌检测试剂的用途。

在一种实施方式中，FGF19和β-klotho联合作为生物标志物。

在一种实施方式中，FGF19和β-klotho联合作为血清生物标志物。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

需要说明的是，所述非小细胞肺癌检测试剂并不限定为必须为液体形式。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂包括特异性识别FGF19的试剂和特异性识别β-klotho的试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19的试剂选自特异性识别FGF19基因的试剂或特异性识别FGF19蛋白的试剂。所述特异性识别β-klotho的试剂选自特异性识别β-klotho基因的试剂或特异性识别β-klotho蛋白的试剂。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的基因序列，制备或筛选特异性识别FGF19基因的试剂；基于所述的β-klotho的基因序列，制备或筛选特异性识别β-klotho基因的试剂；将特异性识别β-klotho基因的试剂和特异性识别β-klotho基因的试剂联合作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，特异性识别FGF19基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增FGF19基因或转录本的引物；

(2)特异识别FGF19基因或转录本的探针。

特异性识别β-klotho基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增β-klotho基因或转录本的引物；

(2)特异识别β-klotho基因或转录本的探针。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的蛋白序列，制备或筛选特异性识别FGF19蛋白的试剂；基于所述的β-klotho的蛋白序列，制备或筛选特异性识别β-klotho蛋白的试剂。将特异性识别FGF19蛋白的试剂和特异性识别β-klotho蛋白的试剂联合作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，特异性识别FGF19蛋白的试剂为FGF19蛋白的抗体或配体。特异性识别β-klotho蛋白的试剂为β-klotho蛋白的抗体或配体。

在一种实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明的第四方面，提供特异性识别FGF19的试剂用于制备非小细胞肺癌诊断试剂盒的用途。

在一种实施方式中，FGF19作为生物标志物。

在一种实施方式中，FGF19作为血清生物标志物。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂盒用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

需要说明的是，所述特异性识别FGF19的试剂并不限定为必须为液体形式。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19的试剂选自特异性识别FGF19基因的试剂或特异性识别FGF19蛋白的试剂。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的基因序列，制备或筛选特异性识别FGF19基因的试剂，从而作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增FGF19基因或转录本的引物；

(2)特异识别FGF19基因或转录本的探针。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的蛋白序列，制备或筛选特异性识别FGF19蛋白的试剂，从而作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19蛋白的试剂为FGF19蛋白的抗体或配体。

在一种实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明的第五方面，提供特异性识别β-klotho的试剂用于制备非小细胞肺癌检测试剂盒的用途。

在一种实施方式中，β-klotho作为生物标志物。

在一种实施方式中，β-klotho作为血清生物标志物。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂盒用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

需要说明的是，所述特异性识别β-klotho的试剂并不限定为必须为液体形式。

在一种实施方式中，所述特异性识别β-klotho的试剂选自特异性识别β-klotho基因和特异性识别β-klotho蛋白的试剂。

在一种实施方式中，基于所述的β-klotho的基因序列，制备或筛选特异性识别β-klotho基因的试剂，作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，特异性识别β-klotho基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增β-klotho基因或转录本的引物；

(2)特异识别β-klotho基因或转录本的探针。

在一种实施方式中，基于所述的β-klotho的蛋白序列，制备或筛选特异性识别β-klotho蛋白的试剂，作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别β-klotho蛋白的试剂为β-klotho蛋白的抗体或配体。

在一种实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明的第六方面，提供特异性识别FGF19和特异性识别β-klotho蛋白的试剂联合用于制备非小细胞肺癌检测试剂盒的用途。

在一种实施方式中，FGF19和β-klotho联合作为生物标志物。

在一种实施方式中，FGF19和β-klotho联合作为血清生物标志物。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂盒用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

需要说明的是，特异性识别FGF19和特异性识别β-klotho蛋白的试剂并不限定为必须为液体形式。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19的试剂选自特异性识别FGF19基因的试剂或特异性识别FGF19蛋白的试剂。所述特异性识别β-klotho的试剂选自特异性识别β-klotho基因的试剂或特异性识别β-klotho蛋白的试剂。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的基因序列，制备或筛选特异性识别FGF19基因的试剂；基于所述的β-klotho的基因序列，制备或筛选特异性识别β-klotho基因的试剂；将特异性识别β-klotho基因的试剂和特异性识别β-klotho基因的试剂联合作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，特异性识别FGF19基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增FGF19基因或转录本的引物；

(2)特异识别FGF19基因或转录本的探针。

特异性识别β-klotho基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增β-klotho基因或转录本的引物；

(2)特异识别β-klotho基因或转录本的探针。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的蛋白序列，制备或筛选特异性识别FGF19蛋白的试剂；基于所述的β-klotho的蛋白序列，制备或筛选特异性识别β-klotho蛋白的试剂。将特异性识别FGF19蛋白的试剂和特异性识别β-klotho蛋白的试剂联合作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，特异性识别FGF19蛋白的试剂为FGF19蛋白的抗体或配体。特异性识别β-klotho蛋白的试剂为β-klotho蛋白的抗体或配体。

在一种实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明的第七方面，提供一种非小细胞肺癌检测试剂盒，所述试剂盒中至少包括特异性识别FGF19的试剂。

在一种实施方式中，FGF19作为生物标志物。

在一种实施方式中，FGF19作为血清生物标志物。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂盒用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

需要说明的是，所述特异性识别FGF19的试剂并不限定为必须为液体形式。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19的试剂选自特异性识别FGF19基因的试剂或特异性识别FGF19蛋白的试剂。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的基因序列，制备或筛选特异性识别FGF19基因的试剂，从而作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增FGF19基因或转录本的引物；

(2)特异识别FGF19基因或转录本的探针。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的蛋白序列，制备或筛选特异性识别FGF19蛋白的试剂，从而作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19蛋白的试剂为FGF19蛋白的抗体或配体。

在一种实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明第八方面，提供另一种非小细胞肺癌检测试剂盒，所述试剂盒至少包括特异性识别β-klotho的试剂。

在一种实施方式中，β-klotho作为生物标志物。

在一种实施方式中，β-klotho作为血清生物标志物。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂盒用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

需要说明的是，所述特异性识别β-klotho的试剂并不限定为必须为液体形式。

在一种实施方式中，所述特异性识别β-klotho的试剂选自特异性识别β-klotho基因和特异性识别β-klotho蛋白的试剂。

在一种实施方式中，基于所述的β-klotho的基因序列，制备或筛选特异性识别β-klotho基因的试剂，作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，特异性识别β-klotho基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增β-klotho基因或转录本的引物；

(2)特异识别β-klotho基因或转录本的探针。

在一种实施方式中，基于所述的β-klotho的蛋白序列，制备或筛选特异性识别β-klotho蛋白的试剂，作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，所述特异性识别β-klotho蛋白的试剂为β-klotho蛋白的抗体或配体。

在一种实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明的第九方面，提供另一种肺癌检测试剂盒，所述试剂盒至少包括特异性识别FGF19和特异性识别β-klotho蛋白的试剂。

在一种实施方式中，FGF19和β-klotho联合作为生物标志物。

在一种实施方式中，FGF19和β-klotho联合作为血清生物标志物。

在一种实施方式中，所述非小细胞肺癌检测试剂盒用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

需要说明的是，特异性识别FGF19和特异性识别β-klotho蛋白的试剂并不限定为必须为液体形式。

在一种实施方式中，所述特异性识别FGF19的试剂选自特异性识别FGF19基因的试剂或特异性识别FGF19蛋白的试剂。所述特异性识别β-klotho的试剂选自特异性识别β-klotho基因的试剂或特异性识别β-klotho蛋白的试剂。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的基因序列，制备或筛选特异性识别FGF19基因的试剂；基于所述的β-klotho的基因序列，制备或筛选特异性识别β-klotho基因的试剂；将特异性识别β-klotho基因的试剂和特异性识别β-klotho基因的试剂联合作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，特异性识别FGF19基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增FGF19基因或转录本的引物；

(2)特异识别FGF19基因或转录本的探针。

特异性识别β-klotho基因的试剂选自以下任一种或多种：

(1)特异性扩增β-klotho基因或转录本的引物；

(2)特异识别β-klotho基因或转录本的探针。

在一种实施方式中，基于所述的FGF19的蛋白序列，制备或筛选特异性识别FGF19蛋白的试剂；基于所述的β-klotho的蛋白序列，制备或筛选特异性识别β-klotho蛋白的试剂。将特异性识别FGF19蛋白的试剂和特异性识别β-klotho蛋白的试剂联合作为非小细胞肺癌检测试剂。

在一种实施方式中，特异性识别FGF19蛋白的试剂为FGF19蛋白的抗体或配体。特异性识别β-klotho蛋白的试剂为β-klotho蛋白的抗体或配体。

在一种实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明首次发现，FGF19和β-klotho可各自或联合作为生物标志物用于非小细胞肺癌的早期诊断、治疗方案选择、预后评估，特异性高、灵敏度好。可实现非小细胞肺癌早期体外诊断，克服原有非小细胞肺癌检测大多为活体组织检测的局限，克服现有非小细胞肺癌血清检测操作繁琐，假阳性多的缺点。

附图说明

图1：ELISA法检测血清样本中FGF19浓度，检测结果显示非小细胞肺癌患者血清样品中FGF19浓度显著高于正常人群，检测差异具有统计学意义(p＝0.0158)，而对于肿瘤患者，肿瘤转移的患者的FGF19浓度高于未转移的患者(p＝0.0007)。

图2：ELISA法检测血清样本中β-klotho浓度，检测结果显示非小细胞肺癌患者血清样品中β-klotho浓度显著低于正常人群,检测差异具有统计学意义(p＝0.0065)，而对于肿瘤患者，肿瘤转移的患者的β-klotho浓度低于未转移的患者(p＝0.0009)。

图3：以血清样品中FGF19为非小细胞肺癌诊断生物标志物的ROC曲线。

图4：以血清样品中β-klotho(KLB)为非小细胞肺癌诊断生物标志物的ROC曲线。

图5：以血清样品中FGF19和β-klotho联合作为非小细胞肺癌生物标志物的ROC曲线。

具体实施方式

成纤维细胞生长因子19(FGF19)是一种调控代谢的激素，通过体液及循环系统参与对人体生理活动的调控。FGF19最早在肝脏相关的研究中被发现。β-klotho被认为是FGF19的辅助因子参与FGF19的信号调控，两者在组织中的含量也存在紧密联系。非小细胞肺癌中β-klotho是否参与FGF19功能的实现也缺乏研究。

本发明经过广泛而深入的研究发现，一对新的在血清中有明显异常表达的非小细胞肺癌生物标志物，实现非小细胞肺癌早期体外诊断，克服原有非小细胞肺癌检测大多为活体组织检测的局限，克服现有非小细胞肺癌血清检测操作繁琐，假阳性多的缺点。本发明以非小细胞肺癌患者及早期、高危非小细胞肺癌人群其血清中，FGF19浓度显著高于正常人群、β-klotho显著低于正常人群，两者可单独或共同作为诊断非小细胞肺癌及早期筛查的生物标志物，用于非小细胞肺癌体外检测方法和应用。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。

实施例1

一、血清样本收集：

收集临床非小细胞肺癌病人血清和正常人血清：

收集57例上海市胸科医院入院治疗的非小细胞肺癌病人血清，同时也收集27例正常人血清。肿瘤分类按照WHO肺肿瘤分类标准，病理分级基于TNM标准，患者的临床资料收集于病案室档案库，包括年龄、性别、肿瘤大小、病理分析和吸烟史。

二、直接ELISA法检测血清中FGF19/β-klotho的含量，具体包括如下步骤：

1、用干净试管收集血液，室温凝固30分钟，离心2000×g 20分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

2、配制10,000pg/ml标准品：取1ml样品稀释液加入标准品管内，盖好后静置10分钟以上，然后颠倒/搓动以助溶解。

3、配制1000pg/ml标准品：取100ul 10,000pg/ml的标准品加入有0.9ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀，做上标记。

4、配制500pg/ml→15.6pg/ml标准品：准备6只Eppendorf管，每管加0.3ml样品稀释液，分别标记上500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml，15.6pg/ml。取0.3ml 1000pg/ml的标准品加入标记500pg/ml的管中，混匀后同样取出0.3ml，加入下一只管中。余同此类推，直到最后一只样品管。

5、将1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml，15.6pg/ml的标准品各100ul依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为零孔。血清各加入100ul，作两个副孔。

6、酶标板加上封板膜，37℃反应90分钟。

7、反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体，不洗。

8、将准备好的生物素抗人FGF19/β-klotho抗体工作液按每孔100ul依次加入(TMB空白显色孔除外)。酶标板加上封板膜，37℃反应60分钟。

9、1X洗涤缓冲液洗涤3次，每次浸泡1分钟左右(每孔洗液至少300ul)。

10、将准备好的ABC工作液按每孔100ul依次加入(TMB空白显色孔除外)。酶标板加上封板膜，37℃反应30分钟。

11、1X洗涤缓冲液洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右(每孔洗液至少300ul)。

12、按每孔90ul依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液，37℃避光反应25-30分钟。

13、按每孔100ul依次加入TMB终止液，此时蓝色立转黄色。

14、用酶标仪在450nm测定O.D.值。

三、检测血清FGF19、Β-klotho浓度对非小细胞肺癌诊断的价值

1、ELISA法检测血清样本中FGF19浓度

结果如图1所示，检测结果显示非小细胞肺癌患者血清样品中FGF19浓度显著高于正常人群，检测差异具有统计学意义(p＝0.0158)，而对于肿瘤患者，肿瘤转移的患者的FGF19浓度高于未转移的患者(p＝0.0007)；

2、ELISA法检测血清样本中β-klotho浓度

结果如图2所示，检测结果显示非小细胞肺癌患者血清样品中β-klotho浓度显著低于正常人群,检测差异具有统计学意义(p＝0.0065)。而对于肿瘤患者，肿瘤转移的患者的β-klotho浓度低于未转移的患者(p＝0.0009)。

3、FGF19与β-klotho检测的灵敏度与特异性

结果如表1所示，仅检测血清样品中FGF19浓度、仅检测血清样品中β-klotho浓度、同时检测血清样品中FGF19与β-klotho浓度时，以诊断是否为非小细胞肺癌样品的灵敏度以及特异性。

表1

此外，以血清样品中FGF19为非小细胞肺癌诊断生物标志物的ROC曲线如图3所示。以血清样品中β-klotho(KLB)为非小细胞肺癌诊断生物标志物的ROC曲线如图4所示。以血清样品中FGF19和β-klotho联合作为非小细胞肺癌生物标志物的ROC曲线如图5所示。

综上所述，以血清样品中FGF19为生物标志物进行非小细胞肺癌的早期诊断、治疗方案选择、预后评估，特异性高、灵敏度好。也可以血清样品中β-klotho(KLB)为生物标志物进行非小细胞肺癌的早期诊断、治疗方案选择、预后评估，特异性高、灵敏度好。还可以血清样品中FGF19和β-klotho联合作为生物标志物进行非小细胞肺癌的早期诊断、治疗方案选择、预后评估，特异性高、灵敏度好。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

Claims (19)

1.FGF19用于制备或筛选非小细胞肺癌检测试剂的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，FGF19作为生物标志物，优选为FGF19作为血清生物标志物。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述非小细胞肺癌检测试剂用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述非小细胞肺癌检测试剂为特异性识别FGF19的试剂。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述特异性识别FGF19的试剂选自特异性识别FGF19基因的试剂或特异性识别FGF19蛋白的试剂。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述特异性识别FGF19基因的试剂选自以下任一种或多种：(1)特异性扩增FGF19基因或转录本的引物，(2)特异识别FGF19基因或转录本的探针；所述特异性识别FGF19蛋白的试剂为FGF19蛋白的抗体或配体。

7.β-klotho用于制备或筛选非小细胞肺癌检测试剂的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，β-klotho作为生物标志物，优选作为血清生物标志物。

9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述非小细胞肺癌检测试剂用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

10.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述非小细胞肺癌检测试剂为特异性识别β-klotho的试剂。

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述特异性识别β-klotho的试剂选自特异性识别β-klotho基因和特异性识别β-klotho蛋白的试剂。

12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述特异性识别β-klotho基因的试剂选自以下任一种或多种：(1)特异性扩增β-klotho基因或转录本的引物，(2)特异识别β-klotho基因或转录本的探针；所述特异性识别β-klotho蛋白的试剂为β-klotho蛋白的抗体或配体。

13.FGF19和β-klotho联合用于制备或筛选非小细胞肺癌检测试剂的用途。

14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，FGF19和β-klotho联合作为生物标志物，优选地，FGF19和β-klotho联合作为血清生物标志物。

15.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，所述非小细胞肺癌检测试剂用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

16.特异性识别FGF19的试剂用于制备非小细胞肺癌诊断试剂盒的用途。

17.特异性识别β-klotho的试剂用于制备非小细胞肺癌检测试剂盒的用途。

18.特异性识别FGF19和特异性识别β-klotho蛋白的试剂联合用于制备非小细胞肺癌检测试剂盒的用途。

19.一种非小细胞肺癌检测试剂盒，所述试剂盒中至少包括非小细胞肺癌检测试剂，所述非小细胞肺癌检测试剂选自特异性识别FGF19的试剂或特异性识别β-klotho的试剂中的任一种或多种。