CN107037210A - Thbs2蛋白检测物在制备肝细胞癌诊断试剂盒中的应用 - Google Patents

Thbs2蛋白检测物在制备肝细胞癌诊断试剂盒中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了THBS2蛋白检测物在制备肝细胞癌诊断试剂盒中的应用。本发明提供检测待测人血清或血浆中THBS2蛋白含量的物质在制备诊断或辅助诊断所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用。实验证明，THBS2蛋白可作为肝细胞癌的肿瘤标志物；在以正常人为筛查对象的情况下进行筛查，判定为HCC患者的灵敏度为82％、特异度为93％，AUC为0.92；THBS2蛋白可用于诊断AFP阴性肝癌(以正常人为筛查对象，AUC＝0.90，灵敏度为87％，特异度为87％)；THBS2蛋白可与AFP联合用于在正常人中筛查或辅助诊断HCC。THBS2蛋白还可与SPARC蛋白联合用于在正常人中筛查或辅助诊断HCC。

Description

THBS2蛋白检测物在制备肝细胞癌诊断试剂盒中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种THBS2蛋白检测物在制备肝细胞癌诊断试剂盒中的应用。
背景技术
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤之一，有较高的发病率和死亡率，每年约650 000人死于HCC，且其发病率有增高的趋势。该病多发于东南亚，其中约有50％以上发生于中国。目前肝切除术等外科手术仍是肝细胞癌的主要治疗方法，但术后复发转移率高，5年生存率较差，个体差异大。早发现、早治疗可提高肝细胞癌患者的生存率。
目前HCC临床诊断与病情监测等仍主要依赖于B超等影像学检查联合血清标志物甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)水平的检测。而AFP作为目前HCC诊断和病情监测一个最主要的生物标志物，其灵敏度仍不理想。所以，寻找灵敏的肝细胞癌血清生物标记物，尤其可应用于AFP阴性的肝癌患者，对于诊断肝细胞癌非常重要。
为了寻找肝细胞癌血清生物标记物，本实验室对AFP阴性肝癌患者的配对的肿瘤与癌旁组织间隙液进行鉴定，发现THBS2蛋白在肝癌患者肿瘤组织间隙液中显著上调。因为组织间隙液是连接细胞内液和循环体液的接口，该结果提示THBS2蛋白非常有可能从肝癌组织中通过组织间隙液分泌到血液中去。我们进而检测了该蛋白在临床血清样本中的表达水平，发现其血清浓度在肝癌患者中显著增高，提出THBS2蛋白可作为AFP阴性肝癌患者的血清诊断标志物，且可与AFP联合诊断肝癌。
Thrombospondin-2(THBS2)是一种介导细胞-细胞和细胞-基质间相互作用的糖蛋白。
发明内容
本发明的一个目的是提供检测待测人THBS2蛋白含量的物质的用途。
本发明提供的检测待测人THBS2蛋白含量的物质在制备筛查或辅助诊断肝细胞癌产品中的应用。
本发明还提供的检测待测人THBS2蛋白含量的物质在制备筛查或辅助诊断甲胎蛋白阴性肝细胞癌产品中的应用。
在本发明的一个实施例中，所述肝细胞癌具体为继发于HBV感染的有肝硬化背景的肝细胞癌。
本发明第二个目的是提供检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人甲胎蛋白含量的物质的用途。
本发明提供了检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人甲胎蛋白含量的物质在制备诊断或辅助诊断所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用；
或，检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人中甲胎蛋白含量的物质在制备筛查或辅助筛查所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用。
本发明第3个目的是提供检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质的用途。
本发明提供了检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质在制备诊断或辅助诊断所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用；
或，检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质在制备筛查或辅助筛查所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用。
本发明第4个目的是提供检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质的用途。
本发明提供了检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质
在制备诊断或辅助诊断所述待测人是否患有甲胎蛋白阴性肝细胞癌产品中的应用；
或，检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质在制备筛查或辅助筛查所述待测人是否患有甲胎蛋白阴性肝细胞癌产品中的应用。
上述应用中，所述检测待测人THBS2蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中THBS2蛋白含量的物质；
或所述检测待测人甲胎蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中甲胎蛋白含量的物质；
或所述检测待测人SPARC蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中SPARC蛋白含量的物质；
或所述检测待测人血清或血浆中THBS2蛋白含量的物质包括THBS2蛋白ELISA检测试剂盒；
或，所述检测待测人血清或血浆中甲胎蛋白含量的物质包括AFP化学发光法试剂盒；
或，所述检测待测人血清或血浆中SPARC蛋白含量的物质包括SPARC ELISA检测试剂盒。
上述物质还包括检测所需仪器。
在本发明的一个实施例中，检测血清或血浆中甲胎蛋白浓度所需的试剂为AFP化学发光法试剂盒，仪器为罗氏全自动电化学发光免疫分析仪。
在本发明的一个实施例中，在本发明的一个实施例中，所述用于检测SPARC蛋白浓度的物质为SPARC蛋白抗体，具体为ELISA所用SPARC抗体(R&D Systems公司，货号：DSP00)。
在本发明的一个实施例中，所述用于检测THBS2蛋白浓度的物质为THBS2蛋白抗体，具体为ELISA所用THBS2抗体(R&D Systems公司，货号：DY1635)。当然，也可以为其它类型的抗体或是其它可用于检测THBS2蛋白浓度的物质。
上述应用中，所述检测血清或血浆中THBS2蛋白浓度所需的试剂包括THBS2蛋白抗体。
本发明第5个目的是提供一种产品。
本发明提供的产品，为如下1)-3)中任意一种：
1)包括检测待测人中THBS2蛋白含量的物质；
2)包括检测待测人中THBS2蛋白含量的物质和检测待测人甲胎蛋白含量的物质；
3)包括检测待测人中THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC含量的物质。
上述产品中，所述检测待测人THBS2蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中THBS2蛋白含量的物质；
或所述检测待测人甲胎蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中甲胎蛋白含量的物质；
或所述检测待测人SPARC蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中SPARC蛋白含量的物质；
或所述检测待测人血清或血浆中THBS2蛋白含量的物质包括THBS2蛋白ELISA检测试剂盒；
或，所述检测待测人血清或血浆中甲胎蛋白含量的物质包括AFP化学发光法试剂盒；
或，所述检测待测人血清或血浆中SPARC蛋白含量的物质包括SPARC ELISA检测试剂盒。
上述产品具有如下A或B功能：
A、诊断或辅助诊断或筛查或辅助筛查待测人是否患有肝细胞癌；
B、诊断或辅助诊断或筛查或辅助筛查待测人是否患有甲胎蛋白阴性肝细胞癌。
人血清或血浆中THBS2蛋白作为肝细胞癌诊断标记物或甲胎蛋白阴性肝细胞癌诊断标记物中的应用也是本发明保护的范围。
血清或血浆为离体血清或血浆。
所述THBS2蛋白为人THBS2蛋白。
在本发明中，所述产品的筛查或诊断对象是正常人。
所述检测THBS2蛋白浓度具体可为检测人血清或血浆中的THBS2蛋白浓度。
上述产品中，所述产品为试剂盒。
实验证明，血清THBS2蛋白可作为肝细胞癌(HCC)的肿瘤标志物。当以无症状的正常人作为筛查对象时，受试者工作特征曲线(receiver operating characteristiccurve,ROC)分析结果表明曲线下面积(Area Under roc Curve,AUC)达到0.92，灵敏度为82％、特异度为93％；THBS2蛋白用于诊断AFP阴性肝癌患者时，以正常人为筛查对象，AUC＝0.90，灵敏度为87％，特异度为87％；THBS2蛋白可与AFP联合用于在正常人中筛查或辅助诊断HCC。THBS2蛋白还可与SPARC蛋白联合用于在正常人中筛查或辅助诊断HCC。
附图说明
图1为正常组(N)和肝癌患者组(HCC)血清中THBS2蛋白水平散点图。
图2为正常组(N)和肝癌患者组(HCC)血清中THBS2蛋白水平的ROC曲线分析结果。
图3为正常组(N)和AFP阴性肝癌患者组(HCC)血清中THBS2蛋白水平的ROC曲线分析结果。
图4为THBS2与AFP联合诊断的ROC曲线分析结果。
图5为THBS2与SPARC在正常组、肝癌患者组和AFP阴性肝癌患者诊断的ROC曲线分析；A为THBS2与SPARC在正常组和肝癌患者组联合诊断的ROC曲线分析结果；B为THBS2与SPARC在正常组和AFP阴性肝癌患者组联合诊断的ROC曲线分析结果。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所涉及的名词解释：
受试者工作特征(receiver(relative)operating characteristic,ROC)曲线反映了灵敏度与特异度间的平衡，ROC曲线下面积是重要的试验准确度指标。分别计算各个试验的ROC曲线下的面积(AUC)进行比较，面积大者，试验的诊断价值大。
灵敏度(真阳性率)：实际有病而按试验标准被正确判断为有病的百分率，灵敏度越大越好，理想灵敏度为100％。
特异度(真阴性率)：实际无病而按试验标准被正确判断为无病的百分率，特异度越大越好，理想特异度100％。
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，实施例仅用于解释本发明而不用于限制本发明的范围。
下述实施例中的患者及正常对照的血清均来自于全血，使用前-80℃冷冻保存。
实施例1、酶联免疫吸附实验测定血清中THBS2蛋白丰度
一、实验材料
血清样本来自：正常人(N)30例；有HBV慢性感染背景的肝细胞癌患者(HCC)50例(其中23例为AFP阴性，1例AFP未知)。肝细胞癌患者为临床确诊病人的血清样本，由北京肿瘤医院提供，且患者知情。30例正常的正常人来自于常规正常体检人群，无HBV感染史，未发现肝细胞癌。
二、血清中THBS2蛋白与HCC病人的关系
对血清样本中的THBS2蛋白水平进行ELISA检测，所用试剂盒为R&D Systems公司THBS2ELISA检测试剂盒(货号：DY1635)，具体方法如下：
1、用PBS稀释捕获抗体(试剂盒配备)至4μg/mL，向96孔酶标板中每孔加入100μL捕获抗体，室温孵育过夜，得到THBS2捕获抗体包被的酶标板A；
2、用PBST(PBS中包含0.05％20)洗3次，每次1min；
3、酶标板A中每孔加入300μL 1％BSA，室温孵育2小时；
4、用PBST洗3次，每次1min；
5、用1％BSA稀释待测血清样本(1：40)，THBS2蛋白标准品(试剂盒自带)稀释梯度10000pg/ml、5000pg/ml、2500pg/ml、1250pg/ml、625pg/ml、313pg/ml、156pg/ml、0pg/ml，稀释后的血清样本和标准品各100ul加入到封闭后的酶标板A，室温孵育2小时；
6、用PBST洗3次，每次1min；
7、用1％BSA稀释THBS2检测抗体(试剂盒配备)至200ng/ml，向结合有抗原的酶标板A中每孔加100μL检测抗体，室温孵育2小时；
8、用PBST洗3次，每次1min；
9、用1％BSA水溶液1:200稀释加辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)标记的链霉素(Streptavidin-HRP，试剂盒配备)，每孔加入100μL，室温避光孵育20分钟；
10、用PBST洗3次，每次1min；
11、向链霉素反应后的酶标板A中每孔加入100μl TMB底物(试剂盒配备)，室温避光反应20分钟，反应结束后，向酶标板的每孔中加入50μl终止液(试剂盒配备)，得到显色后的酶标板，在450nm波长读数。
通过THBS2标准蛋白浓度和其对应的OD值绘制标准曲线(四参数Logistic曲线拟合方程：y＝(3.44684-0.02660)/[1+(x/5453.48934)-1.12448]+0.02660)。通过各孔血清样本所测得的OD值，利用ELISACalc软件对THBS2的标准曲线进行四参数拟合，计算各血清样本中THBS2蛋白的含量。结果显示，正常组THBS2蛋白的浓度平均值±标准差为13.85±6.34ng/ml，HCC患者组为45.81±30.40ng/ml。对各组样本中THBS2蛋白含量进行统计学分析(Mann-Whitney test)，发现血清THBS2蛋白在HCC患者组的丰度显著高于正常对照组(p<0.0001)(图1)。
用SPSS 16.0软件以正常组为对照组，肝细胞癌患者组为疾病组，对血清THBS2蛋白水平进行ROC曲线分析，曲线下面积AUC＝0.92，灵敏度为82％、特异度为93％(如图2所示)。说明THBS2可用作正常人与HCC患者进行判别诊断的潜在标志物。
在上述计算过程中，会得到判别诊断的浓度阈值，为ROC曲线的最大约登指数对应的阈值，约登指数(灵敏度+特异度-1)及对应阈值详见表1(最大约登指数及对应阈值粗体标注)。针对本次实验数据，在进行正常人和HCC患者的判别诊断时，若待测人血清中THBS2蛋白表达量大于等于阈值浓度21.74ng/ml，则该待测人为或候选为HCC患者。
表1.THBS2判别诊断正常人和HCC患者的阈值及约登指数
三、血清中THBS2蛋白在检测甲胎蛋白(AFP)阴性的HCC患者中的应用
将上述一中的30例正常人和23例AFP阴性的肝细胞癌(HCC)患者血清样本按照上述二的方法检测。
结果正常组THBS2蛋白的血清浓度平均值±标准差为13.85±6.34ng/ml，23例AFP阴性的HCC患者组为36.74±20.94ng/ml。
以AFP阴性(AFP<20ng/ml)的HCC患者组为疾病组，正常组为对照组，对血清中THBS2蛋白水平进行ROC曲线分析，曲线下面积AUC＝0.90(图3)，灵敏度为87％，特异度为87％。说明THBS2蛋白可用于判别诊断AFP阴性的肝癌患者。
进行正常人和AFP阴性的HCC患者的判别诊断时，若待测人血清中THBS2蛋白浓度大于等于20.34ng/ml，则该待测人为或候选为HCC患者。判别诊断的浓度阈值为ROC曲线的最大约登指数对应的阈值。
四、THBS2蛋白和AFP蛋白在检测HCC患者中的应用
AFP血清蛋白浓度检测方法：使用罗氏全自动电化学发光免疫分析仪，利用AFP化学发光法试剂盒检测，详细步骤参照仪器说明书。
正常组血清中AFP蛋白浓度均小于20ng/ml，HCC患者组血清中AFP蛋白浓度为13626.6±47251.9ng/ml。
THBS2蛋白浓度在正常组和HCC患者组的血清样本中的ELISA检测结果：正常组血清中THBS2蛋白的浓度平均值±标准差为13.85±6.34ng/ml，HCC患者组中血清中THBS2蛋白的浓度为45.81±30.40ng/ml。经统计学分析(Mann-Whitney test)，发现血清THBS2蛋白和AFP蛋白浓度在正常组和HCC患者组间均有显著性差异(p<0.0001)。
共同判断THBS2蛋白和AFP蛋白的标准依据二元Logistic回归计算结果，区分HCC与正常组具体计算公式为：P＝1/(1+e-(-3.882+0.18*THBS2+0.005*AFP))，当P大于等于0.533时，判断为HCC患者。
用SPSS 16.0软件对正常人(N)和肝细胞癌患者(HCC)进行AFP与THBS2联合使用诊断HCC的ROC曲线分析。以正常组为对照组，HCC患者组为疾病组，血清THBS2蛋白与AFP蛋白联合使用判别诊断HCC患者的曲线下面积AUC＝0.94(图4)，灵敏度为88％、特异度为93％。
由上述结果可知，血清中THBS2蛋白和AFP蛋白可用作正常人与HCC患者判别诊断的潜在标志物。
上述结果汇总于表2，展示了THBS2蛋白、AFP蛋白及其联合应用用于肝细胞癌患者与正常人鉴别诊断的效果。
表2THBS2蛋白和AFP蛋白判别诊断正常人和肝细胞癌患者效果比较(THBS2或THBS2与AFP联合使用效果优于AFP)
五、THBS2蛋白和SPARC蛋白在检测HCC患者及AFP阴性HCC患者中的应用
对上述一的血清样本中的SPARC蛋白水平进行ELISA检测，所用试剂盒为R&DSystems公司SPARC ELISA检测试剂盒(货号：DSP00)，详细步骤参照检测试剂盒说明书。
正常组SPARC蛋白的血清浓度72.77±51.79ng/ml，HCC患者组319.00±192.66ng/ml，AFP阴性HCC患者组为308.62±196.04ng/ml。正常组THBS2蛋白的浓度为13.85±6.34ng/ml，HCC患者组为45.81±30.40ng/ml，AFP阴性HCC患者为36.74±20.94ng/ml。经统计学分析(Mann-Whitney test)，发现血清THBS2蛋白和SPARC蛋白浓度在正常组和HCC患者组以及正常组和AFP阴性患者组均有显著性差异(p<0.0001)。
共同判断THBS2蛋白和SPARC蛋白的标准依据二元Logistic回归计算结果，区分HCC与正常组具体计算公式为：P＝1/(1+e-(-5.959+0.174*THBS2+0.019*SPARC))，当P大于等于0.775时，判断为HCC患者；区分AFP阴性HCC患者和正常组的计算公式为P＝1/(1+e-(-6.122+0.174 *THBS2+0.016*SPARC))，当P大于等于0.285时，判断为HCC。
用SPSS 16.0软件对正常人(N)和肝细胞癌患者(HCC)、正常人和AFP阴性的肝细胞癌进行THBS2与SPARC联合使用诊断HCC的ROC曲线分析。以正常组为对照组，HCC患者组为疾病组，血清THBS2蛋白与SPARC蛋白联合使用判别诊断HCC患者的曲线下面积AUC＝0.97(图5A)，灵敏度为88％、特异度为100％；以正常组为对照组，AFP阴性的HCC患者组为疾病组，血清THBS2蛋白与SPARC蛋白联合使用判别诊断HCC患者的曲线下面积AUC＝0.95(图5B)，灵敏度为91％、特异度为93％；
由上述结果可知，血清中THBS2蛋白和SPARC蛋白可用作正常人与HCC患者以及正常人与AFP阴性的HCC患者判别诊断的潜在标志物。
上述结果汇总于表3和表4，展示了THBS2蛋白、SPARC蛋白及其联合应用用于肝细胞癌患者与正常人以及AFP阴性的肝癌患者于正常人的鉴别诊断的效果。
表3THBS2蛋白和SPARC蛋白判别诊断正常人和肝细胞癌患者效果比较(THBS2与SPARC联合使用效果优于各自单独诊断)
表4THBS2蛋白和SPARC蛋白判别诊断正常人和AFP阴性的肝细胞癌患者效果比较(THBS2与SPARC联合使用效果优于各自单独诊断)
上述实施例对本发明进行具体描述，并不用于限制本发明。在不脱离本发明原理的前提下，对本发明的修饰、改动均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 北京蛋白质组研究中心 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所
<120> THBS2蛋白检测物在制备肝细胞癌诊断试剂盒中的应用
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1172
<212> PRT
<213> 1
<400> 1
Met Val Trp Arg Leu Val Leu Leu Ala Leu Trp Val Trp Pro Ser Thr
1 5 10 15
Gln Ala Gly His Gln Asp Lys Asp Thr Thr Phe Asp Leu Phe Ser Ile
20 25 30
Ser Asn Ile Asn Arg Lys Thr Ile Gly Ala Lys Gln Phe Arg Gly Pro
35 40 45
Asp Pro Gly Val Pro Ala Tyr Arg Phe Val Arg Phe Asp Tyr Ile Pro
50 55 60
Pro Val Asn Ala Asp Asp Leu Ser Lys Ile Thr Lys Ile Met Arg Gln
65 70 75 80
Lys Glu Gly Phe Phe Leu Thr Ala Gln Leu Lys Gln Asp Gly Lys Ser
85 90 95
Arg Gly Thr Leu Leu Ala Leu Glu Gly Pro Gly Leu Ser Gln Arg Gln
100 105 110
Phe Glu Ile Val Ser Asn Gly Pro Ala Asp Thr Leu Asp Leu Thr Tyr
115 120 125
Trp Ile Asp Gly Thr Arg His Val Val Ser Leu Glu Asp Val Gly Leu
130 135 140
Ala Asp Ser Gln Trp Lys Asn Val Thr Val Gln Val Ala Gly Glu Thr
145 150 155 160
Tyr Ser Leu His Val Gly Cys Asp Leu Ile Asp Ser Phe Ala Leu Asp
165 170 175
Glu Pro Phe Tyr Glu His Leu Gln Ala Glu Lys Ser Arg Met Tyr Val
180 185 190
Ala Lys Gly Ser Ala Arg Glu Ser His Phe Arg Gly Leu Leu Gln Asn
195 200 205
Val His Leu Val Phe Glu Asn Ser Val Glu Asp Ile Leu Ser Lys Lys
210 215 220
Gly Cys Gln Gln Gly Gln Gly Ala Glu Ile Asn Ala Ile Ser Glu Asn
225 230 235 240
Thr Glu Thr Leu Arg Leu Gly Pro His Val Thr Thr Glu Tyr Val Gly
245 250 255
Pro Ser Ser Glu Arg Arg Pro Glu Val Cys Glu Arg Ser Cys Glu Glu
260 265 270
Leu Gly Asn Met Val Gln Glu Leu Ser Gly Leu His Val Leu Val Asn
275 280 285
Gln Leu Ser Glu Asn Leu Lys Arg Val Ser Asn Asp Asn Gln Phe Leu
290 295 300
Trp Glu Leu Ile Gly Gly Pro Pro Lys Thr Arg Asn Met Ser Ala Cys
305 310 315 320
Trp Gln Asp Gly Arg Phe Phe Ala Glu Asn Glu Thr Trp Val Val Asp
325 330 335
Ser Cys Thr Thr Cys Thr Cys Lys Lys Phe Lys Thr Ile Cys His Gln
340 345 350
Ile Thr Cys Pro Pro Ala Thr Cys Ala Ser Pro Ser Phe Val Glu Gly
355 360 365
Glu Cys Cys Pro Ser Cys Leu His Ser Val Asp Gly Glu Glu Gly Trp
370 375 380
Ser Pro Trp Ala Glu Trp Thr Gln Cys Ser Val Thr Cys Gly Ser Gly
385 390 395 400
Thr Gln Gln Arg Gly Arg Ser Cys Asp Val Thr Ser Asn Thr Cys Leu
405 410 415
Gly Pro Ser Ile Gln Thr Arg Ala Cys Ser Leu Ser Lys Cys Asp Thr
420 425 430
Arg Ile Arg Gln Asp Gly Gly Trp Ser His Trp Ser Pro Trp Ser Ser
435 440 445
Cys Ser Val Thr Cys Gly Val Gly Asn Ile Thr Arg Ile Arg Leu Cys
450 455 460
Asn Ser Pro Val Pro Gln Met Gly Gly Lys Asn Cys Lys Gly Ser Gly
465 470 475 480
Arg Glu Thr Lys Ala Cys Gln Gly Ala Pro Cys Pro Ile Asp Gly Arg
485 490 495
Trp Ser Pro Trp Ser Pro Trp Ser Ala Cys Thr Val Thr Cys Ala Gly
500 505 510
Gly Ile Arg Glu Arg Thr Arg Val Cys Asn Ser Pro Glu Pro Gln Tyr
515 520 525
Gly Gly Lys Ala Cys Val Gly Asp Val Gln Glu Arg Gln Met Cys Asn
530 535 540
Lys Arg Ser Cys Pro Val Asp Gly Cys Leu Ser Asn Pro Cys Phe Pro
545 550 555 560
Gly Ala Gln Cys Ser Ser Phe Pro Asp Gly Ser Trp Ser Cys Gly Ser
565 570 575
Cys Pro Val Gly Phe Leu Gly Asn Gly Thr His Cys Glu Asp Leu Asp
580 585 590
Glu Cys Ala Leu Val Pro Asp Ile Cys Phe Ser Thr Ser Lys Val Pro
595 600 605
Arg Cys Val Asn Thr Gln Pro Gly Phe His Cys Leu Pro Cys Pro Pro
610 615 620
Arg Tyr Arg Gly Asn Gln Pro Val Gly Val Gly Leu Glu Ala Ala Lys
625 630 635 640
Thr Glu Lys Gln Val Cys Glu Pro Glu Asn Pro Cys Lys Asp Lys Thr
645 650 655
His Asn Cys His Lys His Ala Glu Cys Ile Tyr Leu Gly His Phe Ser
660 665 670
Asp Pro Met Tyr Lys Cys Glu Cys Gln Thr Gly Tyr Ala Gly Asp Gly
675 680 685
Leu Ile Cys Gly Glu Asp Ser Asp Leu Asp Gly Trp Pro Asn Leu Asn
690 695 700
Leu Val Cys Ala Thr Asn Ala Thr Tyr His Cys Ile Lys Asp Asn Cys
705 710 715 720
Pro His Leu Pro Asn Ser Gly Gln Glu Asp Phe Asp Lys Asp Gly Ile
725 730 735
Gly Asp Ala Cys Asp Asp Asp Asp Asp Asn Asp Gly Val Thr Asp Glu
740 745 750
Lys Asp Asn Cys Gln Leu Leu Phe Asn Pro Arg Gln Ala Asp Tyr Asp
755 760 765
Lys Asp Glu Val Gly Asp Arg Cys Asp Asn Cys Pro Tyr Val His Asn
770 775 780
Pro Ala Gln Ile Asp Thr Asp Asn Asn Gly Glu Gly Asp Ala Cys Ser
785 790 795 800
Val Asp Ile Asp Gly Asp Asp Val Phe Asn Glu Arg Asp Asn Cys Pro
805 810 815
Tyr Val Tyr Asn Thr Asp Gln Arg Asp Thr Asp Gly Asp Gly Val Gly
820 825 830
Asp His Cys Asp Asn Cys Pro Leu Val His Asn Pro Asp Gln Thr Asp
835 840 845
Val Asp Asn Asp Leu Val Gly Asp Gln Cys Asp Asn Asn Glu Asp Ile
850 855 860
Asp Asp Asp Gly His Gln Asn Asn Gln Asp Asn Cys Pro Tyr Ile Ser
865 870 875 880
Asn Ala Asn Gln Ala Asp His Asp Arg Asp Gly Gln Gly Asp Ala Cys
885 890 895
Asp Pro Asp Asp Asp Asn Asp Gly Val Pro Asp Asp Arg Asp Asn Cys
900 905 910
Arg Leu Val Phe Asn Pro Asp Gln Glu Asp Leu Asp Gly Asp Gly Arg
915 920 925
Gly Asp Ile Cys Lys Asp Asp Phe Asp Asn Asp Asn Ile Pro Asp Ile
930 935 940
Asp Asp Val Cys Pro Glu Asn Asn Ala Ile Ser Glu Thr Asp Phe Arg
945 950 955 960
Asn Phe Gln Met Val Pro Leu Asp Pro Lys Gly Thr Thr Gln Ile Asp
965 970 975
Pro Asn Trp Val Ile Arg His Gln Gly Lys Glu Leu Val Gln Thr Ala
980 985 990
Asn Ser Asp Pro Gly Ile Ala Val Gly Phe Asp Glu Phe Gly Ser Val
995 1000 1005
Asp Phe Ser Gly Thr Phe Tyr Val Asn Thr Asp Arg Asp Asp Asp
1010 1015 1020
Tyr Ala Gly Phe Val Phe Gly Tyr Gln Ser Ser Ser Arg Phe Tyr
1025 1030 1035
Val Val Met Trp Lys Gln Val Thr Gln Thr Tyr Trp Glu Asp Gln
1040 1045 1050
Pro Thr Arg Ala Tyr Gly Tyr Ser Gly Val Ser Leu Lys Val Val
1055 1060 1065
Asn Ser Thr Thr Gly Thr Gly Glu His Leu Arg Asn Ala Leu Trp
1070 1075 1080
His Thr Gly Asn Thr Pro Gly Gln Val Arg Thr Leu Trp His Asp
1085 1090 1095
Pro Arg Asn Ile Gly Trp Lys Asp Tyr Thr Ala Tyr Arg Trp His
1100 1105 1110
Leu Thr His Arg Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Arg Val Leu Val His
1115 1120 1125
Glu Gly Lys Gln Val Met Ala Asp Ser Gly Pro Ile Tyr Asp Gln
1130 1135 1140
Thr Tyr Ala Gly Gly Arg Leu Gly Leu Phe Val Phe Ser Gln Glu
1145 1150 1155
Met Val Tyr Phe Ser Asp Leu Lys Tyr Glu Cys Arg Asp Ile
1160 1165 1170

Claims (10)

1.检测待测人THBS2蛋白含量的物质在制备诊断或辅助诊断所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用；
或，检测待测人THBS2蛋白含量的物质在制备筛查或辅助筛查所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用。
2.检测待测人THBS2蛋白含量的物质在制备诊断或辅助诊断所述待测人是否患有甲胎蛋白阴性肝细胞癌产品中的应用；
或，检测待测人THBS2蛋白含量的物质在制备筛查或辅助筛查所述待测人是否患有甲胎蛋白阴性肝细胞癌产品中的应用。
3.检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人甲胎蛋白含量的物质在制备诊断或辅助诊断所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用；
或，检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人中甲胎蛋白含量的物质在制备筛查或辅助筛查所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用。
4.检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质在制备诊断或辅助诊断所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用；
或，检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质在制备筛查或辅助筛查所述待测人是否患有肝细胞癌产品中的应用。
5.检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质在制备诊断或辅助诊断所述待测人是否患有甲胎蛋白阴性肝细胞癌产品中的应用；
或，检测待测人THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC蛋白含量的物质在制备筛查或辅助筛查所述待测人是否患有甲胎蛋白阴性肝细胞癌产品中的应用。
6.根据权利要求1-5所述的应用，其特征在于：
所述检测待测人THBS2蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中THBS2蛋白含量的物质；
或所述检测待测人甲胎蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中甲胎蛋白含量的物质；
或所述检测待测人SPARC蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中SPARC蛋白含量的物质；
或所述检测待测人血清或血浆中THBS2蛋白含量的物质包括THBS2蛋白ELISA检测试剂盒；
或，所述检测待测人血清或血浆中甲胎蛋白含量的物质包括AFP化学发光法试剂盒；
或，所述检测待测人血清或血浆中SPARC蛋白含量的物质包括SPARC ELISA检测试剂盒。
7.一种产品，为如下1)-3)中任意一种：
1)包括检测待测人中THBS2蛋白含量的物质；
2)包括检测待测人中THBS2蛋白含量的物质和检测待测人甲胎蛋白含量的物质；
3)包括检测待测人中THBS2蛋白含量的物质和检测待测人SPARC含量的物质。
8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于：
所述检测待测人THBS2蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中THBS2蛋白含量的物质；
或所述检测待测人甲胎蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中甲胎蛋白含量的物质；
或所述检测待测人SPARC蛋白含量的物质为所述检测待测人血清或血浆中SPARC蛋白含量的物质；
或所述检测待测人血清或血浆中THBS2蛋白含量的物质包括THBS2蛋白ELISA检测试剂盒；
或，所述检测待测人血清或血浆中甲胎蛋白含量的物质包括AFP化学发光法试剂盒；
或，所述检测待测人血清或血浆中SPARC蛋白含量的物质包括SPARC ELISA检测试剂盒。
9.根据权利要求7或8所述的产品，其特征在于：
所述产品具有如下A或B功能：
A、诊断或辅助诊断或筛查或辅助筛查待测人是否患有肝细胞癌；
B、诊断或辅助诊断或筛查或辅助筛查待测人是否患有甲胎蛋白阴性肝细胞癌。
10.人血清或血浆中THBS2蛋白作为肝细胞癌诊断标记物或甲胎蛋白阴性肝细胞癌诊断标记物中的应用。
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