CN109678835A - 一种儿茶素没食子酸酯标准物质的制备方法 - Google Patents

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沙跃兵
郑坚璐
张辉
陈怡�
王珂
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    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
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Abstract

本发明涉及一种儿茶素没食子酸酯标准物质的制备方法。本发明首先称取适量表儿茶素没食子酸酯原料，加超纯水，50̊C超声溶解，配制浓度为10 mg/mL的料液，置于烘箱，在130̊C下转化45 min，取出冷却至室温。然后高温转化后的料液于9000 rpm离心，取上清液进行制备液相色谱分离纯化。最后收集相应的馏分，对其进行旋转蒸发浓缩，浓缩后液相色谱检测纯度>99%，置于‑35̊C冰箱冷冻12小时以上，取出再进行冷冻干燥，经液相色谱检测，纯度>99%，收集冻干产物，即为儿茶素没食子酸酯标准物质。本发明制备的标准物具有较高的均匀性和稳定性，能够保证标准物质具有复现、保存和传递量值的功能。

Description

一种儿茶素没食子酸酯标准物质的制备方法
技术领域
本发明属于计量技术领域，主要涉及茶多酚及茶制品产品质量检测分析中使用的一种儿茶素没食子酸酯(CG)标准物质的制备方法。
背景技术
茶多酚及茶制品产品质量检测的一些标准，如《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》(GB/T 8313-2008)、《固态速溶茶儿茶素类含量的检测方法》(GB/T 21727-2008)、《出口食品中茶多酚的检测方法高效液相色谱法》(SN/T3848-2014)等国家标准和行业标准中，均要求采用表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯和儿茶素没食子酸酯等标准物质进行外标法定量，测定茶及茶制品中儿茶素类化合物的含量。
标准物质作为分析测量中的计量器具，不仅在校准仪器设备性能、考核分析人员的技术水平和评价分析测量方法，以及在生产过程中的质量控制等方面都起着非常重要的作用。有证标准物质具有复现、保存和传递量值的功能，对实现测量结果的溯源性、保证测量结果在时间和空间上的连续性与可比性、保障测量结果的可靠性和有效性以及与国际互认等具有关键作用。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供了一种儿茶素没食子酸酯标准物质的制备方法。
本发明包括以下步骤：
称取适量表儿茶素没食子酸酯原料，加超纯水，50℃超声溶解，配制浓度为10mg/mL的料液，置于烘箱，在130℃下转化45min，取出冷却至室温。
高温转化后的料液于9000rpm离心，取上清液进行制备液相色谱分离纯化。
收集相应的馏分，对其进行旋转蒸发浓缩，浓缩后液相色谱检测纯度>99％，置于-35℃冰箱冷冻12小时以上，取出再进行冷冻干燥，经液相色谱检测，纯度>99％，收集冻干产物，即为儿茶素没食子酸酯标准物质。
本发明的有益效果：本发明制备的标准物具有较高的均匀性和稳定性，能够保证标准物质具有复现、保存和传递量值的功能。
具体实施方式
下面实施案例对本发明做进一步说明。
本发明的具体技术方案是：
称取适量表儿茶素没食子酸酯(ECG)原料，加适量超纯水，50℃超声溶解，配制浓度为10mg/mL的料液，置于烘箱，在130℃下转化45min，取出冷却至室温。
高温转化后的料液于9000rpm离心，取上清液进行制备液相色谱分离纯化。制备色谱条件如下：流速为15mL/min；流动相比例为35％甲醇-水体系(水中含0.1％乙酸)；进样体积为5mL。
收集相应的馏分，对其进行旋转蒸发浓缩(60℃)，浓缩后液相色谱检测纯度>99％，置于-35℃冰箱冷冻12小时以上，取出再进行冷冻干燥，经液相色谱检测，纯度>99％，收集冻干产物，即为儿茶素没食子酸酯(CG)标准物质候选物。
为了保证儿茶素没食子酸酯(CG)标准物的可靠性，对其进行测定：
1、选取八家有测试分析能力的实验室
2、采用液相色谱-紫外检测法测定，通过面积归一化法计算主成分的含量，每个化合物分别称取2份，每份样品重复测定6次，同时测定空白溶剂样品。
3、空白溶剂，选择50％甲醇-水(体积比)溶液，在定值化合物的积分条件下不得出现干扰峰。
4、液相方法：液相色谱系统(配PDA光电二极管阵列检测器)；色谱柱(Agilent SB-C18,5μm,4.6*250mm)；柱温(35℃)；流动相A(甲醇)；流动相B(水含0.1％乙酸(V/V))；洗脱方式(30％流动相A等度洗脱)；流速(1.00mL/min)；检测波长(278nm)；进样体积(10μL)。
5、样品浓度：0.5mg/mL(溶剂：50％甲醇-水)，准确称取1～5mg儿茶素没食子酸酯(CG)各2份，加适量50％甲醇-水(体积比)溶液，漩涡超声溶解，配制浓度均为0.50mg/mL的溶液。
6、测定方法：液相方法至少平衡30min；进样顺序：空白溶剂→标物候选物-称量1-重复测定1→标物候选物-称量2-重复测定1→标物候选物-称量1-重复测定2→标物候选物-称量2-重复测定2→标物候选物-称量1-重复测定3→标物候选物-称量2-重复测定3→标物候选物-称量1-重复测定4→标物候选物-称量2-重复测定4→标物候选物-称量1-重复测定5→标物候选物-称量2-重复测定5→标物候选物-称量1-重复测定6→标物候选物-称量2-重复测定6；液相色谱数据采集时间：不少于30min。
杂质含量测定方法：
1、通过热重法测定水分及残留溶剂等挥发性组份杂质含量。
2、通过ICP-MS测定无机金属杂质含量。
3、通过离子色谱法测定无机阴离子杂质含量。
均匀性检验
1、随机抽取的儿茶素没食子酸酯(CG)样品15份，分别称取3～5mg，加适量50％甲醇-水溶液，超声溶解，配制浓度均为0.5mg/mL的儿茶素没食子酸酯(CG)溶液。
2、采用液相色谱定值方法进行测定，每份样品测3次，液相色谱方法：液相色谱系统(配PDA光电二极管阵列检测器)；色谱柱(Agilent SB-C18,5μm,4.6*250mm)；柱温(35℃)；流动相A(甲醇)；流动相B(水含0.1％乙酸(V/V))；洗脱方式(30％流动相A等度洗脱)；流速(1.00mL/min)；检测波长(278nm)；进样体积(10μL)。
3、采用单因素方差分析法(F检验法)进行均匀性检验统计分析判断标物候选物的均匀性。
表1儿茶素没食子酸酯(CG)均匀性检验测试结果及统计分析
由表1数据可知，在自由度(14,30)及给定的显著性水平α＝0.05时，查得Fα＝2.31。对儿茶素没食子酸酯(CG)，计算统计量得到F＝0.49，小于临界值2.31，可知制备的儿茶素没食子酸酯(CG)是均匀的。
稳定性检验：稳定性是标准物质的基本属性，用于描述标准物质的特性值随时间变化的性质，即描述标准物质特性的时间分布特征。儿茶素没食子酸酯(CG)稳定性考察是考察标物候选物在4℃存储1、2、3、6和12个月的稳定性。具体步骤是：
1、分别在1、2、3、6和12个月的时间点取出儿茶素没食子酸酯(CG)标物候选物样品，称取3～5mg，加适量50％甲醇-水溶液，超声溶解，配制浓度为0.5mg/mL的儿茶素溶液。
2、采用液相色谱定值方法进行测定，每份样品测3次，液相色谱系统(配PDA光电二极管阵列检测器)；色谱柱(Agilent SB-C18,5μm,4.6*250mm)；柱温(35℃)；流动相A(甲醇)；流动相B(水含0.1％乙酸(V/V))；洗脱方式(30％流动相A等度洗脱)；流速(1.00mL/min)；检测波长(278nm)；进样体积(10μL)。
3、采用格拉布斯(Grubbs)法统计剔除测试结果可疑值。
4、采用t检验法进行稳定性检验统计分析判断标物候选物的稳定性。
表2长期稳定性测试结果
采用采用格拉布斯(Grubbs)法统计分析结果，未发现稳定性测试结果的可疑值，具体统计分析结果如表2所示。
表2格拉布斯(Grubbs)法统计分析结果
采用t检验法进行稳定性检验统计分析，结果显示儿茶素没食子酸酯(CG)12个月内稳定，具体数据如表3所示。
表3稳定性测试数据t检验分析
化合物 |β<sub>1</sub>| t<sub>0.95·n-2</sub> s(β<sub>1</sub>) |β<sub>1</sub>|＜t<sub>0.95，n-2</sub>·s(β<sub>1</sub>)
CG 4.13E-3 2.16 4.92E-03 是
综上，本发明涉及一种儿茶素没食子酸酯(CG)标准物质的制备方法，其以表儿茶素没食子酸酯(ECG)原料，经高温转化，制备液相色谱分离纯化，制备成HPLC纯度大于99％标准物质候选物。按照质量平衡法进行定值研究，采用液相色谱面积归一化法，通过多家实验室联合定值测定主成分的含量；去除杂质含量得到最终纯度值。并通过均匀性检验和稳定性检验核查该标准物质的均匀性和稳定性。
上述具体实施方式用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种儿茶素没食子酸酯标准物质的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
称取适量表儿茶素没食子酸酯原料，加超纯水，50̊C超声溶解，配制浓度为10 mg/mL的料液，置于烘箱，在130̊C下转化45 min，取出冷却至室温；
高温转化后的料液于9000 rpm离心，取上清液进行制备液相色谱分离纯化；
收集相应的馏分，对其进行旋转蒸发浓缩，浓缩后液相色谱检测纯度>99%，置于-35̊C冰箱冷冻12小时以上，取出再进行冷冻干燥，经液相色谱检测，纯度>99%，收集冻干产物，即为儿茶素没食子酸酯标准物质。
2.根据权利要求1所述的一种儿茶素没食子酸酯标准物质的制备方法，其特征在于：制备液相色谱分离纯化中的色谱条件如下：流速为15 mL/min；流动相比例为35%甲醇-水体系；进样体积为5 mL。
3.根据权利要求1所述的一种儿茶素没食子酸酯标准物质的制备方法，其特征在于：所述的水体系中含0.1%的乙酸。
4.根据权利要求1所述的一种儿茶素没食子酸酯标准物质的制备方法，其特征在于：旋转蒸发浓缩时的温度为60̊C。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113009011A (zh) * 2021-02-19 2021-06-22 广东省计量科学研究院（华南国家计量测试中心） 4,4′-二溴二苯醚纯度标准物质及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103524473A (zh) * 2012-07-04 2014-01-22 江苏天晟药业有限公司 高纯度表儿茶素没食子酸酯制备方法
CN105646429A (zh) * 2016-03-08 2016-06-08 浙江省计量科学研究院 一种制备高纯度儿茶素没食子酸酯cg的方法
CN105820148A (zh) * 2015-01-05 2016-08-03 中华全国供销合作总社杭州茶叶研究所 一种从茶多酚中纯化茶儿茶素的技术

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103524473A (zh) * 2012-07-04 2014-01-22 江苏天晟药业有限公司 高纯度表儿茶素没食子酸酯制备方法
CN105820148A (zh) * 2015-01-05 2016-08-03 中华全国供销合作总社杭州茶叶研究所 一种从茶多酚中纯化茶儿茶素的技术
CN105646429A (zh) * 2016-03-08 2016-06-08 浙江省计量科学研究院 一种制备高纯度儿茶素没食子酸酯cg的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张营，刘丹，杨娜，程康: "茶多酚EGCG 的不稳定性初探", 《广东化工》 *
沈生荣: "茶多酚的稳定性", 《茶叶》 *
马文娟: "茶叶中茶多酚的热稳定性研究", 《农产品加工》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113009011A (zh) * 2021-02-19 2021-06-22 广东省计量科学研究院（华南国家计量测试中心） 4,4′-二溴二苯醚纯度标准物质及其制备方法

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