CN109652494A - 一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法，其原料按重量份比包括：COD降解菌11‑13份、牛肉浸粉15‑17份、大豆蛋白胨12‑15份、胰蛋白胨10‑13份、氯化钙3‑8份、氯化钠4‑6份、琼脂11‑13份、去离子水70‑90份，本发明涉及微生物检测技术领域。该快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法，通过在该试剂中加入COD降解菌，可消耗了该试剂中的细菌成分，延长了该试剂的使用寿命，同时保存了该试剂的活性，进而使得该检测液中的金黄色葡萄球菌可以在试剂中快速繁殖菌落，通过观察试剂中菌落的颜色可进行判定，缩短了培养时间，节省了一定的检测成本，便于检测人员进行操作，为工作人员减轻了一定的工作强度，利于推广使用，具有良好的发展前景。

Description

一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，具体为一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌，属有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染，而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，金黄色葡萄球菌，也称“金葡菌”，细胞壁含90％的肽聚糖和10％的磷壁酸，其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到，因此食品受到污染的机会很多。

为了检测出样品中是否含有金黄色葡萄球菌，通常的检测方式是采用显色培养基进行检测，采用培养基进行一两次的测试后，且培养基内部会繁殖其他细菌的菌群，影响该培养基的活性以及影响金黄色葡萄球菌的检测结果，导致检测时间过长，同时也耗费了一定的物力和人力，不利于实际的使用需求。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法，解决了试剂中其他细菌的繁殖影响后续金黄色葡萄球菌检测工作的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂，其原料按重量份比包括：COD降解菌11-13份、牛肉浸粉15-17份、大豆蛋白胨12-15份、胰蛋白胨10-13份、氯化钙3-8份、氯化钠4-6份、琼脂11-13份、去离子水70-90份。

优选的，其原料包括如下组分：COD降解菌12份、牛肉浸粉16份、大豆蛋白胨13份、胰蛋白胨12份、氯化钙5份、氯化钠5份、琼脂12份、去离子水80份。

优选的，其原料包括如下组分：COD降解菌11份、牛肉浸粉15份、大豆蛋白胨12份、胰蛋白胨10份、氯化钙3份、氯化钠4份、琼脂11份、去离子水70份。

优选的，其原料包括如下组分：COD降解菌13份、牛肉浸粉17份、大豆蛋白胨15份、胰蛋白胨13份、氯化钙8份、氯化钠6份、琼脂13份、去离子水90份。

本发明还公开了一种快速检测金黄色葡萄球菌的方法，具体包括以下步骤：

S1、将琼脂加注去离子水进行溶解，溶解到所需体积的75-90％，然后进行高温灭菌，冷却后备用；

S2、将COD降解菌、牛肉浸粉、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、氯化钙和氯化钠依次放入高速混合搅拌机内，搅拌2-4h，搅拌速度为60-80r/min，搅拌结束后，取出放入干燥机内，在50-70℃的干燥环境下，干燥时间为15-25min，在该混合后的原料内注入去离子水进行溶解，并调节PH值；

S3、将S2中得到的混合溶液进行灭菌处理，再加入S1中的琼脂培养基，倒入培养皿中，得到试剂；

S4、将检测样品放入到生理盐水中，搅拌制成样品质量的浓度为10-15％，按16-18％重量比将增菌剂放入水中，溶化得增菌液，其次将样品溶液与增菌液混合均匀，通过震荡机在38-40℃的温度条件下震荡4.5-5.5h，得到样品增菌液；

S5、根据S4中将已得到的样品增菌液中加入裂解剂，通过搅拌器混合搅拌均匀，混合均匀后静置5-10min中，得出检测液；

S6、取出一部分试剂放入无菌培养皿中，根据S2中将已得到的检测液倒入在无菌培养皿中的试剂上，到达培养皿内部高度的0.5cm-1cm时停止倒入，再将该培养皿放入无菌恒温室，在60-80℃的条件下培养1.5-2.5h；

S7、根据S6中，培养结束后，将该无菌培养皿从无菌恒温室内取出，静置5-10min，观察试剂的颜色，若试剂显绿色，且其周围试剂变为黄色，则说明该检测液中含有金黄色葡萄球菌。

(三)有益效果

本发明提供了一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法。与现有技术相比具备以下有益效果：该快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法，其原料按重量份比包括：COD降解菌11-13份、牛肉浸粉15-17份、大豆蛋白胨12-15份、胰蛋白胨10-13份、氯化钙3-8份、氯化钠4-6份、琼脂11-13份、去离子水70-90份，通过在该试剂中加入COD降解菌，可消耗了该试剂中的细菌成分，延长了该试剂的使用寿命，同时保存了该试剂的活性，进而使得该检测液中的金黄色葡萄球菌可以在试剂中快速繁殖菌落，通过观察试剂中菌落的颜色可进行判定，大大缩短了培养时间，节省了一定的检测成本，便于检测人员进行操作，为工作人员减轻了一定的工作强度，利于推广使用，具有良好的发展前景。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例提供三种技术方案：一种快速检测金黄色葡萄球菌的方法，具体包括以下实施例：

实施例1

S1、将12份琼脂加注80份去离子水进行溶解，溶解到所需体积的75％，然后进行高温灭菌，冷却后备用；

S2、将12份COD降解菌、16份牛肉浸粉、13份大豆蛋白胨、12份胰蛋白胨、5份氯化钙和5份氯化钠依次放入高速混合搅拌机内，大豆蛋白胨为血纤维等蛋白质经胃蛋白酶或其他酶水解而得到的胨和氨基酸类的混合物，搅拌2h，搅拌速度为60r/min，搅拌结束后，取出放入干燥机内，在50℃的干燥环境下，干燥时间为15min，在该混合后的原料内注入去离子水进行溶解，并调节PH值，COD降解菌是具备多种有机物降解能力菌种合剂，能够分解脂肪酸、表面活性剂、碳氢化合物、酚类化合物、酮以及不易分解的有机物；

S3、将S2中得到的混合溶液进行灭菌处理，再加入S1中的琼脂培养基，倒入培养皿中，得到试剂；

S4、将检测样品放入到生理盐水中，搅拌制成样品质量的浓度为10％，按16％重量比将增菌剂放入水中，溶化得增菌液，其次将样品溶液与增菌液混合均匀，通过震荡机在38℃的温度条件下震荡4.5h，得到样品增菌液；

S5、根据S4中将已得到的样品增菌液中加入裂解剂，通过搅拌器混合搅拌均匀，混合均匀后静置5min中，得出检测液；

S6、取出一部分试剂放入无菌培养皿中，根据S2中将已得到的检测液倒入在无菌培养皿中的试剂上，到达培养皿内部高度的0.5cm时停止倒入，再将该培养皿放入无菌恒温室，在60℃的条件下培养1.5h；

S7、根据S6中，培养结束后，将该无菌培养皿从无菌恒温室内取出，静置5min，观察试剂的颜色，若试剂显绿色，且其周围试剂变为黄色，则说明该检测液中含有金黄色葡萄球菌，金黄色葡萄球菌在显微镜下呈葡萄状，排列无芽胞、荚膜，直径0.5-1μm。

实施例2

S1、将11份琼脂加注70份去离子水进行溶解，溶解到所需体积的80％，然后进行高温灭菌，冷却后备用；

S2、将11份COD降解菌、15份牛肉浸粉、12份大豆蛋白胨、10份胰蛋白胨、3份氯化钙和4份氯化钠依次放入高速混合搅拌机内，搅拌3h，搅拌速度为70r/min，搅拌结束后，取出放入干燥机内，在60℃的干燥环境下，干燥时间为20min，在该混合后的原料内注入去离子水进行溶解，并调节PH值；

S3、将S2中得到的混合溶液进行灭菌处理，再加入S1中的琼脂培养基，倒入培养皿中，得到试剂；

S4、将检测样品放入到生理盐水中，搅拌制成样品质量的浓度为12％，按17％重量比将增菌剂放入水中，溶化得增菌液，其次将样品溶液与增菌液混合均匀，通过震荡机在39℃的温度条件下震荡5h，得到样品增菌液；

S5、根据S4中将已得到的样品增菌液中加入裂解剂，通过搅拌器混合搅拌均匀，混合均匀后静置8min中，得出检测液；

S6、取出一部分试剂放入无菌培养皿中，根据S2中将已得到的检测液倒入在无菌培养皿中的试剂上，到达培养皿内部高度的0.8cm时停止倒入，再将该培养皿放入无菌恒温室，在70℃的条件下培养2h；

S7、根据S6中，培养结束后，将该无菌培养皿从无菌恒温室内取出，静置8min，观察试剂的颜色，若试剂显绿色，且其周围试剂变为黄色，则说明该检测液中含有金黄色葡萄球菌。

实施例3

S1、将13份琼脂加注90份去离子水进行溶解，溶解到所需体积的90％，然后进行高温灭菌，冷却后备用；

S2、将13份COD降解菌、17份牛肉浸粉、15份大豆蛋白胨、13份胰蛋白胨、8份氯化钙和6份氯化钠依次放入高速混合搅拌机内，搅拌4h，搅拌速度为80r/min，搅拌结束后，取出放入干燥机内，在70℃的干燥环境下，干燥时间为25min，在该混合后的原料内注入去离子水进行溶解，并调节PH值；

S3、将S2中得到的混合溶液进行灭菌处理，再加入S1中的琼脂培养基，倒入培养皿中，得到试剂；

S4、将检测样品放入到生理盐水中，搅拌制成样品质量的浓度为15％，按18％重量比将增菌剂放入水中，溶化得增菌液，其次将样品溶液与增菌液混合均匀，通过震荡机在40℃的温度条件下震荡5.5h，得到样品增菌液；

S5、根据S4中将已得到的样品增菌液中加入裂解剂，通过搅拌器混合搅拌均匀，混合均匀后静置10min中，得出检测液；

S6、取出一部分试剂放入无菌培养皿中，根据S2中将已得到的检测液倒入在无菌培养皿中的试剂上，到达培养皿内部高度的1cm时停止倒入，再将该培养皿放入无菌恒温室，在80℃的条件下培养2.5h；

S7、根据S6中，培养结束后，将该无菌培养皿从无菌恒温室内取出，静置10min，观察试剂的颜色，若试剂显绿色，且其周围试剂变为黄色，则说明该检测液中含有金黄色葡萄球菌。

效果实施例

通过三个实施例的实验过程，发现放入COD降解菌的试剂可消耗了该试剂中的细菌成分，延长了该试剂的使用寿命，同时保存了该试剂的活性，进而使得该检测液中的金黄色葡萄球菌可以在试剂中快速繁殖菌落，便于后续的显色观察，大大缩短了培养时间，便于检测人员进行操作，利于推广使用。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (5)

1.一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂，其特征在于：其原料按重量份比包括：COD降解菌11-13份、牛肉浸粉15-17份、大豆蛋白胨12-15份、胰蛋白胨10-13份、氯化钙3-8份、氯化钠4-6份、琼脂11-13份、去离子水70-90份。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂，其特征在于：其原料包括如下组分：COD降解菌12份、牛肉浸粉16份、大豆蛋白胨13份、胰蛋白胨12份、氯化钙5份、氯化钠5份、琼脂12份、去离子水80份。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂，其特征在于：其原料包括如下组分：COD降解菌11份、牛肉浸粉15份、大豆蛋白胨12份、胰蛋白胨10份、氯化钙3份、氯化钠4份、琼脂11份、去离子水70份。

4.根据权利要求1所述的一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂，其特征在于：其原料包括如下组分：COD降解菌13份、牛肉浸粉17份、大豆蛋白胨15份、胰蛋白胨13份、氯化钙8份、氯化钠6份、琼脂13份、去离子水90份。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的一种快速检测金黄色葡萄球菌的试剂，其特征在于：其方法具体包括以下步骤：

S1、将琼脂加注去离子水进行溶解，溶解到所需体积的75-90％，然后进行高温灭菌，冷却后备用；

S2、将COD降解菌、牛肉浸粉、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、氯化钙和氯化钠依次放入高速混合搅拌机内，搅拌2-4h，搅拌速度为60-80r/min，搅拌结束后，取出放入干燥机内，在50-70℃的干燥环境下，干燥时间为15-25min，在该混合后的原料内注入去离子水进行溶解，并调节PH值；

S3、将S2中得到的混合溶液进行灭菌处理，再加入S1中的琼脂培养基，倒入培养皿中，得到试剂；

S4、将检测样品放入到生理盐水中，搅拌制成样品质量的浓度为10-15％，按16-18％重量比将增菌剂放入水中，溶化得增菌液，其次将样品溶液与增菌液混合均匀，通过震荡机在38-40℃的温度条件下震荡4.5-5.5h，得到样品增菌液；

S5、根据S4中将已得到的样品增菌液中加入裂解剂，通过搅拌器混合搅拌均匀，混合均匀后静置5-10min中，得出检测液；

S6、取出一部分试剂放入无菌培养皿中，根据S2中将已得到的检测液倒入在无菌培养皿中的试剂上，到达培养皿内部高度的0.5cm-1cm时停止倒入，再将该培养皿放入无菌恒温室，在60-80℃的条件下培养1.5-2.5h；

S7、根据S6中，培养结束后，将该无菌培养皿从无菌恒温室内取出，静置5-10min，观察试剂的颜色，若试剂显绿色，且其周围试剂变为黄色，则说明该检测液中含有金黄色葡萄球菌。