CN109651301B - 一种奥利司他的纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种奥利司他的纯化方法。本发明的奥利司他的纯化方法包括以下步骤：1)将奥利司他粗提取物进行溶解、过滤；2)将经步骤1)过滤后的奥利司他溶液上样到装有UniSil微球的层析柱中进行层析；采用流动相对奥利司他溶液进行洗脱；3)分段收集目的峰值的奥利司他溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的奥利司他。本发明的奥利司他的纯化方法，采用UniSil微球作为固定相，仅需一步层析纯化，即可做到奥利司他单杂含量低于0.20％，总杂低于1.0％，纯度大于99％，收率大于86.0％，纯化收率高而稳定，同时本发明纯化方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。

Description

一种奥利司他的纯化方法

技术领域

本发明涉及药物纯化技术领域，具体涉及一种奥利司他的纯化方法。

背景技术

奥利司他是一种强效和长效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂，通过直接阻断人体对食物中脂肪的吸收，摄入的热能和脂肪一旦小于消耗，体内脂肪自然减少，从而达到减重的目的。它是安全减肥，有效成分不进入血液循环，不作用于中枢神经，副作用较少，不会出现头晕、心慌、失眠、口干等情况。

结构式如下：

目前国内外专利、文献等对奥利司他也有相关分离纯化方法的报道。

CN103992296B公开了一种奥利司他的制备方法，具体包括发酵液的预处理、滤饼浸提、浓缩、非极性溶剂萃取、浓缩、极性溶剂萃取、冷冻除杂、浓缩、非极性溶剂结晶、氢化、反洗、结晶及重结晶。采用本发明工艺制备的奥利司他含量在99％以上，最大单杂在0.1％以内，高于药用标准。但是，该方法工序步骤繁琐，所用的溶剂部分为正相试剂，危害较大，操作复杂收率降低。

近年来，随着分离提纯技术的不断进步，制备液相色谱技术得到了极大地应用。CN102070568A公开了一种奥利司他的制备方法，以反相硅胶或反相聚合物树脂作为DAC柱填料，奥利司他粗品溶液单针或多针分批连续方式上样，以有机溶剂甲醇或乙醇洗脱，分段收集解析液，对目标物进行结晶纯化奥利司他的方法。该工艺虽然纯化结晶收率较高达85％以上，但是产品质量不高，最大单杂0.17％，不符合USP35规定的药用标准。

CN102070567A公开了反相高效液相色谱制备高纯度奥利司他的方法，采用反相高效液相色谱制备高纯度奥利司他，虽然精制的产品纯度较高达99.5％以上、单杂在0.1％以内，但是制备液相技术设备投资大，填料成本高，不适于工业化生产。

因此，有必要对奥利司他的高效纯化做更进一步的研究。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种奥利司他的纯化方法，纯化收率高而稳定，简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

一种奥利司他的纯化方法，所述纯化方法包括以下步骤：

1)将奥利司他粗提取物进行溶解、过滤；

2)将经步骤1)过滤后的奥利司他溶液上样到装有UniSil微球的层析柱中进行层析；采用流动相对奥利司他溶液进行洗脱；

3)分段收集目的峰值的奥利司他溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的奥利司他。

本发明的奥利司他的纯化方法，采用UniSil微球作为固定相，仅需一步层析纯化，即可做到奥利司他单杂含量低于0.20％，总杂低于1.0％，纯度大于99％，收率大于86.0％，纯化收率高而稳定，同时本发明纯化方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。

步骤1)中，所述奥利司他粗提取物的纯度为90～95％，例如所述奥利司他粗提取物的纯度为90％、91％、92％、93％、94％或95％等。

步骤1)中，所述过滤是采用孔径为0.4～0.5μm的滤膜对用甲醇质量浓度为80～85％的甲醇-水溶液溶解后的奥利司他粗提取物进行过滤，例如滤膜的孔径为0.4μm、0.41μm、0.42μm、0.43μm、0.44μm、0.45μm、0.46μm、0.47μm、0.48μm、0.49μm、0.5μm。

步骤2)中，所述UniSil微球为UniSil C8。UniSil C8是粒径为10μm、孔径

的高分子微球，该微球具有严格控制的粒径大小和孔径结构(如图1)，为单分散的、具有孔道结构的微球，使其作为色谱填料时具有很好的针对性。

步骤2)中，所述流动相为甲醇的质量浓度为80～85％的甲醇-水溶液和有机溶剂的混合物。本发明采用有机溶剂和甲醇质量浓度为80～85％的甲醇-水溶液作为流动相，用18个柱体积就可完成奥利司他主峰的洗脱，因此本过程所用流动相相对安全、成本较低。

其中，所述流动相中有机溶剂的质量浓度为80～85％，例如所述流动相中有机溶剂的质量浓度为80％、81％、82％、83％、84％或85％等。

所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈和异丙醇中的任意一种或至少两种的混合物。所述混合物典型但非限制的组合为甲醇、乙醇的混合物，甲醇、乙腈的混合物，甲醇和异丙醇的混合物，乙醇、乙腈的混合物，乙醇和异丙醇的混合物，乙腈和异丙醇的混合物，甲醇、乙醇、乙腈的混合物，甲醇、乙醇和异丙醇的混合物，乙醇、乙腈和异丙醇的混合物，甲醇、乙醇、乙腈和异丙醇的混合物。

步骤2)中，所述洗脱为等度洗脱；优选地，所述等度洗脱为：采用有机溶剂质量浓度为80～85％的有机溶剂-水溶液进行等度洗脱。优选地，所述等度洗脱的流速为2～4mL/min，例如等度洗脱的流速为2mL/min、2.5mL/min、3mL/min、3.5mL/min、4mL/min。

所述步骤2)上样前，还包括对层析柱平衡的步骤。

所述平衡的过程为，采用质量浓度为90～100％的有机相对层析柱进行除杂，再用质量浓度为80～85％的有机相对除杂后的层析柱进行平衡；

优选地，所述有机相为甲醇、乙醇、乙腈和异丙醇中的任意一种或至少两种的混合物。

作为本发明的优选方案，所述奥利司他的纯化方法包括以下步骤：

1)将纯度为90～95％的奥利司他粗提取物用甲醇质量浓度为80～85％的甲醇-水溶液进行溶解，采用孔径为0.4～0.5μm的滤膜对用甲醇质量浓度为80～85％的甲醇-水溶液溶解后的奥利司他粗提取物进行过滤；

2)将经步骤1)过滤后的奥利司他溶液上样到装有UniSil微球UniSil C8的层析柱中进行层析，上样前采用质量浓度为90～100％的有机相对层析柱进行除杂，再用80～85％的有机相对除杂后的层析柱进行平衡；

采用超甲醇浓度为80～85％的甲醇-水溶液和有机溶剂的混合物为流动相对奥利司他溶液进行等度洗脱，所述等度洗脱为：采用有机溶剂浓度为80～85％的有机溶剂-水溶液进行等度洗脱；

3)分段收集目的峰值的奥利司他溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的奥利司他。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明的奥利司他的纯化方法，采用UniSil微球作为固定相，仅需一步层析，即可使奥利司他单杂含量低于0.20％，总杂低于1.0％，纯度大于99％，收率大于86.0％。

(2)本发明的奥利司他的纯化方法，不仅纯度高、收率高且稳定，而且操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相量相对较少，大大降低成本。

附图说明

图1为本发明的实施例1使用的UniSil C8微球的扫描电镜照片；

图2为本发明的实施例1纯化前的奥利司他粗提取物的高效液相色谱分析图；

图3为本发明的实施例1纯化后的奥利司他的高效液相色谱分析图。

具体实施方式

下面结合附图1、2、3，并通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。

实施例1

取纯度为93.842％的奥利司他粗提取物，加入质量浓度为81％甲醇-水溶液，溶解，溶液中奥利司他浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。

采用10×250mm的色谱柱，奥利司他专用C8微球(苏州纳微科技有限公司生产，扫描电镜照片如图1所示)作为层析柱填料，装柱体积为19.625mL。对层析柱进行柱前预处理，先用质量浓度为95％的甲醇进行除杂，后用质量浓度为81％的甲醇-水进行平衡。然后采用质量浓度为81％的甲醇-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，上样冲洗流速控制在2mL/min，洗脱流速控制在3mL/min。

分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

经高效液相色谱分析，洗脱液中奥利司他的纯度99.652％，收率88.6％，单杂含量均低于0.2％，总杂0.348％。

图2是纯化前的奥利司他粗提取物的高效液相色谱分析图，由图2可见，纯化前的奥利司他粗提取物有一定的杂质。图3是纯化后的奥利司他高效液相色谱分析图，由图3可见，纯化后的奥利司他洗脱液中杂峰非常小，说明经纯化后的杂质非常少。

实施例2

取纯度为93.924％的奥利司他粗提取物，加入质量浓度为81％甲醇-水溶液，溶解，溶液中奥利司他浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。

采用20×250mm的色谱柱，奥利司他专用C8微球作为层析柱填料，装柱体积为78.5mL。对层析柱进行柱前预处理，先用质量浓度为90％的甲醇进行除杂，后用质量浓度为81％甲醇进行平衡。然后采用质量浓度为81％甲醇-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，流速控制在20mL/min。

分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

经高效液相色谱分析，洗脱液中奥利司他的纯度99.219％，收率86.2％；单杂含量均低于0.2％，总杂0.781％。

实施例3

取纯度为93.623％的奥利司他粗提取物，加入质量浓度为81％甲醇-水溶液，溶解，溶液中奥利司他浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。

采用20×250mm的色谱柱，奥利司他专用C8微球作为层析柱填料，装柱体积为78.5mL。对层析柱进行柱前预处理，先用质量浓度为98％的甲醇进行除杂，后用质量浓度为81％甲醇进行平衡。然后采用质量浓度为81％甲醇-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，流速控制在20mL/min。

分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

经高效液相色谱分析，洗脱液中奥利司他的纯度99.106％，收率86.3％；单杂含量均低于0.2％，总杂0.894％。

实施例4

取纯度为91.482％的奥利司他粗提取物，加入质量浓度为81％甲醇-水溶液，溶解，溶液中奥利司他浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。

采用20×250mm的色谱柱，奥利司他专用C8微球作为层析柱填料，装柱体积为78.5mL。对层析柱进行柱前预处理，先用质量浓度为95％的甲醇进行除杂，后用质量浓度为81％甲醇进行平衡。然后采用质量浓度为81％甲醇-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，流速控制在20mL/min。

分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

经高效液相色谱分析，洗脱液中奥利司他的纯度99.284％，收率87.5％；单杂含量均低于0.2％，总杂0.716％。

对比例1

取纯度为92.019％的奥利司他粗提取物，加入质量浓度为83％甲醇-水溶液，溶解，溶液中奥利司他浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。

采用20×250mm的色谱柱，UniSil 10-100C8Ultra微球作为层析柱填料，装柱体积为78.5mL。对层析柱进行柱前预处理，先用质量浓度为95％的甲醇进行除杂，后用质量浓度为83％甲醇进行平衡。然后采用质量浓度为83％甲醇-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，流速控制在20mL/min。

分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

经高效液相色谱分析，洗脱液中奥利司他的纯度99.234％，收率55.37％，单杂含量均低于0.2％，总杂0.766％。由此可以看出，将C8微球替换为UniSil10-100C8Ultra微球后，纯化效果变差。

对比例2

取纯度为92.334％的奥利司他粗提取物，加入质量浓度为83％甲醇-水溶液，溶解，溶液中奥利司他浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。

采用20×250mm的色谱柱，奥利司他专用C8微球作为层析柱填料，装柱体积为78.5mL。对层析柱进行柱前预处理，先用质量浓度为95％的甲醇进行除杂，后用质量浓度为83％甲醇进行平衡。然后采用质量浓度为79％甲醇-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，流速控制在20mL/min。

分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

经高效液相色谱分析，洗脱液中奥利司他的纯度99.130％，收率53.15％，单杂含量均低于0.2％，总杂0.870％。

对比例3

取纯度为91.413％的奥利司他粗提取物，加入质量浓度为75％乙醇-水溶液，溶解，溶液中奥利司他浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。

采用20×250mm的色谱柱，奥利司他专用C8微球作为层析柱填料，装柱体积为78.5mL。对层析柱进行柱前预处理，先用质量浓度为95％的甲醇进行除杂，后用质量浓度为75％乙醇进行平衡。然后采用质量浓度为75％乙醇-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，流速控制在20mL/min。

分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

经高效液相色谱分析，洗脱液中有机物质量浓度太低，未能将奥利司他杂质含量均降低于0.2％，实验效果不理想。

本发明奥利司他的纯化方法，用于奥利司他的深度精纯，仅需一步层析纯化和萃取即可满足奥利司他纯度大于99.4％，收率大于90.0％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。

本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (3)

1.一种奥利司他的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：

1)将奥利司他纯度为90～95％的粗提取物进行溶解、过滤；

2)将经步骤1)过滤后的奥利司他溶液上样到装有UniSil C8微球的层析柱中进行层析；采用流动相对奥利司他溶液进行洗脱，所述流动相为甲醇-水溶液，所述甲醇-水溶液中甲醇的质量浓度为81％；

所述洗脱为等度洗脱，所述等度洗脱为：采用甲醇质量浓度为81％的甲醇-水溶液进行等度洗脱；

所述等度洗脱的流速为2～4mL/min；

上样前，还包括对层析柱平衡的步骤，所述平衡的过程为：采用质量浓度为90～100％的有机相对层析柱进行除杂，再用质量浓度为80～85％的有机相对除杂后的层析柱进行平衡；

3)分段收集目的峰值的奥利司他溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的奥利司他；

所述过滤是采用孔径为0.4～0.5μm的滤膜对用甲醇质量浓度为80～85％的甲醇-水溶液溶解后的奥利司他粗提取物进行过滤。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述平衡时采用的所述有机相为甲醇、乙醇、乙腈和异丙醇中的任意一种或至少两种的混合物。

3.根据权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：

1)将纯度为90～95％的奥利司他粗提取物用甲醇质量浓度为80～85％的甲醇-水溶液进行溶解，采用孔径为0.4～0.5μm的滤膜对用甲醇质量浓度为80～85％的甲醇-水溶液溶解后的奥利司他粗提取物进行过滤；

2)将经步骤1)过滤后的奥利司他溶液上样到装有UniSil微球UniSil C8的层析柱中进行层析，上样前采用质量浓度为90～100％的有机相对层析柱进行除杂，再用80～85％的有机相对除杂后的层析柱进行平衡；

采用甲醇浓度为80～85％的甲醇-水溶液为流动相对奥利司他溶液进行等度洗脱，所述等度洗脱为：采用甲醇浓度为80～85％的甲醇-水溶液进行等度洗脱；

所述等度洗脱的流速为2～4mL/min；

3)分段收集目的峰值的奥利司他溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的奥利司他。

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