CN109627317B

CN109627317B - 片段缩合制备索马鲁肽的方法

Info

Publication number: CN109627317B
Application number: CN201910105996.5A
Authority: CN
Inventors: 常民; 彭雅丽; 王锐; 薛宏祥; 武怡菲; 申宇轩; 方泉
Original assignee: Lanzhou University
Current assignee: Lanzhou University
Priority date: 2019-02-01
Filing date: 2019-02-01
Publication date: 2020-11-27
Anticipated expiration: 2039-02-01
Also published as: CN109627317A

Abstract

一种制备索马鲁肽的方法，本发明采用固液相结合片段缩合的方案，固相合成侧链保护肽，液相进行片段缩合得到全保护索马鲁肽，然后裂解得到索马鲁肽粗肽，纯化换盐得到索马鲁肽；为了减少消旋造成的副产物，本发明使用了伪脯氨酸策略。本发明方法，减少了杂质，提高了产率，同时缩短了合成时间，减少了废液排放，大幅降低了合成成本，非常有利于产业化生产。

Description

片段缩合制备索马鲁肽的方法

技术领域

本发明涉及制药领域，具体地说涉及片段缩合制备索马鲁肽的方法。

背景技术

索马鲁肽(Semaglutide)是诺和诺德公司开发的新型长效GLP-1类似物，序列为：H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu-17-carboxyheptadecanoyl)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH，分子式：C₁₈₇H₂₉₁N₄₅O₅₉。能抑制DPP-4酶的水解，延长生物半衰期，长效降低血糖，促进胰岛细胞再生，用于治疗2型糖尿病。

专利CN103848910、专利CN104356224、专利CN105753964、专利CN106928343、专利CN106478806、专利CN108203462、专利CN108359006、专利CN108676087和专利CN109021092是采用Fmoc策略固相法依次连接合成索马鲁肽。该方法氨基酸逐个偶联合成周期长，逐步偶联时树脂收缩严重、反应不完全、产生缺陷肽，固相载体选用的取代值限制，总收率较低，同时杂质较多，纯化困难。

专利CN108059666采用固相片段缩合的方法合成，固相片段缩合投入的每个片段都是2-5倍过量，严重浪费肽片段，造成合成成本很高；同时固相片段缩合的树脂取代值限制，物料通量降低，浪费溶剂，产生大量废液。

由于索马鲁肽的序列较长，属于中长肽，所以采用纯液相合成不是常规手段。如上所述，目前的主要手段以固相逐个缩合或固相片段缩合为主，这对于合成31个氨基酸的索马鲁肽来说，是可以得到产物的，但是，收率不高，实际上的收率在15-35％之间。所以本领域技术人员仍然期待以高产品收率、低合成成本获得具有良好品质产品的方法，尤其是降低成本、减少废液产生的新方法，对于大规模、产业化生产是非常必要和重要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有方法合成收率低、生产成本高、产生废液多、产品纯化难、不能低成本高效率得到高纯度的索马鲁肽的缺点，提供一种片段缩合制备索马鲁肽的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种片段缩合制备索马鲁肽的方法，固相合成3个侧链保护的肽片段序列，将各肽片段在溶液体系中逐步偶联得到全保护索马鲁肽，然后裂解脱除保护基得到索马鲁肽粗肽，纯化换盐得到索马鲁肽；

其中，所述的3个肽片段序列为：

第一肽片段序列为索马鲁肽序列中的第1-12位氨基酸，侧链保护的第一肽片段序列为：

Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(ψ^Me，MePro)-OH；

第二肽片段序列为索马鲁肽序列中的第13-24位氨基酸，侧链保护的第二肽片段序列为：

Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic(OtBu))-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-OH；

第三肽片段序列为索马鲁肽序列中的第25-31位氨基酸，侧链保护的第三肽片段序列为：

Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-OH。

上述片段缩合制备索马鲁肽的方法，优选包括以下步骤：

(1)分别固相合成侧链保护的第一～第三肽片段序列，并从树脂上裂解；

(2)将侧链保护的第三肽片段序列羧基端修饰保护，并脱去其氨基保护基和侧链保护的第二肽片段序列偶联得到侧链保护的第四肽片段序列：Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic(OtBu))-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-OtBu。

(3)将侧链保护的第四肽片段序列脱去氨基保护基，和侧链保护的第一肽片段序列偶联得到全保护的索马鲁肽：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(ψ^Me，MePro)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic(OtBu))-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-OtBu。

(4)将全保护的索马鲁肽裂解脱除保护基得到索马鲁肽粗肽；

(5)索马鲁肽粗肽经纯化换盐得到索马鲁肽。

步骤(1)中，侧链保护的第一至第三肽片段序列分别由氨基酸依次偶联在固相载体上获得；其中，所述的固相载体为酸敏感树脂，优选为2-氯-三苯甲基氯树脂。

侧链保护的第一至第三肽片段序列固相合成中，

所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为20％的哌啶的DMF溶液、或者体积百分含量为l％的DBU的DMF溶液；优选体积百分含量为20％哌啶的DMF溶液。

所使用的偶联剂为DIC与HOBt按摩尔比1∶1的组合、或者HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1∶1∶2的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA按摩尔比1∶1∶2的组合；优选HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1∶1∶2的组合；待偶联的氨基酸与HOBt的摩尔比是1∶1。

所使用的裂解剂为体积百分含量为0.5～1％的TFA的DCM溶液、或者体积百分含量为20％的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1∶2∶7的混合物，优选体积百分含量为0.5～1％的TFA的DCM溶液。

步骤(1)中，具体的固相合成方法，为本领域技术人员的常规技术手段。

步骤(2)中，所使用的羧基端保护试剂为0.5M的2-Cl-Trt Cl的DCM溶液或者CHCl₃与TFE与TBTA按照体积比7∶2∶1的混合物，优选为CHCl3与TFE与TBTA按照体积比7∶2∶1的混合物。

步骤(2)、(3)中，所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为16％的哌啶的DMF溶液，或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液。优选体积百分含量为16％哌啶的DMF溶液。

步骤(2)、(3)中，所使用的偶联剂为HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1∶1∶2的组合、或者HBTU与HOAt与DIEA按摩尔比1∶1∶2的组合、或者DIC与HOBt按摩尔比1∶1的组合、或者EDC与HOBt按摩尔比1∶1的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA按摩尔比1∶1∶2的组合。优选HBTU与HOBt与DIEA按摩尔比1∶1∶2的组合。待偶联的羧基端与氨基端的摩尔比是0.95～1.05∶1。待偶联的羧基端与HOBt的摩尔比是1∶1。偶联反应的溶剂为DMF、DCM、NMP、THF、TFE和DMSO中的任意一种或几种的组合，优选DMF。

步骤(4)中，全保护索马鲁肽裂解的裂解液为TFA与H₂O按体积比95∶5的混合溶液、或者TFA与EDT与TIS与PhOH与H₂O按体积比80∶5∶5∶5∶5的混合溶液、或者TFA与EDT与TIS与H₂O按体积比92.5∶2.5∶2.5∶2.5的混合溶液，优选TFA与EDT与TIS与H₂O按体积比92.5∶2.5∶2.5∶2.5的混合溶液。

步骤(5)中，纯化为反相高效液相色谱纯化换盐；即色谱柱为C18柱；流动相为体积百分比0.25％醋酸的水溶液和乙腈。

本发明使用酸敏感树脂进行各个肽片段的固相合成，树脂取代值高，氨基酸1.5-2倍投量，物料成本低。合成的肽片段纯度高，不必进行HPLC纯化，即可进行液相反应，减少了后处理的步骤，减少了废液产生。多个片段可以同时合成，节约合成时间，缩短合成周期。片段缩合采用液相体系，羧基端片段的投量仅为氨基端片段0.95-1.05倍，不会造成片段的浪费，大大降低了成本，而未反应的片段均可通过合适的反应体系通过萃取清除，后处理简单、快捷。并且液相片段缩合没有了固相片段缩合存在的树脂取代值限制的问题，物料通量增加，减少了废液产生。在最终的液相色谱纯化步骤中，杂质不是缺少一个或几个氨基酸的缺陷肽，而是未缩合的片段，不会造成纯化困难的问题。所以本发明的特点是高通量、低成本、废液少、效率高、纯化易，非常适合大规模、产业化生产。

本发明中所使用的物料缩写的含义见表1。本发明所涉及的目标肽(索马鲁肽)及中间体的各个肽片段的氨基酸序列见表2。

表1本发明所使用的物料缩写含义

表2索马鲁肽相应的编码氨基酸序列

肽序号	氨基酸序列
		第一肽片段	H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser(ψ<sup>MeMe</sup>Pro)-OH
第二肽片段	H-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(X)-Glu-Phe-Ile-Ala-OH
		第三肽片段	H-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH
第四肽片段	H-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(X)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH

在常规的液相或固相合成不适宜或产率不够高的情况下，改变合成方案是所有从业者都能想到的，在索马鲁肽的合成上我们尝试采用了固液相结合的片段缩合方案，但是如何进行分段，需要大量的试验工作。固相合成片段的长短没有固定选择，因为不同的氨基酸序列会产生不同的二级结构，合成难度和溶解度并不和长度正相关。液相片段缩合对于反应物和产物在不同溶剂中的溶解状态要求，以及可能在不同反应条件下产生的消旋问题会产生不易除去的杂质。所以采用片段缩合方案，不一定就可以得到优于固相逐个缩合的结果。经过多次分段尝试，我们设计了一个成熟的路线，得到了很好的结果。

有益效果：本发明相对现有技术具有以下优点：

1、本发明利用较高荷载量的酸敏感树脂为起始原料，先采用标准的固相肽合成技术合成选定结构的高纯度肽片段，再采用液相偶联技术使肽片段缩合，从而获得高纯度(＞99.5％)、高收率(＞42％)的目标肽。

2、相比较连续固相合成索马鲁肽的工艺，本发明每个片段可使用高荷载量的固相载体，没有逐个缩合氨基酸数目过多造成的树脂取代值限制，物料通量增加，废液排放减少；片段缩合，各个肽片段合成可以同时进行，大大缩短了合成时间。

3、相比较固相片段缩合合成索马鲁肽的工艺，本发明利用液相片段缩合，片段摩尔比为0.95-1.05倍量，远低于固相片段缩合合成片段的2-5倍过量，节约物料成本；而未反应的片段均可通过合适的反应体系通过萃取清除，后处理简单、快捷。

4、采用超酸敏感型树脂合成的10个左右氨基酸的侧链保护肽片段序列纯度非常高，不必用色谱技术纯化，只需要进行沉淀、研磨即可使用；片段液相偶合，其杂质主要为未偶合的片段，而不是缺少一个或数个氨基酸的缺陷肽，并且未偶合的片段可以通过合适的溶剂体系萃取去除，在最终高效液相色谱纯化中容易得多，从而减少制备次数，降低了索马鲁肽的制备成本。

5、为了避免和解决片段缩合时的消旋问题，我们在第一肽片段中引入了Ser-Ser的伪脯氨酸策略，很好的解决了该位点的消旋问题。

6、本发明具有高通量、低成本、废液少、效率高、纯化易的特点，有利于实现规模化、产业化生产。

附图说明

图1为本发明制备的索马鲁肽质谱图。

图2为本发明制备的索马鲁肽色谱图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例：

1.树脂制备

1.1制备Fmoc-Gly-2-氯-三苯甲基树脂：2-氯-三苯甲基氯树脂5g，取代值1.03mmol/g(1eq)加入多肽合成器，DCM洗涤，加入DCM溶解的1.3eq Fmoc-Gly-OH和2.5eqDIEA，氩气保护机械搅拌该混合物1小时，甲醇封闭。DMF、DCM和MeOH洗涤，真空干燥至恒重，得Fmoc-Gly-2-氯-三苯甲基树脂。紫外分光光度法测定树脂的荷载量为0.8mmol/g。

1.2制备Fmoc-Ala-2-氯-三苯甲基树脂：2-氯-三苯甲基氯树脂5g，取代值1.03mmol/g(1eq)加入多肽合成器，DCM洗涤，加入DCM溶解的1.1eq Fmoc-Ala-OH和2.2eqDIEA，氩气保护机械搅拌该混合物1小时，甲醇封闭。DMF、DCM和MeOH洗涤，真空干燥至恒重，得Fmoc-Ala-2-氯-三苯甲基树脂。紫外分光光度法测定树脂的荷载量为0.68mmol/g。

1.3制备Fmoc-Ser(tBu)-Ser(^ψMe，MePro)-2-氯-三苯甲基树脂：2-氯-三苯甲基氯树脂5g，取代值1.03mmol/g(1eq)加入多肽合成器，DCM洗涤，加入DCM溶解的1.3eq Fmoc-Ser(tBu)-Ser(^ψMe，MePro)-OH和2.5eq DIEA，氩气保护机械搅拌该混合物1小时，甲醇封闭。DMF、DCM和MeOH洗涤，真空干燥至恒重，得Fmoc-Ser(tBu)-Ser(^ψMe，MePro)-2-氯-三苯甲基树脂。紫外分光光度法测定树脂的荷载量为0.71mmol/g。

2.固相片段制备

2.1第一肽片段，即Boc-AA(1-12)-OH的制备：

Fmoc-Ser(tBu)-Ser(^ψMe，MePro)-2-氯-三苯甲基树脂5g，20％哌啶/DMF分别5、15分钟处理树脂，脱除氨基端保护，DMF冼涤，去除Fmoc副产物(二苯并富烯和其哌啶加合物)和残余哌啶，茚三酮试验测定。

同时活化序列中的后续氨基酸Fmoc-Val-OH，以在其羧基端反应。2eq Fmoc-AA-OH、2eq HOBt和4eq DIEA室温下溶于DMF，冷却至0℃，加入2eq HBTU，将活化的氨基酸溶液加入到抽干的树脂中，机械搅拌所述反应物1小时。用定性茚三酮试验监测缩合完成情况，反应完成后，抽干树脂，DMF洗涤。

依次用Fmoc-保护的氨基酸：Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Aib-OH以及Boc-His(Trt)-OH各2eq，对所述肽片段后续单体重复该操作过程。在最后一个偶合反应后，用DMF、DCM和MeOH洗涤，真空干燥至恒重，得到肽树脂。

用1％TFA/DCM处理肽树脂约1小时，然后用0.5％TFA/DCM洗涤两遍各5分钟，从树脂裂解所述肽。向裂解收集液中加入吡啶(与TFA体积比1∶1)，合并裂解洗涤液，真空下浓缩，然后用DMSO或DMF重构，同时继续浓缩以去除残余DCM，加入水沉淀产物，室温下搅拌该淤浆30分钟，真空过滤收集所述固体，水洗涤。真空干燥所述产物，得Boc-AA(1-12)-OH，收率92％，纯度96％。

2.2第二肽片段，即Fmoc-AA(13-24)-OH的制备：

Fmoc-Ala-2-氯-三苯甲基树脂5g，20％哌啶/DMF分别5、15分钟处理树脂，脱除氨基端保护，DMF冼涤，去除Fmoc副产物和残余哌啶，茚三酮试验测定。

同时活化序列中的后续氨基酸Fmoc-Ile-OH，以在其羧基端反应。2eq Fmoc-AA-OH、2eq HOBt和4eq DIEA室温下溶于DMF，冷却至0℃，加入2eq HBTU，将活化的氨基酸溶液加入到抽干的树脂中，机械搅拌所述反应物1小时。用定性茚三酮试验监测缩合完成情况，反应完成后，抽干树脂，DMF洗涤。

依次用Fmoc-保护的氨基酸：Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu(OtBu)-Octadecanedioic(OtBu))-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH和Fmoc-Tyr(tBu)-OH各2eq，对所述肽片段后续单体重复该操作过程。在最后一个偶合反应后，用DMF、DCM和MeOH洗涤，真空干燥至恒重，得到肽树脂。

用1％TFA/DCM处理肽树脂约1小时，然后用0.5％TFA/DCM洗涤两遍各5分钟，从树脂裂解所述肽。向裂解收集液中加入吡啶(与TFA体积比1∶1)，合并裂解洗涤液，真空下浓缩，然后用DMSO或DMF重构，同时继续浓缩以去除残余DCM，加入水沉淀产物，室温下搅拌该淤浆30分钟左右，真空过滤收集所述固体，水洗涤。真空干燥所述产物，得Fmoc-AA(13-24)-OH，产率91％，纯度95％。

2.3第三肽片段，即Fmoc-AA(25-31)-OH的制备：

Fmoc-Gly-2-氯-三苯甲基树脂5g，20％哌啶/DMF分别5、15分钟处理树脂，脱除氨基端保护，DMF冼涤，去除Fmoc副产物和残余哌啶，茚三酮试验测定。

同时活化序列中的后续氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH，以在其羧基端反应。2eq Fmoc-AA-OH、2eq HOBt和4eq DIEA室温下溶于DMF，冷却至0℃，加入2eq HBTU，将活化的氨基酸溶液加入到抽干的树脂中，机械搅拌所述反应物1小时。用定性茚三酮试验监测缩合完成情况，反应完成后，抽干树脂，DMF洗涤。

依次用Fmoc-保护的氨基酸：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH和Fmoc-Trp(Boc)-OH各2eq，对所述肽片段后续单体重复该操作过程。在最后一个偶合反应后，用DMF、DCM和MeOH洗涤，真空干燥至恒重，得到肽树脂。

用1％TFA/DCM处理肽树脂约1小时，然后用0.5％TFA/DCM洗涤两遍各5分钟，从树脂裂解所述肽。向裂解收集液中加入吡啶(与TFA体积比1∶1)，合并裂解洗涤液，真空下浓缩，然后用DMSO或DMF重构，同时继续浓缩以去除残余DCM，加入水沉淀产物，室温下搅拌该淤浆30分钟，真空过滤收集所述固体，水洗涤。真空干燥所述产物，得Fmoc-AA(25-31)-OH，产率94％，纯度98％。

3.液相片段缩合过程

3.1制备第四肽片段序列，即Fmoc-AA(13-31)-OtBu：

1mmol Fmoc-AA(25-31)-OH和CHCl₃∶TFE∶TBTA溶液(7∶2∶1)，磁力搅拌2小时，加入冷MTBE沉淀产物，继续搅拌1小时，真空过滤收集固体，用MTBE洗涤，干燥，得到Fmoc-AA(25-31)-OtBu。再加入DMF溶解，滴加哌啶至最终浓度16％，反应2小时，加入冰水沉淀产物，洗涤2遍，MTBE搅拌2小时去除脱除Fmoc的富烯产物，过滤沉淀，干燥，得到H-AA(25-31)-OtBu。

0.93mmol Fmoc-AA(13-24)-OH、0.98mmol H-AA(25-31)-OtBu和0.93mmol HOBt溶于DMF，加入1.86mmol DIEA，冷却至0℃加入0.93mmol HBTU，搅拌反应混合物30分钟，升至室温，再搅拌3-5小时，加入水从所述溶液沉淀肽。真空过滤收集固体，用水洗涤，室温下用乙腈研磨所述固体，真空过滤收集，得Fmoc-AA(13-31)-OtBu，产率96％。

3.2制备全保护索马鲁肽

DMF溶解Fmoc-AA(13-31)-OtBu，滴加哌啶至最终浓度16％，反应2小时，加入冰水沉淀产物，冰水洗涤2遍，MTBE搅拌2小时去除脱除Fmoc的富烯产物，过滤沉淀，干燥，得到H-AA(13-31)-OtBu。

1mmol Boc-AA(1-12)-OH、0.95mmol H-AA(13-31)-OtBu和1mmol HOBt溶于DMF，加入2mmol DIEA，冷却至0℃加入1mmol HBTU，搅拌反应混合物30分钟，升至室温，再搅拌6-8小时，加入水沉淀肽。真空过滤收集固体，水洗两遍，MTBE洗涤，干燥，室温下乙腈研磨，真空过滤收集，干燥得Boc-AA(1-31)-OtBu，收率95％。

4.索马鲁肽的裂解及纯化

4.1通过去除侧链保护制备索马鲁肽粗肽

全保护索马鲁肽加入三氟乙酸/水/三异丙基硅烷/1，2-乙二硫醇(92.5∶2.5∶2.5∶2.5)溶液，冷却至0℃，搅拌所述淤浆直到所述固体溶解，然后升至室温，搅拌3小时。旋转浓缩，将该溶液加入0℃乙醚沉淀，洗涤，然后将固体溶于含有1％乙酸的1∶1水/乙腈中，冷冻干燥得索马鲁肽粗肽，产率98％。

4.2 HPLC纯化索马鲁肽粗肽

50mg索马鲁肽粗肽经RP-HPLC纯化得索马鲁肽26mg，纯度99.516％，产率52％。

色谱柱：Waters C18 250×19，5u，130A；流速：8mL/min；检测：UV，220nm；流动相：A.乙腈；B.0.25％醋酸/水；方法：10％-30％A，10min；30-50％A，40min。

Claims

1.片段缩合制备索马鲁肽的方法，其特征在于，固相合成3个侧链保护的肽片段序列，将各肽片段在溶液体系中逐步偶联得到全保护索马鲁肽，然后裂解脱除保护基得到索马鲁肽粗肽，纯化换盐得到索马鲁肽；

其中，所述的3个肽片段序列为：

第一肽片段序列为索马鲁肽序列中的第1-12位氨基酸，

第二肽片段序列为索马鲁肽序列中的第13-24位氨基酸，

第三肽片段序列为索马鲁肽序列中的第25-31位氨基酸；

上述方法包括以下步骤：

(2)将侧链保护的第三肽片段序列羧基端修饰保护，并脱去其氨基保护基和侧链保护的第二肽片段序列偶联得到侧链保护的第四肽片段序列；

(3)将侧链保护的第四肽片段序列脱去氨基保护基，和侧链保护的第一肽片段序列偶联得到全保护的索马鲁肽；

(4)将全保护的索马鲁肽裂解脱除保护基得到索马鲁肽粗肽；

(5)索马鲁肽粗肽经纯化换盐得到索马鲁肽。

2.根据权利要求1所述的片段缩合制备索马鲁肽的方法，其特征在于，步骤(1)中，侧链保护的第一至第三肽片段序列分别由氨基酸依次偶联在固相载体上获得；其中，所述的固相载体为酸敏感树脂；

侧链保护的第一至第三肽片段序列固相合成中，所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为20％的哌啶的DMF溶液、或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液；所使用的偶联剂为DIC与HOBt的组合、或者HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA的组合；所使用的裂解剂为体积百分含量为0.5～1％的TFA的DCM溶液、体积百分含量为20％的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1:2:7的混合物。

3.根据权利要求1所述的片段缩合制备索马鲁肽的方法，其特征在于，步骤(2)中，所使用的羧基端保护试剂为0.5M的2-Cl-Trt Cl的DCM溶液或者CHCl₃与TFE与TBTA按照体积比7:2:1的混合物。

4.根据权利要求1所述的片段缩合制备索马鲁肽的方法，其特征在于，步骤(2)、(3)中，所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为16％的哌啶的DMF溶液，或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液。

5.根据权利要求1所述的片段缩合制备索马鲁肽的方法，其特征在于，步骤(2)、(3)中，所使用的偶联剂为HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者HBTU与HOAt与DIEA的组合、或者DIC与HOBt的组合、或者EDC与HOBt的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA的组合；偶联反应的溶剂为DMF、DCM、NMP、THF、TFE和DMSO中的任意一种或几种的组合。

6.根据权利要求1所述的片段缩合制备索马鲁肽的方法，其特征在于，步骤(4)中，全保护索马鲁肽裂解的裂解液为TFA与H₂O按体积比95:5的混合溶液、或者TFA与EDT与TIS与PhOH与H₂O按体积比80:5:5:5:5的混合溶液、或者TFA与EDT与TIS与H₂O按体积比92.5:2.5:2.5:2.5的混合溶液。

7.根据权利要求1所述的片段缩合制备索马鲁肽的方法，其特征在于，步骤(5)中，纯化为反相高效液相色谱纯化换盐；流动相为醋酸水溶液和乙腈溶液。