CN109627309A - 一种利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，所述方法为：将蚕丝丝素溶于CaC1₂水溶液中，加热煮沸至丝素溶解后，过滤，取滤液，获得丝素溶液；将丝素溶液与pH 7.5‑8.0的缓冲液混合，于35‑37℃水浴中预热5‑10min，加入舍雷肽酶构成酶解体系，35‑37℃水浴振荡酶解完成后，煮沸灭酶活，冷却后离心，取上清液，透析去除Ca²⁺后，冷冻干燥，获得丝素肽。本发明使用舍雷肽酶水解丝素，具有水解速度快、水解度易控制的优点；(2)酶解制备的丝素肽具有较好的抗氧化活性；(3)本发明具有方法简单、环境友好，易于实现工业化应用的优点。

Description

一种利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法

(一)技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体地说，是一种利用舍雷肽酶水解丝素制备抗氧化活性丝素肽的方法。

(二)背景技术

丝素，即丝素蛋白，也称丝心，是蚕丝的主要结构蛋白质，约占蚕丝含量的70％-80％，由18种氨基酸组成，分子量在3.6×10⁵-3.7×10⁵Da之间。丝素是一种天然高分子材料，具有良好的生物相容性、可生物降解性以及极弱的炎症反应，已应用在药物释放、伤口敷料、神经组织工程等生物医药材料领域。

虽然丝素属于蛋白，但由于结构的特殊性，人体肠胃无法消化吸收，只有当其降解到小分子短肽(丝素肽)和氨基酸水平后，才有可能被吸收利用。丝素肽会表现出一定的生物活性，如抗氧化、抗菌、降血压等，所以丝素肽可以开发成具有特殊功能的保健品和化妆品，目前市场己有一些含丝素肽的产品，如护发素、面霜和面膜等。

丝素的水解可以采用化学水解法和酶水解法。化学水解法一般是采用酸或碱水解，该法的优点在于工艺简单，成本低，缺点是肽键断裂位点没有选择性，短肽分子量不均匀，氨基酸容易被破坏，制备的丝素肽生物活性低，甚至无活性；此外，在酸碱水解过程中，所用的酸或碱浓度一般较高，水解完成后须有除碱或除酸工艺，加大了工艺的复杂性。酶水解法是选用合适的蛋白酶，在一定的温度下水解。酶水解法的优点在于酶解的肽键有选择性，可以得到分子量相对均匀的短肽，生物活性高，而且具有条件温和、环境友好等优点，因而酶解法在生产丝素肽具有相对的优势。

目前已有不少利用蛋白酶水解丝素制备丝素肽的论文和专利报道，但所用的蛋白酶多为普通中性或碱性蛋白酶。丝素的结晶度高达50％-70％，结构非常紧密，肽键难以被普通蛋白酶水解，所以利用普通蛋白酶水解丝素，往往存在水解速度慢，水解度不高的问题，如用碱性蛋白酶水解丝素制备丝素肽，5小时后的水解度仅为19.54％(参考文献：蓝建京.丝素蛋白酶解多肽的抗氧化性研究.广东化工,2013,40(24):38-40)；中国发明专利“一种具有抑菌活性的丝素肽制备方法”(CN201210440176)中，报道的水解度为4-21％。所以，现有蛋白酶水解丝素制备丝素肽技术，存在的问题是酶解效率低，致使制备的丝素肽生物活性不高，甚至无活性，技术的应用受到一定的限制。

(三)发明内容

本发明的目的是克服现有丝素酶解技术水解效率不高、丝素肽活性低的问题，提供一种利用舍雷肽酶水解丝素，制备具有抗氧化活性的丝素肽，方法具有过程简单、丝素水解度可控，制备的丝素肽具抗氧化活性的特点。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供一种利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，所述方法为：(1)将蚕丝丝素溶于CaC1₂水溶液中，加热煮沸至丝素溶解后(优选5-10min)，过滤(优选8层纱布)，取滤液，获得丝素溶液；(2)将丝素溶液与pH 7.5-8.0的缓冲液混合，于35-37℃水浴中预热5-10min，加入舍雷肽酶构成酶解体系，35-37℃水浴振荡酶解完成后(优选20-10h)，煮沸(优选5min)灭酶活，冷却后离心，取上清液，透析去除Ca²⁺后，冷冻干燥，获得丝素肽。

进一步，步骤(1)中CaC1₂水溶液质量浓度为40％。

进一步，步骤(1)中CaC1₂水溶液体积用量以蚕丝丝素重量计为20-30mL/g。

进一步，步骤(1)中蚕丝丝素按如下方法制备：将蚕茧剪碎后加入质量浓度0.5％的Na₂CO₃水溶液中煮沸30-60min后，自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗1-2次，最后用蒸馏水冲洗，于85-100℃烘箱内烘干，获得蚕丝丝素；所述Na₂CO₃水溶液体积用量以蚕茧重量计为40-50mL/g。

进一步，步骤(2)中缓冲液为pH 7.5-8.0的Tris-HCl缓冲液。

进一步，步骤(2)酶解体系中丝素浓度为5-10g/L；所述舍雷肽酶是干燥的固体酶粉，活力单位为1500-2000U/mg，其在酶解体系中的活力单位为300-750U/mL。

进一步，步骤(2)所述透析方法为：取上清液转入截留分子量为500Da的透析袋中，于流动自来水中透析，用Ca²⁺指示剂检验溶液中是否残留Ca²⁺，透析至完全除去Ca²⁺后，取截留液(即丝素肽溶液)，于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥，获得丝素肽。

更进一步，本发明利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，包括以下步骤：

(1)将蚕茧剪碎后加入到质量浓度0.5％的Na₂CO₃水溶液中煮沸30-60min，再用自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗1-2次，将经过2-3次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净，于85-100℃烘箱内烘干，即获得脱胶后的蚕丝丝素；所述Na₂CO₃水溶液体积用量以蚕茧重量计为40-50mL/g；

(2)将蚕丝丝素加入到质量浓度40％的CaCl₂水溶液，煮沸5-10min，待丝素溶解后，8层纱布过滤，取滤液，获得丝素溶液；所述CaC1₂水溶液体积用量以蚕丝丝素重量计为20-30mL/g；

(3)将步骤(2)制备的丝素溶液加入pH 7.5-8.0、0.5mol/L的Tris-HCl的缓冲液中，于35-37℃水浴锅中预热5-10min，加入舍雷肽酶，35-37℃水浴振荡酶解2-10h，酶解结束后，酶解体系煮沸5-10min以灭酶活，冷却后离心留上清液，转入截留分子量为500Da的透析袋中，流动自来水透析24-36h，用Ca²⁺指示剂检验是否溶液中残留Ca²⁺，透析至完全除去Ca²⁺，转入洁净培养皿中，于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥，既得丝素肽粉；所述酶解体系中，丝素浓度为5-10g/L，舍雷肽酶加入量为300-750U/mL。

与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：(1)本发明使用舍雷肽酶水解丝素，具有水解速度快、水解度易控制的优点；(2)酶解制备的丝素肽具有较好的抗氧化活性；(3)本发明具有方法简单、环境友好，易于实现工业化应用的优点。

(四)附图说明

图1：血清蛋白浓度—A₅₉₅标准曲线(考马斯亮蓝法)。

图2：丝氨酸摩尔浓度—A₅₇₀标准曲线(茚三酮法)。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1

以蚕茧为原料制备丝素，选择8种蛋白酶水解丝素制备丝素肽，筛选丝素水解度高、具抗氧化活性的蛋白酶。

(1)丝素的制备：称取5g剪成碎片的蚕茧，加入到200mL质量浓度为0.5％的Na₂CO₃水溶液中，煮沸30min，再用大量自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗2次。将经过3次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净，于85℃烘箱内烘干，获得脱胶后的丝素3.46g，丝素的得率为69.2％；将3.46g丝素加入到70mL质量浓度为40％的CaC1₂水溶液，煮沸5min，待丝素溶解后，8层纱布过滤，得丝素溶液，丝素浓度为45.5g/L；

(2)水解丝素制备丝素肽蛋白酶的筛选：取步骤(1)制备的丝素溶液5.5mL，加入pH7.5、0.5mol/L的Tris-HCl缓冲液至总体积50mL，丝素浓度为5.00g/L，于35℃水浴中预热5min，加入不同的蛋白酶，使它们在体系中的酶活均为300U/mL，35℃水浴振荡酶解6h。酶解结束后，酶解体系煮沸5min以灭酶活，冷却后离心留上清液，即丝素肽溶液。不同蛋白酶水解丝素制备的丝素肽的水解度和抗氧化活性见表1。

表1不同蛋白酶水解丝素的水解度和抗氧活性(DPPH法)

从表1数据可以看出，在实验的8种蛋白酶中，舍雷肽酶水解丝素的水解度以及制备丝素肽溶液抗氧化活性都远远超过其他7种蛋白酶，所以，舍雷肽酶是水解丝素制备丝素肽较佳的酶。

步骤(1)中所述的丝素浓度采用考马斯亮蓝法测定，具体方法为：1mL经蒸馏水适当倍数稀释的丝素溶液，加入5mL考马斯亮蓝G-250溶液，摇匀后静置10min，以1mL蒸馏水代替样品的相同处理为参比，测定A₅₉₅，由牛血清蛋白浓度—A₅₉₅标准曲线(图1)计算出蛋白质浓度，乘以稀释倍数即得样品丝素的浓度。

步骤(2)中所述的丝素水解度的测定采用茚三酮法，具体方法为：1mL经过适当倍数稀释的丝素肽溶液，加入1mL的pH 5.4、2mol/L的醋酸缓冲液和1mL茚三酮显色液，摇匀后沸水浴15min，自来水冷却。静置5min后，加60％乙醇3mL摇匀，以1mL蒸馏水代替样品的相同处理为参比测定A₅₇₀，由丝氨酸摩尔浓度—A₅₇₀标准曲线(图2)，计算出样品中丝氨酸的摩尔浓度(即NH₂的摩尔浓度)，按公式(1)计算丝素的水解度。

公式1中，DH为蛋白的水解度(％)；h为丝素水解后每g蛋白被裂解的肽键(mmol/g)；h_tot为底物蛋白质中肽键总数，丝素蛋白的h_tot＝12.4mmol/g(参考文献：周凤娟,许时婴,杨瑞金,等.Alcalase水解丝素蛋白的特性.纺织学报,2007,28(5):13-17)。

步骤(2)中所述的抗氧化活性DPPH自由基清除率测定方法为：取经蒸馏水适当倍数稀释的丝素肽溶液1mL于试管中，加入现配浓度为0.1mmol/L的DPPH(2,2-联苯基-1-苦基肼基，95％乙醇配制)溶液3mL，摇匀，室温避光反应20min后，以95％乙醇做参比，于波长517nm处测定吸光值(A_样品)。以1mL蒸馏水代替样品，按如上操作，测定吸光值(A_对照)。吸取待测样品1mL于试管中，加入3mL 95％乙醇摇匀，室温避光反应20min后，以95％乙醇做参比，于波长517nm处测定吸光值(A_空白)。按照公式(2)计算DPPH自由基清除率。

实施例2

(1)丝素的制备：称取5g剪成碎片的蚕茧，加入到200mL质量浓度为0.5％的Na₂CO₃水溶液中，煮沸30min，再用大量自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗2次。将经过3次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净，于85℃烘箱内烘干，获得脱胶后的丝素3.27g，丝素的得率为65.4％；将3.27g丝素加入到75mL质量浓度为40％的CaC1₂水溶液，煮沸5min，待丝素溶解后，8层纱布过滤，得丝素溶液，丝素浓度为40.5g/L；

(2)不同时间下舍雷肽酶水解丝素制备的丝素肽水解度和抗氧化活性：取步骤(1)制备的丝素溶液6.2mL，加入pH 7.5、0.5mol/L的Tris-HCl缓冲液至总体积50mL，丝素浓度为5.03g/L，于35℃水浴中预热5min，加入舍雷肽酶，使其在体系中的酶活为300U/mL，35℃水浴振荡酶解不同时间。酶解结束后，酶解体系均煮沸5min以灭酶活，冷却后离心留上清液，即丝素肽溶液。不同时间下舍雷肽酶水解丝素制备的丝素肽水解度和抗氧化活性见表2。

表2不同时间下舍雷肽酶水解丝素制备的丝素肽的水解度和抗氧化活性

从表2数据可以看出，舍雷肽酶水解丝素的时间越长，水解度就随之增加，8小时后基本稳定在79％左右，但是抗氧化活性较高的水解度范围为36.9％-55.3％。理论上可以理解：丝素的水解度过高，丝素被水解成氨基酸，抗氧化活性自然也就不高。所以，为了制备抗氧化活性高的丝素肽，水解度应控制在36.9％-55.3％。

丝素浓度、丝素水解度和丝素肽抗氧化活性的测定方法，均同实施例1所述方法。

实施例3

以蚕茧为原料，利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽，可以按以下步骤操作：

(1)称取5g剪成碎片的蚕茧，加入到200mL质量浓度为0.5％的Na₂CO₃水溶液中，煮沸30min，再用大量自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗2次。将经过3次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净，于85℃烘箱内烘干，获得脱胶后的丝素3.35g；

(2)将步骤(1)制备的3.35g丝素加入到75mL质量浓度为40％的CaC1₂水溶液，煮沸5min，待丝素溶解后，8层纱布过滤，得丝素溶液，丝素浓度为40.2g/L；

(3)取步骤(2)制备的丝素溶液6.2mL，加入pH 8.0、0.5mol/L的Tris-HCl缓冲液至总体积50mL，丝素浓度为4.98g/L，于35℃水浴中预热5min，加入舍雷肽酶10mg，使其在体系中的酶活为300U/mL，35℃水浴振荡酶解2h。酶解结束后，酶解体系煮沸5min以灭酶活，冷却后离心留上清液，即丝素肽溶液；

(4)将丝素肽溶液转入截留分子量为500Da的透析袋中，于流动自来水中透析，用Ca²⁺指示剂检验溶液中是否残留Ca²⁺，透析至完全除去Ca²⁺后，丝素肽溶液转入洁净培养皿中，于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥，得丝素肽粉207mg。

按上述方法，由蚕丝制备丝素的得率为67.0％，由丝素制备丝素肽的得率为83.1％，丝素的水解度为35.4％，在丝素肽浓度为1.55g/L时，抗氧化活性DPPH自由基清除率为72.5％。

丝素浓度、丝素水解度和丝素肽抗氧化活性的测定方法，均同实施例1所述方法。

实施例4

以蚕茧为原料，利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽，可以按以下步骤操作：

(1)称取5g剪碎的蚕茧，加入到250mL质量浓度为0.5％的Na₂CO₃水溶液中，煮沸60min，再用大量自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗1次。将经过2次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净，于100℃烘箱内烘干，获得脱胶后的丝素3.21g；

(2)将步骤(1)制备的3.21g丝素加入到75mL质量浓度为40％的CaC1₂水溶液，煮沸10min，待丝素溶解后，8层纱布过滤，得丝素溶液，丝素的浓度为38.1g/L；

(3)取步骤(2)制备的丝素溶液9.9mL，加入pH 8.0、0.5mol/L的Tris-HCl缓冲液至总体积50mL，丝素的浓度为7.54g/L，于35℃水浴中预热10min，加入舍雷肽酶15mg，使其在体系中的酶活为450U/mL，35℃水浴振荡酶解3h。酶解结束后，酶解体系煮沸10min以灭酶活，冷却后离心留上清液，即丝素肽溶液；

(4)将丝素肽溶液转入截留分子量为500Da的透析袋中，于流动自来水中透析，用Ca²⁺指示剂检验溶液中是否残留Ca²⁺，透析至完全除去Ca²⁺后，丝素肽溶液转入洁净培养皿中，于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥，得丝素肽粉307mg。

按上述方法，由蚕丝制备丝素的得率为64.2％，由丝素制备丝素肽的得率为81.4％，丝素的水解度为44.7％，在丝素肽浓度为1.55g/L时，抗氧化活性DPPH自由基清除率为74.8％。

丝素浓度、丝素水解度和丝素肽抗氧化活性的测定方法，均同实施例1所述方法。

实施例5

以蚕茧为原料，利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽，可以按以下步骤操作：

(1)称取5g剪碎的蚕茧，加入到250mL质量浓度为0.5％的Na₂CO₃水溶液中，煮沸60min，再用大量自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗1次。将经过2次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净，于100℃烘箱内烘干，获得脱胶后的丝素3.25g；

(2)将步骤(1)制备的3.25g丝素加入到80mL质量浓度为40％的CaC1₂水溶液，煮沸10min，待丝素溶解后，8层纱布过滤，得丝素溶液，丝素的浓度为36.2g/L；

(3)取步骤(2)制备的丝素溶液13.8mL，加入pH 7.5、0.5mol/L的Tris-HCl缓冲液至总体积50mL，丝素的浓度为9.98g/L，于37℃水浴中预热10min，加入舍雷肽酶20mg，使其在体系中的酶活为600U/mL，37℃水浴振荡酶解3h。酶解结束后，酶解体系煮沸10min以灭酶活，冷却后离心留上清液，即丝素肽溶液；

(4)将丝素肽溶液转入截留分子量为500Da的透析袋中，于流动自来水中透析，用Ca²⁺指示剂检验溶液中是否残留Ca²⁺，透析至完全除去Ca²⁺后，丝素肽溶液转入洁净培养皿中，于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥，得丝素肽粉412mg。

按上述方法，由蚕丝制备丝素的得率为65.0％，由丝素制备丝素肽的得率为82.3％，丝素的水解度为48.3％，在丝素肽浓度为1.55g/L时，抗氧化活性DPPH自由基清除率为73.2％。

丝素浓度、丝素水解度和丝素肽抗氧化活性的测定方法，均同实施例1所述方法。

实施例6

以蚕茧为原料，利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽，可以按以下步骤操作：

(1)称取10g剪碎的蚕茧，加入到400mL质量浓度为0.5％的Na₂CO₃水溶液中，煮沸60min，再用大量自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗1次。将经过2次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净，于100℃烘箱内烘干，获得脱胶后的丝素6.83g；

(2)将步骤(1)制备的6.83g丝素加入到200mL质量浓度为40％的CaC1₂水溶液，煮沸10min，待丝素溶解后，8层纱布过滤，得丝素溶液，丝素的浓度为31.1g/L；

(3)取步骤(2)制备的丝素溶液32.2mL，加入pH 8.0、0.5mol/L的Tris-HCl缓冲液至总体积100mL，丝素的浓度为10.0g/L，于37℃水浴中预热10min，加入舍雷肽酶40mg，使其在体系中的酶活为600U/mL，37℃水浴振荡酶解4h。酶解结束后，酶解体系煮沸10min以灭酶活，冷却后离心留上清液，即丝素肽溶液；

(4)将丝素肽溶液转入截留分子量为500Da的透析袋中，于流动自来水中透析，用Ca²⁺指示剂检验溶液中是否残留Ca²⁺，透析至完全除去Ca²⁺后，丝素肽溶液转入洁净培养皿中，于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥，得丝素肽粉828mg。

按上述方法，由蚕丝制备丝素的得率为68.3％，由丝素制备丝素肽的得率为82.7％，丝素的水解度为54.5％，在丝素肽浓度为1.55g/L时，抗氧化活性DPPH自由基清除率为71.8％。

丝素浓度、丝素水解度和丝素肽抗氧化活性的测定方法，均同实施例1所述方法。

实施例7

以蚕茧为原料，利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽，可以按以下步骤操作：

(1)称取10g剪碎的蚕茧，加入到500mL质量浓度为0.5％的Na₂CO₃水溶液中，煮沸60min，再用大量自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗1次。将经过2次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净，于100℃烘箱内烘干，获得脱胶后的丝素6.67g；

(2)将步骤(1)制备的6.67g丝素加入到200mL质量浓度为40％的CaC1₂水溶液，煮沸10min，待丝素溶解后，8层纱布过滤，得丝素溶液，丝素的浓度为30.0g/L；

(3)取步骤(2)制备的丝素溶液33.4mL，加入pH 8.0、0.5mol/L的Tris-HCl缓冲液至总体积100mL，丝素的浓度为10.0g/L，于37℃水浴中预热10min，加入舍雷肽酶50mg，使其在体系中的酶活为750U/mL，37℃水浴振荡酶解3h。酶解结束后，酶解体系煮沸10min以灭酶活，冷却后离心留上清液，即丝素肽溶液；

(4)将丝素肽溶液转入截留分子量为500Da的透析袋中，于流动自来水中透析，用Ca²⁺指示剂检验溶液中是否残留Ca²⁺，透析至完全除去Ca²⁺后，丝素肽溶液转入洁净培养皿中，于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥，得丝素肽粉794mg。

按上述方法，由蚕丝制备丝素的得率为66.7％，由丝素制备丝素肽的得率为79.2％，丝素的水解度为52.7.8％，在丝素肽浓度为1.55g/L时，抗氧化活性DPPH自由基清除率为72.2％。

丝素浓度、丝素水解度和丝素肽抗氧化活性的测定方法，均同实施例1所述方法。

Claims (8)

1.一种利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，其特征在于所述方法为：(1)将蚕丝丝素溶于CaC1₂水溶液中，加热煮沸至丝素溶解后，过滤，取滤液，获得丝素溶液；(2)将丝素溶液与pH7.5-8.0的缓冲液混合，于35-37℃水浴中预热5-10min，加入舍雷肽酶构成酶解体系，35-37℃水浴振荡酶解完全后，煮沸灭酶活，冷却后离心，取上清液，透析去除Ca²⁺后，冷冻干燥，获得丝素肽。

2.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，其特征在于步骤(1)中CaC1₂水溶液质量浓度为40％。

3.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，其特征在于步骤(1)中CaC1₂水溶液体积用量以蚕丝丝素重量计为20-30mL/g。

4.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，其特征在于步骤(1)中蚕丝丝素按如下方法制备：将蚕茧剪碎后加入质量浓度0.5％的Na₂CO₃水溶液中煮沸30-60min后，自来水冲洗，再重复煮沸和冲洗1-2次，最后用蒸馏水冲洗，于85-100℃烘箱内烘干，获得蚕丝丝素；所述Na₂CO₃水溶液体积用量以蚕茧重量计为40-50mL/g。

5.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，其特征在于步骤(2)中缓冲液为pH 7.5-8.0的Tris-HCl缓冲液。

6.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，其特征在于步骤(2)酶解体系中丝素浓度为5-10g/L；所述舍雷肽酶在酶解体系中的活力单位为300-750U/mL。

7.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，其特征在于步骤(2)所述透析方法为：取上清液转入截留分子量为500Da的透析袋中，于流动自来水中透析，用Ca²⁺指示剂检验溶液中是否残留Ca²⁺，透析至完全除去Ca²⁺后，取截留液，于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥，获得丝素肽。

8.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法，其特征在于所述包括以下步骤：

(1)将蚕茧剪碎后加入到质量浓度0.5％的Na₂CO₃水溶液中煮沸30-60min，再用自来水冲洗，重复上述操作1次，将经过2次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净，于85-100℃烘箱内烘干，即获得脱胶后的蚕丝丝素；所述Na₂CO₃水溶液体积用量以蚕茧重量计为40-50mL/g；

(2)将蚕丝丝素加入到质量浓度40％的CaC1₂水溶液，煮沸5-10min，待丝素溶解后，8层纱布过滤，取滤液，获得丝素溶液；所述CaC1₂水溶液体积用量以蚕丝丝素重量计为20-30mL/g；

(3)将步骤(2)制备的丝素溶液加入pH 7.5-8.0、0.5mol/L的Tris-HCl的缓冲液中，于35-37℃水浴锅中预热5-10min，加入舍雷肽酶，35-37℃水浴振荡酶解2-10h，酶解结束后，酶解体系煮沸5-10min以灭酶活，冷却后离心留上清液，转入截留分子量为500Da的透析袋中，流动自来水透析24-36h，用Ca²⁺指示剂检验是否溶液中残留Ca²⁺，透析至完全除去Ca²⁺，转入洁净培养皿中，于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥，既得丝素肽粉；所述酶解体系中，丝素浓度为5-10g/L，舍雷肽酶加入量为300-750U/mL。