CN109588317B - 烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法，包括以下步骤：种子消毒，切取种胚进行初代培养，扩繁继代培养，生根培养，生根苗的炼苗和移栽；其中，初代培养和扩繁继代培养所用培养基中含有6‑BA 1.5～3mg/L、NAA 0.5～1mg/L和2,4‑D 0.5～1mg/L；生根培养所用培养基中含有IBA 0.1～1.2mg/L。本发明通过调整植物组织培养过程的植物外源激素的浓度和配比，实现了烟台翠雀的组培快速繁殖，具有愈伤诱导率高，增殖系数高、生根时间短，移栽成活率高的优点，为烟台翠雀组培工厂化繁育提供了便捷的方法和途径。

Description

烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体地说，涉及一种烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法。
背景技术
烟台翠雀为山东省特有野生花卉，野生资源稀少，且在其种群自然分布区实生苗较少，同时果实成熟后自然开裂，种子难以采集，再加上自然生态环境日益破坏，现已处于极度濒危状态，影响其种质资源保存以及引种驯化工作。
本发明旨在通过组织培养和快速繁殖技术获得烟台翠雀的无性繁殖体系，从而扩大繁殖系数，为濒危植物种质资源的保护提供可行的方法。
发明内容
本发明的目的是提供烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法。
为了实现本发明目的，本发明提供的烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法，主要包括以下步骤：种子消毒，切取种胚进行初代培养，扩繁继代培养，生根培养，生根苗的炼苗和移栽。
本发明进行初代培养和扩繁继代培养所用培养基中含有6-BA 1.5～3mg/L、NAA0.5～1mg/L和2,4-D 0.5～1mg/L；优选含有6-BA 3mg/L、NAA 1mg/L和2,4-D 1mg/L。
更优选地，初代培养基和继代培养基均为MS+6-BA 1.5～3mg/L+NAA 0.5～1mg/L+2,4-D 0.5～1mg/L+25～30g/L蔗糖+6～8g/L琼脂。
本发明进行生根培养所用生根培养基中含有IBA 0.1～1.2mg/L，优选0.5～1mg/L。
更优选地，生根培养基为1/2MS+IBA 0.5～1mg/L+25～30g/L蔗糖+6～8g/L琼脂。
前述的方法，在进行生根苗的炼苗时，所用基质为泥炭和珍珠岩按重量比2～3：1(优选3：1)的混合物。
前述的方法，种子消毒具体如下：挑选烟台翠雀发育良好的种子，种子用自来水冲洗60～120min，然后置于70％～75％酒精中消毒3～5s，无菌水冲洗3～5次，饱和漂白粉消毒10～15min，无菌水冲洗3～5次，即可。
前述的方法，初代培养具体如下：消毒后将种胚横切接入初代培养基，进行初代培养28～32天；培养条件为：温度21-25℃，湿度55-75％，光照12～14小时/天，光照强度1500Lx。
前述的方法，扩繁继代培养具体如下：经初代培养所得外植体材料转入继代培养基，进行快速增殖21～28天；培养条件为：温度21-25℃，湿度55-75％，光照12～14小时/天，光照强度1500Lx。
前述的方法，生根培养具体如下：经扩繁继代培养所得外植体材料转入生根培养基，进行生根培养；生根培养分为两个阶段，暗培养阶段：6～12天，温度18-26℃，湿度55-75％，光培养阶段：6～10天，温度18-26℃，湿度55-75％，光照16～20小时/天，光照强度1800-2200Lx。
前述的方法，生根苗的炼苗和移栽具体如下：生根培养的烟台翠雀组培苗根长达到2～3cm时，移至温室大棚闭瓶炼苗3～7天，开瓶炼苗3～7天，然后取出瓶内生根组培苗，洗去培养基，进行根部消毒处理，移栽入穴盘中，穴盘填充基质为泥炭和珍珠岩的混合物，待根系发育完全后移栽到大田。
优选地，用0.2％多菌灵对组培苗根部进行消毒处理。
借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：
本发明通过调整植物组织培养过程的植物外源激素的浓度和配比，实现了烟台翠雀的组培快速繁殖，具有愈伤诱导率高，增殖系数高、生根时间短，移栽成活率高的优点，为烟台翠雀组培工厂化繁育提供了便捷的方法和途径。
利用本发明方法可实现烟台翠雀的组培快速繁殖，继代培养周期25天时，增殖系数是继代培养之前的8～10倍，生根时间不超过15天，生根率达到90％以上，炼苗驯化后大田移栽成活率大于85％。
附图说明
图1为本发明实施例1中烟台翠雀继代培养示意图。
图2为本发明实施例1中烟台翠雀生根培养示意图。
图3为本发明实施例1中烟台翠雀组培生根苗盆栽生长示意图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
实施例1烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法
1、烟台翠雀无菌系的建立：选择烟台翠雀发育良好的饱满种子，进行种子消毒。用自来水冲洗60min，75％酒精消毒5s，无菌水冲洗5次，饱和漂白粉消毒10min，无菌水冲洗5次，然后采用培养基为MS+6-BA 3mg/L+NAA 1mg/L+2,4-D 1mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基进行初代培养，培养条件为：温度25℃，湿度75％，光照14小时/天，光照强度1500Lx。
2、烟台翠雀的扩繁继代培养：烟台翠雀的初代培养试验材料，采用培养基为MS+6-BA 3mg/L+NAA 1mg/L+2,4-D 1mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基进行继代培养(图1)，培养条件为：温度25℃，湿度75％，光照14小时/天，光照强度1500Lx，进行快速增殖28天。
3、烟台翠雀的生根培养：将烟台翠雀的继代培养材料切分为单芽，采用培养基为1/2MS+IBA 1.0mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基进行生根培养(图2)，生根培养分为两个阶段，暗培养阶段：暗培养10天，温度25℃，湿度75％，光培养阶段：温度25℃，湿度75％，光照18小时/天，培养8天，光照强度2000Lx。
4、烟台翠雀生根苗的炼苗和大田移栽：生根培养的烟台翠雀组培苗根长达到2～3cm时，移至温室大棚闭瓶炼苗7天，开瓶炼苗7天，然后取出瓶内生根组培苗，洗去培养基，用0.2％多菌灵进行根部消毒处理，移栽入穴盘中(图3)，穴盘填充基质为泥炭：珍珠岩(重量比3：1)混合物，待根系发育完全后移栽到大田。
实施例2烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法
1、烟台翠雀无菌系的建立：选择烟台翠雀发育良好的饱满种子，进行种子消毒。用自来水冲洗60min，70％酒精消毒3s，无菌水冲洗3次，饱和漂白粉消毒10min，无菌水冲洗3次，然后采用培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L+25g/L蔗糖+6g/L琼脂的培养基进行初代培养，培养条件为：温度21℃，湿度55％，光照12小时/天，光照强度1500Lx。
2、烟台翠雀的扩繁继代培养：烟台翠雀的初代培养试验材料，采用培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L+25g/L蔗糖+6g/L琼脂的培养基进行继代培养，培养条件为：温度21℃，湿度55％，光照12小时/天，光照强度1500Lx，进行快速增殖21天。
3、烟台翠雀的生根培养：将烟台翠雀的继代培养材料切分为单芽，采用培养基为1/2MS+IBA 0.1mg/L+25g/L蔗糖+6g/L琼脂的培养基进行生根培养。生根培养分为两个阶段，暗培养阶段：暗培养6天，温度18℃，湿度55％，光培养阶段：温度18℃，湿度55％，光照16小时/天，培养6天，光照强度1800Lx。
4、烟台翠雀生根苗的炼苗和大田移栽：生根培养的烟台翠雀组培苗根长达到2～3cm时，移至温室大棚闭瓶炼苗4天，开瓶炼苗4天，然后取出瓶内生根组培苗，洗去培养基，用0.2％多菌灵进行根部消毒处理，移栽入穴盘中(图3)，穴盘填充基质为泥炭：珍珠岩(重量比2：1)混合物，待根系发育完全后移栽到大田。
实施例3烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法
1、烟台翠雀无菌系的建立：选择烟台翠雀发育良好的饱满种子，进行种子消毒。用自来水冲洗60min，72％酒精消毒3s，无菌水冲洗4次，饱和漂白粉消毒10min，无菌水冲洗4次，然后采用培养基为MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.8mg/L+2,4-D 0.8mg/L+28g/L蔗糖+8g/L琼脂的培养基进行初代培养，培养条件为：温度22℃，湿度65％，光照13小时/天，光照强度1500Lx。
2、烟台翠雀的扩繁继代培养：烟台翠雀的初代培养试验材料，采用培养基为MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.8mg/L+2,4-D 0.8mg/L+28g/L蔗糖+8g/L琼脂的培养基进行继代培养，培养条件为：温度22℃，湿度65％，光照13小时/天，光照强度1500Lx，进行快速增殖26天。
3、烟台翠雀的生根培养：将烟台翠雀的继代培养材料切分为单芽，采用培养基为1/2MS+IBA 1.2mg/L+28g/L蔗糖+8g/L琼脂的培养基进行生根培养。生根培养分为两个阶段，暗培养阶段：暗培养12天，温度26℃，湿度65％，光培养阶段：温度26℃，湿度65％，光照20小时/天，培养10天，光照强度2200Lx。
4、烟台翠雀生根苗的炼苗和大田移栽：生根培养的烟台翠雀组培苗根长达到2～3cm时，移至温室大棚闭瓶炼苗3天，开瓶炼苗3天，然后取出瓶内生根组培苗，洗去培养基，用0.2％多菌灵进行根部消毒处理，移栽入穴盘中(图3)，穴盘填充基质为泥炭：珍珠岩(重量比3：1)混合物，待根系发育完全后移栽到大田。
实施例4烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法
1、烟台翠雀无菌系的建立：选择烟台翠雀发育良好的饱满种子，进行种子消毒。用自来水冲洗60min，72％酒精消毒3s，无菌水冲洗4次，饱和漂白粉消毒10min，无菌水冲洗4次，然后采用培养基为MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.8mg/L+2,4-D 0.8mg/L+28g/L蔗糖+8g/L琼脂的培养基进行初代培养，培养条件为：温度22℃，湿度65％，光照13小时/天，光照强度1500Lx。
2、烟台翠雀的扩繁继代培养：烟台翠雀的初代培养试验材料，采用培养基为MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.8mg/L+2,4-D 0.8mg/L+28g/L蔗糖+8g/L琼脂的培养基进行继代培养，培养条件为：温度22℃，湿度65％，光照13小时/天，光照强度1500Lx，进行快速增殖26天。
3、烟台翠雀的生根培养：将烟台翠雀的继代培养材料切分为单芽，采用培养基为1/2MS+IBA 0.5mg/L+28g/L蔗糖+8g/L琼脂的培养基进行生根培养。生根培养分为两个阶段，暗培养阶段：暗培养12天，温度26℃，湿度65％，光培养阶段：温度26℃，湿度65％，光照20小时/天，培养10天，光照强度2200Lx。
4、烟台翠雀生根苗的炼苗和大田移栽：生根培养的烟台翠雀组培苗根长达到2～3cm时，移至温室大棚闭瓶炼苗5天，开瓶炼苗5天，然后取出瓶内生根组培苗，洗去培养基，用0.2％多菌灵进行根部消毒处理，移栽入穴盘中(图3)，穴盘填充基质为泥炭：珍珠岩(重量比3：1)混合物，待根系发育完全后移栽到大田。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：种子消毒，切取种胚进行初代培养，扩繁继代培养，生根培养，生根苗的炼苗和移栽；
初代培养所用培养基和扩繁继代培养所用继代培养基均为MS+6-BA 1.5～3mg/L+NAA0.5～1mg/L+2,4-D 0.5～1mg/L+25～30g/L蔗糖+6～8g/L琼脂；
生根培养所用生根培养基为1/2MS+IBA 0.1～1.2mg/L+25～30g/L蔗糖+6～8g/L琼脂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，初代培养所用培养基和扩繁继代培养所用继代培养基均为MS+6-BA 3mg/L+NAA 1mg/L+2,4-D 1mg/L+25～30g/L蔗糖+6～8g/L琼脂；生根培养所用生根培养基为1/2MS+IBA 0.5～1mg/L+25～30g/L蔗糖+6～8g/L琼脂。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行生根苗的炼苗时所用基质为泥炭和珍珠岩按重量比2～3：1的混合物。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，种子消毒具体方法如下：挑选烟台翠雀发育良好的种子，种子用自来水冲洗60～120min，然后置于70％～75％酒精中消毒3～5s，无菌水冲洗3～5次，饱和漂白粉消毒10～15min，无菌水冲洗3～5次，即可。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，初代培养具体方法如下：消毒后将种胚横切接入初代培养基，进行初代培养28～32天；培养条件为：温度21-25℃，湿度55-75％，光照12～14小时/天，光照强度1500Lx。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，扩繁继代培养具体方法如下：经初代培养所得外植体材料转入继代培养基，进行快速增殖21～28天；培养条件为：温度21-25℃，湿度55-75％，光照12～14小时/天，光照强度1500Lx。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，生根培养具体方法如下：经扩繁继代培养所得外植体材料转入生根培养基，进行生根培养；生根培养分为两个阶段，暗培养阶段：6～12天，温度18-26℃，湿度55-75％，光培养阶段：6～10天，温度18-26℃，湿度55-75％，光照16～20小时/天，光照强度1800-2200Lx。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，生根苗的炼苗和移栽具体方法如下：生根培养的烟台翠雀组培苗根长达到2～3cm时，移至温室大棚闭瓶炼苗3～7天，开瓶炼苗3～7天，然后取出瓶内生根组培苗，洗去培养基，进行根部消毒处理，移栽入穴盘中，穴盘填充基质为泥炭和珍珠岩的混合物，待根系发育完全后移栽到大田。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，用0.2％多菌灵对组培苗根部进行消毒处理。
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