CN109563070A - 作为napi-iib抑制剂的稠合噻吩衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式(A)的化合物：

Description

作为NAPI-IIB抑制剂的稠合噻吩衍生物
本发明提供了治疗与慢性肾病(CKD)相关的磷酸盐过量或高磷酸盐血症、患有末期肾病(ESRD)的透析患者和有关心血管疾病的化合物。
在患有肾脏功能受损例如慢性肾病的患者和患有末期肾病的透析患者中，体内磷蓄积，导致血液中磷浓度升高和磷酸盐过量。
在一些患者中，该磷酸盐负担达到了被称为高磷酸盐血症的状态。CKD和ESRD中升高的磷酸盐负担进而引起甲状旁腺素分泌过多，即继发性甲状旁腺功能亢进，并导致骨损伤。高磷酸盐血症已经与冠状动脉和主动脉的钙化以及心血管和各种原因导致的死亡相关联。血管钙化被认为会引起导致死亡的心脏功能障碍。磷酸盐调节功能障碍具有严重的临床后果，研究显示，甚至在正常或接近正常范围内血清磷酸盐水平的小幅升高都可能与发病率和死亡率升高有关。III期和IV期CKD患者中的磷酸盐过量和身体对磷酸盐过量的补偿性应答与相关的心血管发病率和死亡率有关。III期和IV期CKD患者中磷酸盐吸收降低可减轻或预防这些响应，保持心血管健康。在CKD早期控制磷酸盐负荷可以减少或预防受累患者的发病率和死亡率(C.S.Ritter和E.Slatopolsky,Phosphate Toxicity in CKD:TheKiller Among Us,Clin.J.Am.Soc.Nephrol.11:1088–1100,2016)。
已经鉴定了NaPi-II的三种同工型。NaPi-IIa(IIa型，也称为SLC34A1)主要在肾脏中表达，而NaPi-IIb(IIb型，也称为SLC34A2)在小肠中表达，并且可由维生素D调节。NaPi-IIc(IIc型，也称为SLC34A3)也在肾脏中表达。胃肠道中的磷酸盐吸收大部分由NaPi-IIb进行，而血液中的磷酸盐被肾小球过滤，且主要由肾小管中的NaPi-IIa和NaPi-IIc以必需的量重吸收(Miyamoto等人,Sodium-Dependent Phosphate Cotransporters:Lessons fromGene Knockout and Mutation Studies,J.Pharm.Science,100(9):3719-30,2011)。
尽管磷酸盐过量和/或高磷酸盐血症的治疗取得了进展，但是对治疗这些病症的安全有效的疗法仍然存在显著未满足的需求。目前的治疗应用磷酸盐吸附剂抑制胃肠道中磷酸盐的吸收。这些包括例如非金属聚合物吸附剂例如碳酸司维拉姆和盐酸司维拉姆、钙盐制剂例如沉淀碳酸钙、和金属吸附剂例如碳酸镧。然而，这些药物各自都被报道具有副作用，例如便秘、腹泻、高钙血症和金属蓄积。另外，用吸附剂治疗需要每天摄入几克数量级的吸附剂，治疗的不顺从性是一个常见的问题。因此，对具有改善的安全性、功效和方便性的磷酸盐过量和/或高磷酸盐血症的治疗仍存在未满足的需求。
抑制NaPi-IIb可以抑制胃肠道中磷酸盐的吸收，从而导致血液中磷酸盐浓度降低，这可作为治疗高磷酸盐血症的一种方法(Sabbagh等人，Intestinal PhosphateTransport,Adv.Chronic Kidney Dis.,18(2):85–90,2011)。与目前的磷酸盐吸附剂相比，通过NaPi-IIb抑制来抑制磷酸盐吸收采用了一种不同的作用机制，可以为磷酸盐过量和/或高磷酸盐血症的预防和/或治疗提供临床上有用的优点。此外，NaPi-IIb转运蛋白抑制剂可以通过减少饮食磷酸盐的吸收为继发性甲状旁腺功能亢进、慢性肾病和/或与慢性肾病相关的心血管疾病提供另外的益处。
本发明的化合物是NaPi-IIb转运蛋白的抑制剂，证实了有效抑制NaPi-IIb。因此，本发明的化合物被认为可用于治疗其中NaPi-IIb介导的磷酸盐吸收起作用的病症，例如慢性肾病和高磷酸盐血症。
美国申请公开文本US 2013/0053369公开了作为NaPi-IIb抑制剂的一些四氢苯并噻吩化合物，描述了可用于治疗包括高磷酸盐血症在内的大量疾病的化合物。
对于磷酸盐过量、高磷酸盐血症、慢性肾病和/或与慢性肾病相关的心血管疾病的安全方便并且不存在吸附剂和本领域已知的其它药物所具有的缺点的治疗的需求仍然是治疗患者肾病的关注点。本发明提供了可用于治疗磷酸盐过量、高磷酸盐血症、慢性肾病和/或与慢性肾病相关的心血管疾病的供替代选择的化合物。另外，所述化合物解决了对治疗与NaPi-IIb活性相关的病症的需求，具有改善的功效和/或有利的副作用和耐受性特性。
本发明提供了式II的化合物：
其中Y是稠合的环己烷环或稠合的苯基环，
其中A是其中交叉线表示与式II的母核的连接点的键，虚线表示与R2的连接点的键，
其中R2选自-CH3、-(CH2)3OH、-(CH2)3OCH3、-(CH2)3CO2H、-COOCH3、-COCH3、-CO(CH2)3CH3、-COCH(CH3)2、-CO(CH2)2CO2H、-COCH2NH2、-COCH2N(CH3)2、-SO2N[(CH2)2OCH3]2、-SO2NHCH3、-SO2(CH2)2OCH3、-CONH(CH2)4OH、-CONH(CH2)4OCH3、-CONHCH3、-CONH(CH2)2CO2H、-CONH(CH2)2OCH3、-CON(CH2CH2OCH3)2、-CSNHCH3、 其中虚线表示连接点，
其中R’是-CO2H或-CONH2，
或其药学上可接受的盐。
本发明进一步提供了上文所述的式II的化合物，其中Y是稠合的环己烷环，A是R’是-CO2H，或其药学上可接受的盐。
本发明进一步提供了上文所述的式II的化合物，其中Y是稠合的环己烷环，A是R’是-CO2H，或其药学上可接受的盐。
此外，本发明提供了式I的化合物：
其中R选自-(CH2)3OH、-(CH2)3OCH3、-(CH2)3CO2H、-CONH(CH2)4OH、-COCH2NH2、-SO2N[(CH2)2OCH3]2、-CONH(CH2)4OCH3和-CO(CH2)2CO2H，
其中R’是-CO2H或-CONH2，
或其药学上可接受的盐。
本发明进一步提供了上文所述的式I的化合物，其中R’是-CO2H，或其药学上可接受的盐。
下面的具体实施方案是式I和/或II的化合物和/或盐。
本发明提供了一种化合物，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸，或其药学上可接受的盐。
本发明提供了一种化合物，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(3-羟基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸，或其药学上可接受的盐。
本发明提供了一种化合物，其是4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[双(2-甲氧基乙基)氨磺酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸，或其药学上可接受的盐。
本发明提供了一种化合物，其是4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(3-羧基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸，或其药学上可接受的盐。
本发明提供了一种化合物，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(3-甲氧基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸，或其药学上可接受的盐。
本发明提供了一种化合物，其是4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-氨基乙酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸，或其药学上可接受的盐。
本发明提供了一种化合物，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-甲氧基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸，或其药学上可接受的盐。
本发明提供了一种化合物，其是4-[4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-氨基甲酰基苯基)乙基]-3,5-二氟-苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸，或其药学上可接受的盐。
本发明提供了一种盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠。
本发明提供了4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠的固体分散体制剂，其中所述制剂包含30％4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠和70％聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯。
本发明进一步提供了选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[(2,2,4-三甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酸盐；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨基甲酰基)哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨基甲硫酰基(carbamothioyl))哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-羧基乙基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(甲基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酸盐；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[(4-甲氧基羰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；
4-(2,6-二氟-4-(2-(3-(((1R,5S)-8-戊酰基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯甲酰氨基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰氨基(carboxamido))苯乙基)苯甲酸；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[4-[[2-[[3-[(8-乙酰基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲氧基乙基磺酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲氧基乙基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(4-甲氧基丁基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[双(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲基丙酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[2-(二甲基氨基)乙酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-[1-(甲氧基甲基)环丙烷羰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；和
4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-乙酰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸。
此外，本发明提供了一种药物组合物，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。此外，本发明提供了一种药物组合物，其包含式II的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
此外，本发明提供了式I或II的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗。本发明提供了一种盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠，用于治疗。
此外，本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗高磷酸盐血症。此外，本发明提供了式II的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗高磷酸盐血症。此外，本发明提供式I或II的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗慢性肾病。本发明提供了一种盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠，用于治疗高磷酸盐血症。本发明提供了4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠的固体分散体制剂，其中所述制剂包含30％4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠和70％聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯，用于治疗高磷酸盐血症。
本发明提供了一种盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠，用于治疗慢性肾病。本发明提供了4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠的固体分散体制剂，其中所述制剂包含30％4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠和70％聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯，用于治疗慢性肾病。
本发明提供了一种化合物或盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸或其药学上可接受的盐，用于治疗与慢性肾病相关的心血管疾病。本发明提供了一种盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠，用于治疗与慢性肾病相关的心血管疾病。本发明提供了一种治疗与慢性肾病相关的心血管疾病的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的化合物或盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸或其药学上可接受的盐。
此外，本发明提供了式I或II的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗高磷酸盐血症和/或慢性肾病的药剂中的用途。
此外，本发明提供了一种治疗高磷酸盐血症的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。此外，本发明提供了一种治疗高磷酸盐血症的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的式II的化合物或其药学上可接受的盐。
此外，本发明提供了一种治疗高磷酸盐血症的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸或其药学上可接受的盐。此外，本发明提供了一种治疗高磷酸盐血症的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠。此外，本发明提供了一种治疗高磷酸盐血症的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠的固体分散体制剂，其中所述制剂包含30％4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠和70％聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯。
术语“药学上可接受的盐”包括与式I或II的化合物的碱性部分结合存在的酸加成盐，或与式I或II的化合物的酸性部分结合存在的碱加成盐。这类盐包括药学上可接受的盐，例如在Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use,P.H.Stahl和C.G.Wermuth(编辑),Wiley-VCH,New York,2002中列出的那些，其是本领域技术人员已知的。
除了药学上可接受的盐之外，本发明还涉及其它盐。它们可以在化合物的纯化中或在其它药学上可接受的盐的制备中用作中间体，或者可用于鉴别、表征或纯化本发明的化合物。
本文所用的术语“患者”是指温血动物例如哺乳动物，并且包括人。人是优选的患者。
与慢性肾病相关的心血管疾病可以包括心脏性猝死、心律失常、心绞痛、心肌梗死和心力衰竭(Kestenbaum等人,Serum Phosphate Levels and Mortality Risk AmongPeople with Chronic Kidney Disease,J.Am.Soc.Nephrol.16:520-528,2005)。
本领域技术人员可以通过给目前显示症状的患者施用有效量的式I的化合物来治疗高磷酸盐血症和/或慢性肾病。因此，术语“治疗”用于指其中可存在减慢、阻断、阻止、控制或终止现有病症和/或其症状的进展、但不一定显示全部消除所有症状的所有过程。
本领域技术人员可以通过给具有高磷酸盐血症和/或慢性肾病的公认风险因素的患者施用有效量的式I的化合物来治疗高磷酸盐血症和/或慢性肾病。例如，考虑到其它因素例如高血压和/或糖尿病，具有处于正常范围的高端的磷酸盐水平的患者可能被认为是具有高磷酸盐血症和/或慢性肾病以及与慢性肾病相关的心血管疾病的公认风险。
本文所用的术语式I或II的化合物的“有效量”是指有效治疗疾病例如本文所述的高磷酸盐血症和/或慢性肾病的量。本领域技术人员能通过使用常规技术以及通过观察在被认为对于目前患者能提供信息的情况下获得的结果来确定有效量。在确定式I或II的化合物的有效量或剂量中，考虑许多因素，包括施用哪种式I或II的化合物；是否存在共同施用药物；哺乳动物的种类；其大小、年龄和总体健康状况；疾病例如高磷酸盐血症和/或慢性肾病的累及程度或严重性；个体患者的响应；施用方式；施用的制剂的生物利用度特征；所选择的剂量方案；以及其它相应的情况。
本发明的化合物可以单独施用或者以与药学上可接受的载体或赋形剂组合的药物组合物的形式施用，所述药学上可接受的载体或赋形剂的比例和性质由所选择的化合物的溶解度和化学性质例如稳定性、所选择的施用途径和标准药学实践决定。本发明的化合物虽然本身有效，但是也可以以其药学上可接受的盐的形式配制和施用。
制备制剂领域的技术人员可以根据所选择化合物的具体特性、被治疗的疾病或病症、所述疾病或病症的阶段以及其它相关情况容易地选择合适的施用形式和方式(参见，例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,L.V.Allen编辑,第22版,Pharmaceutical Press,2012)。
一些缩写定义如下：“AcOH”是指乙酸；“ACN”是指乙腈；“BOP”是指六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)-磷鎓；“DCM”是指二氯甲烷；“DIPEA”是指N,N-二异丙基乙胺；“DMF”是指N,N-二甲基甲酰胺；“DMSO”是指二甲亚砜；“EDCI”是指3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基丙烷-1-胺；“EtOAc”是指乙酸乙酯；“EtOH”是指乙醇；“FBS”是指胎牛血清；“HATU”是指六氟磷酸1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物；“HEPES”是指2-[4-(2-羟基乙基)-1-基]乙磺酸；“HOBT”是指羟基苯并三唑；‘hr”是指小时；“IC50”是指产生药物可能的最大抑制反应的50％的药物浓度；“LC-ES/MS”是指液相色谱电喷雾质谱；“min”是指分钟；“MeOH”是指甲醇；“MTBE”是指甲基叔丁基醚；“33P”是指磷-33；“psi”是指磅/平方英寸；“PyBOP”是指六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷子基磷鎓；“RT”是指室温；“TEA”是指三乙胺；“TFA”是指三氟乙酸；“THF”是指四氢呋喃；“Tris”是指2-氨基-2-羟基甲基-丙烷-1,3-二醇；“U/mL”是指单位/毫升；“PVP-VA”是指聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯。
方案1
方案1描绘了式Ix的化合物的合成路线。概括而言，可以在本领域公知的各种条件下，例如使用胺和合适的非亲核碱例如TEA、DIPEA，或在合适的有机溶剂例如THF、ACN或DMF中，将烷基卤化物化合物II胺化。更具体地，可以将约2当量3,3-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯在微波反应容器中于110℃在约1当量烷基卤化物II和约12当量DIPEA的存在下在ACN中加热，得到烷基胺III。可以在本领域公知的酸性条件下除去化合物III的Boc保护基。更具体地，可以将化合物II在DCM中用过量的在1,4-二噁烷中的HCl处理，得到盐酸盐IV。
随后在本领域公知的各种条件下进行化合物IV的烷基化，例如在烷基化条件下用烷基卤化物处理，例如，在非亲核性碱例如TEA、DIPEA、吡啶或1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯存在下、在合适的有机溶剂例如DCM、ACN或DMF中用适当取代的烷基卤化物和胺IV处理。另外，可以在还原性胺化条件下进行化合物IV的烷基化，例如在还原剂例如硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼氢化钠和催化量的有机酸例如AcOH或TFA的存在下，在合适的有机溶剂例如MeOH、EtOH、ACN、DCM、THF或DMF中，用适当取代的醛进行化合物IV的烷基化。更具体地，可以将化合物IV在约2当量三乙酰氧基硼氢化物和催化性AcOH的存在下在DCM中用约2当量DIPEA处理，然后用3-甲氧基丙醛(proprionaldehyde)或4-氧代丁酸甲酯处理。
化合物IV的酰基化或磺酰化可以在本领域公知的条件下实现，例如在合适的有机溶剂例如DCM、THF、ACN或DMF中，在使用过量的合适的非亲核性碱例如TEA或DIPEA的碱性条件下，使用酰卤或磺酰卤实现。更具体地，可以将化合物IV在约1:10MeOH:ACN的混合物中用约4当量DIPEA和约2当量N-(4-羟基丁基)-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐处理，并且在微波反应器中于100℃加热，得到化合物Vc。也可以在本领域公知的标准酰胺偶联条件下进行胺IV的酰基化，例如使用EDCI和HOBT、HATU、BOP或PyBOP、在非亲核性碱例如TEA或DIPEA的存在下、在合适的有机溶剂例如MeOH、ACN、THF、DCM或DMF或其组合中进行胺IV的酰基化。更具体地，可以将约1.2当量化合物IV用约0.9当量1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯处理，然后用约1当量N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸、0.5当量HOBT好1.2当量在DMF中的EDCI处理，得到化合物Vd。可以在约1.5当量双(2-甲氧基乙基)氨磺酰氯和约5当量TEA的存在下在DMF中、在加热下实现化合物IV的磺酰化，得到化合物Ve。
此外，通过在碱性条件下将胺亲核加成到异氰酸酯上进行胺的酰基化以获得脲也是本领域公知的。特别地，可以将约1当量化合物IV在DCM中在约4当量TEA的存在下用约2当量1-异氰酰基-4-甲氧基丁烷处理，得到化合物Vf。
可以通过在本领域公知的酸性或碱性条件下皂化化合物V的甲酯部分来制备式Ix的化合物。更具体地，可以将化合物Va-Vf在THF、MeOH、H2O或其合适的混合物中用约1-5当量LiOH处理，得到式Ia-f的化合物。这些条件可以同时皂化化合物Vb中的另外的酯部分。可以通过公知的方法除去另外的保护基，例如，在完成酯皂化之后，用过量的4M在二噁烷中的HCl处理化合物Ve。此外，可以在上文所述的还原性胺化条件下用化合物IV处理另外的杂原子-保护的烷基醛，特别是3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-1-丙醛，原位脱保护，最后如上所述进行皂化。更具体地，可以将3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-1-丙醛和化合物IV在还原性胺化条件下使用上文所述的三乙酰氧基硼氢化钠和催化性AcOH处理，然后使用过量的在1,4-二噁烷中的HCl原位除去硅烷基。可以如上所述用LiOH进行最后的皂化，得到式Ig的化合物。
方案2
在方案2中描绘了式Ic的化合物的供替代选择的合成方法。可以将约1当量4-[2-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)乙基]苯甲酸甲酯XII和1.1当量3-(叔丁氧基羰基氨基)-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-甲酸(Aurum Pharmatech)在DCM中的混合物在约5当量DIPEA存在下用约1.25当量双-(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯处理，得到产物化合物VII，其可以在本领域公知的标准条件下脱保护，特别地使用过量的4N在1,4-二噁烷中的HCl并且使用DCM作为溶剂来进行脱保护，得到胺化合物VIII。胺VIII可以如上所述经受酰基化条件，特别地在吡啶存在下用DCM作为溶剂用约1.1当量3-(氯甲基)苯甲酰氯作为酰基化条件，得到化合物IX。可以在本领域公知的一些列胺化条件下将烷基氯IX进行胺化，更特别地，如上所述在ACN/MeOH混合物中、在约4当量DIPEA的存在下，用约2当量N-(4-羟基丁基)-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐进行胺化，得到化合物X，随后如上所述进行皂化，可以得到式Ic的化合物。
方案3
在方案3中描绘了苯胺化合物XII的合成。概括而言，芳基卤化物和取代的乙炔之间的钯-铜介导的Sonogashira交叉偶联是本领域公知的。特别地，可以将约1当量3,5-二氟-4-碘苯胺(Asta Tech)和约1当量4-乙炔基苯甲酸甲酯(Alfa Aesar)在约0.4当量二氯化双(三苯基膦)-钯(II)和0.07当量CuI的存在下与约10当量在THF中的DIPEA一起加热，得到二芳基乙炔化合物XI，其可以在本领域公知的标准条件下还原，特别地在THF/H2O的溶剂混合物中在钯黑的存在下在约60psi下催化氢化，得到必需的苯胺化合物XII。
方案4
方案4阐述了胺XV的合成。在3当量DIPEA的存在下，用DMC作为反应溶剂，将1当量2,2-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯亲核加成到约1.1当量4-异氰酰基丁酸甲酯上，可以得到脲化合物XIII。可以使用文献中公知的一系列条件完成酯部分的还原，所述条件包括BH3、硼氢化锂和氢化二异丁基铝。更具体地，可以用约3当量硼氢化锂在THF中处理1当量酯XII，得到还原产物XIV；然后如上所述除去BOC保护基，得到所需的化合物XV。
方案5
方案5描绘了式Iy的化合物的合成。可以在本领域公知的条件下实现化合物XVI中酯部分的水解，例如在水性、有机或双相溶剂混合物中，用碱性碱例如NaOH、KOH或LiOH水解。更具体地，可以在水性THF的混合物中，用5当量LiOH处理酯XVI；皂化酸的温和酸化可以得到化合物XVII。然后可以在温和条件下完成经由酰氯的直接酰胺化(E.Valeur和M.Bradley,Chem.Soc.Rev.,2009,38,606–631)。更具体地，可以在室温下用1.2-2.5当量双(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯原位产生酸化合物XVII的酰氯，然后用过量的氨处理，得到所需的伯酰胺XVIII。如上所述除去BOC保护基，得到如上所述的所需的化合物XIX。可以在本领域公知的条件下实现未遮蔽的哌嗪氮的酰基化，特别地，在酰化剂例如琥珀酸酐的存在下用5当量合适的非亲核性碱例如DIPEA处理化合物XIX，得到式Iy的化合物。本领域技术人员可以通过类似于本文描述的方法使用适合的起始材料并根据需要进行调整来制备其它式I和/或II的化合物。
在方案6中描绘了化合物X的合成。进行BOPCl介导的酰胺偶联，得到化合物A。如上所述除去BOC保护基，得到所需的化合物B。可以在本领域公知的条件下实现氨基的酰基化，特别地，在吡啶的存在下用3-(氯甲基)-苯甲酰氯处理B，得到化合物C。用取代的哌嗪亲核取代苄基氯(benzylic chloride)，得到苯甲酸甲酯D。然后如上所述皂化，得到化合物X。
制备例和实施例
下面的制备例和实施例进一步阐述了本发明，代表本发明化合物的典型合成。试剂和起始材料是本领域技术人员容易获得的或者可以容易地合成的。应当理解，制备例和实施例作为举例说明列出而非限制，可以由本领域技术人员进行各种调整。
LC-ES/MS在HP1100液相色谱系统上进行。在与HP1100HPLC连接的Mass Selective Detector四极质谱仪上进行电喷雾质谱测量(以正和/或负模式获得)。LC-MS条件(低pH)：柱：NX C18 2.1×50mm 3.5μm；梯度∶在3分钟中5-100％B，然后100％B 0.75分钟，或在1.5分钟中5-95％B，然后95％B 0.25分钟；柱温：50℃+/-10℃；流速∶1.2ml/min；溶剂A∶含有0.1％HCOOH的去离子水；溶剂B∶含有0.1％甲酸的ACN；波长214nm。替代的LC-MS条件(高pH)∶柱：MS C18柱2.1×50mm，3.5μm；梯度∶5％溶剂A 0.25分钟，在3分钟中梯度从5％至100％溶剂B和100％溶剂B0.5分钟或者在3分钟中从10％到100％溶剂B和100％溶剂B 0.75分钟或者在1.5分钟中5-95％B，然后95％B 0.25分钟；柱温：50℃+/-10℃；流速∶1.2mL/min；溶剂A：10mM NH4HCO3pH9；溶剂B∶ACN；波长：214nm。
在Bruker AVIII HD 400MHz NMR光谱仪或Varian VNMRS 300或400MHz NMR光谱仪上进行NMR光谱，以CDCl3或DMSO-d6溶液形式获得，以ppm报告，使用残留溶剂[CDCl3,7.26ppm；DMSO-d6,2.50ppm]作为参比标准。当报告多重性时，可以使用以下缩写∶s(单峰)，d(双重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，br s(宽单峰)，dd(双二重峰)、dt(双三重峰)。当报告偶合常数(J)时，以赫兹(Hz)报告。
制备例1
4-[2-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)乙炔基]苯甲酸甲酯
将3,5-二氟-4-碘苯胺(14.7g,55.9mmol)、CuI(0.745g,3.91mmol)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(1.59g,2.24mmol)、4-乙炔基苯甲酸甲酯(9.05g,55.9mmol)、TEA(114mL)和THF(44.1mL)的混悬液在60℃下搅拌3小时。将混合物冷却至RT，在减压下蒸干溶剂。加入EtOAc(100mL)和H2O(100mL)，用硅藻土过滤得到的固体。将来自滤液的有机层分离，经MgSO4干燥，在减压下蒸干。将DCM:庚烷的1:1混合物(400mL)加入到得到的残余物中，在RT下搅拌该混合物过夜。通过过滤收集得到的固体，在真空下干燥，得到标题化合物(8.0g，收率45.8％)，为棕色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ3.86(s,3H),6.26-6.37(m,4H),7.59(d,J＝8.2Hz,2H),7.96(d,J＝8.5Hz,2H)。
制备例2
4-[2-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)乙基]苯甲酸甲酯
在N2下，向500mL Parr振荡器中装入Pd黑(0.53g,5.0mmol)。在N2下，加入脱气的MeOH/THF 4:1溶液(25mL)，然后加入脱气的4-[2-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)乙炔基]苯甲酸甲酯(1.17g,3.38mmol)在MeOH/THF 4:1混合物(25mL)中的溶液。将得到的混合物用N2吹扫，用H2加压至60psi。在40℃下加热密封的容器14小时。在N2下将得到的混悬液经由硅藻土垫过滤，在真空中蒸干。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用25-35％己烷/THF梯度洗脱，在溶剂蒸发和真空干燥后，得到标题化合物，为白色固体(404mg，收率40％)。1H NMR(400.13MHz,DMSO-d6)δ,2.71-2.83(m,4H),3.84(s,3H),5.52(s,2H),6.10-6.15(m,2H),7.28(d,J＝8.3Hz,2H),7.85(d,J＝8.2Hz,2H)。LC-ES/MS(m/z)292[M+1]。
制备例3
4-[(4-甲氧基4-氧代-丁基)氨基甲酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向30mL闪烁瓶中装入2,2-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，2.28mmol)和DCM(12mL)。将得到的溶液在冰/水浴中冷却，一次性加入DIPEA(1.20mL,6.85mmol)。历经5分钟滴加4-异氰酰基丁酸甲酯(447mg，2.97mmol)在DCM(3mL)中的溶液。将反应混合物缓慢温热至RT，再搅拌15分钟。将混合物在5％柠檬酸水溶液(100mL)和DCM(20mL)之间分配。分离有机层，用DCM(每次20mL)再萃取水层两次。将合并的有机萃取物用饱和NaHCO3水溶液(30mL)和饱和NaCl水溶液(30mL)顺序洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下蒸发。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用30-50％己烷/丙酮梯度洗脱，在除去溶剂和真空干燥后，得到标题化合物，为无色粘性油状物(848mg，收率95％)。1H NMR(399.8MHz,CDCl3)δ1.34(s,6H),1.45(s,9H),1.83(t,J＝6.9Hz,2H),2.37(t,J＝7.1Hz,2H),3.25-3.30(m,2H),3.37(t,J＝5.7Hz,2H),3.47(s,2H),3.65(s,3H),3.71(t,J＝5.7Hz,2H),4.65-4.68(m,1H)。LC-ES/MS(m/z)358[M+1]。
制备例4
4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在RT下，将2M的LiBH4在THF中的溶液(3.02mL,6.04mmol)滴加至含有4-[(4-甲氧基-4-氧代-丁基)氨基甲酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(783mg,2.01mmol)和THF(2mL)的100mL圆底烧瓶中。将得到的混合物在RT下搅拌12小时。用0.5mL MeOH淬灭反应混合物，在RT下搅拌20分钟，在5％NaHCO3水溶液(150mL)和DCM(50mL)之间分配。分离有机层，用DCM(每次50mL)再萃取水层两次。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下蒸干，得到标题化合物，为白色固体(634mg，收率96％)。1H NMR(399.8MHz,CDCl3)δ1.36(s,6H),1.46(s,9H),1.58-1.63(m,4H),3.31-3.28(m,2H),3.49(s,2H),3.66-3.69(m,2H),3.71-3.74(m,2H),3.37-3.39(m,2H)。LC-ES/MS(m/z)330[M+1]。
制备例5
N-(4-羟基丁基)-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐
向30mL闪烁瓶中装入4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(631mg,1.92mmol)在DCM(20mL)中的溶液。历经5分钟滴加4N的HCl在二噁烷中的溶液(2.4mL,9.58mmol)，将得到的溶液在RT下搅拌2小时。在真空下除去挥发性物质，真空干燥残余物，得到标题化合物，为吸湿性白色油性固体(收率100％，定量收率)，其适合不经进一步纯化即用于下一步。LC-ES/MS(m/z)230[M+1]。
制备例6
4-[2-[4-[[2-(叔丁氧基羰基氨基)-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向100mL圆底烧瓶中装入4-[2-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)乙基]苯甲酸甲酯(2.11g,7.24mmol)、3-(叔丁氧基羰基氨基)-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-甲酸(2.37g,7.97mmol)和DCM(60mL)。将得到的混悬液在冰/水浴中冷却，滴加DIPEA(5.05mL,29.0mmol)，得到黄-棕色混浊的溶液。在0℃下历经30分钟以小份加入固体双-(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯(2.30g，9.05mmol)。然后将反应混合物温热至室温，搅拌24小时。加入另外的固体3-(叔丁氧基羰基氨基)-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-甲酸(0.6g,2.0mmol)，然后历经5分钟以小份加入另外的DIPEA(1.26mL,7.25mmol)和固体双-(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯(0.58g，2.26mmol)。将得到的混浊的棕色反应混合物在RT下搅拌12小时。将反应混合物在5％柠檬酸水溶液(150mL)和DCM(50mL)之间分配，分离有机层，用DCM(每次50mL)再萃取水层两次。将合并的有机萃取物用10％NaHCO3水溶液(50mL)、饱和NaCl水溶液(50mL)顺序洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的棕色油性固体，用15-40％己烷/(10％在DCM中的MTBE)梯度洗脱。将收集的含有所需产物的级分合并，在减压下浓缩，将得到的残余物与MTBE(15mL)一起研磨。通过过滤收集得到的固体，在真空下干燥，得到标题化合物(2.75g，收率66％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.44(s,9H),1.69-1.77(m,4H),2.53-2.65(m,4H),2.91(br s,4H),3.84(s,3H),7.30-7.34(m,4H),7.86(d,J＝8.3Hz,2H),9.80(br s,1H),9.94(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)569[M-1]。
制备例7
4-[2-[4-[(2-氨基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基)氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯盐酸盐
向30mL闪烁瓶中装入4-[2-[4-[[2-(叔丁氧基羰基氨基)-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(351mg,0.61mmol)和DCM(6mL)。通过穿过温和的N2气流使得到的浅黄色溶液脱气。历经5分钟滴加4N HCl在二噁烷中的溶液(155mL,6.1mmol)，将得到的溶液在RT下搅拌12小时。真空浓缩反应混合物，将得到的浅黄色残余物与最少量的DCM一起研磨。通过过滤收集得到的固体，在真空下干燥，得到标题化合物，为灰白色粉末(337mg，收率99％)。1H NMR(399.8MHz,DMSO-d6)δ1.73-1.75(m,4H),2.40-2.44(m,2H),2.56-2.59(m,2H),2.85(s,4H),3.80(s,3H),7.26-7.28(m,4H),7.81-7.83(m,2H),9.21(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)571[M+1]。
制备例8
4-[2-[4-[[2-[[3-(氯甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
将在250mL圆底烧瓶中的4-[2-[4-[(2-氨基-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基)氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯盐酸盐(2.43g,4.55mmol)在DCM(80mL)中的混悬液在冰/水浴中冷却至0℃。在搅拌下历经5分钟滴加吡啶(0.92mL,11mmol)。将得到的浅微黄色溶液在0℃下再搅拌5分钟，历经5分钟滴加3-(氯甲基)苯甲酰氯(0.71mL,5.0mmol)在DCM(20mL)中的溶液。将反映混合物在0℃下再搅拌30分钟。将反应混合物用150mL 10％柠檬酸水溶液稀释，在室温下搅拌1小时。分离有机层，用DCM(每次50mL)再萃取水层两次。将合并的有机萃取物用5％NaHCO3水溶液(2×50mL)和饱和NaCl水溶液(50mL)顺序洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤在减压下蒸干。将得到的残余物与EtOH(30mL)一起研磨，通过过滤收集得到的固体，用EtOH(15mL)洗涤，在真空下干燥，得到标题化合物，为黄褐色固体(2.61g，收率92％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ),1.73-1.81(m,4H),2.68(m,4H),2.92(s,4H),3.84(s,3H),4.83(s,2H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H)7.38-7.344(m,2H),7.56(t,J＝7.7Hz,1H),7.69(d,J＝7.8Hz,1H),7.82(d,J＝7.9Hz,1H),7.87(d,J＝8.2Hz,2H),7.96(br s,1H),10.10(s,1H),11.34(s,1H)。LC-ES/MS(m/z-)621[M-1]。
制备例9
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向2mL微波小瓶中装入在ACN(1.5mL)和MeOH(50μL)的混合物中的4-[2-[4-[[2-[[3-(氯甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(50mg,0.08mmol)、N-(4-羟基丁基)-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐(42.7mg,0.16mmol)和DIPEA(0.056mL,0.32mmol)。在Initiator微波合成器中于110℃加热得到的黄色混悬液4小时。真空浓缩反应混合物，将残余物在5％NaHCO3水溶液(75mL)和DCM(25mL)之间分配。分离有机层，用DCM(每次25mL)再萃取水层两次，用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤合并的有机萃取物，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下蒸干。通过在C-18二氧化硅上进行反相色谱处理纯化得到的残余物，用0-100％的5％HCOOH在H2O/ACN中的混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为淡黄色泡沫状固体(30.2mg，收率46％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.05(s,6H),1.37-1.44(m,4H),1.80-1.85(m,4H),2.25-2.27(m,2H),2.65-2.677(m,4H),2.91(br s,4H),2.96-3.05(m,2H),3.12(s,2H),3.17-3.26(m,2H),3.35-3.41(m,2H),3.51(s,2H),3.84(s,3H),4.36(t,J＝5.1Hz,1H),6.35-6.39(m,1H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),7.51-7.56(m,4H),7.70-7.80(m,1H),7.87(m,3H),10.01(br s,1H),11.45(br s,1H)。LC-ES/MS(m/z)816[M+1]。
制备例10
4-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向20mL微波反应容器中装入在15mL ACN中的4-[2-[4-[[2-[[3-(氯甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(1.85g,2.97mmol)、3,3-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.91g,4.16mmol)和DIPEA(2.07mL,11.9mmol)。在Initiator微波合成器中于110℃加热得到的黄色混悬液4小时。真空浓缩反应混合物，将残余物在5％NaHCO3水溶液(150mL)和DCM(50mL)之间分配。分离有机层，用DCM(2×25mL)萃取水层。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩至干。通过在二氧化硅上进行反相色谱处理纯化得到的残余物，用0-100％的在己烷中的9:1DCM/丙酮混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为黄色固体(1.63g，收率69％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.04(s,6H),1.38(s,9H),1.81-1.74(m,4H),2.28(t,J＝5.0Hz,2H),2.70(br s,4H),2.91(s,4H),3.13(s,2H),3.26(s,2H),3.52(s,2H),3.84(s,3H),7.31(d,J＝8.3Hz,2H),7.44-7.39(m,2H),7.55-7.46(m,2H),7.75(d,J＝7.6Hz,1H),7.87(m,3H),9.99(s,1H),11.49(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)801[M+1]。
制备例11
4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐
将4-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.13g,1.41mmol)在DCM(14.1mL)中的溶液在RT下搅拌，经由注射器加入4N在二噁烷中的HCl(3.5mL,14.1mmol)。当加入完成后，将反应在RT下搅拌过夜，在减压下浓缩至干。将固体与DCM/Et2O一起研磨，经由真空过滤收集得到的沉淀物，在真空烘箱中于50℃干燥滤饼，得到标题化合物，为白色固体(0.93g，1.20mmol，收率85％)。LC-ES/MS(m/z)701[M+1]。
制备例12
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[双(2-甲氧基乙基)氨磺酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(190.8mg,0.24mmol)和TEA(0.165mL,1.18mmol)在4mL THF中的溶液中滴加在4mL THF中的双(2-甲氧基乙基)氨磺酰氯(87mg,0.36mmol)。将得到的混合物加热至50℃达18小时。在冷却至RT后，将反应混合物用5％NaHCO3水溶液(75mL)和DCM(25mL)的混合物稀释。分离各层，用另外的DCM(2×25mL)洗涤水层。合并有机萃取物，用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用10-30％丙酮在己烷中的混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到所需产物，为淡黄色固体(150.1mg，收率70.8％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.13(s,6H),1.85-1.70(m,4H),2.43-2.36(m,2H),2.75-2.65(m,4H),3.03-2.86(m,8H),3.24(s,6H),3.36-3.32(m,4H),3.44(t,J＝5.8Hz,4H),3.54(s,2H),3.84(s,3H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),7.52-7.38(m,3H),7.56(d,J＝7.6Hz,1H),7.74(d,J＝7.6Hz,1H),7.91-7.84(m,3H),10.00(s,1H),11.47(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)896[M+1]。
制备例13
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-甲氧基-4-氧代-丁基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(148.4mg,0.1688mmol)、DIPEA(60mL,0.34mmol)和4-氧代丁酸甲酯(40mg,0.34mmol)在4mL DCM中的溶液中加入AcOH(0.01mL)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.073g，0.34mmol)。使得到的反应混合物在RT下搅拌12小时。用5％NaHCO3水溶液(75mL)和DCM(25mL)的混合物稀释反应混合物。分离各层，用另外的DCM(2×25mL)洗涤水层。合并有机萃取物，用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，使用35-40％的9:1EtOH/DCM在己烷中的混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到所需产物，为淡黄色固体(132.1mg，收率91.8％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.09(s,6H),1.70-1.58(m,2H),1.87-1.70(m,4H),2.20-2.09(m,2H),2.36-2.27(m,4H),2.63-2.54(m,2H),2.75-2.64(m,4H),2.92(s,4H),3.30-3.28(m,2H),3.65-3.53(m,5H),3.84(s,3H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),7.58-7.37(m,4H),7.72-7.69(m,1H),7.91-7.83(m,3H),9.99(s,1H),11.45(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)801[M+1]。
制备例14
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(3-甲氧基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(0.108g,0.13mmol)、3-甲氧基丙醛(0.023g,0.25mmol)和DIPEA(0.043mL,0.25mmol)在4mL DCM中的溶液中加入AcOH(0.01mL)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.053g，0.25mmol)。将得到的反应混合物在RT下搅拌12小时。用5％NaHCO3水溶液(75mL)和DCM(25mL)稀释反应混合物。分离各层，用另外的DCM(2×25mL)洗涤水层。合并有机萃取物，用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，使用25-80％在己烷中的丙酮梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到所需产物，为淡黄色固体(26.2mg，收率27.6％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ11.44(m,1H),9.98(m,1H),7.92-7.82(m,3H),7.76-7.70(m,1H),7.57-7.38(m,4H),7.36-7.27(m,2H),3.84(s,4H),3.27-3.16(m,4H),2.97-2.87(m,4H),2.76-2.64(m,4H),2.37-2.28(m,2H),2.25-2.15(m,2H),1.90-1.71(m,4H),1.67-1.54(m,2H),1.09(s,6H)。LC-ES/MS(m/z)773[M+1]。
制备例15
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向圆底烧瓶中加入4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(500mg,1.4mmol)、DMF(25mL)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.19mL,1.27mmol)。将混合物简短搅拌，用HOBT(103mg,0.67mmol)、EDCI(250mg,1.6mmol)和N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(132mg,0.75mmol)处理。将混合物在RT下搅拌18小时。用水(25mL)稀释混合物，将得到的浆液在RT下搅拌3小时。通过过滤收集得到的淡黄色固体，用水洗涤，风干。将得到的粉末溶于DCM中，经无水MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化残余物，用15％在DCM中的EtOAc洗脱20分钟，然后用25％在DCM中的EtOAc洗脱，在溶剂蒸发后得到标题化合物(451mg，收率38％)。1H NMR(400.13MHz,DMSO)δ11.52-11.46(m,1H),9.99(s,1H),7.90-7.86(m,3H),7.76-7.74(m,1H),7.57-7.55(m,1H),7.52-7.47(m,1H),7.44-7.39(m,2H),7.33(d,J＝7.6Hz,2H),6.76-6.71(m,1H),3.84(s,3H),3.81-3.76(m,2H),3.57-3.54(m,2H),3.43-3.38(m,2H),3.32(s,12H,water),3.28-3.22(m,2H),2.91(s,4H),2.70(s,4H),2.51-2.50(m,16H,DMSO),2.39-2.35(m,2H),1.87-1.81(m,4H),1.40-1.35(m,10H),1.29-1.25(m,1H),1.07(d,J＝21.1Hz,6H)。LC-ES/MS(m/z)858[M+1]。
制备例16
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-甲氧基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
在30mL闪烁瓶中，在RT下搅拌4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(120mg,0.155mmol)和TEA(63mg,0.62mmol)在DCM(3mL)中的溶液，同时经由注射器加入1-异氰酰基-4-甲氧基-丁烷(30mg,0.23mmol)在DCM(1mL)中的溶液。使得到的反应混合物在RT下搅拌4小时。在减压下浓缩反应混合物，通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化，使用0-100％EtOAc/己烷梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为黄褐色泡沫状物(102mg，收率79％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.03(s,6H),1.35-1.45(m,4H),1.68-1.82(m,4H),2.21-2.25(m,2H),2.63-2.70(m,4H),2.89(s,4H),2.95-3.02(m,2H),3.095(s,2H),3.18(s,3H)；3.15-3.22(m,2H),3.25-3.30(m,2H),3.48(s,2H),3.815(s,3H),6.334(t,J＝5.5Hz,1H),7.30(d,J＝7.9Hz,2H),7.35-7.42(m,2H),7.42-7.50(m,1H),),7.50-7.55(m,1H),7.71(d,J＝7.6Hz,1H),7.83-7.89(m,3H),9.981(s,1H),11.44(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)830[M+1]。
制备例17
4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-叔丁氧基羰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
向60mL闪烁瓶中装入4-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.92g,4.8mmol)、氢氧化锂(570mg,24mmol)、THF(20mL)、MeOH(10mL)和H2O(10mL)，将得到的混悬液在RT下搅拌12小时。将反应混合物用H2O(40mL)稀释，真空浓缩至～1/2体积。将得到的混合物的pH用10％柠檬酸水溶液调节至～5-6，将得到的无色混悬液在150mL水和50mL4:1氯仿/异丙醇之间分配。分离有机层，用10％柠檬酸水溶液再次将水层的pH调节至pH～5，用另外的4:1氯仿/异丙醇(2×50mL)萃取混合物两次。合并有机层，用饱和NaCl水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩滤液，得到标题化合物(3.7g，收率>99％)，为灰白色固体，其可以不经另外纯化即用于后续步骤。LC-ES/MS(m/z)787[M+1]。
制备例18
4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-氨基甲酰基苯基)乙基]-3,5-二氟-苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向500mL圆底烧瓶中装入4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-叔丁氧基羰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸(3.50g,4.45mmol)和DIPEA(3.1mL,17.8mmol)在DCM(75mL)中的溶液。历经10分钟，向该溶液中分小份加入固体双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(1.4g,5.3mmol)，将得到的混悬液在RT下搅拌10分钟。一次性加入0.5M的NH3在1,4-二噁烷中的溶液(40mL,22.25mmol)，在RT下搅拌得到的混悬液2小时。历经5分钟分小份加入另外的双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(0.7g,2.7mmol)，使得到的混悬液在RT下搅拌12小时。历经5分钟，再次分小份加入另外的双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(0.7g,2.7mmol)，使得到的混悬液在RT下搅拌12小时。将得到的反应混合物在300mL 5％NaHCO3水溶液和50mLDCM之间分配。分离各层，用另外的DCM(2×100mL)萃取水层两次。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩至干。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的黄色泡沫状残余物，用10-12％丙酮/DCM梯度洗脱；然后，将流动相转换为35％MeOH/DCM。合并收集的含有所需产物的级分，在减压下浓缩，将残余物与DCM一起研磨。通过过滤收集得到的固体，在真空下干燥，得到标题化合物。回收研磨的滤液，在真空中蒸干。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用5-10％在DCM中的MeOH梯度洗脱，合并收集的含有所需产物的级分，蒸发，加入到第一次纯化得到的物质中，得到标题化合物，为淡黄色固体(2.43g，收率70％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.05(s,6H),1.39(s,9H),1.68-1.90(m,4H),2.29(m,2H),2.70(m,4H),2.89(m,4H),3.14(s,2H),3.28(s,2H),3.51(s,2H),7.16-7.34(m,3H),7.36-7.58(m,4H),7.68-7.73(m,3H),7.90(m,2H),10.00(s,1H),11.49(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)786[M+1]。
制备例19
N-[4-[2-(4-氨基甲酰基苯基)乙基]-3,5-二氟-苯基]-2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-甲酰胺二盐酸盐
在氮气下，使在250mL圆底烧瓶中的4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-氨基甲酰基苯基)乙基]-3,5-二氟-苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.43g,3.1mmol)在DCM(80mL)和MeOH(8mL)的混合物中的溶液充分脱气，历经10分钟滴加4N HCl在1,4-二噁烷中的溶液(16mL,62mmol)。在RT下搅拌得到的溶液12小时。在真空中除去挥发性物质，得到标题化合物，为黄色吸湿性固体(2.45g，>99％)，其可不经进一步纯化即用于下一步。
制备例20
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[(2,2,4-三甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向5mL微波反应容器中装入4-[2-[4-[[2-[[3-(氯甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(225mg,361mmol)以及1,3,3-三甲基哌嗪(65mg,0.488mmol)和DIPEA(0.25mL,1.4mmol)在3mL ACN中的溶液。将得到的黄色混悬液在Initiator微波合成器中于110℃加热3小时。真空浓缩反应混合物，将残余物在5％NaHCO3水溶液(75mL)和DCM(25mL)之间分配。分离有机层，用DCM(2×25mL)萃取水层。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩至干。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用20-50％的10％7N NH3/MeOH的DCM溶液在MTBE中的混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为淡黄色固体(195mg，收率76％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6):δ1.11(两个s,6H).1.90-1.64(m,4H),2.25-1.94(m,4H),2.40-2.26(m,2H),2.50(在残余dmso共振下，3H),2.79-2.60(br s,4H),2.92(s,4H),3.77-3.76(br,2H),3.84(s,3H),7.32(m,2H),7.60-7.36(m,4H),7.79-7.67(m,1H),7.87(m,3H),9.99(s,1H),11.46(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)715[M+1]。
制备例21
4-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基甲酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向20mL闪烁瓶中装入2,2-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg,2.29mmol)在DCM(12mL)中的溶液，在冰浴中冷却。在冷却的同时，加入DIPEA(1.20mL,6.86mmol)，然后历经5分钟滴加3-异氰酰基丙酸甲酯(404mg,2.97mmol)在DCM(3mL)中的溶液。使得到的混合物升温至室温，在室温下搅拌15分钟。用5％柠檬酸水溶液(100mL)和DCM(25mL)稀释反应混合物，分离各层。用DCM(2×25mL)萃取水层。合并有机萃取物，用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用30-53％在己烷中的丙酮梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为无色粘稠的油状物(726mg，含有～10％残余DCM的物质，收率83％)。1H NMR(399.8MHz,CDCl3):δ1.34(s,6H),1.45(s,9H),2.58-2.48(m,2H),3.37(t,J＝5.7Hz,2H),3.54-3.43(m,4H),3.75-3.62(m,5H),5.08-4.99(m,1H)。LC-ES/MS(m/z)344[M+1]。
制备例22
3-[(3,3-二甲基哌嗪-1-羰基)氨基]丙酸甲酯盐酸盐
在搅拌下向含有4-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基甲酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg,0.65mmol)在DCM(7mL)中的溶液的20mL闪烁瓶中滴加4N在二噁烷中的盐酸(1.63mL,6.54mmol)。将得到的混悬液在室温下搅拌1小时，真空浓缩，在真空下干燥残余物，得到标题化合物，为白色吸湿性固体，将其就这样用于下一步。LC-ES/MS(m/z)244[M+1]。
制备例23
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基甲酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向5mL微波反应容器中装入在3mL ACN和0.5mL MeOH混合物中的4-[2-[4-[[2-[[3-(氯甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(180mg,0.29mmol)、3-[(3,3-二甲基哌嗪-1-羰基)氨基]丙酸甲酯盐酸盐(162mg,0.58mmol)和N,N-DIPEA(0.202mL,1.16mmol)。将得到的黄色混悬液在Initiator微波合成器中于110℃加热3小时。真空浓缩反应混合物，将残余物在5％NaHCO3水溶液(75mL)和DCM(25mL)之间分配。分离有机层；用DCM(2×25mL)萃取水层。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩至干。通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用15-80％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为浅橙色固体(81mg，收率34％)。LC-ES/MS(m/z)830[M+1]。
制备例24
3-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
向20mL微波反应容器中装入4-[2-[4-[[2-[[3-(氯甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(1.80g,2.89mmol)以及3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(760mg,3.47mmol)和DIPEA(1.01mL,5.78mmol)在ACN(12mL)中的溶液。将得到的黄色混悬液在Initiator微波合成器中于110℃加热1小时。真空浓缩反应混合物，将残余物在5％NaHCO3水溶液(150mL)和DCM(50mL)之间分配。分离有机层，用DCM(2×50mL)萃取水层。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩至干。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用15-45％的在己烷中的EtOAc梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为淡黄色固体(2.23g，收率97％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6):δ1.38(s,9H),1.95-1.60(m,8H),2.16(d,J＝10.0Hz,2H),2.57(d,J＝10.0Hz,1H),2.70(br s,4H),2.92(s,4H),3.51(s,2H),3.84(s,3H),4.08-3.96(m,2H),7.35-7.26(m,2H),7.45-7.35(m,2H),7.58-7.45(m,2H),7.79-7.72(m,1H),7.92-7.79(m,3H),10.00(s,1H),11.41(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)799[M+1]。
制备例25
4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐
在N2下，向含有3-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(2.23g,2.79mmol)在DCM(45mL)中溶液的250mL圆底烧瓶中滴加4N在二噁烷中的盐酸(7.0mL,28mmol)，同时进行搅拌。将得到的混悬液在RT下搅拌12小时，真空浓缩，在真空下干燥残余物，得到标题化合物，为淡微黄色固体，将其不经进一步纯化即用于下一步。LC-ES/MS(m/z)699[M+1]。
制备例26
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(甲基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向20mL闪烁瓶中装入4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(1.04g,1.27mmol)、DCM(8mL)和TEA(0.89mL,6.4mmol)。将得到的混悬液在RT下搅拌，直到所有固体溶解。在搅拌下滴加甲基氨基甲酰氯(144mg,1.46mmol)在2mL DCM中的溶液，继续搅拌另外15分钟。用5％NaHCO3水溶液(150mL)和DCM(50mL)稀释反应混合物，分离各层。用DCM(2×50mL)萃取水层。合并有机萃取物，用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用10-20％的5％MeOH在10mM碳酸氢铵的ACN溶液中的混合物梯度洗脱5分钟，用20-80％的5％MeOH在10mM碳酸氢铵的ACN溶液中的混合物梯度洗脱15分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为灰白色固体(53mg，收率68％)。以微黄的绿色固体得到标题化合物，是混合物的少量组分(177mg，收率17％)。将该物质不经进一步纯化即用于下一步。LC-ES/MS(m/z)752[M+1]。
制备例27
4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
将4-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(480mg,0.599mmol)在DCM(5mL)中的溶液在RT下搅拌，经由注射器加入4N在二噁烷中的HCl(4mL,16mmol)。加入完成后，将反应在RT下搅拌2小时，在此期间形成沉淀物。将得到的混合物真空浓缩成淡黄色固体，然后在高真空下在环境温度下进一步干燥16小时，得到464mg中间体盐酸盐，为淡黄色固体。将该固体在饱和碳酸氢钠和乙酸乙酯之间分配。分离各层，将水性部分用另一份乙酸乙酯洗涤。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，倾析，然后真空浓缩，并在55℃下真空干燥16小时，得到标题化合物，为黄-棕色固体(323mg，0.461mmol，收率77％)。LC-ES/MS(m/z)701[M+1]。
制备例28
4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-乙酰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
将4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(226mg,0.322mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在RT下搅拌，用乙酰氯(46μL,0.645mmol)处理。向得到的混合物中缓慢加入饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)。将混合物在室温下快速搅拌1小时，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和二氯甲烷(15mL)稀释。分离各层，用硫酸镁干燥有机层。将混合物过滤，用二氯甲烷洗涤滤饼。在真空中干燥得到的滤液。经由正相闪式色谱纯化粗产物，用3:1乙酸乙酯/己烷在等度条件下洗脱，收集240nM的级分。合并含有产物的级分，真空浓缩，得到标题化合物，为淡黄色固体(169mg，227mmol，收率71％)。LC-ES/MS(m/z)741[M-1]。
制备例29
4-(2,6-二氟-4-(2-(3-(((1R,5S)-8-戊酰基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯甲酰氨基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰氨基)苯乙基)苯甲酸甲酯
经由注射器向4-(4-(2-(3-(((1R,5S)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯甲酰氨基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰氨基)-2,6-二氟苯乙基)苯甲酸甲酯二盐酸盐(200mg,0.24mmol)和TEA(0.145mL,4.0eq.,1.04mmol)在2.60mLDCM中的溶液中加入溶于0.5mL DCM中的戊酰氯(87mg,1.5eq.,0.39mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌6小时。真空浓缩反应混合物，将残余物在水(15mL)和EtOAc(10mL)之间分配。分离有机层，用EtOAc(2×10mL)萃取水层。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩至干，得到所需产物，为淡黄色固体(214mg，收率100％)。LC-ES/MS(m/z)783[M+1]。
制备例30
4-(4-(2-(3-(((1R,5S)-8-(二甲基甘氨酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯甲酰氨基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰氨基)-2,6-二氟苯乙基)苯甲酸甲酯
将4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸酯二盐酸盐(200mg,0.2592mmol)、2-(二甲基氨基)乙酸(40mg,0.39mmol)、三乙胺(4equiv.,1.037mmol)、EDCI(74mg,1.5equiv.,0.39mmol)和1-羟基-7-偶氮苯并三唑(53mg,1.5equiv.,0.39mmol)在DCM(2.6mL)中的溶液在RT下搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，将残余物在水(15mL)和EtOAc(10mL)之间分配。分离有机层，用EtOAc(2×10mL)萃取水层。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩至干。通过柱色谱(0-5％MeOH/DCM)纯化残余物，得到所需产物，为浅黄固体(135mg，收率66％)。LC-ES/MS(m/z)785[M+1]。
制备例31
4-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸甲酯
向4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(200mg,0.26mmol)和TEA(0.146mL,1.03mmol)在3mL DCM中的溶液中滴加在1mLDCM中的氯甲酸甲酯(36mg，0.39mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc稀释，用水分配。用EtOAc萃取产物。合并所有有机层，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用0-30％的EtOAc在己烷中的混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后得到所需产物，为黄褐色泡沫状物(157mg，收率80％)。LC-ES/MS(m/z)757[M-1]。
制备例32
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(201mg,0.26mmol)和TEA(0.146mL,1.03mmol)在3mL DCM中的溶液中滴加在1mLDCM中的N-甲基氨磺酰氯(50mg,0.39mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc稀释，用水分配。用EtOAc萃取产物。合并所有有机层，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用0-50％的EtOAc在己烷中的混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到所需产物，为黄褐色泡沫状物(55mg，收率27％)。LC-ES/MS(m/z)792[M-1]。
制备例33
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-[1-(甲氧基甲基)环丙烷羰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
将4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(150mg,0.194mmol)、1-(甲氧基甲基)环丙烷甲酸(30mg,0.233mmol)、三乙胺(4equiv.,0.972mmol)、EDCI(56mg,1.5equiv.,0.29mmol)和1-羟基-7-偶氮苯并三唑(39mg,1.5equiv.,0.29mmol)在DCM(2.6mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，将残余物在水和EtOAc之间分配。分离有机层，用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩至干。通过柱色谱(0-100％EtOAc/己烷)纯化残余物，得到所需产物，为白色泡沫状物(128mg，收率81％)。LC-ES/MS(m/z)810[M-1]。
制备例34
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
将4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸酯二盐酸盐(200mg,0.26mmol)、2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酸(62mg,0.39mmol)、Hunig碱(0.17g,1.30mmol)和HATU(127mg,0.32mmol)在DMF(2.6mL)中的溶液在室温搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，将残余物在水和EtOAc之间分配。分离有机层，用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩至干。通过柱色谱(0-10％MeOH/DCM)纯化残余物，得到所需产物，为白色泡沫状物(220mg，收率100％)。LC-ES/MS(m/z)840[M+1]。
以基本上类似于实施例29的方法制备了下述制备例35-41。
制备例35
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
使用4-异氰酰基四氢吡喃制备，收率52％，MS(m/z)824[M-1]
制备例36
4-[2-[4-[[2-[[3-[(8-乙酰基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯使用乙酰氯制备，收率83％，MS(m/z)741[M+1]
制备例37
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲氧基乙基磺酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
使用2-甲氧基乙磺酰氯制备，收率64％，MS(m/z)820[M-1]
制备例38
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲氧基乙基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
使用1-异氰酰基-2-甲氧基-乙烷制备，收率95％，MS(m/z)800[M+1]
制备例39
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(4-甲氧基丁基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
使用1-异氰酰基-4-甲氧基-丁烷制备，收率90％，MS(m/z)827[M-1]
制备例40
4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[双(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
使用N,N-双(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氯制备，收率54％，MS(m/z)857[M-1]
制备例41
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲基丙酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯使用2-甲基丙酰氯制备，收率100％，MS(m/z)767[M-1]
制备例42
4-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向20mL微波反应容器中装入在15mL ACN中的4-[2-[4-[[2-[[3-(氯甲基)苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(1.85g,2.97mmol)、3,3-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.91g,4.16mmol)和DIPEA(2.07mL,11.9mmol)。将得到的黄色混悬液在Initiator微波合成器中于110℃加热4小时。真空浓缩反应混合物，将残余物在5％NaHCO3水溶液(150mL)和DCM(50mL)之间分配。分离有机层，用DCM(2×25mL)萃取水层。用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。通过在二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用0-100％的9:1DCM/丙酮在己烷中的混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为黄色固体(1.63g，收率69％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.04(s,6H),1.38(s,9H),1.81-1.74(m,4H),2.28(t,J＝5.0Hz,2H),2.70(br s,4H),2.91(s,4H),3.13(s,2H),3.26(s,2H),3.52(s,2H),3.84(s,3H),7.31(d,J＝8.3Hz,2H),7.44-7.39(m,2H),7.55-7.46(m,2H),7.75(d,J＝7.6Hz,1H),7.87(m,3H),9.99(s,1H),11.49(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)801[M+1]。
制备例43
4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐
将4-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.13g,1.41mmol)在DCM(14.1mL)中的溶液在RT下搅拌，经由注射器加入4N在二噁烷中的HCl(3.5mL,14.1mmol)。完成加入后，将反应在RT下搅拌过夜，在减压下浓缩至干。将固体与DCM/Et2O一起研磨，经由真空过滤收集得到的沉淀物，将滤饼在真空烘箱中于50℃干燥，得到标题化合物，为白色固体(0.93g,1.20mmol,收率85％)。LC-ES/MS(m/z)701[M+1]。
制备例44
4-[2-[4-[[2-(叔丁氧基羰基氨基)苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向圆底烧瓶中装入2-(叔丁氧基羰基氨基)苯并噻吩-3-甲酸(2.60g,8.87mmol)、4-[2-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)乙基]-苯甲酸甲酯(2.35g,8.07mmol)和30mL CH2Cl2。将得到的混悬液在冰/水浴中冷却，滴加DIPEA(5.63mL,32.3mmol)，得到黄-棕色混浊的溶液。在0℃下，历经30分钟，分小份加入固体双-(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(2.57g,10.1mmol)。然后，使反应混合物升温至RT并搅拌48小时。加入另外的固体2-(叔丁氧基羰基氨基)苯并噻吩-3-甲酸(1.3g,4.43mmol)，然后历经5分钟分小份加入另外的DIPEA(2.8mL)和固体双-(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(1.3g,5.1mmol)。将得到的浑浊的棕色反应混合物在RT下搅拌12小时。将反应混合物用40mL二氯甲烷稀释，然后用5％柠檬酸水溶液(150mL)、盐水(2×25mL)洗涤。分离有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过闪式色谱纯化得到的棕色泡沫状固体，得到标题化合物(2.2g，收率48％)。LC-ES/MS(m/z)565[M-1]。
制备例45
4-[2-[4-[(2-氨基苯并噻吩-3-羰基)氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯盐酸盐
向圆底烧瓶中装入在30mL CH2Cl2中的4-[2-[4-[[2-(叔丁氧基羰基氨基)-苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(2.2g,3.9mmol)。滴加4N在二噁烷中的HCl(9.7mL,39mmol)。使得到的混合物在室温下静置12小时。将淡黄色混悬液在真空下浓缩至干，得到2.0g(100％)标题化合物。LC-ES/MS(m/z)467[M+1]。
制备例46
4-[2-[4-[[2-[[3-(氯甲基)苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向圆底烧瓶中装入在24mL CH2Cl2中的4-[2-[4-[(2-氨基苯并噻吩-3-羰基)氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯盐酸盐(2g,3.976mmol)。将得到的混悬液在冰浴中冷却至0℃。滴加吡啶(0.804mL,9.940mmol)。历经5分钟向得到的黄色混悬液中滴加3-(氯甲基)-苯甲酰氯(0.622mL,4.374mmol)在6mL CH2Cl2中的溶液，得到深黄色溶液，使其升温至室温1小时。将反应混合物用75mL 10％NaHCO3水溶液稀释。用CH2Cl2(2×25mL)洗涤水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。使用20mL EtOH研磨粗产物。将得到的浆液在室温下搅拌30分钟，然后过滤，得到2.2g(89％)标题化合物，为淡黄色固体。LC-ES/MS(m/z)617[M-1]。
制备例47
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯
向微波烧瓶中装入4-[2-[4-[[2-[[3-(氯甲基)苯甲酰基]-氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(0.98g,1.6mmol)、N-(4-羟基丁基)-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐(0.59g,2.2mmol)和DIPEA(1.1mL,6.3mmol)在12mL CH3CN中的溶液。将反应混合物在微波中加热至110℃达4小时。将得到的黄色溶液冷却至室温，在真空下浓缩至干。将残余物在25mL CH2Cl2和75mL5％NaHCO3水溶液之间分配。将有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。得到1.3g(100％)标题化合物，为黄色泡沫状固体。LC-ES/MS(m/z)812[M+1]。
实施例1
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸
向30mL闪烁瓶中装入4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯(196mg,0.24mmol)、氢氧化锂单氢化物(lithium hydroxidemonohydride)(17.2mg,0.72mmol)、THF(4mL)、MeOH(2mL)和H2O(2mL)。将得到的混悬液在RT下搅拌12小时。将反应混合物用4mL H2O稀释，在减压下浓缩至约1/2体积。滴加1N HCl水溶液，得到粘稠的灰白色混悬液，将其在真空中蒸干。通过在C-18二氧化硅上的反相色谱纯化得到的残余物，用0-100％的5％NH4HCO3在H2O/ACN中的混合物梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为浅黄色固体(82.5mg，收率41％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.05(s,6H)1.37-1.42(m,4H),1.74-1.85(m,4H),2.25-2.30(m,2H),2.64-2.76(m,4H),2.91(s,4H),2.96-3.02(m,2H),3.12-3.15(m,2H),3.17-3.25(m,2H),3.35-3.40(m,2H),3.51(s,2H),4.36(t,J＝5.1Hz,1H),6.36(t,J＝5.4Hz,1H),7.30(d,J＝8.3Hz,2H),7.45-7.55(m,4H),7.74-7.79(m,1H),7.84-7.87(m,4H),10.01(s,1H),11.45(s,1H),12.82(br s,1H)。LC-ES/MS(m/z)802[M+1]。
制备4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸的喷雾干燥粉末固体分散体，为无定形产物，含有30％4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠/70％PVP-VA(聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯)。通过离子交换色谱测试所有物质，显示与预期的化学计量一致。使用具有蒸发光散射检测(ELSD)的阳离子交换色谱定量活性药物成分(API)4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸和该活性药物成分的固体分散体制剂中的钠水平。在以下条件下进行阳离子交换色谱(HPLC)：ELSD:60℃，泵：2.0ml/分钟，氮气：1.4L/min，柱温：30℃，柱：5μ SCX 100A(15cmx4.6mm,5um)，注射体积∶50ul，流动相A：0.1M甲酸铵缓冲液，pH 4.5，流动相B：100％ACN，运行时间：4分钟。
通过在60℃下将126mg 4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸游离碱放入5mL丙酮中、同时以1000rpm搅拌，进行4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠的放大试验，得到白色固体浆液。加入18μL氢氧化钠(2.17当量)。样品变黄，偏振光显微术显示半无定形固体。通过真空过滤分离黄色固体，得到淡黄色物质的滤饼。回收102mg。X-射线粉末衍射(XRD)显示为不良结晶固体(poorly crystalline solid)。
将4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠的固体分散体配制为30％4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠/70％PVP-VA。通过将1040.5mg 4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸游离碱和2426.7mg PVP-VA放入50mL甲醇中进行含有30％4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸药物载荷的喷雾干燥的固体分散体的放大试验。搅拌物料，得到白色浆液。向所述浆液中加入0.519mL 5N氢氧化钠(2.0摩尔当量)，进行水浴超声，直到形成澄清的黄色溶液。将溶液缓慢泵入具有热氮气流的喷雾干燥器中，得到固体粉末，收集并在真空烘箱中于50℃在真空下进一步干燥过夜至干。
喷雾干燥的条件如下：
装置 水浴 油浴 氮气 起始温度 最终温度
设置 60℃ 200℃ 60psi 45℃ 50℃
观察到所回收的喷雾干燥的物质是直径约2.5μm的显微非双折射颗粒。
观察到的活性药物成分和活性药物成分的固体分散体制剂中的钠水平如下所示：
物质 理论钠％ 观察到的钠％(n＝3)
实施例1，二钠盐 5.43 5.59
实施例1，二钠盐，固体分散体 1.63 1.73
实施例2
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(3-羟基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸
向4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(214.6mg,0.28mmol)、在DCM(4mL)中的在DCM(4mL)中的DIPEA(0.097mL,0.55mmol)中加入3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-1-丙醛(55mg，0.28mmol)和AcOH(25μl)。使得到的溶液在RT下搅拌30分钟。一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.12g，0.55mmol)。将混合物在RT下搅拌12小时，用10％NaHCO3水溶液(75mL)和DCM(25mL)稀释，分离各层。用DCM(2×25mL)萃取水层。合并有机萃取物，用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。将得到的残余物溶于DCM(3mL)中，加入4M在1,4-二噁烷中的HCl。将得到的溶液在室温下搅拌24小时。在减压下除去有机溶剂，得到黄色固体。将该物质溶于MeOH(2mL)中，加入LiOH(0.36g,1.4mmol)。将得到的混合物在RT下搅拌16小时，用H2O(4mL)稀释，在减压下浓缩至约50％体积。加入1N HCl的水溶液(5mL)，在减压下浓缩混合物。将得到的残余物通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化，用15-20％的0.1％甲酸/CH3CN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱5分钟，然后用20-50％的0.1％甲酸/CH3CN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱20分钟，在溶剂蒸发后，得到单甲酸盐形式的标题化合物(73mg，收率33％)，为黄色固体。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6):δ1.10(s,6H),1.55(五重峰,J＝6.7Hz,2H),1.85-1.69(m,4H),2.41-2.09(m,8H),2.81-2.61(m,4H),2.91(s,4H),3.65-3.36(m,4H),7.29(d,J＝8.2Hz,2H),7.57-7.36(m,4H),7.75-7.72(m,1H),7.94-7.80(m,3H),8.15(s,1H),11.1-9.1(br,3H)。LC-ES/MS(m/z)745[M+1]。
实施例3
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[双(2-甲氧基乙基)氨磺酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
将4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[双(2-甲氧基乙基)氨磺酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(148.4mg,0.17mmol)和LiOH(0.016g,0.66mmol)在THF:MeOH:H2O(6mL)的2:1:1混合物中的溶液在室温下搅拌12小时。将反应混合物用H2O(2mL)稀释，在减压下浓缩至～1/3体积，加入1N HCl(4mL)。然后，将混合物在减压下浓缩至干，通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用15-20％的0.1％甲酸/CH3CN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱5分钟，然后用20-50％的0.1％甲酸/CH3CN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱20分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为黄色固体(99.0mg，收率67.8％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.13(s,6H),1.87-1.70(m,4H),2.44-2.36(m,2H),2.76-2.64(m,4H),3.02-2.91(m,8H),3.24(s,6H),3.36-3.31(m,4H),3.44(t,J＝5.8Hz,4H),3.54-3.49(br s,2H),7.30(d,J＝8.3Hz,2H),7.59-7.39(m,4H),7.75(d,J＝7.6Hz,1H),7.90-7.81(m,3H),10.01(s,1H),11.47(s,1H),12.83(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)883[M+1]。
实施例4
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(3-羧基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
将4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-甲氧基-4-氧代-丁基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢-苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯(120.8mg,0.14mmol)和LiOH(0.017g,0.71mmol)在THF:MeOH:H2O的2:1:1混合物(4mL)中的混合物在RT下搅拌12小时。将得到的溶液用H2O(2mL)稀释，然后在减压下浓缩至～1/3体积。加入1N HCl水溶液(4mL)，在减压下除去溶剂。将得到的残余物通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化，用15-20％的0.1％甲酸/CH3CN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱5分钟，然后用20-50％的0.1％甲酸/CH3CN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱20分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为黄色固体(72.5mg，收率62.3％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.11(s,6H),1.68-1.55(m,2H),1.88-1.69(m,4H),2.40-2.03(m,10H),2.79-2.61(m,4H),2.91(s,4H),3.70-3.40(m,2H),7.29(d,J＝8.3Hz,2H),7.58-7.36(m,4H),7.79-7.69(m,1H),7.92-7.79(m,3H),10.00(br s,1H),11.45(br s,1H),12.54(br,2H)。LC-ES/MS(m/z)773[M+1]。
实施例5
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(3-甲氧基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酸盐
将4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(3-甲氧基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯(22.7mg,0.029mmol)和LiOH(7mg,0.3mmol)在THF:MeOH:H2O的2:1:1混合物(4mL)中的混合物在RT下搅拌16小时。将得到的混合物用H2O(3mL)稀释，在减压下浓缩至～1/2体积。加入1N HCl水溶液(5mL)，在减压下除去溶剂。将得到的残余物通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化，历经10分钟用15-70％梯度洗脱，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为黄色固体(16.2mg，收率68.3％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.11(s,6H),1.68-1.55(m,2H),1.88-1.69(m,4H),2.43-2.07(m,6H),2.79-2.62(m,4H),2.91(s,4H),3.20(s,3H),3.62-3.23(m,6H),7.29(d,J＝8.3Hz,2H),7.58-7.36(m,4H),7.79-7.68(m,1H),7.85(d,J＝8.2Hz,3H),8.14(s,1H),10.00(br s,1H),11.45(br s,1H),13.14-12.45(br,1H)。LC-ES/MS(m/z)759[M+1]。
实施例6
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-氨基乙酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
向25mL微波反应瓶中装入4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯(0.451g,0.53mmol)、THF(12mL)、MeOH(8mL)和1N在THF中的LiOH(2.5mL,2.5mmol)。将混合物经微波于100℃加热30分钟。向该混合物中加入1NHCl水溶液(2.5mL)，在氮气流下搅拌得到的混合物以蒸发挥发物。将得到的油状残余物溶于EtOAc(25mL)中，用饱和NaCl水溶液(10mL)稀释，分离各层。将有机层经MgSO4干燥，过滤，用溶剂洗涤滤饼。在减压下浓缩滤液，得到粗标题化合物(0.431g)，为淡黄色粉末。向圆底烧瓶中加入粗标题化合物(0.422g,0.56mmol)、DCM(25mL)和4N在二噁烷中的HCl(1.25mL,5mmol)。将混合物用THF(10mL)稀释，于RT下在氮气下搅拌24小时，然后在50℃下搅拌4小时。此时，加入另一份4N在二噁烷中的HCl(1.25mL,5mmol)。继续加热2小时，将混合物冷却至RT。将得到的浆液用己烷(50mL)稀释，过滤收集粗产物(364mg)。将粗物质溶于MeOH/DMSO中，通过反相HPLC在Waters30×75mm 5μm C-18 OBD柱上纯化，用27-50％的10mM碳酸氢铵/ACN在MeOH中的混合物以85mL/min梯度洗脱6分钟，同时在205和237nm下监测。将合适的级分在减压下浓缩至干，在40℃下干燥18小时，得到标题化合物(0.16g，收率43％)。1H NMR(400.13MHz,DMSO)δ7.93(s,1H),7.88-7.79(m,3H),7.46(t,J＝6.3Hz,1H),7.42-7.36(m,3H),7.31-7.28(m,2H),4.00-3.97(m,30H，宽峰，可交换质子),2.89-2.86(m,4H),2.86-2.78(m,3H),2.58-2.54(m,2H),2.51-2.50(m,18H,DMSO),2.44-2.41(m,3H),1.76-1.72(m,4H),1.06(d,J＝12.3Hz,6H)。LC-ES/MS(m/z)744[M+1]。
实施例7
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-甲氧基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸
将4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-甲氧基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯(93mg,0.11mmol)在3:2:1THF:MeOH:水的混合物(3mL)中的溶液在RT下搅拌，同时一次性加入LiOH(14mg，0.56mmol)。将得到的反应混合物在RT下搅拌6小时，真空浓缩。将得到的残余物通过反相色谱在GEMINI-C-18柱上纯化，用23-57％的5％MeOH在10mM碳酸氢铵水溶液(pH～10)和ACN中的混合物梯度洗脱7分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为淡黄色泡沫状固体(83mg，91％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.03(s,6H),1.38-1.43(m,4H),1.72-1.76(m,4H),2.22-2.28(m,2H),2.60-2.67(m,2H),2.67-2.75(m,2H),2.88(s,4H),2.95-3.02(m,2H),3.095(s,2H),3.18(s,3H)；3.15-3.22(m,2H),3.23-3.28(m,2H),3.49(s,2H),6.34(t,J＝4.8Hz,1H),7.27(d,J＝7.9Hz,2H),7.35-7.42(m,2H),7.40-7.48(m,1H),),7.47-7.52(m,1H),7.72-7.77(m,1H),7.81-7.88(m,3H),10.01(br s,1H),11.49(br s,1H),12.75(br s,1H)。LC-ES/MS(m/z)816[M+1]。
实施例8
4-[4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-氨基甲酰基苯基)乙基]-3,5-二氟-苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸
将DIPEA(0.1mL,0.55mmol)加入到N-[4-[2-(4-氨基甲酰基苯基)乙基]-3,5-二氟-苯基]-2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-甲酰胺二盐酸盐(92.0mg,0.11mmol)在DCM(4mL)中的溶液中，然后立即加入琥珀酸酐(160mg，1.65mmol)。将得到的溶液在RT下搅拌20分钟，加入另外的琥珀酸酐(53.4mg,0.05mmol)，将得到的混合物再20分钟。通过加入MeOH(0.5mL)淬灭反应混合物，在真空中除去挥发物，将得到的黄色油状残余物通过反相色谱在GEMINI-C-18柱上纯化，用20-70％的5％MeOH在10mM碳酸氢铵水溶液(pH～10)和ACN中的混合物梯度洗脱6分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为淡黄色固体(50.9mg，收率61％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.03(s,3H),1.09(s,3H),1.62-1.89(m,4H),2.28(m,1H),2.30(m,1H),2.40-2.47(m,2H),2.58-2.81(br m,4H),2.88(s,4H),3.27(s,2H),3.30(m,2H,与残余水峰部分重叠),3.38(br s,2H),3.54(s,2H),7.19-7.31(m,3H),7.31-7.59(m,3H),7.78(d,J＝8.1Hz,3H),7.92-7.85(m,2H),8.36(br s,1H),8.56(br s,1H),9.99(br s,1H),11.51(br s,1H),11.93(br s,1H)。LC-ES/MS(m/z)786[M+1]。
实施例9
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[(2,2,4-三甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酸盐
将4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[(2,2,4-三甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯(167mg,0.233mmol)和氢氧化锂(22mg,0.93mmol)在THF:MeOH:H2O的2:1:1混合物(6mL)中的溶液在RT下搅拌12小时。将反应混合物用水(2mL)稀释，在减压下浓缩至～1/3体积，加入1N HCl(3mL)。然后将混合物在减压下浓缩至干，通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用15-20％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱5分钟，然后用20-50％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱20分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为黄色固体(122mg，收率68％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6):δ1.11(s,6H),1.89-1.67(m,4H),2.15(s,3H),2.41-2.30(m,4H),2.70(m,4H),2.91(s,4H),4.10-3.10(br,4H),7.29(m,2H),7.57-7.36(m,4H),7.75(m,1H),7.90-7.81(m,3H),8.15(s,1H),10.8-9.7(br,1H),12.9-11.1(br,1H)。LC-ES/MS(m/z)701[M+1]。
实施例10
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨基甲酰基)哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
向20mL闪烁瓶中装入4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(145mg,0.187mmol)和TEA(0.13mL,0.94mmol)在DCM(2mL)中的溶液。将得到的混悬液搅拌直到澄清。滴加N-甲基氨基甲酰氯(21mg，0.22mmol)在1mL DCM中的溶液。使得到的溶液在室温下搅拌15分钟。用5％NaHCO3水溶液(75mL)和DCM(25mL)稀释反应混合物，分离各层。用DCM(2×25mL)萃取水层。将有机萃取物合并，用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。将得到的粗物质和氢氧化锂(23mg，0.94mmol)混悬在THF:MeOH:H2O的2:1:1混合物(4mL)中，在室温下搅拌12小时。将反应混合物用水(3mL)稀释，在减压下浓缩至～1/3体积，加入1N HCl(4mL)。然后将混合物在减压下浓缩至干，通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用10-15％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱5分钟，然后用15-50％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱20分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为浅黄色固体(108mg，收率77％)。1HNMR(400.1MHz,DMSO-d6):δ1.06(s,6H),1.88-1.65(m,4H),2.27(s,2H),2.55(d,J＝4.3Hz,3H),2.70(m,4H),2.91(s,4H),3.10(s,2H),3.25-3.15(m,2H),3.51(s,2H),6.33(m,1H),7.34-7.24(m,2H),7.59-7.37(m,4H),7.83-7.79(m,1H),7.93-7.80(m,3H),10.02(br s,1H),11.46(br s,1H),12.79(br s,1H)。LC-ES/MS(m/z)744[M+1]。
实施例11
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨基甲硫酰基)哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
向20mL闪烁瓶中装入4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-二甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯二盐酸盐(165mg,0.212mmol)和TEA(0.15mL,1.1mmol)在DCM(3mL)中的溶液。将得到的混悬液搅拌直到其澄清。滴加异硫氰酸甲酯(18mg,0.24mmol)在1mLDCM中的溶液。使得到的溶液在室温下搅拌15分钟。将反应混合物用5％NaHCO3水溶液(75mL)和DCM(25mL)稀释，分离各层。用DCM(2×25mL)萃取水层。合并有机萃取物，用饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩。将得到的粗物质和氢氧化锂(26mg，1.1mmol)混悬在THF:MeOH:H2O的2:1:1混合物(4mL)中，在室温下搅拌12小时。将反应混合物用水(3mL)稀释，在减压下浓缩至～1/3体积，加入1N HCl(4mL)。然后将混合物在减压下浓缩至干，通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用15-20％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱5分钟，然后用20-60％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱20分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为灰白色固体(73mg，收率45％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6):δ1.06(s,6H),1.89-1.68(m,4H),2.34(m,2H),2.77-2.61(m,4H),2.99-2.82(m,7H),3.52(s,2H),3.60(s,2H),3.71(br s,2H),7.35-7.22(m,2H),7.53-7.35(m,3H),7.68-7.53(m,2H),7.80-7.68(m,1H),7.94-7.80(m,3H),10.02(br s,1H),11.47(br s,1H),12.79(br s,1H),。LC-ES/MS(m/z)760[M+1]。
实施例12
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-羧基乙基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
将4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-[(3-甲氧基-3-氧代-丙基)氨基甲酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯(80mg,0.097mmol)和氢氧化锂(12mg,0.49mmol)在THF:MeOH:H2O的2:1:1混合物(6mL)中的溶液在RT搅拌12小时。将反应混合物用H2O(3mL)稀释，在减压下浓缩至～1/3体积，加入1N HCl(2mL)。然后将混合物在减压下浓缩至干，通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用10-15％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱1分钟，然后用15-50％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱20分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为灰白色固体(53mg，收率68％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6):δ1.05(s,6H),1.88-1.66(m,4H),2.31-2.20(m,2H),2.42-2.31(m,2H),2.79-2.60(m,4H),2.91(s,4H),3.11(m,2H),3.27-3.15(m,4H),3.51(s,2H),6.48(m,1H),7.35-7.23(m,2H),7.60-7.36(m,4H),7.80-7.68(m,1H),7.94-7.80(m,3H),10.02(br s,1H),11.46(br s,1H),12.78-12.15(br,1H)。LC-ES/MS(m/z)802[M+1]。
实施例13
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(甲基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酸盐
将4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(甲基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酯(100mg,0.13mmol)和氢氧化锂(15mg,0.63mmol)在THF:MeOH:H2O的2:1:1混合物(4mL)中的溶液在RT下搅拌12小时。将反应混合物用水(3mL)稀释，在减压下浓缩至～1/3体积，加入1N HCl(3mL)。然后将混合物在减压下浓缩至干，通过在C-18二氧化硅上进行色谱处理纯化得到的残余物，用10％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱5分钟，然后用10-65％的0.1％甲酸/ACN在0.1％甲酸/H2O中的混合物梯度洗脱15分钟，在溶剂蒸发后，得到标题化合物，为微黄的黄褐色固体(67mg，收率67％)。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6):δ1.77-1.57(m,2H),1.97-1.79(m,2H),2.19(d,J＝10.2Hz,2H),2.52(与残余DMSO共振重叠,2H),2.56(m,3H),2.94(s,4H),3.53(s,2H),4.13(br s,2H),6.37(m,1H),7.65-7.25(m,8H),8.08-7.78(m,6H),8.14(s,1H),10.63(s,1H),11.93(s,1H),12.79(br s,1H)。LC-ES/MS(m/z)738[M+1]。
实施例14
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[(4-甲氧基羰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸
向25mL闪烁瓶中装入4-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸甲酯(152mg,0.20mmol)、氢氧化锂(25mg,5mmol)、THF(1.5mL)、MeOH(1.0mL)和H2O(0.5mL)，在RT下搅拌得到的混悬液8小时。将反应混合物蒸发，在DMSO(2mL)中重构，在Phenomenex Kinetex EVO C18柱上利用梯度洗脱(32-67％的乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液pH10/5％MeOH)纯化。在减压下浓缩洗脱液，得到标题化合物，为灰白色固体(124mg，收率83％)。LC-ES/MS(m/z)746[M+1]。
实施例15
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
向25mL闪烁瓶中装入4-[[3-[[3-[[3,5-二氟-4-[2-(4-甲氧基羰基苯基)乙基]苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸甲酯(152mg,0.20mmol)、氢氧化锂(25mg,5mmol)、THF(1.5mL)、MeOH(1.0mL)和H2O(0.5mL)，在RT下搅拌得到的混悬液8小时。将反应混合物蒸发，在DMSO(2mL)中重构，在Phenomenex Kinetex C18柱上利用梯度洗脱(32-67％的乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液pH10/5％MeOH)纯化。在减压下浓缩洗脱液，得到标题化合物(124mg，收率83％)，为灰白色固体。LC-ES/MS(m/z)746[M+1]。
实施例16
4-(2,6-二氟-4-(2-(3-(((1R,5S)-8-戊酰基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯甲酰氨基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰氨基)苯乙基)苯甲酸
向60mL闪烁瓶中装入4-(2,6-二氟-4-(2-(3-(((1R,5S)-8-戊酰基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯甲酰氨基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰氨基)苯乙基)苯甲酸甲酯(214mg,0.27mmol)、氢氧化锂(33mg,6.0eq.,1.37mmol)、THF(1.5mL)、MeOH(1.0mL)和H2O(0.5mL)，在RT下搅拌得到的混悬液12小时。将反应混合物用H2O(5mL)稀释，真空浓缩至～1/2体积。将得到的混合物的pH用10％柠檬酸水溶液调节至～5-6，将得到的无色混悬液在15mL水和5mL 4:1氯仿/异丙醇之间分配。分离有机层，用10％柠檬酸水溶液再次将水层的pH调节至pH～5，将混合物用另外的4:1氯仿/异丙醇萃取两次(2×15mL)。合并有机层，用饱和NaCl水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩滤液，得到标题化合物(114mg，收率54％)，为灰白色固体。LC-ES/MS(m/z)769[M+1]。
以基本上类似于实施例16的方法制备了下面的实施例17-27。
实施例17
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸
收率17％，MS m/z 812[M+1]
实施例18
4-[2-[4-[[2-[[3-[(8-乙酰基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸酯
收率85％，MS m/z 727[M+1]
实施例19
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲氧基乙基磺酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯
收率70％，MS m/z 807[M+1]
实施例20
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲氧基乙基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯
收率28％，MS m/z 786[M+1]
实施例21
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(4-甲氧基丁基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯
收率84％，MS m/z 815[M+1]
实施例22
4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[双(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸酯
收率23％，MS m/z 844[M+1]
实施例23
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲基丙酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯
收率62％，MS m/z 755[M+1]
实施例24
4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[2-(二甲基氨基)乙酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
收率73％，MS m/z 770[M+1]
实施例25
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-[1-(甲氧基甲基)环丙烷羰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸
收率98％MS m/z 797[M+1]
实施例26
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸
收率59％，MS m/z 825[M+1]
实施例27
4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-乙酰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸
向25mL微波反应瓶中装入4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-乙酰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸甲酯甲酯(169mg,0.227mmol)、四氢呋喃(12mL,148mmol)、甲醇(8mL,197mmol)和1M氢氧化锂水溶液(1.14mL,1.14mmol)。给小瓶盖上盖子，搅拌得到的混合物，经微波照射于100℃加热30分钟。然后用1M盐酸水溶液(1.14mL,1.14mmol)小心地处理反应混合物，得到pH～4的反应混合物。将得到的混合物真空浓缩至干，经由低pH反相色谱纯化产物。1H NMR(400.1MHz,DMSO-d6)δ1.04(s,3H),1.09(s,3H),1.84-1.72(m,4H),1.97(bs,3H),2.29-2.27(m,1H),2.37-2.33(m,1H),2.75-2.65(m,4H),2.91(s,4H),3.25-3.3.24(m,2H),3.38-3.34(m,2H),3.54(s,2H),7.29(d,J＝7.6Hz,2H),7.45-7.37(m,2H),7.51-7.46(m,1H),7.55(d,J＝7.5Hz,1H),7.76(d,J＝7.5Hz,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,2H),7.91(s,1H),9.99(s,1H),11.49(s,1H),12.84(s,1H)。LC-ES/MS(m/z)729[M+1]。
实施例28
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸
向4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]-乙基]苯甲酸甲酯(0.20g,0.25mmol)在8mL混合溶剂(比例2:1:1的THF/CH3OH/H2O)中的溶液中加入LiOH(18mg,0.75mmol)。使得到的混合物在室温下静置12小时。加入另外的LiOH(18mg,0.75mmol)。使该混合物在室温下静置48小时，用1mL 4N在二噁烷中的HCl稀释。在真空下除去溶剂。通过闪式色谱纯化粗产物，得到120mg(57％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(399.80MHz,DMSO-d6):d 1.06(s,6H),1.31-1.48(m,4H),2.34(s,2H),2.87-2.97(m,4H),3.07-3.09(m,2H),3.09-3.18(s,2H),3.18-3.28(m,2H),3.38(与残余水峰部分重叠，1H),3.54(s,2H),4.38(m,2H),6.33(m,2H),7.25-7.71(m,8H),7.73-8.08(m,6H),10.64(s,1H),11.99(s,1H),12.8(br s,1H)。LC-ES/MS(m/z)798[M+1]。
体外NaPi-IIb的抑制
在人和小鼠NaPi-IIb T-REXTM-CHO稳定的细胞系中测量33P吸收的抑制。在质粒SLC34A2 pcDNA5/TO(人)和SLC34A2 pcDNA5/TO(小鼠)中亚克隆用于NaPi-IIb的cDNA，分别由人和小鼠的克隆分离产生稳定的细胞系。中将小鼠和人稳定的细胞系保持在生长培养基(达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)：营养混合物F-12(3:1)，10％热灭活的FBS，1％青霉素/链霉素/(HYCLONETM)，20mMHEPES,250μg/mL潮霉素，5μg/mL杀稻瘟菌素(blasticidin))中的连续培养物中。使用0.25％胰蛋白酶从T225细胞培养物烧瓶中收集细胞，以40,000个细胞/孔铺板在96孔CYTOSTAR-TTM闪烁微量滴定板(Amersham Systems)中的100mL生长培养基加100ng/mL四环素中。将细胞板在37℃和5％CO2下孵育过夜。第二天，将化合物使用一比三稀释连续稀释在100％DMSO中。细胞板可以保持在培养箱中直到可进行测定。从培养箱移出细胞板，除去培养基。将细胞用200mL测定缓冲液(137mM NaCl，5.4mM KCl，2.8mM CaCl2，1.2mM MgSO4和14mM Tris-HCl缓冲液，pH～7.5)洗涤3次，在每次洗涤之间除去缓冲液。将在DMSO中连续稀释的化合物进一步50倍稀释在测定缓冲液中，将50μL加入到CYTOSTAR-TTM测定板中，然后立即加入50μL 33P溶液(PERKIN-Walton,MA；0.05μCi/50μL)。用箔覆盖CYTOSTAR-TTM测定板以避光，在RT下孵育60分钟。孵育60分钟后，向测定板中加入100μL终止液(测定缓冲液+400μM根皮素(Phleretin))以阻止33P吸收。在加入终止液后，立即在WallacTrilux液体闪烁计数器和光度计上读板，每孔计数1分钟。每个板可以分别处理，实时振摇，以便在加入终止液后计数没有延迟。相对于1％DMSO(最小作用)和100μM完全有效的NaPi-IIb抑制剂(最大作用)的作用，计算在所有测试浓度(最终测定浓度100-0.005μM)下的抑制百分比。使用4参数逻辑曲线拟合方程计算IC50值。给出的数字为计算的具有标准偏差(SD)的几何平均数，其中n为运行数量。因此，表1描述了实施例1-28分别针对人NaPi-IIb和鼠NaPi-IIb的相对IC50值。
表1.在T-REXTM中国仓鼠卵巢-稳定细胞系中实施例1-28针对人和鼠NaPi-IIb的相对IC50(rel IC50)值体内数据
体内NaPi-IIb抑制
对于测试品和赋形剂对照制备物，向测试品中加入介质20％在水中的羟丙基-β环糊精(HPBCD)。根据需要，在超声波水浴中超声处理以减小粒径。如果必要，使用polytron破碎测试品溶液中任何可见的颗粒。如下面的表2中所示，加入1N NaOH。用1N NaOH将赋形剂对照的pH调节为8.0至8.5。
表2.加入到指定测试化合物中的1N NaOH的量
放射性磷酸盐制备物：使用作为介质的0.9％生理盐水制备16.25mM Na2HPO4溶液。混合直到形成澄清溶液。调节pH至约7.4。使用无菌0.2μm聚醚砜膜过滤。对于放射性磷酸盐给药溶液的最终制备物，加入0.5μl储备液H3 33PO4/mL Na2HPO4。充分混合，然后在给药前使用0.2μm聚醚砜膜无菌过滤H3 33PO4+Na2HPO4溶液。用闪烁计数器测量每个样品的放射性。如果DPM在100,000至150,000之间，进行给药。
体内试验方案∶在研究前一天，对约8-9周龄的雄性C57Bl6雄性小鼠禁食16小时。基于研究当天的体重，将它们分配入治疗组。给小鼠口服给药10mls/kg剂量体积的如上所述制备的测试品或介质对照。十五分钟后，通过口服管饲法给予放射性磷酸盐给药溶液。十五分钟后，通过眼眶放血收集血液。制备血浆，将来自每只小鼠的50μl EDTA血浆与10ml闪烁液混合，通过闪烁计数测定计数。通过比较来自测试品治疗的动物的血浆中的计数与介质对照治疗的动物的血浆中的计数来确定测试品的作用[抑制百分比＝(测试品治疗的动物的血浆中的计数/介质对照治疗的动物的血浆中的计数)×100％]。在施用化合物或介质后30分钟以及在施用标记的磷酸盐后15分钟，测量抑制百分比。在下面的表3中举例说明给定实施例的抑制百分比。
表3：实施例化合物4、6和8的体内数据
实施例 治疗 n 抑制百分比 SEM
4 5mg/kg 6 52 5.4
6 5mg/kg 6 62 2.5
8 5mg/kg 6 60 5.2
可以使用各种浓度的供替代选择的介质，例如聚-1-乙烯基吡硌烷酮-共-乙酸乙烯酯(PVP-VA)。可以在PVP-VA中测定实施例1，对于该研究，如实施例1的固体分散体制剂中描述的那样配制所述化合物，然后溶于水，然后通过口服管饲法给药。介质对照是具有不同浓度的PVP-VA的水，所述浓度与实施例1的最高剂量、实施例1的最低剂量和实施例1的中间剂量中所存在的浓度匹配。经若干次研究，观察到可变PVP-VA对于放射性标记的磷酸盐的吸收没有影响，因此，将所有介质求平均数以计算抑制百分比。
表4：在PVP-VA制剂中的实施例1的体内数据
组 治疗 n 抑制百分比 SEM
1 介质 23 0 5.12
2 30mg/kg实施例1 7 75.83 3.54
3 10mg/kg实施例1 7 75.64 4.02
4 3mg/kg实施例1 7 68.71 4.30
5 1mg/kg实施例1 7 66.90 3.10
6 0.3mg/kg实施例1 7 51.21 7.71
7 0.1mg/kg实施例1 7 30.61 7.57
8 0.03mg/kg实施例1 7 0.75 14.45
可以通过与用于评价化合物体内抑制NaPi-IIb的能力类似的方式给予化合物和放射性标记的磷酸盐来评价测试化合物对胃排空的影响。在对小鼠放血后，将其处死，收集它们的胃。将收集的胃在10ml 1N NaOH中消化过夜，通过闪烁计数测定回收的放射性标记的磷酸盐DPM。通过比较用化合物治疗的动物的胃中的dpm与用介质处理的动物的胃中的dpm，确定化合物介导的对胃排空速率的影响。
本发明的化合物例如实施例1显示出有利的药理学性质，例如在临床前试验中显示出效力、体内分布、体内功效和有利的无毒性。例如，实施例1在体内胃排空抑制方面显示出令人惊奇地有利的NaPi-IIb抑制幅度。另外，在该体内实验中，概括而言，当体内施用于正常大鼠四天时间时，实施例1耐受性良好，并且显示出有利的无毒性。

Claims (24)

1.式II的化合物：
其中Y是稠合的环己烷环或稠合的苯基环，
其中A是其中交叉线表示与式II的母核的连接点的键，虚线表示与R2的连接点的键，
其中R2选自-CH3、-(CH2)3OH、-(CH2)3OCH3、-(CH2)3CO2H、-COOCH3、-COCH3、-CO(CH2)3CH3、-COCH(CH3)2、-CO(CH2)2CO2H、-COCH2NH2、-COCH2N(CH3)2、-SO2N[(CH2)2OCH3]2、-SO2NHCH3、-SO2(CH2)2OCH3、-CONH(CH2)4OH、-CONH(CH2)4OCH3、-CONHCH3、-CONH(CH2)2CO2H、-CONH(CH2)2OCH3、-CON(CH2CH2OCH3)2、-CSNHCH3、 其中虚线表示连接点，
其中R’是-CO2H或-CONH2，
或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其中Y是稠合的环己烷环，A是R’是-CO2H，或其药学上可接受的盐。
3.权利要求1的化合物，其中Y是稠合的环己烷环，A是R’是-CO2H，或其药学上可接受的盐。
4.下式的化合物：
其中R选自-(CH2)3OH、-(CH2)3OCH3、-(CH2)3CO2H、-CONH(CH2)4OH、-COCH2NH2、-SO2N[(CH2)2OCH3]2、-CONH(CH2)4OCH3和-CO(CH2)2CO2H，
其中R’是-CO2H或-CONH2，
或其药学上可接受的盐。
5.权利要求4的化合物或盐，其中R’是-CO2H。
6.权利要求1的化合物或盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸，其可以用结构表示为：
或其药学上可接受的盐。
7.权利要求1的化合物或盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(3-羟基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸，其可以用结构表示为：
或其药学上可接受的盐。
8.权利要求1的化合物或盐，其是4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[双(2-甲氧基乙基)氨磺酰基]-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸，其可以用结构表示为：
或其药学上可接受的盐。
9.权利要求1的化合物或盐，其是4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(3-羧基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸，其可以用结构表示为:
或其药学上可接受的盐。
10.权利要求1的化合物或盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(3-甲氧基丙基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸，其可以用结构表示为：
或其药学上可接受的盐。
11.权利要求1的化合物或盐，其是4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-氨基乙酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸，其可以用结构表示为：
或其药学上可接受的盐。
12.权利要求1的化合物或盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-甲氧基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸，其可以用结构表示为:
或其药学上可接受的盐。
13.权利要求1的化合物或盐，其是4-[4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-氨基甲酰基苯基)乙基]-3,5-二氟-苯基]氨基甲酰基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-2-基]氨基甲酰基]苯基]甲基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸，其可以用结构表示为：
或其药学上可接受的盐。
14.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，选自：
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[(2,2,4-三甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酸盐；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨基甲酰基)哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨基甲硫酰基)哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-羧基乙基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(甲基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸甲酸盐；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[(4-甲氧基羰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；
4-(2,6-二氟-4-(2-(3-(((1R,5S)-8-戊酰基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯甲酰氨基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰氨基)苯乙基)苯甲酸；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-二甲基-4-(甲基氨磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[4-[[2-[[3-[(8-乙酰基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲氧基乙基磺酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲氧基乙基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(4-甲氧基丁基氨基甲酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[双(2-甲氧基乙基)氨基甲酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-(2-甲基丙酰基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸酯；
4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[2-(二甲基氨基)乙酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-[1-(甲氧基甲基)环丙烷羰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[8-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；
4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸；和
4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-乙酰基-2,2-二甲基-哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]-2,6-二氟-苯基]乙基]苯甲酸。
15.权利要求1的盐，其是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠。
16.药物组合物，其包含权利要求1至15中任意一项所述的化合物或盐以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
17.4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠的固体分散体制剂，其中所述制剂包含30％4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠和70％聚乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯。
18.治疗高磷酸盐血症的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的权利要求1至15中任意一项所述的化合物或盐。
19.治疗慢性肾病的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的权利要求1至15中任意一项所述的化合物或盐。
20.治疗与慢性肾病相关的心血管疾病的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的权利要求1至15中任意一项所述的化合物或盐。
21.权利要求1至15中任意一项所述的化合物或盐，用于治疗。
22.权利要求1至15中任意一项所述的化合物或盐，用于治疗高磷酸盐血症。
23.权利要求1至15中任意一项所述的化合物或盐，用于治疗慢性肾病和与慢性肾病相关的心血管疾病。
24.治疗与慢性肾病相关的心血管疾病的方法，其包括给需要其的患者施用有效量的盐，所述盐是4-[2-[2,6-二氟-4-[[2-[[3-[[4-(4-羟基丁基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-哌嗪-1-基]甲基]苯甲酰基]氨基]-4,5,6,7-四氢苯并噻吩-3-羰基]氨基]苯基]乙基]苯甲酸二钠。
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