CN113784956A - 钠-氢交换体3抑制剂化合物 - Google Patents

钠-氢交换体3抑制剂化合物 Download PDF

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CN113784956A CN202080033042.9A CN202080033042A CN113784956A CN 113784956 A CN113784956 A CN 113784956A CN 202080033042 A CN202080033042 A CN 202080033042A CN 113784956 A CN113784956 A CN 113784956A
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P·贾达夫
X·王
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Abstract

本发明涉及下式的钠‑氢交换体3(NHE3)抑制剂化合物：涉及包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物用于治疗与升高的钠和/或磷酸盐水平相关的某些疾病的用途。

Description

钠-氢交换体3抑制剂化合物
本发明涉及新的钠-氢交换体3(NHE3)抑制剂化合物，涉及包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物用于治疗与升高的钠和/或磷酸盐水平相关的某些疾病的用途。本发明进一步涉及新的NHE3化合物与某些钠依赖性磷酸盐共转运蛋白(NPT2b)抑制剂组合的用途。
NHE3是一种存在于哺乳动物小肠、结肠、胆囊、肾近端管和亨勒袢的粗细肢中的上皮钠-氢交换体。在肠道中，NHE3调节作为消化的一部分急剧发生，并在餐后立即被抑制。NHE3缺失小鼠表现出钠-液平衡紊乱，突出了NHE3在保持容量稳态方面的作用，并表明NHE3是肠道钠吸收的主要贡献者。此外，最近的体内研究表明，NHE3抑制导致肠道磷酸盐吸收减少(Orlowski,J.等人,Pflugers Arch.-Eur.J.Physiol.,2004,447:549-565，King,A.J.等人,Sci.Transl.Med.,2018,10,1-17)。
钠的过量摄入在西方饮食中无处不在，这与高血压的表现密切相关，而高血压又与心血管和肾脏疾病的风险增加相关。保持最佳水平的钠摄入量可以有助于管理血压并预防心血管和肾脏疾病(Weintraub,W.S.等人,J.Am.Coll.Cardiol.,2015,65(10),1042-1050)。
慢性肾病(CKD)和终末期肾病(ESRD)的肾清除率降低导致磷酸盐负荷增加，这可以促进肾脏继发性甲状旁腺功能亢进并最终导致高磷血症(Wolf M.,J.Am.Soc.Nephrol.,2010,21,1427-1435)。CKD不仅是人类高磷血症的最常见原因，而且在成年猫和狗中也是如此(Kidder,A.等人,J.Feline Med.Sur.,2009,11,913-924)。高磷血症的一个有充分证据证实的后果是心血管疾病(CVD)，它可以表现为血管和心脏瓣膜钙化、左心室肥厚、心力衰竭、心律失常和心源性猝死(Fujii,H.等人,Clin.Exp.Nephrol.,2017,21(S1),S53-S63)。磷酸盐负荷增加引起的继发性甲状旁腺功能亢进还可导致骨病(Yuen,N.K.等人,Perm.J.,2016,20(3),15-127)。
通过饮食磷酸盐限制和使用磷酸盐吸收抑制剂来有效减少肠道磷酸盐的吸收将会减少CKD中的磷酸盐负荷，并有助于减少导致CVD、骨病和肾功能进一步恶化的后遗症。
WO2010/078449公开了用于在治疗与体液潴留或盐过载相关的病症和胃肠道病症中抑制NHE介导的反向转运的化合物和方法。WO2014/169094公开了NHE3结合化合物和用于抑制磷酸盐转运的方法。
综上所述，人们认识到，肠道内过多的钠和磷酸盐吸收会导致如高血压、CKD、CVD、骨病的疾病的发病率和相关死亡率的增加。因此，需要针对这些病症的替代治疗，特别是抑制NHE3的治疗。具体地说，需要有效减少体内钠和磷酸盐吸收并且同时对NHE3抑制具有高度选择性的化合物。此外，还希望有与NPT2b抑制剂化合物组合有效的NHE3抑制剂化合物。
因此，本发明提供了式I化合物：
Figure BDA0003333640490000021
其中两个R都是CN或两个R都是C(O)NH2，或其药学上可接受的盐。
在一个特定实施方案中，两个R都是C(O)NH2。
在一个特定实施方案中，该化合物是下式的化合物：
Figure BDA0003333640490000022
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，该化合物是下式的化合物：
Figure BDA0003333640490000031
在另一个实施方案中，该化合物是以下物质的二盐酸盐：
Figure BDA0003333640490000032
在一个特定实施方案中，该化合物是下式的化合物：
Figure BDA0003333640490000033
在一个特定实施方案中，该化合物是以下物质的二盐酸盐：
Figure BDA0003333640490000034
本发明还提供了一种治疗选自CKD、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭、高血压和CVD的疾病的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本发明提供一种治疗猫的CKD的方法，其包括向有需要的猫施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明还提供了一种治疗选自CKD、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭和CVD的疾病的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用式I化合物或药学上其可接受的盐与式II化合物或其药学上可接受的盐组合的治疗有效组合：
Figure BDA0003333640490000041
在一个实施方案中，本发明提供了一种治疗猫的CKD的方法，其包括向有需要的猫施用式I化合物或其药学上可接受的盐与式II化合物或其药学上可接受的盐的组合的治疗有效组合。
此外，本发明提供一种用于疗法的式I化合物或其药学上可接受的盐。具体地，本发明提供了一种用于治疗CKD、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭、高血压或CVD的式I化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗猫的CKD的式I化合物或其药学上可接受的盐。
此外，本发明提供了一种式I化合物或其药学上可接受的盐，其用于与式II化合物或其药学上可接受的盐同时、分开或顺序组合用于治疗CKD、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭或心血管疾病。在一个实施方案中，本发明提供了一种式I化合物或其药学上可接受的盐，其用于与式II化合物或其药学上可接受的盐同时、分开或顺序组合用于治疗猫的CKD。
此外，本发明提供了一种式II化合物或其药学上可接受的盐，其用于与式I化合物或其药学上可接受的盐同时、分开或顺序组合用于治疗CKD、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭或心血管疾病。在一个实施方案中，本发明提供了一种式II化合物或其药学上可接受的盐，其用于与式I化合物或其药学上可接受的盐同时、分开或顺序组合用于治疗猫的CKD。
此外，本发明提供了一种药物组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
此外，本发明提供了一种药物组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂，另外还包含式II化合物或其药学上可接受的盐。
此外，本发明提供了式I化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗CKD、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭、高血压或CVD的药物中的用途。在一个实施方案中，本发明提供了式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗猫的CKD的药物中的用途。
本发明的化合物和组合可用于治疗与钠和/或磷酸盐失衡相关的疾病和病症，包括：高磷血症，特别是ESRD或CKD中的高磷血症或家族性高磷血症；甲状旁腺功能亢进，特别是与CKD相关的继发性甲状旁腺功能亢进；磷酸钙肾结石；与CKD或ESRD相关的心脏瓣膜钙化；与CKD相关的骨折；钙化防御；肿瘤性钙质沉着；和急性肾病。
在一个特定实施方案中，式II化合物是游离酸。在一个特定实施方案中，式II化合物是二钠盐。式II的游离酸化合物在本文中称为“化合物A”。
如本文所用，术语“治疗”包括遏制、减缓、停止或逆转现有症状或病症的进展或严重性。
在一个实施方案中，要治疗的哺乳动物是人。在另一个实施方案中，哺乳动物是猫或狗，优选猫。
如本文所用，术语“有效量”是指在向哺乳动物单剂量或多剂量施用后在接受诊断或治疗的患者中提供所需效果的式I或式II化合物或其药学上可接受的盐的量或剂量。
有效量可由本领域技术人员通过使用已知技术并通过观察在类似情况下获得的结果来确定。在确定针对患者的有效量时，考虑许多因素，包括但不限于：患者的物种；患者的大小、年龄、饮食和一般健康状况；所涉及的特定疾病或病症；疾病或病症的程度或参与程度或严重程度；个体患者的反应；施用的具体化合物；施用模式；施用制剂的生物利用度特征；选择的剂量方案；伴随药物的使用；及其他相关情况。式I和式II化合物在约0.01至约15mg/kg体重范围内的每日剂量下是有效的。
式I或式II化合物被配制为通过使化合物生物可利用的任何途径施用的药物组合物。优选地，所述药物组合物用于口服施用。所述药物组合物及其制备方法是本领域已知的(参见，例如，Remington,J.P.,Remington:The Science and Practice of Pharmacy,L.V.Allen编辑,第22版,Pharmaceutical Press,2012)。
式I化合物及其药学上可接受的盐可用于本发明的治疗用途，其中某些构型是优选的。以下本发明化合物的列表描述了这类构型。应当理解，这些优选内容适用于治疗用途和本发明的化合物。
技术人员将了解，对于其中两个R都是C(O)NH2的化合物，脒脲部分可以E或Z构型存在并且可以容易地在两者之间转换。本发明的化合物包括E和Z异构体，以及它们的混合物。
式I化合物包括：
Figure BDA0003333640490000071
Figure BDA0003333640490000081
或其药学上可接受的盐。
尽管本发明考虑了所有单独的对映异构体和非对映异构体，以及所述化合物的对映异构体的混合物，包括外消旋物，但式Ia'和式Ia”的化合物及其药学上可接受的盐是特别优选的。具体来说，式Ia”化合物的二盐酸盐是优选的。
本领域普通技术人员可以在合成本发明化合物的任何方便点，通过如以下的方法来分离或拆分单个的对映异构体，例如选择性结晶技术、手性色谱(参见例如J.Jacques等人,Enantiomers,Racemates,and Resolutions,John Wiley and Sons,Inc.,1981，以及E.L.Eliel和S.H.Wilen,Stereochemistry of Organic Compounds,Wiley-Interscience,1994)，或超临界流体色谱(SFC)(参见例如，T.A.Berger；Supercritical FluidChromatography Primer,Agilent Technologies,2015年7月)。
式I化合物的药学上可接受的盐可以例如通过适当的游离碱形式的式I化合物与适当的药学上可接受的酸在合适的溶剂中在本领域公知的标准条件下反应形成(参见，例如，Bastin,R.J.等人；Org.Process.Res.Dev.,4,427-435,2000和Berge,S.M.等人；J.Pharm.Sci.,66,1-19,1977)。具体来说，式I化合物的优选盐是二盐酸盐。
式II化合物的药学上可接受的盐可以例如通适当的游离酸形式的式II化合物与适当的药学上可接受的碱在合适的溶剂中在本领域公知的标准条件下反应形成(参见，例如，Bastin,R.J.等人；Org.Process.Res.Dev.,4,427-435,2000和Berge,S.M.等人；J.Pharm.Sci.,66,1-19,1977)。具体来说，式II化合物的优选盐是二钠盐。
WO2018/034883描述了一类化合物，包括式II化合物，它们是钠依赖性磷酸盐共转运蛋白2b(NPT2b或NaPiIIb)的抑制剂。NPT2b存在于小肠的内腔表面上，在这里其通过主动转运促进磷酸盐吸收。式II化合物可以通过WO2018/034883中描述的方法制备。
式I化合物或其盐可以通过本领域普通技术人员已知的多种方法制备，其中一些在以下制备例和实施例中说明。每个步骤的产物可以通过本领域众所周知的常规方法回收，包括萃取、蒸发、沉淀、色谱、过滤、研制和结晶。试剂和起始材料对于本领域普通技术人员来说是容易获得的。在不限制本发明范围的情况下，提供以下制备例和实施例以进一步说明本发明。此外，本领域普通技术人员了解，式I化合物可以通过使用本领域技术人员可以制备的具有相应的所需立体化学构型的起始材料或中间体来制备。
某些缩写定义如下：“ACN”是指乙腈；“BCECF-AM”是指2',7'-双(2-羧基乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰氧基甲酯；“BSA”是指牛血清白蛋白；“DCM”是指二氯甲烷；“DMSO”是指二甲亚砜；“EtOAc”是指乙酸乙酯；“ES/MS”是指电喷雾质谱；“EMS”是指甲磺酸乙酯；“EtOH”是指乙醇；“FBS”是指胎牛血清；“h”是指小时；“HEPES”是指4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸；“HPLC”是指高效液相色谱；“IC50”指半数最大抑制时的抑制剂浓度；“LC-MS”是指液相色谱-质谱；“MeOH”是指甲醇；“min”是指分钟；“MTBE”是指甲基叔丁基醚；“m/z”是指质荷比；“Pd(dba)2”是指双(二亚苄基丙酮)钯(0)；“RT”是指室温；“TLC”是指薄层色谱。
LC-MS在
Figure BDA0003333640490000091
HP1260液相色谱系统上进行。质谱测量通过ES/MS(以正和/或负模式获取)完成，并在连接到HPLC的质量选择检测器四极杆质谱仪上进行，该HPLC可能有也可能没有ELSD。LC-MS条件(低pH)：柱：
Figure BDA0003333640490000102
NX C18 2.0×50mm 3.0μm，110埃；梯度：1.5分钟内5-95％B，然后95％B持续0.5分钟；柱温：50℃+/-10℃；流速：1.2ml/min；1μl注射体积；溶剂A：含0.1％HCOOH的去离子水；溶剂B：含0.1％甲酸的ACN；波长200-400nm和212-216nm。如果HPLC配备有ELSD，则设置为45℃蒸发器温度、40℃雾化器温度和1.6SLM气体流速。替代LC-MS条件(高pH)：柱：Waters
Figure BDA0003333640490000103
C18柱2.1×50mm，3.5μm；梯度：1.5分钟内5-95％B，然后95％B持续0.50分钟；柱温：50℃+/-10℃；流速：1.2ml/min；1μL注射体积；溶剂A：10mM NH4HCO3 pH9；溶剂B：ACN；波长：200-400nm和212-216nm；如果有ELSD：45℃蒸发器温度、40℃雾化器温度和1.60SLM气体流速。
制备例1
4-(3-苄基硫基苯基)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉
Figure BDA0003333640490000101
以相同的规模并行设置三个反应。对于每个反应，准备两种溶液，溶液1和溶液2。溶液1：在15℃下在氮气下，向4-(3-溴苯基)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉(54.0g，145.5mmol)的二甲苯(1.08L)溶液中添加Pd(dba)2(3.35g，5.82mmol)和Xantphos(3.37g，0.04当量5.82mmol)。将混合物搅拌1小时。溶液2：在0℃下在氮气下，向K2CO3(10.1g，72.7mmol)在二甲苯(1.08L)中的混合物中逐滴添加苯基甲硫醇(27.1g，218.3mmol)。在15℃下将混合物搅拌1小时。在15℃下将溶液1逐滴添加到溶液2中，并在140℃下将混合物搅拌12小时。
合并三份反应混合物并用水(500ml)洗涤。浓缩有机层并通过硅胶色谱纯化，使用1％至17％EtOAc的石油醚溶液梯度洗脱，得到标题化合物(92g，50％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.28-7.17(m,8H),7.05-7.04(m,1H),7.00-6.95(m,1H),6.74-6.69(m,1H),4.15-4.04(m,3H),3.76(d,J＝16.0Hz,1H),3.47(d,J＝16.0Hz,1H),2.90(dd,J＝11.2,7.2MHz,1H),2.50-2.42(m,4H)。
制备例2
3-(6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基)苯磺酰氯；盐酸盐
Figure BDA0003333640490000111
以相同的规模并行设置两个反应。对于每个反应，在0℃下，向4-(3-苄基硫基苯基)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉(50.0g，121mmol)、乙酸(52.17g，868.8mmol)和水(62ml)在CAN(690ml)中的搅拌混合物中逐份添加1,3-二氯-5,5-二甲基-咪唑烷-2,4-二酮(47.5g，241mmol)。在0至5℃下将混合物搅拌2小时，然后真空浓缩反应混合物。将MTBE(200ml)和HCl(在1,4-二噁烷中的4M溶液，10ml)添加到每个反应中，并将反应混合物合并在一起。搅拌30分钟，并过滤收集固体。用MTBE(100ml)洗涤固体，得到标题化合物(112g)，其无需进一步纯化即可使用。假设定量收率，基于103g的理论产量，纯度估计为92％w/w。TLC(1:6EtOAc:石油醚)Rf＝0.05。
制备例3
N-[2-[2-[2-[[3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯基]磺酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003333640490000112
向N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(5.22g，21.0mmol)和三甲胺(6.38g，8.79ml，63.0mmol，3.00当量)的无水DCM(120ml)溶液中添加外消旋3-(6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基)苯磺酰氯(Abacipharm，8.21g，21.0mmol)并在室温下在氮气下搅拌过夜。真空浓缩反应混合物。向油状残余物中添加EtOAc(50ml)，滤除固体并真空浓缩滤液得到橙色油。通过硅胶柱色谱纯化，用EtOAc洗脱，获得无色油状的外消旋化合物(6.92g，55％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.67(s,1H),7.44(t,J＝7.6Hz,1H),7.36(d,J＝7.2Hz,1H),7.23(d,J＝2.0Hz,1H),6.71(d,J＝1.2Hz,1H),5.42-5.05(br m,1H),4.29(t,J＝6.0Hz,1H),3.73(d,J＝16.2Hz,1H),3.57(d,J＝15.8Hz,1H),3.55-3.46(m,8H),3.34-3.25(m,2H),3.14-3.08(m,2H),2.97(dd,J＝11.5,5.29Hz,1H),2.59(dd,J＝11.5,7.2Hz,1H),2.46(s,3H),1.41(s,9H)。
在
Figure BDA0003333640490000121
AD(8×35cm)柱(流速400ml/min，在260nm下检测)上分离对映异构体，11次进样629mg，用95:5EtOH:ACN洗脱获得标题化合物(2.94g，23％)，为第二洗脱异构体。手性HPLC(柱：
Figure BDA0003333640490000122
AD-H4.6×150mm，流速：0.6ml/min，检测：250nm，洗脱剂：95:5EtOH:ACN)表明>99％ee。
替代合成
在0℃下，向N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(57.1g，230mmol)在DCM(1.70L)中的溶液中添加三乙胺(65.2g，645mmol)。在0℃下，将3-(6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基)苯磺酰氯；盐酸盐(根据制备例2制备的原料；84.0g，181mmol)逐份添加到混合物中。将混合物加热至25℃，并搅拌4小时。将反应混合物与基本上按照以上描述以3-(6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基)苯磺酰氯；盐酸盐(根据制备例2制备的原料；各52g，112mmol，总共104g，224mmol)为原料制备的两份反应混合物合并。将所得混合物倒入冰水(1.8L)中，然后用水(2×1.5L)洗涤有机层并浓缩，得到黄色残余物。通过硅胶色谱纯化，使用1％至2％MeOH的DCM溶液梯度洗脱，得到黄色油状的外消旋化合物(157g，64％产率)。
将该外消旋物(157g，261mmol)与如上制备的另外的外消旋物(23g，38mmol)合并。使用
Figure BDA0003333640490000123
AD-H(5μm，3×25cm)柱(流速70g/min，在220nM下UV检测)通过SFC分离对映异构体，用70:30 CO2:(0.1％NH4OH)的MeOH溶液洗脱，获得黄色胶状的标题化合物(50g，28％)，为第二洗脱异构体，>99％ee。ES/MS m/z(35Cl/37Cl)602/604[M+H]+。
制备例4
N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯磺酰胺二盐酸盐
Figure BDA0003333640490000131
向N-[2-[2-[2-[[3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯基]磺酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(2.94g，4.88mmol)中添加4M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(10ml，40mmol)并在室温下搅拌所得溶液过夜。真空浓缩反应混合物得到白色泡沫(2.85g，>100％)。在高真空下干燥过夜，并且无需进一步操作即可使用。ES/MS m/z(35Cl/37Cl)502/504[M+H]+
制备例5
N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯磺酰胺
Figure BDA0003333640490000132
使用10g
Figure BDA0003333640490000133
SCX柱对N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯磺酰胺二盐酸盐(992mg，1.84mmol)进行纯化，得到740mg透明无色半固体状的游离碱(740mg，80％)。
制备例6
N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯磺酰胺
Figure BDA0003333640490000141
在15℃下，向在MeOH(190ml)中的N-[2-[2-[2-[[3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯基]磺酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(48g，80mmol)中添加4M盐酸的1,4-二噁烷溶液(100ml，400mmol)并在室温下搅拌所得溶液过夜。真空除去溶剂并将残余物溶解在水(150ml)中。向该溶液中添加5N NaOH(30ml)和2N NaOH(50ml)，直至pH 9-10，然后添加20％Na2CO3(75ml)水溶液，使溶液至pH 11。用EtOAc(2×200ml，然后1×100ml)萃取水性混合物。合并有机物并用饱和氯化钠水溶液(120ml)和20％Na2CO3(30ml)的混合物洗涤。有机物经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物溶解在甲苯中并真空浓缩，然后再重复此操作两次。将残余物溶解在DCM中并真空浓缩，然后再重复此操作两次，得到深黄色油状物(42g，94％)，基于以苯甲醚为内标的1H-NMR比较，纯度大约为90wt％。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76-7.72(m,1H),7.68-7.66(m,1H),7.43(t,J＝7.6Hz,1H),7.36-7.33(m,1H),7.23(d,J＝2.1Hz,1H),6.74-6.72(m,1H),4.28-4.22(m,1H),3.67(d,J＝16.2Hz,1H),3.62-3.49(m,9H),3.11(t,J＝4.6Hz,2H),2.91(dd,J＝11.8,5.5Hz,1H),2.87(t,J＝5.1Hz,2H),2.58(dd,J＝11.7,7.4Hz,1H),2.44(s,3H)。ES/MS m/z(35Cl/37Cl)502/504[M+H]+。
实施例1
2-氰基-1-[4-[[N'-氰基-N-[2-[2-[2-[[3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉
-4-基]苯基]磺酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]甲脒基]氨基]丁基]-3-[2-[2-[2-[[3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯基]磺酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]胍
Figure BDA0003333640490000151
向N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯磺酰胺(根据制备例5制备；740mg，1.47mmol)在1,4-二噁烷(10ml)和吡啶(10ml)中的溶液中添加N-氰基羰亚胺二苯基酯(351mg，1.47mmol)并在室温下在氮气下搅拌过夜。添加丁烷-1,4-二胺(65mg，0.74mmol)并在60℃下加热24小时，然后在90℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温。用EtOAc稀释反应混合物，用5％碳酸钾水溶液洗涤两次，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩得到橙色油状物。通过硅胶柱色谱对粗混合物进行纯化，用0至10％MeOH的DCM溶液梯度洗脱，得到黄色泡沫状的标题化合物(591mg，67％)。ES/MS m/z(35Cl)1193[M+H]+
替代合成
向N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯磺酰胺(根据制备例6制备；纯度90wt％，24.5g，44mmol)在1,4-二噁烷(240ml)中的溶液中添加吡啶(17.7ml，219mmol)和N-氰基羰亚胺二苯基酯(10.5g，44mmol)并在室温下在氮气下搅拌过夜。向反应混合物中添加丁烷-1,4-二胺(1.93g，21.9mmol)，将反应物分成四等份，并且将每一份加热到90℃持续21小时。将丁烷-1,4-二胺(102mg，1.16mmol)和1,4-二噁烷(5ml)添加到每一份反应物中，并在90℃下继续加热23小时。将丁烷-1,4-二胺(42mg，0.48mmol)和1,4-二噁烷(5ml)添加到通过LC-MS测定显示氰基异脲中间体:标题化合物的比大于1:5的反应混合物的份中。继续在90℃下加热所有份的反应混合物过夜，然后冷却至室温。合并反应份。将混合物与以基本相同的方式使用N-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基]-3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯磺酰胺(90wt％纯度)(分别为10.05g，18.00mmol和5.20g，9.32mmol)制备的另外两批料混合。减压除去溶剂，将残余物溶解在DCM(250ml)中，然后用5％碳酸钾水溶液(2×80ml)洗涤有机物。合并水洗液并用DCM(2×40ml)萃取。将所有有机洗液合并在一起并用饱和氯化钠水溶液(80ml)洗涤。有机物经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到黄棕色油状物。通过硅胶柱色谱对粗品物质进行纯化，用8至16％EtOH的DCM溶液梯度洗脱。然后通过硅胶色谱对该物质重新纯化两次，用5至12％和2至12％MeOH的DCM溶液梯度洗脱。通过硅胶色谱对不纯级分重新纯化，用2％至12％MeOH的DCM溶液梯度洗脱，合并纯的物质得到灰白色泡沫状固体形式的标题化合物(15.3g，36％)。ES/MS m/z(35Cl)1193[M+H]+。
实施例2
[[4-[[N'-氨基甲酰基-N-[2-[2-[2-[[3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯基]磺酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙基]甲脒基]氨基]丁基氨基]-[2-[2-[2-[[3-[(4S)-6,8-二氯-2-甲基]-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基]苯基]磺酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙基氨基]亚甲基]脲二盐酸盐
Figure BDA0003333640490000161
向实施例1(670mg，0.562mmol)中添加三氟乙酸(10ml)和水(1ml)并在室温下搅拌过夜。在减压下除去挥发物。将残余物溶解在最少量的MeOH中，并通过10g
Figure BDA0003333640490000162
SCX柱纯化，得到黄色泡沫(629mg)。通过制备型HPLC[柱：
Figure BDA0003333640490000163
EVO C18 100×30mm，5μm粒度，50℃下的在线加热器；洗脱剂：51至86％(5％MeOH在10mM NH4HCO3中的溶液)的ACN溶液]进行纯化得到游离碱形式的标题化合物，为橙色油状物(253mg，37％)。ES/MSm/z(35Cl)1229[M+H]+。在小瓶中，将游离碱化合物(223mg，0.181mmol)溶解在DCM(0.5ml)中并在振荡下逐滴添加盐酸(在乙醚中的1M溶液，1ml)。白色固体从溶液中沉淀出来。振荡混合物5分钟，然后真空浓缩得到白色细粉状标题化合物(236mg，100％)。ES/MS m/z(35Cl)1229[游离碱M+H]+,1227[游离碱M-H]+
替代合成
按以下方式制备两等份的混合物：对于每份混合物，将实施例1的化合物(5.1g，4.3mmol)、4M盐酸的二噁烷溶液(50ml，200mmol)和水(25ml)混合。将每份溶液加热至65℃持续2小时。将混合物冷却至室温并在室温下搅拌过夜，然后将它们与以实施例1的化合物(3.1g，2.6mmol)为原料以基本相同的方式制备的另一批料合并在一起。真空浓缩混合物。向残余物中添加水/乙醇(1:2，100ml)并真空浓缩。重复此操作三次。向残余物中添加EtOH并在45℃下搅拌10分钟，然后真空浓缩。重复此操作三次。在室温下真空干燥残余物22小时。向残余物中添加另一批用实施例1按照与以上描述基本相同的方式制备的产物(1g，0.8mmol)。真空干燥，在室温下23小时、50℃下16小时、55℃下6小时，然后在室温下72小时得到标题化合物(14.7g，94％)。ES/MS m/z(35Cl)1229[游离碱M+H]+。
测定
体外NHE3抑制活性
为了创建NHE3测定，通过在内源性NHE缺陷细胞系中过表达人NHE3产生选择性表达NHE3的细胞。NHE缺陷细胞系通过化学诱导诱变产生。诱变后，通过将锂(Li)负载细胞置于酸性细胞外环境中来选择NHE缺陷细胞。在这些条件下，NHE将细胞内Li+交换为细胞外质子，因此只有NHE缺陷细胞才能避免毒性细胞内酸中毒并存活。
NHE缺陷细胞系NHD C8通过诱变和选择从细胞系Dede(
Figure BDA0003333640490000171
CCL-39TM)产生。通过以500μg/ml的终浓度在生长培养基中用EMS(Sigma-Aldrich)处理Dede CCL-39细胞20小时来诱导诱变。通过在LiCl溶液(130mM LiCl、5mM KCl、1mM MgSO4、2mM CaCl2、5mM葡萄糖和20mM Hepes-Tris，pH 7.4)中培养2小时，然后在氯化胆碱溶液(130mM氯化胆碱、5mMKCl、1mM MgSO4、2mM CaCl2和20mM 2-(N-吗啉代)乙磺酸-Tris，pH 5.5)中培养30分钟来选择NHE缺陷细胞。存活的细胞在标准培养基中生长至90％汇合后进行第二轮选择。分离单克隆菌落，生长至完全汇合，并进行第三轮选择。将存活的克隆扩增并测试钠-氢交换体的活性(参见下面的测定)。
将编码人NHE3的带有myc标签的cDNA亚克隆到质粒pcDNA3.1中，并在上文提及的NHE缺陷NHD C8细胞中产生稳定的细胞系。将稳定过表达NHE3的细胞保持在含有10％FBS、400mg/ml G418(Gibco-ThermoFisher Scientific)和抗生素/抗真菌溶液的McCoy’s 5A培养基(Hyclone-GE Healthcare Bio science)中。
为了测量NHE活性，通过添加NH4Cl降低细胞的细胞内pH。然后通过细胞内pH敏感性荧光素染料BCECF-AM(分子探针-ThermoFisher Scientific)测量钠依赖性细胞内pH变化。NHD8/NHE3细胞用多通道移液器以每孔30,000个分散到96孔聚D-赖氨酸板(Corning)中。将细胞在37℃加5％CO2下培养24小时。吸出细胞培养基，用100μl NaCl-HEPES溶液(100mM NaCl、10mM葡萄糖、5mM KCl、2mM CaCl2、1mM MgCl2、0.1％BSA，50mM HEPES，pH 7)洗涤细胞两次，然后将细胞与100μl的5μM BCECF-AM的NH4Cl/pluronic F-127/丙磺舒溶液(130mM NH4Cl、5mM KCl、2mM CaCl2、1mM MgCl2、0.1％BSA、0.0625％pluronic F-127、2mM丙磺舒、20mM HEPES，pH 7)在室温下孵育60分钟。孵育后，用100μl不含铵、不含钠的HEPES/0.1％BSA溶液(100mM氯化胆碱、10mM葡萄糖、5mM KCl、2mM CaCl2、1mM MgCl2、0.1％BSA、50mM HEPES，pH 7)洗涤细胞两次。然后将86μl不含铵、不含钠、含有30μM阿米洛利(amiloride)和化合物或对照物的HEPES/0.1％BSA添加到适当的孔中。通过添加14μl 1MNaCl以达到140mM的终浓度来引发NHE活性。立即读取板在505nm激发波长和550nm发射波长下的荧光强度。相对于1％DMSO时的NHE活性(0％抑制)和标准抑制剂的饱和浓度下的NHE活性(100％抑制)计算每个测试浓度下的抑制百分比。使用Prism将从1000nM到0.152nM加上无化合物的9种浓度响应曲线拟合到4参数模型来确定IC50。
实施例2以浓度依赖性方式抑制人NHE3，IC50为5.76nM(各个IC50的几何平均值，n＝7，几何平均值的标准误差为0.72)。实施例2对NHE3具有选择性，因为它不是有效的NPT2b(IC50＝58.4μM)或SGLT1(IC50＝6.6μM)抑制剂。实施例1以浓度依赖性方式抑制人NHE3，IC50为37.9nM(各个IC50的几何平均值，n＝2，几何平均值的标准误差为6.2)。
实施例2对血压的影响
重250-300g的7周龄的雄性自发性高血压(SHR)大鼠适应反向光照循环(上午8:00关灯，晚上8:00开灯)并自由进食常规食物和水。将植入式遥测装置(型号TA11PA-C40，DataSciences International)植入腹主动脉中。从手术中恢复后，将大鼠放置在安静的遥测设备室中的单独笼子中，用于测量血压(平均动脉压，MAP)和心率(HR)。使用DSI DataquestIV 4.0软件每5分钟采集20秒的数字化压力信号。
将31只SHR大鼠通过MAP随机分为两组，并用媒剂(n＝15)(在纯化水中的10％阿拉伯胶、0.05％消泡剂溶液)或0.15mg/kg/天实施例2每天处理两次，持续14天。第一剂在早上6:00到6:30之间(关灯前2小时)给予，第二剂在下午4:00到4:30之间给予。还监测每日食物消耗和体重增加。
MAP、HR和体重(BW)数据通过重复测量协方差分析(ANCOVA)进行分析，基线作为协变量。食品消耗(FC)数据通过重复测量方差分析(ANOVA)进行分析。对于用0.15mg/kg/天实施例2处理的组，在整个研究时间过程(第1-14天)的平均血压比对照组低4.83mm Hg，p值为0.0007(表1)。未观察到对HR、BW或FC的显著影响。
表1：实施例2对雄性自发性高血压大鼠(SHR)的平均动脉压(MAP)的影响
Figure BDA0003333640490000201
实施例1对钠吸收的影响
口服大剂量氯化钠后尿钠排泄是肠道中钠吸收的间接量度。
基于相等的平均体重，将体重范围为200至250g的雄性Sprague-Dawley大鼠随机分组。在下文中，以下配制物称为“1％HEC”：在水中的1％羟乙基纤维素(HEC)和0.25％
Figure BDA0003333640490000202
80与消泡剂媒剂。用1％HEC在含有预称量的化合物的玻璃小瓶中配制0.1mg/ml的实施例1(最终剂量为1mg/kg，以10ml/kg体积给药)，然后探针超声波处理直至其显现为均匀悬浮液。为确保化合物不会粘附在小瓶的侧面或底部，将搅拌棒加到瓶子中，并在整个配制和给药过程中搅拌悬浮液。实施例1的后续给药溶液通过用1％HEC连续稀释来制备。通过添加无菌水配制10mg/ml的NaCl(最终剂量为200mg/kg，以20ml/kg体积给药)。
在研究前一天，将动物放置到干净的笼子中，没有食物，但可以喝水，空腹过夜。在研究当天，大鼠口服给药媒剂或不同剂量的实施例1。30分钟后，对动物给药NaCl，然后立即转移到代谢笼中。收集尿液样品2小时。记录净尿量。使用临床生化分析仪评估尿钠和肌酐。
计算以尿钠与肌酐的比率(mM/mM)表示的值，并表示为平均值±SEM。这些曲线用4参数对数曲线拟合工具GraphPad Prism 6拟合以计算ED50。出于曲线拟合的目的，对于单独媒剂组，在软件中人为将实施例1的剂量设置为0.001mg/kg。
在口服施用实施例1和NaCl后，尿钠排泄以剂量依赖性方式降低(表2)。实施例1的尿钠排泄的ED50为0.058mg/kg。尿钠排泄的剂量依赖性降低与实施例1的肠道钠吸收的剂量依赖性抑制一致。
表2：实施例1对大鼠中的尿钠的影响
Figure BDA0003333640490000211
实施例2对钠和磷酸盐吸收的影响
口服大剂量磷酸钠后尿钠和磷酸盐的排泄是肠道中钠和磷酸盐吸收的间接量度。
基于相等的平均体重，将体重范围为195至221g的约7周龄的雄性Sprague-Dawley大鼠随机分组。通过添加1％HEC到含有预称量的化合物的玻璃小瓶中然后探针超声波处理直至其显现为均匀悬浮液来配制0.3mg/ml的实施例2(最终剂量为3mg/kg，以10ml/kg体积给药)。为确保化合物不会粘附在小瓶的侧面或底部，将搅拌棒加到瓶子中，并在整个配制和给药过程中搅拌悬浮液。实施例2的后续给药溶液通过用1％HEC连续稀释来制备。通过添加无菌水配制34.5mg/ml的NaH2PO4(最终剂量为690mg/kg，以20ml/kg体积给药)。
在研究当天，将动物放置到干净的笼子中，没有食物，但可以喝水，在研究前禁食4小时。大鼠口服给药媒剂或不同剂量的实施例2。15分钟后，对动物给药无菌水或NaH2PO4，然后立即转移到代谢笼中。收集尿液样品4小时。记录净尿量。使用临床生化分析仪评估尿钠、肌酐和磷酸盐。计算以尿与膳食磷或钠的比率表示的值并表示为平均值±SEM。这些曲线用4参数对数曲线拟合工具GraphPod Prism 6拟合以计算ED50。出于曲线拟合的目的，对于单独媒剂组，在软件中人为将实施例2的剂量设置为0.00001mg/kg。
在口服施用实施例2和磷酸盐后，尿钠和磷酸盐排泄以剂量依赖性方式降低(表3)。实施例2的尿磷排泄的ED50为0.041mg/kg，并且实施例2的钠排泄的ED50为0.058mg/kg。尿钠和磷酸盐排泄的剂量依赖性降低与实施例2的肠道钠和磷酸盐吸收的剂量依赖性抑制一致。
表3：实施例2对大鼠中的尿磷和钠的影响
Figure BDA0003333640490000221
实施例2与NPT2b抑制剂(化合物A)组合对大鼠中的磷酸盐吸收的影响
NPT2b抑制剂给药溶液：将化合物A和聚-1-乙烯基吡咯烷酮-共-乙酸乙烯酯(PVP-VA，Sigma-Aldrich)以30％化合物A和70％PVP-VA的重量比称入瓶中。通过在MeOH中稀释混合物随后用5N NaOH添加2mol NaOH/mol化合物A来制备澄清的黄色溶液。溶液通过热氮气流喷雾干燥，收集固体分散体粉末，然后在真空烘箱中进一步干燥。喷雾干燥固体分散体(SDD)的剂量始终表示为活性药物成分(API)。
为了制备化合物A给药溶液，将适当量的化合物ASDD称入小瓶中并溶解在水中(10ml/kg给药体积)。为确保化合物不会粘附在小瓶的侧面或底部，将搅拌棒加到瓶子中，并在整个配制和给药过程中搅拌悬浮液。用于较低剂量的后续溶液通过用水连续稀释来制备。7mg/ml的PVP-VA用作媒剂对照物。
NHE3抑制剂给药溶液：为了制备实施例2给药溶液，将适当量的化合物称入小瓶中并溶解在1％HEC(10ml/kg给药体积)中。为确保化合物不会粘附在小瓶的侧面或底部，将搅拌棒加到瓶子中，并在整个配制和给药过程中搅拌悬浮液。用于较低剂量的后续溶液通过用HEC连续稀释来制备。
为了制备放射性标记的磷酸盐给药溶液，制备16.25mM Na2HPO4、0.9％盐水、pH7.4溶液并使用无菌0.22μm聚醚砜Millex-GP针筒过滤器装置(EMD Millipore)过滤。以每毫升溶液约2.5μCi添加放射性磷酸盐(H3 33PO4，Perkin Elmer)并再次过滤。
进行三项独立的研究。在这些研究中，雄性Sprague-Dawley大鼠被随机分成平均体重大致相等的组。在禁食过夜后，所有动物均以10ml/kg给药媒剂、不同剂量的化合物A(研究1)、不同剂量的实施例2(研究2)或1.2mg/kg化合物A和不同剂量的实施例2(研究3)。15分钟后，放射性标记的磷酸盐以2ml体积口服给药。15分钟后，收集血液并制备血浆。50μL血浆中的放射性(dpm)通过闪烁计数测量并用于计算磷酸盐吸收。结果用代表100％吸收的媒剂对照物进行归一化。曲线使用GraphPad Prism 6用具有可变斜率的非线性回归拟合，以计算表7中给出的ED50和Emax。出于在ED50计算中拟合曲线的目的，对于在研究2中的单独媒剂组以及研究3中的媒剂+1.2mg/kg化合物A组，在软件中人为将实施例2的剂量设置为0.00001mg/kg。对于在研究1中的单独化合物A，没有进行曲线拟合。
在大鼠中进行的三项独立研究的结果，即，化合物A的剂量响应研究(研究1)、实施例2的剂量响应研究(研究2)和在1.2mg/kg化合物A存在下实施例2的剂量响应研究(研究3)的结果总结在下表4-7中。实施例2和化合物A均以剂量依赖性方式抑制磷酸盐吸收，在测试的最高剂量下的抑制百分比分别为37％和18％。然而，当组合给予时，在实施例2的最高剂量与1.2mg/kg化合物A组合时实现了70％的抑制。因此，当两种化合物一起给药时比任一化合物单独给药时更有效，与每种化合物抑制不同的有助于大鼠肠道磷酸盐吸收的途径一致。
表4：化合物A对大鼠中的磷酸盐吸收的影响(研究1)
处理 吸收(相对于媒剂对照物，％，平均值±SEM)
媒剂 100±7.23
化合物A，0.01mg/kg 94.39±7.88
化合物A，0.1mg/kg 87.61±6.08
化合物A，1mg/kg 87.64±7.26
化合物A，10mg/kg 81.53±5.50
表5：实施例2对大鼠中的磷酸盐吸收的影响(研究2)
处理 吸收(相对于媒剂对照物，％，平均值±SEM)
媒剂 100.00±14.22
实施例2，0.001mg/kg 97.16±20.76
实施例2，0.003mg/kg 100.81±20.74
实施例2，0.01mg/kg 75.15±15.52
实施例2，0.03mg/kg 83.17±17.99
实施例2，0.1mg/kg 57.29±11.20
实施例2，0.3mg/kg 71.09±13.98
实施例2，1mg/kg 44.29±9.09
实施例2，3mg/kg 60.04±12.00
实施例2，10mg/kg 63.47±8.39
表6：化合物A和实施例2组合对大鼠中的磷酸盐吸收的影响(研究3)
Figure BDA0003333640490000241
Figure BDA0003333640490000251
表7：
化合物A 实施例2 实施例2+1.2mg/kg化合物A
ED<sub>50</sub>(mg/kg) 无曲线拟合 0.041 0.056
最高剂量下的抑制％ 18％ 37％ 70％
实施例2与NPT2b抑制剂(化合物A)组合对大鼠中的磷酸盐吸收和肠磷酸盐保留的 影响
该研究的目的是在大鼠中研究实施例2、化合物A和实施例2/化合物A组合对化合物给药后15分钟磷酸盐吸收以及化合物给药后4.25小时保留在肠中的磷酸盐的影响。后者是长时间内吸收的口服磷酸盐负荷的量度。
本研究中使用两种媒剂载体：1)1％HEC和2)在水中的0.46％聚-1-乙烯基吡咯烷酮-共-乙酸乙烯酯(PVP-VA媒剂)。本研究中的媒剂对照组接受两种媒剂的1:1组合。
实施例2、化合物A和磷酸盐给药溶液与上述类似地制备，不同之处在于实施例2的剂量为0.4mg/kg，化合物A的剂量为10mg/kg，并且它们以将以5ml/kg体积给药的浓度制备。实施例2和单独的化合物A组与另一种化合物的媒剂以1:1混合，而化合物A和实施例2在给药前以1:1混合。在所有情况下，最终给药体积为10ml/kg。
雄性Sprague-Dawley大鼠禁食4小时，然后施用适当的媒剂、10mg/kg化合物A、0.4mg/kg实施例2或两种化合物的组合。15分钟后，对动物给药放射性标记的磷酸盐溶液。15分钟后，收集血液并制备血浆。血浆中的放射性通过闪烁计数测量并用于计算磷酸盐吸收的抑制。实施例2(0.4mg/kg)抑制磷酸盐吸收达29％(P＝0.046，相对于媒剂对照物)，化合物A (10mg/kg)抑制磷酸盐吸收达35％(P＝0.013，相对于媒剂对照物)，而这两个化合物的组合抑制磷酸盐吸收达63％(P＝0.0001，相对于媒剂对照物)。实施例2/化合物A组合的63％抑制超过任一单独化合物的抑制。数据表示为平均值±SEM，各组的动物数量等于8。使用JMP 12.1通过ANOVA与实施例2/化合物A组合的邓尼特比较(Dunnett's comparison)确定统计显著性。
在放射性标记的磷酸盐溶液给药后4小时，收集胃、小肠、大肠和粪便，称重并在37℃下用1N NaOH消化过夜。通过闪烁计数测量每个级分中的放射性。
在胃肠道中回收的剂量百分比定义为与给药量相比在胃、小肠、大肠和粪便中回收的放射性。数据表示为平均值±SEM，各组的动物数量等于8。使用JMP 12.1通过ANOVA与实施例2/化合物A组合的邓尼特比较确定统计显著性。
表8：胃肠道各部分中回收的剂量百分比。
Figure BDA0003333640490000261
从胃肠道的每个部分回收的放射性标记的磷酸盐剂量百分比，平均值±SEM
在给药实施例2和化合物A两者的动物中回收的总放射性(46％)大于任一单独化合物(分别为31％和32％)(表8)。因此，该组合比任一单独化合物更有效。
在胃肠道中回收的剂量百分比数据通过JMP 12.1中的双向方差分析进一步分析，以测试实施例2和化合物A对抑制磷酸盐吸收的作用的加合性。实施例2/化合物A相互作用的检测是显著的(p＝0.0187)，表明在本研究中测试的剂量下化合物之间存在协同关系。也就是说，组合的抑制作用大于单个化合物作用的总和。

Claims (18)

1.一种下式的化合物：
Figure FDA0003333640480000011
其中两个R都是CN或两个R都是C(O)NH2，或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中两个R都是C(O)NH2，或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中所述化合物为：
Figure FDA0003333640480000012
或其药学上可接受的盐。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物为：
Figure FDA0003333640480000013
5.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物为以下物质的二盐酸盐：
Figure FDA0003333640480000021
6.一种化合物，其为：
Figure FDA0003333640480000022
7.一种化合物，其为以下物质的二盐酸盐：
Figure FDA0003333640480000023
8.一种治疗选自慢性肾病、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭、高血压和心血管疾病的疾病的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
9.一种治疗选自慢性肾病、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭和心血管疾病的疾病的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐与下式的化合物或其药学上可接受的盐组合的治疗有效组合：
Figure FDA0003333640480000031
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
11.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述哺乳动物是狗。
12.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述哺乳动物是猫。
13.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于疗法中。
14.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗慢性肾病、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭、高血压或心血管疾病。
15.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于与下式的化合物或其药学上可接受的盐同时、分开或顺序组合：
Figure FDA0003333640480000032
用于治疗慢性肾病、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭或心血管疾病。
16.一种下式的化合物：
Figure FDA0003333640480000041
或其药学上可接受的盐，其用于与根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐同时、分开或顺序组合，用于治疗慢性肾病、高磷血症、继发性甲状旁腺功能亢进、心力衰竭或心血管疾病。
17.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
18.根据权利要求17所述的药物组合物，其另外包含下式的化合物：
Figure FDA0003333640480000042
或其药学上可接受的盐。
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