CN109554330B - 一种马尾松原生质体制备方法 - Google Patents

一种马尾松原生质体制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种马尾松原生质体制备方法，选用组培继代培养良好的马尾松悬浮胚性细胞为材料，经过离心沉降进行细胞分离，以纤维素酶、果胶酶、离析酶为分解酶进行细胞酶解，再经过清洗、纯化过程，获得了产量高、活力强的马尾松纯净原生质体。本发明操作方法简单，并提供了一套完整的马尾松原生质体制备的方法，为今后开展马尾松原生质体培养、细胞融合、细胞膜结构功能分析和转基因技术方面的研究提供了有力的保障，具有较好的经济效益和社会效益。

Description

一种马尾松原生质体制备方法
技术领域
本发明属林业生物工程技术领域，具体涉及一种马尾松原生质体制备方法。
背景技术
原生质体培养在体细胞杂交、遗传转化、细胞壁再生、细胞分裂及细胞的许多生理生化研究和植物细胞全能性的理论研究中有重要的应用价值。松属树种是世界上分布范围最广的针叶树种，其综合利用价值高，推广应用前景广阔。与组织和细胞培养相比，松树的原生质体培养研究难度大、进展缓慢，目前尚未见到有关松树原生质体培养再生完整植株的报道。要构建高效的松树原生质体培养技术，获取产量高、活力强的原生质体是根本前提与保障。迄今已分离和培养的松树原生质体仅有火炬松、加勒比松、糖松、海岸松等10余种，而马尾松（Pinus massoniana Lamb.）作为我国南方主要的造林用材和生态建设的树种，却仍然缺乏一套完整的马尾松原生质体制备方法。由于受繁殖材料的影响，不同树种、不同来源的材料，其原生质体制备方法大不相同，所以不能简单套用原有的原生质体培养方法来制备马尾松原生质体，不仅需要构建成熟的马尾松器官或马尾松体胚发生途径的组培技术体系，还要对马尾松原生质体制备中酶组成、酶解时间、渗透压、膜稳定性等关键因素开展研究。
发明内容
本发明针对现有马尾松原生质体制备技术方面的欠缺，提供一种操作简单、成本低、系统完整的马尾松原生质体制备方法，从而获得产量高、活力强的马尾松原生质体。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种马尾松原生质体制备方法，其操作步骤如下：
（1）分离：将组培继代4个月的马尾松胚性悬浮细胞在离心力为20×g的条件下离心5～8 min，弃上清液，取出离心沉淀细胞备用；
（2）酶解：将步骤（1）中得到的离心沉淀细胞置于三角瓶中，加入等体积的酶解液,然后置于转速为55～60 rpm的摇床上，在温度21.5～22.5℃、暗光的条件下酶解5～8 h，即可得到含有原生质体的混合液；
（3）清洗：收集步骤（2）中所得到的混合液置于离心管中，离心后弃上清液，再加入等体积的清洗液进行离心后弃上清液，然后重复加入等体积的清洗液并离心操作2次后，即可得到浓缩细胞；
（4）纯化：收集步骤（3）中得到的浓缩细胞，然后加入等体积的缓冲液即得到纯净的马尾松原生质体。
进一步，步骤（2）中所述的酶解液由以下质量体积浓度的组分组成：纤维素酶RS25～35 g/L、纤维素酶R-10 4～8 g/L、果胶酶Y-23 6～8 g/L、离析酶R-10 2～4 g/L、硝酸钾1 g/L、磷酸二氢钠0.35 g/L、硫酸镁0.25 g/L、氯化钙0.95 g/L、氯化钾0.12 g/L、山梨醇135 g/L。
进一步，步骤（3）中所述的清洗液由以下质量体积浓度的组分组成：氯化钙1.12g/L、氯化钾0.04 g/L、氯化钠7 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、葡萄糖1 g/L。
进一步，步骤（4）中所述的缓冲液由以下质量体积浓度的组分组成：山梨醇135 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、氯化镁1.2 g/L。
进一步，步骤（3）中所述的离心是在离心力为15×g的条件下离心3～4 min。
采用上述马尾松原生质体制备方法制备得到的马尾松原生质体可以在马尾松原生质体培养、荧光标记、膜细胞结构功能分析和转基因技术中应用。
对比于现有技术，本发明的优点及积极效果如下：
1、本发明通过对马尾松悬浮细胞生理状态、酶液的组成和酶解时间等多方面的研究，提供了一套较为完整的马尾松原生质体的制备技术，填补了马尾松原生质体制备方面的空白。
2、由于不同种类的植物，同种植物不同品种，同一植物不同器官和不同部位，继代组织的分化再生能力不同，本发明针对马尾松的生物特性，选择组培继代4个月的马尾松胚性悬浮细胞作为材料制备原生质体，可以获得优质的马尾松原生质体。
3、由于不同植物品种的细胞壁结构不同，导致不同的酶系组合、各种酶组分间的浓度配比及酶解时间对酶解法破壁制备原生质体有很大的影响，所以本发明针对马尾松的细胞结构特点，科学选择合适的酶系组合、各种酶组分间的浓度配比以及酶解时间，提高马尾松原生质体的产量和质量。
4、本发明的马尾松原生质体制备方法操作简单，所使用的试剂价格低廉，易获得，得率高，便于科研工作者的实验研究。
5、利用本发明技术获取的马尾松原生质体纯度好、产量高、活力强，可以在马尾松原生质体培养、细胞融合、细胞膜结构功能分析和转基因技术中应用，具有显著的经济和社会效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步说明。
实施例1：
一种马尾松原生质体制备方法，其操作步骤如下：
（1）分离：将组培继代4个月的马尾松胚性悬浮细胞在离心力为20×g的条件下离心6 min，弃上清液，取出离心沉淀细胞备用；
（2）酶解：将步骤（1）中得到的离心沉淀细胞置于三角瓶中，加入等体积的酶解液,然后置于转速为55 rpm的摇床上，在温度21.5～22.5℃、暗光的条件下酶解8 h，即可得到含有原生质体的混合液；所述的酶解液由以下质量体积浓度的组分组成：纤维素酶RS 25g/L、纤维素酶R-10 8 g/L、果胶酶Y-23 8 g/L、离析酶R-10 2 g/L、硝酸钾1 g/L、磷酸二氢钠0.35 g/L、硫酸镁0.25 g/L、氯化钙0.95 g/L、氯化钾0.12 g/L、山梨醇135 g/L；
（3）清洗：收集步骤（2）中所得到的混合液置于离心管中，离心后弃上清液，再加入等体积的清洗液进行离心后弃上清液，然后重复加入等体积的清洗液并离心操作2次后，即可得到浓缩细胞；所述的清洗液由以下质量体积浓度的组分组成：氯化钙1.12 g/L、氯化钾0.04 g/L、氯化钠7 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、葡萄糖1 g/L；所述的离心是在离心力为15×g的条件下离心3 min；
（4）纯化：收集步骤（3）中得到的浓缩细胞，然后加入等体积的缓冲液即得到纯净的马尾松原生质体；所述的缓冲液由以下质量体积浓度的组分组成：山梨醇135 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、氯化镁1.2 g/L。
实施例2：
一种马尾松原生质体制备方法，其操作步骤如下：
（1）分离：将组培继代4个月的马尾松胚性悬浮细胞在离心力为20×g的条件下离心8 min，弃上清液，取出离心沉淀细胞备用；
（2）酶解：将步骤（1）中得到的离心沉淀细胞置于三角瓶中，加入等体积的酶解液,然后置于转速为55 rpm的摇床上，在温度21.5～22.5℃、暗光的条件下酶解5 h，即可得到含有原生质体的混合液；所述的酶解液由以下质量体积浓度的组分组成：纤维素酶RS 35g/L、纤维素酶R-10 4 g/L、果胶酶Y-23 6 g/L、离析酶R-10 2 g/L、硝酸钾1 g/L、磷酸二氢钠0.35 g/L、硫酸镁0.25 g/L、氯化钙0.95 g/L、氯化钾0.12 g/L、山梨醇135 g/L；
（3）清洗：收集步骤（2）中所得到的混合液置于离心管中，离心后弃上清液，再加入等体积的清洗液进行离心后弃上清液，然后重复加入等体积的清洗液并离心操作2次后，即可得到浓缩细胞；所述的清洗液由以下质量体积浓度的组分组成：氯化钙1.12 g/L、氯化钾0.04 g/L、氯化钠7 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、葡萄糖1 g/L；所述的离心是在离心力为15×g的条件下离心3 min；
（4）纯化：收集步骤（3）中得到的浓缩细胞，然后加入等体积的缓冲液即得到纯净的马尾松原生质体；所述的缓冲液由以下质量体积浓度的组分组成：山梨醇135 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、氯化镁1.2 g/L。
实施例3：
一种马尾松原生质体制备方法，其操作步骤如下：
（1）分离：将组培继代4个月的马尾松胚性悬浮细胞在离心力为20×g的条件下离心7 min，弃上清液，取出离心沉淀细胞备用；
（2）酶解：将步骤（1）中得到的离心沉淀细胞置于三角瓶中，加入等体积的酶解液,然后置于转速为60 rpm的摇床上，在温度21.5～22.5℃、暗光的条件下酶解6 h，即可得到含有原生质体的混合液；所述的酶解液由以下质量体积浓度的组分组成：纤维素酶RS 30g/L、纤维素酶R-10 6 g/L、果胶酶Y-23 6 g/L、离析酶R-10 4 g/L、硝酸钾1 g/L、磷酸二氢钠0.35 g/L、硫酸镁0.25 g/L、氯化钙0.95 g/L、氯化钾0.12 g/L、山梨醇135 g/L；
（3）清洗：收集步骤（2）中所得到的混合液置于离心管中，离心后弃上清液，再加入等体积的清洗液进行离心后弃上清液，然后重复加入等体积的清洗液并离心操作2次后，即可得到浓缩细胞；所述的清洗液由以下质量体积浓度的组分组成：氯化钙1.12 g/L、氯化钾0.04 g/L、氯化钠7 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、葡萄糖1 g/L；所述的离心是在离心力为15×g的条件下离心4 min；
（4）纯化：收集步骤（3）中得到的浓缩细胞，然后加入等体积的缓冲液即得到纯净的马尾松原生质体；所述的缓冲液由以下质量体积浓度的组分组成：山梨醇135 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、氯化镁1.2 g/L。
实施例4：
一种马尾松原生质体制备方法，其操作步骤如下：
（1）分离：将组培继代4个月的马尾松胚性悬浮细胞在离心力为20×g的条件下离心5 min，弃上清液，取出离心沉淀细胞备用；
（2）酶解：将步骤（1）中得到的离心沉淀细胞置于三角瓶中，加入等体积的酶解液,然后置于转速为60 rpm的摇床上，在温度21.5～22.5℃、暗光的条件下酶解7 h，即可得到含有原生质体的混合液；所述的酶解液由以下质量体积浓度的组分组成：纤维素酶RS 25g/L、纤维素酶R-10 4 g/L、果胶酶Y-23 7 g/L、离析酶R-10 3 g/L、硝酸钾1 g/L、磷酸二氢钠0.35 g/L、硫酸镁0.25 g/L、氯化钙0.95 g/L、氯化钾0.12 g/L、山梨醇135 g/L；
（3）清洗：收集步骤（2）中所得到的混合液置于离心管中，离心后弃上清液，再加入等体积的清洗液进行离心后弃上清液，然后重复加入等体积的清洗液并离心操作2次后，即可得到浓缩细胞；所述的清洗液由以下质量体积浓度的组分组成：氯化钙1.12 g/L、氯化钾0.04 g/L、氯化钠7 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、葡萄糖1 g/L；所述的离心是在离心力为15×g的条件下离心4 min；
（4）纯化：收集步骤（3）中得到的浓缩细胞，然后加入等体积的缓冲液即得到纯净的马尾松原生质体；所述的缓冲液由以下质量体积浓度的组分组成：山梨醇135 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、氯化镁1.2 g/L。
将实施例1～实施例4中的马尾松原生质体制备方法运用到马尾松原生质体制备的实际操作中，收集纯净的马尾松原生质体，用血球计数器法计数，算出马尾松悬浮细胞每克鲜样的马尾松原生质体产量；马尾松原生质体活力用伊文思蓝染色法检测，具体数据如表1所示。
表1 马尾松原生质体产量及活性
Figure DEST_PATH_IMAGE002
由表1中数据显示，采用本发明方法制备马尾松原生质体产量高，所得到的马尾松原生质体活力强，可以在马尾松原生质体培养、细胞融合、细胞膜结构功能分析和转基因技术中应用。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种马尾松原生质体制备方法，其特征在于：其操作步骤如下：
（1）分离：将组培继代4个月的马尾松胚性悬浮细胞在离心力为20×g的条件下离心5～8 min，弃上清液，取出离心沉淀细胞备用；
（2）酶解：将步骤（1）中得到的离心沉淀细胞置于三角瓶中，加入等体积的酶解液, 然后置于转速为55～60 rpm的摇床上，在温度21.5～22.5℃、暗光的条件下酶解5～8 h，即可得到含有原生质体的混合液；所述的酶解液由以下质量体积浓度的组分组成：纤维素酶RS25～35 g/L、纤维素酶R-10 4～8 g/L、果胶酶Y-23 6～8 g/L、离析酶R-10 2～4 g/L、硝酸钾1 g/L、磷酸二氢钠0.35 g/L、硫酸镁0.25 g/L、氯化钙0.95 g/L、氯化钾0.12 g/L、山梨醇135 g/L；
（3）清洗：收集步骤（2）中所得到的混合液置于离心管中，离心后弃上清液，再加入等体积的清洗液进行离心后弃上清液，然后重复加入等体积的清洗液并离心操作2次后，即可得到浓缩细胞；所述的清洗液由以下质量体积浓度的组分组成：氯化钙1.12 g/L、氯化钾0.04g/L、氯化钠7 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、葡萄糖1 g/L；
（4）纯化：收集步骤（3）中得到的浓缩细胞，然后加入等体积的缓冲液即得到纯净的马尾松原生质体；所述的缓冲液由以下质量体积浓度的组分组成：山梨醇135 g/L、2-吗啉乙磺酸 150 g/L、氯化镁1.2 g/L。
2.根据权利要求1所述的马尾松原生质体制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述的离心是在离心力为15×g的条件下离心3～4 min。
3.一种如权利要求1～2中任意一项所述的马尾松原生质体制备方法制备得到的马尾松原生质体的应用，其特征在于：所述的马尾松原生质体在马尾松原生质体培养、荧光标记、膜细胞结构功能分析和转基因技术中的应用。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114574423B (zh) * 2022-04-08 2023-08-18 中山大学 一种蜈蚣草原生质体制备方法及其应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61192283A (ja) * 1985-02-20 1986-08-26 Norin Suisansyo Kajiyu Shikenjo ミカン科植物の体細胞雑種の作出方法
CN86108050A (zh) * 1986-12-05 1988-06-15 中国科学院遗传研究所 水稻原生质体再生植株的技术
CN102181424A (zh) * 2011-03-28 2011-09-14 江苏省农业科学院 原生质体不对称融合制备抗霜霉结球甘蓝新种质的方法
CN103299910A (zh) * 2013-07-11 2013-09-18 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种橡胶树原生质体培养植株再生的方法
CN103834611A (zh) * 2014-02-11 2014-06-04 西北农林科技大学 一种丹参原生质体的分离纯化方法
CN109055296A (zh) * 2018-07-16 2018-12-21 南京林业大学 一种马尾松嫩茎原生质体分离纯化及瞬时高效转化方法
CN109055295A (zh) * 2018-07-16 2018-12-21 南京林业大学 一种马尾松针叶原生质体分离纯化以及瞬时高效转化的方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2001230628A1 (en) * 2000-02-03 2001-08-14 Carlos Ramirez Serrano Method for producing somatic embryos of pine tress (genus pinus)

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61192283A (ja) * 1985-02-20 1986-08-26 Norin Suisansyo Kajiyu Shikenjo ミカン科植物の体細胞雑種の作出方法
CN86108050A (zh) * 1986-12-05 1988-06-15 中国科学院遗传研究所 水稻原生质体再生植株的技术
CN102181424A (zh) * 2011-03-28 2011-09-14 江苏省农业科学院 原生质体不对称融合制备抗霜霉结球甘蓝新种质的方法
CN103299910A (zh) * 2013-07-11 2013-09-18 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种橡胶树原生质体培养植株再生的方法
CN103834611A (zh) * 2014-02-11 2014-06-04 西北农林科技大学 一种丹参原生质体的分离纯化方法
CN109055296A (zh) * 2018-07-16 2018-12-21 南京林业大学 一种马尾松嫩茎原生质体分离纯化及瞬时高效转化方法
CN109055295A (zh) * 2018-07-16 2018-12-21 南京林业大学 一种马尾松针叶原生质体分离纯化以及瞬时高效转化的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Isolation and Growth of Protoplasts from Cell Suspensions of Pinus contorta Dougl.ex Loud.;I.C.Hakman and S.von Arnold;《Plant Cell Reports》;19830430;第2卷;第92-94页 *
SOMATIC EMBRYOGENESIS IN IMMATURE EMBRYOS AND PROTOPLASTS OF PINUS-CARIBAEA;E.LAINE and A.DAVID;《Plant Science》;19901231;第69卷;第215-224页 *
几种植物组织及其原生质体过氧化物酶同工酶的比较研究;何若天;《广西植物》;19851231;第5卷(第4期);第389-396页 *
火炬松胚性悬浮细胞原生质体的分离和培养;唐巍等;《植物研究》;19970731;第17卷(第3期);第320-324页 *

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Application publication date: 20190402

Assignee: Wuzhou Zhibang Agroforestry Technology Co.,Ltd.

Assignor: GUANGXI ZHUANG AUTONOMOUS REGION FORESTRY Research Institute

Contract record no.: X2022450000397

Denomination of invention: A Method for Preparing Masson Pine Protoplasts

Granted publication date: 20220222

License type: Common License

Record date: 20221226