CN101066040A - 诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法 - Google Patents

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CN101066040A CN 200710041031 CN200710041031A CN101066040A CN 101066040 A CN101066040 A CN 101066040A CN 200710041031 CN200710041031 CN 200710041031 CN 200710041031 A CN200710041031 A CN 200710041031A CN 101066040 A CN101066040 A CN 101066040A
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林煜
章振华
张承妹
王凌健
苏敏
宋学孟
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Abstract

一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取NL895优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基中培养，其中，脱分化培养基为：MS+KT0.1－0.4mg/L+2，4－D 0.1－0.6mg/L，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织，然后，对愈伤组织进行再分化培养。本发明的优点是：通过培养基培养，克服了林木生活周期长，个体大的劣势，获得大量的，具有细胞全能性的NL895胚性细胞，为NL895诱变育种中筛选耐盐碱、耐旱、抗病、高产等优良突变体提供了重要技术前提。

Description

诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法
技术领域
本发明涉及一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，尤其是NL895品种的胚性细胞发生方法，包括其激素水平及培养日令的选择。
背景技术
NL895是黑杨派杨树品种，具有速生、优质、高产、树干通直圆满、尖削度小、树皮薄、单板出材率高及湿心材含量低等优点，不同立地条件下，平均7年生材积生长量超过对照24.22％～53.22％，木材密度提高3.2％～5％，单板出材率提高12.4％～15.0％，湿心材含量低的无性系比对照降低15.0％～16.0％。其次，还具有较强的适应性和遗传稳定性，在黄淮地区花斑盐碱地上生长良好，材积生长量可超过对照92.44％～138.68％。抗虫抗病性较强，尤其对蛀干害虫和叶部病害表现较强抗性。适种黄淮、江淮及长江中下游的广大平原地区。
黑杨派杨树为木本植物，因个体大存在不易处理和不易大量处理的困难，如何快速组织培养是科学界关注的热点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种诱导黑杨派杨树(NL895)胚性细胞发生方法，为NL895胚性细胞的培育提供重要参考资料。
本发明目的通过下述方法方案实现：一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取NL895优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基中培养，其中，脱分化培养基为：MS+KT0.1-0.4mg/L+2，4-D0.1-0.6mg/L，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织，然后，对愈伤组织进行再分化培养。
所述的脱分化培养72～144小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。
所述的再分化培养基为：MS+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。
所述的再分化培养时间为72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。
利用诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。
本发明的优点是：
通过培养基培养，克服了林木生活周期长，个体大的劣势，获得大量的，具有细胞全能性的NL895胚性细胞，为NL895诱变育种中筛选耐盐碱、耐旱、抗病、高产等优良突变体提供了重要技术前提。
具体实施方式
实施例1
一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana CL“NL895”)优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基，即MS+KT0.2mg/L+2，4-D 0.2mg/L中培养，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织。
培养72～144小时后，将愈伤组织转移至再分化培养基，即MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L中进行再分化培养，培养72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。此时为胚性细胞发生率最高，为50～80％。
利用该诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。
实施例2
一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana CL“NL895”)优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基，即MS+KT 0.1mg/L+2，4-D0.6mg/L中培养，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织。
培养72～144小时后，将愈伤组织转移至再分化培养基，即MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.3mg/L中进行再分化培养，培养72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。此时为胚性细胞发生率最高，为50～80％。利用该诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。
实施例3
一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana CL“NL895”)优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基，即MS+KT 0.4mg/L+2，4-D0.1mg/L中培养，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织。
培养72～144小时后，将愈伤组织转移至再分化培养基，即MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L中进行再分化培养，培养72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。此时为胚性细胞发生率最高，为50～80％。利用该诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。

Claims (5)

1、一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取NL895优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基中培养，其中，脱分化培养基为：MS+KT0.1-0.4mg/L+2，4-D 0.1-0.6mg/L，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织，然后，对愈伤组织进行再分化培养。
2、根据权利要求1所述的诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，其特征在于：所述的脱分化培养72～144小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。
3、根据权利要求1或2所述的诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，其特征在于：所述的再分化培养基为：MS+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。
4、根据权利要求3所述的诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，其特征在于：所述的再分化培养时间为72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。
5、利用权利要求3所述的诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。
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