CN109526943A - 一种免疫细胞冻存方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜3‑7mL、右旋糖酐2‑6mL、细胞培养基15‑25mL、人血清白蛋白2‑4mL、棉籽糖2‑4mL、葡萄糖2‑4mL、丙二醇1‑3mL和人自体血浆60‑80mL；利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。相对现有技术，本发明有效保护免疫细胞免受冷冻损伤，安全性高，对细胞的损伤小，可以提高免疫细胞的复苏成活率，复苏后的成活率可以达到96%以上。
Description
技术领域
本发明涉及细胞冻存技术领域，特别涉及一种免疫细胞冻存方法。
背景技术
现有细胞冻存液的配当多采用DMSO联合动物血清，大部分为10％的DMSO与90％的胎牛血清，但由于DMSO含量仍较高，具有相当的毒性，对病人身体不利，并且免疫细胞易受冷冻损伤，安全性低，对细胞的损伤大，免疫细胞的复苏成活率低。
发明内容
本发明的目的是提供一种免疫细胞冻存方法，所要解决的技术问题是：免疫细胞易受冷冻损伤，安全性低，对细胞的损伤大，免疫细胞的复苏成活率低。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜3-7mL、右旋糖酐2-6mL、细胞培养基15-25mL、人血清白蛋白2-4mL、棉籽糖2-4mL、葡萄糖2-4mL、丙二醇1-3mL和人自体血浆60-80mL；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
进一步，所述免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜3mL、右旋糖酐2mL、细胞培养基15mL、人血清白蛋白2mL、棉籽糖2mL、葡萄糖2mL、丙二醇1mL和人自体血浆80mL。
进一步，所述免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜7mL、右旋糖酐6mL、细胞培养基25mL、人血清白蛋白4mL、棉籽糖4mL、葡萄糖4mL、丙二醇3mL和人自体血浆60mL。
进一步，所述免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜5mL、右旋糖酐4mL、细胞培养基20mL、人血清白蛋白3mL、棉籽糖3mL、葡萄糖3mL、丙二醇2mL和人自体血浆70mL。
进一步，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
进一步，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基或RPMI-1640培养基。
进一步，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
本发明的有益效果是：本发明冻存液中细胞培养基可保持渗透压、酸碱平衡和提供营养，人血白蛋白在一定程度上可以替代胎牛血清在冻存中发挥的作用，同时添加了棉籽糖、葡萄糖和人血清白蛋白有助于延长细胞的存活期，保护细胞结构组织不被自由基破坏，丙二醇可替代二甲基亚砜的保护作用，保证细胞在接近冰点时胞内水分不会结晶，降低二甲基亚砜的使用量，避免产生副作用；从而实现有效保护免疫细胞免受冷冻损伤，安全性高，对细胞的损伤小，可以提高免疫细胞的复苏成活率，复苏后的成活率可以达到96%以上。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜3mL、右旋糖酐2mL、细胞培养基15mL、人血清白蛋白2mL、棉籽糖2mL、葡萄糖2mL、丙二醇1mL和人自体血浆80mL；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基或RPMI-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例2：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜7mL、右旋糖酐6mL、细胞培养基25mL、人血清白蛋白4mL、棉籽糖4mL、葡萄糖4mL、丙二醇3mL和人自体血浆60mL；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基或RPMI-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例3：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜5mL、右旋糖酐4mL、细胞培养基20mL、人血清白蛋白3mL、棉籽糖3mL、葡萄糖3mL、丙二醇2mL和人自体血浆70mL；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基或RPMI-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例4：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜2mL、右旋糖酐4mL、细胞培养基18mL、人血清白蛋白3mL、棉籽糖3mL、葡萄糖4mL、丙二醇1mL和人自体血浆75mL；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基或RPMI-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例5：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜5mL、右旋糖酐5mL、细胞培养基22mL、人血清白蛋白2mL、棉籽糖2mL、葡萄糖2mL、丙二醇1mL和人自体血浆69mL；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基或RPMI-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例6：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜5mL、右旋糖酐4mL、细胞培养基22mL、人血清白蛋白2mL、棉籽糖2mL、葡萄糖4mL、丙二醇2mL和人自体血浆65mL；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基或RPMI-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种免疫细胞冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜3-7mL、右旋糖酐2-6mL、细胞培养基15-25mL、人血清白蛋白2-4mL、棉籽糖2-4mL、葡萄糖2-4mL、丙二醇1-3mL和人自体血浆60-80mL；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
2.根据权利要求1所述一种免疫细胞冻存方法，其特征在于，
所述免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜3mL、右旋糖酐2mL、细胞培养基15mL、人血清白蛋白2mL、棉籽糖2mL、葡萄糖2mL、丙二醇1mL和人自体血浆80mL。
3.根据权利要求1所述一种免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜7mL、右旋糖酐6mL、细胞培养基25mL、人血清白蛋白4mL、棉籽糖4mL、葡萄糖4mL、丙二醇3mL和人自体血浆60mL。
4.根据权利要求1所述一种免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜5mL、右旋糖酐4mL、细胞培养基20mL、人血清白蛋白3mL、棉籽糖3mL、葡萄糖3mL、丙二醇2mL和人自体血浆70mL。
5.根据权利要求1所述一种免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
6.根据权利要求1所述一种免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基或RPMI-1640培养基。
7.根据权利要求1所述一种免疫细胞冻存方法，其特征在于，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
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