CN109521005A - 一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备方法，试剂盒包括：甘胆酸R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；甘胆酸R1试剂是异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸‑BSA鼠单克隆抗体稀释液，甘胆酸R2试剂是碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素鼠单克隆抗体包被的磁微粒稀释液，甘胆酸校准品液是由合成的甘胆酸和缓冲液组成，发光底物液是碱性磷酸酶催化的含二氧杂环乙烷的Tris‑HCl缓冲液。本发明极大地提高了免疫反应的信号强度和灵敏度，使低含量物质在进行免疫结合时也能产生很强的化学发光信号，为甘胆酸的检测提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。

Description

一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒

技术领域

本发明涉及医用诊断试剂领域，特别是涉及一种采用磁微粒化学发光技术和抗原-抗体结合技术检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。

背景技术

甘胆酸的分子量为466.3，是胆汁酸的主要成分之一，甘氨酸的羧基与胆酸侧链末端的羟基通过肽键结合后即可形成甘胆酸。甘胆酸是一种初级胆汁酸，它是胆固醇在肝细胞内经过复杂的酶促反应后转变而成的。

甘胆酸主要由肝细胞合成，经毛细胆管、胆管排入胆囊，然后随同胆汁进入十二指肠，促进脂肪的消化与吸收。大部分甘胆酸在回肠和结肠末端被重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用。重吸收的甘胆酸又进入肝-肠循环，机体即是通过这种循环机制充分地利用甘胆酸。甘胆酸在血清中主要以结合蛋白的形式存在，外周血中胆酸在正常情况下含量甚微。正常成人无论空腹或餐后,其血清中的甘胆酸都稳定在一个较低的水平。

当肝细胞受损或胆汁郁滞时，肝脏对甘胆酸的摄取和排泄会发生异常，从而引发甘胆酸代谢和循环紊乱，导致血液中的甘胆酸含量升高。此外，甘胆酸浓度的高低与肝细胞损害程度即胆汁酸代谢障碍程度直接相关。

近年来有大量的研究报道表明，甘胆酸在肝胆疾病诊断中具有非常重要的临床意义。肝细胞一旦病变即可引起血液中甘胆酸浓度升高。甘胆酸在患有肝胆疾病的患者中阳性率颇高，例如在：急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌、胆石症，黄疸，胆管、胆囊排泄功能障碍，梗阻性肝病，肠-肝循环障碍等疾病患者体内的水平均会显著升高，并且通常具有出现早、恢复慢的特点。甘胆酸是妊娠晚期血清中最主要的胆汁酸组分。正常妊娠时孕妇血清CG水平随孕周逐步增高，至足月妊娠CG值较非孕时增加30％-60％。随着妊娠月份的增加，由于血中孕酮水平的增高，降低了平滑肌的张力，导致妊娠期间胆囊张力降低和排空抑制，使肝脏对胆汁的摄取及排泄发生障碍，引起胆汁不同程度的淤积。因此，部分妊娠妇女血清CG值可出现生理性增高，但临床上并没有明显的ICP症状。随着CG值的升高程度不同，对母婴有着不同程度的损伤，且CG值越高危害越大。大量研究显示，孕妇血清CG水平由于妊娠期胎盘合成和分泌大量雌激素和孕激素以及代谢负荷增大，可能诱发肝胆系统的变化，使孕妇易患妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)。ICP患者血清CG水平较正常孕妇显著增高，甚至可达10-100倍，随ICP患者血清CG增高使羊水污染率、早产率、胎儿宫内窘迫率及剖宫产率增高，甘胆酸增高10倍以上，这些危险进一步增加。当孕妇有ICP时，肝小叶中央区和毛细血管内有胆汁淤积及胆栓存在、胆汁排泄障碍导致胆酸在外周循环中的堆积，致使血中CG含量增高，并产生皮肤瘙痒等症状。由于孕妇血液及羊水中胆汁酸均升高，使胎盘绒毛静脉腔内外均处于高浓度胆汁酸刺激之中，引起血管收缩，胎盘绒毛表面血管痉挛，氧合血流量减少，导致胎儿缺氧，可出现各种并发症，如胎儿宫内窘迫、早产等。国内报道，早产率为13％-42.4％，胎儿宫内窘迫发生率为44％-60.6％。因此，甘胆酸可作为肝胆疾病诊断的良好指标。

目前已知的甘胆酸检测方法主要有RIA(radioimmunoassay放射免疫测定法)法、均相酶免疫检测法、酶联免疫法(ELISA)、高效液相色谱法、气相色谱法和气相色谱和质谱联用法(GC-MS)。但是，这些方法都存在一定的缺陷，RIA法污染大、ELISA法自动化程度低且操作复杂繁琐，高效液相色谱法、气相色谱法和气相色谱和质谱联用法不适合广泛用于临床检测。

因此，目前尚需一种污染小、灵敏度高、操作简单、自动化程度高、特异性好、成本低的甘胆酸检测试剂盒和使用方法。

发明内容

本发明旨在开发一种灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好并且成本低廉的一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。

基于上述目的，本发明提供一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒，包括：R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；R1试剂为异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体稀释液，R2试剂为碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒稀释剂，校准品液系列为含有不同浓度甘胆酸抗原的稀释液，化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液。

另一方案，所述R1试剂即异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸多克隆抗体稀释液是浓度为0.3～0.6μg/mL的异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体经缓冲液稀释配成。

另一方案，所述R1试剂缓冲液pH值为6.7～7.6，缓冲液包括Tris，浓度为12.0～12.3g/L；叠氮钠，浓度为1.98～1.99g/L；氯化钠，浓度为5.7～5.9g/L，牛血清白蛋白，浓度为9～10g/L；8苯胺-1-萘磺酸铵盐，浓度为0.98～0.99g/L；其余为去离子水。

另一方案，所述R1试剂即异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸多克隆抗体稀释液是浓度为0.3μg/mL的异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体经缓冲液稀释配成。

另一方案，所述R1试剂缓冲液pH值为7.0，缓冲液包括Tris，浓度为12.04g/L；叠氮钠，浓度为1.987g/L；氯化钠，浓度为5.79g/L，牛血清白蛋白，浓度为9.86g/L；8苯胺-1-萘磺酸铵盐，浓度为0.986g/L；其余为去离子水。

另一方案，所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原稀释液是由浓度为0.3～0.6μg/mL碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原经缓冲液稀释而成。

另一方案，所述R2试剂缓冲液为pH值为6.7～7.6，优选为商品化的AP ConjugateStabilizer。

另一方案，所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原稀释液是由浓度为0.5μg/mL碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原经缓冲液稀释而成。

另一方案，所述R2试剂缓冲液为pH值为6.8。

另一方案，所述磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒悬浮于缓冲液配制成浓度为0.5～2mg/mL的磁微粒溶液。

另一方案，所述磁分离试剂缓冲液为pH值为7.5～9.0，缓冲液组分为包括Tris，浓度为10.5～11.3g/L；叠氮钠，浓度为1.91～1.95g/L；氯化钠，浓度为5.5～5.7g/L；摩尔浓度为1M的氯化镁溶液；摩尔浓度为0.1M的氯化锌；牛血清白蛋白，浓度为4.7～4.9g/L；特级马血清，浓度为4.8～5.0g/L，其余组分为去离子水。

另一方案，所述磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒悬浮于缓冲液配制成浓度为1.0mg/mL的磁微粒溶液。

另一方案，所述磁分离试剂缓冲液为pH值为8.0，缓冲液组分为包括Tris，浓度为11.08g/L；叠氮钠，浓度为1.917g/L；氯化钠，浓度为5.56g/L；摩尔浓度为1.0M的氯化镁溶液；摩尔浓度为0.1M的氯化锌；牛血清白蛋白，浓度为4.81g/L；特级马血清，浓度为4.91g/L，其余组分为去离子水。

另一方案，所述校准品液系列为含有不同浓度甘胆酸抗原的去激素人血清稀释液。

另一方案，所述校准品液系列的缓冲液包括叠氮钠，浓度为2.0g/L；硫酸庆大霉素，浓度为0.16g/L。

另一方案，所述校准品液系列，浓度范围为0～50ng/mL，缓冲液pH值为7.6。

另一方案，所述校准品液系列的不同浓度为0ng/ml、0.33ng/ml、1.5ng/ml、7.5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml。

另一方案，所述化学发光底物液是摩尔浓度0.1～0.3M的碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液，pH值为8～10的摩尔浓度0.2M的Tris-HCl缓冲液，并含有0.2～0.4mg/mL的二氧杂环乙烷化合物(APCL)。

另一方案，所述化学发光底物液是摩尔浓度为0.2M，pH值为9.3的摩尔浓度0.2M的Tris-HCl缓冲液，并含有0.3mg/mL的二氧杂环乙烷化合物(APCL)。

一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

配制试剂R1：1)按照试剂R1缓冲液组分含量配制缓冲液，调节pH；2)制备异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体；3)将异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体用R1缓冲液进行稀释。

配制试剂R2：1)按照试剂R2缓冲液组分含量配制缓冲液，调节pH；2)制备碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原；3)将碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原用R2缓冲液进行稀释。

配制磁微粒：1)按照磁微粒缓冲液组分含量配制缓冲液；2)制备抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒；3)将磁微粒用Tris-HCl缓冲液进行稀释。

配制校准品：1)按照校准品缓冲液组分含量配制磷酸盐缓冲液；2)将甘胆酸抗原溶解于校准品缓冲液中配置成不同的浓度。

配制化学发光底物液：1)配制0.2M，pH值为9.3的Tris-HCl缓冲液，并添加0.3mg/mL的二氧杂环乙烷；2)将碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物溶解于缓冲液中。

一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒使用方法包括如下步骤：

(1)将待测样本或校准品、试剂R1、试剂R2 37℃混合温育15min；

(2)将磁微粒加入上述反应体系后于37℃继续温育5min；

(3)洗涤，去除未结合的抗体和杂质后加入发光底物；

(4)加入发光底物，ALP催化底物发光后测定相对发光强度(RLU)；

在一定范围内RLU与甘胆酸抗原浓度呈反比，通过内插法就可以从标准曲线上读取待测样本的甘胆酸含量。

采用本发明上述检测试剂盒测定人体甘胆酸含量时的方法学鉴定数据可达到如下指标：

灵敏度－最小检出量为0.045ng/ml；

甘胆酸线性检测范围，0～50ng/ml；

精密度－分析内精密度平均为4.17％(n＝10)，分析间精密度平均为6.06％(n＝10)，精密度远低于国家要求，说明本发明试剂盒在实验过程中具有很好的可重复性；

准确度－将已知甘胆酸浓度的血清采用去激素血清经不同比例稀释后回收率为95％～105％；

特异性－与牛黄胆酸钠、鹅脱胆酸钠、去氯胆酸钠和胆酸钠的交叉率均小于0.1％。

上述步骤表明，本发明采用的竞争法的反应模式，利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合的原理，定量检测人血清或血浆样品中的甘胆酸含量，确保了检测的灵敏度，由于实验采用竞争法不存在HOOK效应，无污染、特异性强、操作简单、并且对样品的前处理要求低、可快速高通量检测大批量样本，便于临床试剂应用。本发明为临床检测人血清中的甘胆酸提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。

附图说明

图1为本发明实施例2试剂盒中甘胆酸的浓度－发光值曲线图；

具体实施方式

测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的组成

一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液。

R1试剂包括：1)R1抗体：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体，浓度为0.3～0.6μg/mL；2)缓冲液：包括Tris，浓度为12.0～12.3g/L；叠氮钠，浓度为1.98～1.99g/L；氯化钠，浓度为5.7～5.9g/L，牛血清白蛋白，浓度为9～10g/L；8苯胺-1-萘磺酸铵盐，浓度为0.98～0.99g/L；其余为去离子水。R1试剂的缓冲液pH值为6.7～7.6。

R2试剂包括：1)R2抗体：碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原，浓度为0.3～0.6μg/ml；2)缓冲液：优选为商品化的AP Conjugate Stabilizer。R2试剂的缓冲液pH值为6.7～7.6。

磁分离试剂包括：1)磁微粒：抗异硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体包被的磁微粒，浓度为0.5～2mg/ml；2)缓冲液：包括Tris，浓度为10.5～11.3g/L；叠氮钠，浓度为1.91～1.95g/L；氯化钠，浓度为5.5～5.7g/L；摩尔浓度为1M的氯化镁溶液；摩尔浓度为0.1M的氯化锌；牛血清白蛋白，浓度为4.7～4.9g/L；特级马血清，浓度为4.8～5.0g/L，其余组分为去离子水。磁分离试剂的缓冲液pH值为7.5～9.0。

校准品液系列包括：1)甘胆酸抗原的去激素人血清；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为2g/L；硫酸庆大霉素，浓度为0.16g/L。校准品液系列的缓冲液pH值为7.6。校准品液系列为含有不同浓度(0，0.33，1.5，7.5，25，50ng/ml)的试剂系列。

底物液为摩尔浓度0.1～0.3M碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液，其中，发光底物液中二氧杂环乙烷化合物(APCL)的浓度为0.2～0.4mg/mL，缓冲液为摩尔浓度为0.2M的Tris-HCl，pH值为8～10。

一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

配制试剂R1：1)按照试剂R1缓冲液组分含量配制缓冲液，调节pH；2)制备异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体；3)将异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体用R1缓冲液进行稀释。

配制试剂R2：1)按照试剂R2缓冲液组分含量配制缓冲液，调节pH；2)制备碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原；3)将碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原用R2缓冲液进行稀释。

配制磁分离试剂：1)按照磁微粒缓冲液组分含量配制缓冲液；2)制备抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒；3)将磁微粒用缓冲液进行稀释。

配制校准品液系列：1)按照校准品缓冲液组分含量配制缓冲液；2)将不同浓度的甘胆酸抗原分别溶解于校准品缓冲液中配置成不同浓度的校准品液。

配制化学发光底物液：1)配制Tris-HCl缓冲液，并添加二氧杂环乙烷化合物(APCL)；2)将碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物溶解于缓冲液中。

人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的测定方法和绘制标准曲线

(1)首先，将50μl的校准品系列(浓度分别为0，0.33，1.5，7.5，25，50ng/ml)分别与50μl试剂R1、50μl试剂R2依次加入反应管中，37℃条件下混合温育15min；

(2)将上述试剂系列分别再与25μl磁分离试剂结合后于37℃继续温育5min；

(3)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质；

(4)加入发光底物液150μl，ALP催化底物发光后采用利德曼自研化学发光检测仪测定相对发光强度(RLU)，获得甘胆酸浓度-发光值系列数值。

(5)根据甘胆酸浓度-发光值系列数值进行拟合，获得甘胆酸浓度-发光值标准曲线。

(6)根据拟合的甘胆酸浓度-发光值标准曲线计算测定待测样本的浓度值。

在一定范围内RLU与甘胆酸抗原浓度呈反比，通过内插法就可以从标准曲线上读取待测样本的甘胆酸含量。

采用本发明上述检测试剂盒测定人体甘胆酸含量时的方法学鉴定数据可达到如下指标：

灵敏度，最小检出量为0.045ng/ml；

甘胆酸含量的线性检测范围为0～50ng/ml；

精密度，分析内精密度平均为4.17％(n＝10)，分析间精密度平均为6.06％(n＝10)，精密度远低于国家要求，说明本发明试剂盒在实验过程中具有很好的可重复性；

准确度，将已知甘胆酸浓度的血清采用去激素血清经不同比例稀释后回收率为95％～105％；

特异性，与牛黄胆酸钠、鹅脱胆酸钠、去氯胆酸钠和胆酸钠的交叉率均小于0.1％。

上述步骤表明，本发明采用的竞争法的反应模式，利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合的原理，定量检测人血清或血浆样品中的甘胆酸含量，确保了检测的灵敏度，由于实验采用竞争法不存在HOOK效应，无污染、特异性强、操作简单、并且对样品的前处理要求低、可快速高通量检测大批量样本，便于临床试剂应用。本发明为临床检测人血清中的甘胆酸提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。

实施例1一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和底物液。

本实施例中，R1试剂包括：1)R1抗体：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体，浓度为0.3μg/ml；2)缓冲液：Tris，浓度为12.04g/L；叠氮钠，浓度为1.987g/L；氯化钠，浓度为5.79g/L，牛血清白蛋白，浓度为9.86g/L；8苯胺-1-萘磺酸铵盐，浓度为0.986g/L；其余为去离子水。R1试剂的缓冲液pH值优选为7.0。

本实施例中，R2试剂包括：1)R2抗体：碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原，浓度为0.5μg/ml；2)缓冲液：为商品化的AP Conjugate Stabilizer。R2试剂的缓冲液pH值为6.8。

本实施例中，磁分离试剂包括：1)磁微粒：抗异硫氰酸荧光素(FITC)单克隆抗体包被的磁微粒，浓度为1mg/ml；2)缓冲液：Tris，浓度为11.08g/L；叠氮钠，浓度为1.917g/L；氯化钠，浓度为5.56g/L；摩尔浓度为1M的氯化镁溶液；摩尔浓度为0.1M的氯化锌；牛血清白蛋白，浓度为4.81g/L；特级马血清，浓度为4.91g/L，其余组分为去离子水。磁分离试剂的缓冲液pH值为8.0。

本实施例中，校准品液系列包括：1)甘胆酸抗原的去激素人血清；2)缓冲液：包括叠氮钠，浓度为2g/L；硫酸庆大霉素，浓度为0.16g/L。校准品液系列的缓冲液pH值为7.6。校准品系列为含有不同浓度(0，0.33，1.5，7.5，25，50ng/ml)实际系列。

本实施例中，底物液为碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液，其中，发光底物液中二氧杂环乙烷化合物(APCL)的浓度为0.3mg/mL，缓冲液为摩尔浓度为0.2M的Tris-HCl，pH值为9.3。

实施例2测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒的制备和测定方法

(1)首先，将实施例1的50μl的校准品系列(浓度分别为0，0.33，1.5，7.5，25，50ng/ml)分别与实施例1的50μl试剂R1、50μl试剂R2依次加入反应管中，37℃条件下混合温育15min；

(2)将上述试剂系列分别再与实施例1的25μl磁分离试剂结合后于37℃继续温育5min；

(3)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质；

(4)加入实施例1的发光底物液150μl，ALP催化底物发光后采用利德曼自研化学发光检测仪测定相对发光强度(RLU)，结果如下表所示：

表1

校准品(ng/ml)	0	0.33	1.5	7.5	25	50
							RLU(100000)	35	25	12.5	2	0.2	0.05

(5)根据表1的数值进行拟合，获得图1所示的甘胆酸浓度-发光值标准曲线。

(6)将50μl的待测样品与实施例1的50μl试剂R1、50μl试剂R2依次加入反应管中，37℃条件下混合温育15min；

(7)将上述试剂再与实施例1的25μl磁分离试剂结合后于37℃继续温育5min；

(8)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质；

(9)加入实施例1的发光底物液150μl，ALP催化底物发光后采用利德曼自研化学发光检测仪测定相对发光强度RLU为500000；

(10)根据步骤(5)的甘胆酸浓度-发光值标准曲线计算待测样品500000对应的甘胆酸浓度值为5ng/ml。

本发明提供的人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒可以与全自动化学发光分析仪联用，操作步骤极大简化，加大了检测速度和检测通量，提高了检测效率，同时避免了人为操作导致的误差。

所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本发明的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (12)

1.一种检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，包括：R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；

R1试剂为异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸-BSA单克隆抗体稀释液，R2试剂为碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒稀释剂，校准品液系列为含有不同浓度甘胆酸抗原的稀释液，化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液。

2.根据权利要求1所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R1试剂即异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸单克隆抗体稀释液是浓度为0.3～0.6μg/mL的异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸单克隆抗体经缓冲液稀释配成。

3.根据权利要求2所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R1试剂缓冲液pH值为6.7～7.6，缓冲液包括Tris，浓度为12.0～12.3g/L；叠氮钠，浓度为1.98～1.99g/L；氯化钠，浓度为5.7～5.9g/L，牛血清白蛋白，浓度为9～10g/L；8苯胺-1-萘磺酸铵盐，浓度为0.98～0.99g/L；其余为去离子水。

4.根据权利要求1所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原稀释液是由浓度为0.3～0.6μg/mL碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原经缓冲液稀释而成。

5.根据权利要求4所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述R2试剂缓冲液为商品化的AP Conjugate Stabilizer，pH值为6.7～7.6。

6.根据权利要求1所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒悬浮于缓冲液配制成浓度为0.5～2mg/mL的磁微粒溶液。

7.根据权利要求6所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述磁分离试剂缓冲液pH值为7.5～9.0，缓冲液组分包括Tris，浓度为10.5～11.3g/L；叠氮钠，浓度为1.91～1.95g/L；氯化钠，浓度为5.5～5.7g/L；摩尔浓度为1M的氯化镁溶液；摩尔浓度为0.1M的氯化锌；牛血清白蛋白，浓度为4.7～4.9g/L；特级马血清，浓度为4.8～5.0g/L，其余组分为去离子水。

8.根据权利要求1所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列为含有不同浓度甘胆酸抗原的去激素人血清稀释液。

9.根据权利要求8所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列的缓冲液包括叠氮钠，浓度为2g/L；硫酸庆大霉素，浓度为0.16g/L；其余均为商品化的去激素人血清。

10.根据权利要求9所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列，浓度范围为0～50ng/mL，缓冲液pH值为7.6。

11.根据权利要求10所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品液系列的不同浓度为0ng/ml、0.33ng/ml、1.5ng/ml、7.5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml。

12.根据权利要求1所述的检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液是摩尔浓度0.1～0.3M的碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液，pH值为8～10的摩尔浓度0.2M的Tris-HCl缓冲液，并含有0.2～0.4mg/mL的二氧杂环乙烷化合物(APCL)。