CN106841596A - 一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒及其应用方法 - Google Patents
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Abstract
一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，包括甘胆酸试剂R1、甘胆酸试剂R2和甘胆酸标准品，该种检测过程使用了竞争法，从而也就控制了试液浑浊度变化在较高的范围中，这样即可以使普通的分析仪器进行检测，又有利于保证仪器的精准度。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测领域，特别涉及一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒及其应用方法。
背景技术
血清甘胆酸(CG)是胆酸与甘氨酸结合二次的结合型胆酸之一，在肝细胞内，胆固醇经过期极其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。
甘胆酸(CG)正常代谢途径为肠-肝循环，CG正常代谢途径为肠-肝循环，由肝细胞合成，经毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆汁进入十二指肠，帮助食物消化。95％胆酸在回肠末端重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用。在血清中主要以蛋白结合形式存在，溢入体循环的总量小于1％。在正常情况下，外周血中胆酸含量甚微，血清CG浓度稳定在较低水平。
并且，甘胆酸是肝脏分泌到胆汁中最大量的有机酸，肝细胞能高效能地从门静脉摄取大量的甘胆酸。重吸收的甘胆酸又进入肝肠循环，通过这种机制，机体能充分利用甘胆酸。为此，一旦肝细胞病变，血中的甘胆酸浓度会升高，其中急性肝炎、慢性肝炎轻度升高，肝硬变，肝癌病人显著升高。
当肝细胞受损时，肝细胞摄取CG能力下降，致使血中CG含量增高；胆汁郁滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍，而返流血液循环的CG含量增高，也使血CG含量增高。因此，测定血清甘胆酸(CG)是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一。
目前已知的甘胆酸测定方法有放射免疫法(RIA)、化学发光法、酶联免疫吸附法(ELISA)法、免疫均相分析法、直接免疫比浊法等。
虽然，放射免疫分析法的精准度高，但是，其步骤繁琐，试剂价格和仪器昂贵，且存在放射性污染。酶联免疫吸附法存在检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要。免疫均相分析法试剂操作简单、快速，但稳定性差，灵敏度不高。胶乳增强免疫比浊法具有操作简单、快速，可适用于自动化分析仪等优点。
其中，现有的胶乳增强免疫比浊法也就是直接免疫比浊法工艺简单、快速，但对低浓度样品和小分子抗原灵敏度比较低。因此，提高乳胶增强免疫比浊法的灵敏度及试剂稳定性，使其应用于大型生化分析仪，适合于临床样本批量检测，是十分重要的，也将为临床肝病的诊断及判断提供强有力的支持。
发明内容
本发明的目的在于提供一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒及其应用方法，其能够提高普通检测仪器的灵敏度，从而既节省了成本，也提高了检测效率。
本发明的上述目的是通过以下技术方案得以实现的：一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，包括甘胆酸试剂R1、甘胆酸试剂R2和甘胆酸标准品，其中，
甘胆酸试剂R1包括MEC缓冲液50～175mmol/L，牛血清蛋白0.1～2g/L，NaCl电解液100～200mmol/L，Pro-Clin3000.05～0.8g/L，乙二胺四乙酸二钠3mmol/L，叠氮钠0.6g/L，人工合成的甘胆酸0.05～1.5mg/L；
甘胆酸试剂R2的配制步骤：
S1、取5ml的包被缓冲液，加入80ul的80～300nm羧基胶乳微球，再加入50ul的20mg/mlCG抗体，37度反应1小时；
S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述S1的反应液中，继续反应1小时；
S3、反应结束后，用超声粉碎；
S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去上清等体积的偶联缓冲液，再加入400ul的封闭缓冲液，37度反应1小时；
S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；
S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去的上清等体积的存储缓冲液；
S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的胶乳微球，即为甘胆酸试剂R2。
甘胆酸标准品包括MEC缓冲液100mmol/L、牛血清蛋白1.5g/L、乙二胺四乙酸二钠3mmol/L、NaCl电解质166mmol/L和Pro-Clin3000.5g/L并向上述配置的缓冲液中加入不同量的人源性甘胆酸得到浓度分别为0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一组标准品。
优选的，所述甘胆酸试剂R1包括MEC缓冲液100mmol/L，牛血清蛋白1.2g/L，NaCl电解液150mmol/L，Pro-Clin300 0.3g/L，乙二胺四乙酸二钠3mmol/L，叠氮钠0.6g/L，人工合成的甘胆酸1mg/L；
甘胆酸试剂R2的配制步骤：
S1、取5ml的包被缓冲液，加入80ul的200nm羧基胶乳微球，再加入50ul的20mg/mlCG抗体，37度反应1小时；
S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述S1的反应液中，继续反应1小时；
S3、反应结束后，用超声粉碎；
S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去上清等体积的偶联缓冲液，再加入400ul的封闭缓冲液，37度反应1小时；
S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；
S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去的上清等体积的存储缓冲液；
S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的胶乳微球，即为甘胆酸试剂R2。
通过采用上述技术方案，甘胆酸试剂R1中的乙二胺四乙酸二钠和叠氮钠均是一种防腐剂，从而有利于延长牛血清蛋白的保存时间，同时，乙二胺四乙酸二钠也是一种配合剂，其能够与重金属发生络合反应，从而屏蔽了重金属对试验结果的干扰，有利于提高检测的准确性。而甘胆酸试剂R2在配制的过程中利用超声的方式来进行处理，这样能够更好的实现液体的分层，从而更容易实现上清和沉淀的分离。
优选的，所述包被缓冲液为20mmol/L的MES，且PH为6.0。
优选的，所述偶联缓冲液为20mmol/L的HEPES，且PH为7.5。
优选的，所述封闭缓冲液为质量分数为5％的BSA。
优选的，所述存储缓冲液为50mmol/L的Tris，其PH为9.0，并且含有质量分数为5％甘油。
通过采用上述技术方案，在存储缓冲液中加入少量的甘油，其能够对甘胆酸试剂R2起到保温、保湿、润滑和缓冲的作用，从而也就延长了甘胆酸试剂R2的保存时间。
一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒的应用方法，其包括以下步骤：
A1、量取100ulR2试剂；
A2、量取400ulR1试剂；
A3、向R2试剂中放入3ul甘胆酸标准品，于37度反应5分钟；
A4、加入R1试剂，混匀，于37度继续反应5分钟；
A5、在600nm波长下反应，用全自动生化分析仪进行检测，从而进行校准；
A6、重复上述A1～A5的操作步骤对样品进行检测。
通过采用上述技术方案，利用直接竞争法能够保证试液的浑浊度在高浓度的范围内发生变化，这样有利于普通的分析设备对试液进行检测，从而既简化的检测的步骤、降低了成本，同时也能够保证精准度。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
1、在甘胆酸试剂R1中加入乙二胺四乙酸二钠，这样能够有效地屏蔽重金属对试液的干扰，同时也能够提高牛血清蛋白的防腐能力，从而有利于延长甘胆酸试剂R1的保存时间；
2、利用甘胆酸试剂R1和样品混合之后再加入到甘胆酸试剂R2中进行并利用直接竞争法使得混合反应后的试剂浑浊度控制在较高的浓度范围，从而有利于普通分析仪器的检测，这样即简化了检测步骤，又保证了检测的准确性。
附图说明
图1为试剂盒一和放射免疫分析检测法之间的关系图；
图2为传统的胶乳增强免疫试剂盒和放射免疫分析检测法之间的关系图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
实施例一：
甘胆酸试剂R1：
用纯化水800ml将上述原料溶解后，再补加纯化水定容至1000ml，然后用盐酸和氢氧化钠调pH至6.0。
甘胆酸试剂R2：
1.羧基胶乳微球：200nm的胶乳微球
2.CG抗体浓度：以20mg/ml为例进行偶联
S1、取5ml的包被缓冲液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基胶乳微球，再加入50ul的CG抗体(兔抗人甘胆酸抗体)，37度反应1小时；
S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述S1的反应液中，继续反应1小时；
S3、反应结束后，用超声粉碎；
S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去上清等体积的偶联缓冲液(20mmol/L的HEPES，PH7.5)，再加入400ul的封闭缓冲液(质量分数为5％的BSA)，37度反应1小时；
S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；
S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去的上清等体积的存储缓冲液(50mmol/L的Tris，PH9.0，且含有质量分数为5％甘油)；
S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的胶乳微球，即为R2试剂。
甘胆酸标准品：
并向上述配置的缓冲液中加入不同量的人源性甘胆酸(纯品)得到浓度分别为0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一组标准品。
实施例二：
甘胆酸试剂R1：
用纯化水800ml将上述原料溶解后，再补加纯化水定容至1000ml，然后用盐酸或氢氧化钠调pH至6.0。
甘胆酸试剂R2：
1.羧基胶乳微球：300nm的胶乳微球
2.CG抗体浓度：以20mg/ml为例进行偶联
S1、取5ml的包被缓冲液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基胶乳微球，再加入50ul的CG抗体(兔抗人甘胆酸抗体)，37度反应1小时；
S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述反应液中，继续反应1小时；
S3、反应结束后，用超声粉碎；
S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去上清等体积的偶联缓冲液(20mmol/L的HEPES，PH7.5)，再加入400ul的封闭缓冲液(质量分数为5％的BSA)，37度反应1小时；
S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；
S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去的上清等体积的存储缓冲液(50mmol/L的Tris，PH9.0，且含有质量分数为5％甘油)；
S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的羧基胶乳微球，即为R2试剂。
甘胆酸标准品：
并向上述配置的缓冲液中加入不同量的人源性甘胆酸(纯品)得到浓度分别为0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一组标准品。
实施例三：
甘胆酸试剂R1：
用纯化水800ml将上述原料溶解后，再补加纯化水定容至1000ml，然后用盐酸或氢氧化钠调pH至6.0。
甘胆酸试剂R2：
1.羧基胶乳微球：150nm的胶乳微球
2.CG抗体浓度：以20mg/ml为例进行偶联
S1、取5ml的包被缓冲液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基胶乳微球，再加入50ul的CG抗体(鸡抗人甘胆酸抗体)，37度反应1小时；
S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述反应液中，继续反应1小时；
S3、反应结束后，用超声粉碎；
S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入等体积的偶联缓冲液，再加入400ul的封闭缓冲液，37度反应1小时；
S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；
S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入等体积的存储缓冲液；S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的胶乳微球，即为R2试剂。
甘胆酸标准品：
向上述缓冲液中加入不同量的人源性甘胆酸(纯品)得到浓度分别为0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一组标准品。
实施例四：
甘胆酸试剂R1：
用纯化水800ml将上述原料溶解后，再补加纯化水定容至1000ml，然后用盐酸或氢氧化钠调pH至6.0。
甘胆酸试剂R2：
1.羧基胶乳微球：220nm的胶乳微球
2.CG抗体浓度：以20mg/ml为例进行偶联
S1、取5ml的包被缓冲液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基胶乳微球，再加入50ul的CG抗体(兔抗人甘胆酸抗体)，37度反应1小时；
S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述S1的反应液中，继续反应1小时；
S3、反应结束后，用超声粉碎；
S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去上清等体积的偶联缓冲液(20mmol/L的HEPES，PH7.5)，再加入400ul的封闭缓冲液(质量分数为5％的BSA)，37度反应1小时；
S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；
S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去的上清等体积的存储缓冲液(50mmol/L的Tris，PH9.0，且含有质量分数为5％甘油)；
S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的胶乳微球，即为R2试剂。
甘胆酸标准品：
并向上述配置的缓冲液中加入不同量的人源性甘胆酸(纯品)得到浓度分别为0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一组标准品。
实施例五：
甘胆酸试剂R1：
用纯化水800ml将上述原料溶解后，再补加纯化水定容至1000ml，然后用盐酸或氢氧化钠调pH至6.0。
甘胆酸试剂R2：
1.羧基胶乳微球：80nm的胶乳微球
2.CG抗体浓度：以20mg/ml为例进行偶联
S1、取5ml的包被缓冲液(20mmol/L的MES，PH6.0)，加入80ul的羧基胶乳微球，再加入50ul的CG抗体(兔抗人甘胆酸抗体)，37度反应1小时；
S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述S1的反应液中，继续反应1小时；
S3、反应结束后，用超声粉碎；
S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去上清等体积的偶联缓冲液(20mmol/L的HEPES，PH7.5)，再加入400ul的封闭缓冲液(质量分数为5％的BSA)，37度反应1小时；
S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；
S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去的上清等体积的存储缓冲液(50mmol/L的Tris，PH9.0，且含有质量分数为5％甘油)；
S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的胶乳微球，即为R2试剂。
甘胆酸标准品：
并向上述配置的缓冲液中加入不同量的人源性甘胆酸(纯品)得到浓度分别为0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一组标准品。
试剂盒的测定方法：
分析方法：竞争抑制法
反应方向：下降反应
校准方式：logit-log(4p)
测定波长：600nm
测定温度：37℃
操作步骤：
A1、取100ul(或者1份)R2试剂；
A2、取400ul(或者4份)R1试剂；
A3、将R1试剂中放入3ul样本或者甘胆酸标准品，于37度反应5分钟；
A4、加入R2试剂，混匀，于37度继续反应5分钟；
A5、在600nm波长下反应，用日立7020全自动生化分析仪进行检测，校准品浓度分别为：0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml。
一、试剂盒性能评价试验：
1.准确度
取具有溯源性的血清低值质控品和高值质控品各一份，其中低值质控品的浓度为3.0mg/L，高值质控品的浓度为10.0mg/L，用实施例1-5的试剂盒、试剂盒A(市面上销售的安徽大干生物工程有限公司基于直接法生产的甘胆酸测定试剂盒)以及试剂盒B(市面销售的宁波瑞源生物科技有限公司基于均相免疫法生产的甘胆酸测定试剂盒)各进行检测十次，求均值，分别获得表一和表二的数据(单位为mg/L)，并与质控靶值进行对照。结果显示实施例一至实施例五的试剂盒反应体系的具有良好的准确性，可靠性较好；多次检测结果误差较小，说明试剂盒具有良好的稳定性，其中实施例一的准确度和精确度相对较高，而且，每一组实施例的变异系数都在10％内，从而也就说明，本发明的试剂盒能够满足一般情况下的血液中甘胆酸的测试，而市售的试剂盒A和试剂盒B的准确度与精确度要明显低于本发明的试剂盒。
表一
表二
该发明的反应原理是：本发明采用竞争胶乳增强免疫比浊法，R1试剂里的甘胆酸与样本中相应的甘胆酸抗原，可以和包被了高特异性抗体的胶乳颗粒发生特异性结合，形成不溶性的抗原-抗体-胶乳颗粒复合物，产生一定的浊度，其浊度的高低与样本中的甘胆酸浓度成正比，在一定波长下进行浊度测定，即可测定样本中被检测甘胆酸的含量。其中，R1试剂里的甘胆酸为人工合成的甘胆酸，该人工合成的甘胆酸是由sigmaalderich公司提供的，其含有多个抗体靶位，可以和多个抗体进行结合形成铰链结构。形成铰链结构的抗原抗体结合物体积增大，形成乳浊。而样本中的甘胆酸抗原只有一个靶位可以和抗体结合，即只能结合一个抗体，无法形成铰链，并且样品中的甘胆酸可以和R1试剂中的甘胆酸竞争结合抗体。所以，样本里面的甘胆酸越多，形成铰链越小，浊度越少。因此，当样本中的甘胆酸含量较低时，反应液的浊度很高，不会出现像现有的胶乳增强免疫比浊法(直接免疫比浊法)那样由于浊度太低无法用普通的检测仪器进行检测或检测不准的问题。从而大大提高试剂盒的检测灵敏度。
二、样本检测和产品比较：
应用例A
用本发明实施例一中的试剂盒一和传统的胶乳增强免疫试剂盒(试剂盒A)检测30个样本，并获得表三的数据。然后分别比较和放射免疫分析检测法的相关性，并获得图1和图2。结果显示，本发明实施例一的试剂盒一的检测结果与放射免疫分析法检测结果相关性较好，如图1所示，相关系数为0.997，线性方程为y＝0.9466x-0.029。
由图表结果显示，对于其中高浓度和低浓度的样品的检测与放射免疫分析检测法相接近，而市售的现有的胶乳增强免疫试剂盒检测对于低浓度数值样品的检测与放射免疫分析检测法相差较大。
应用例B
选取30名经医院诊断肝功能正常但有高血压、高血脂、高血糖中一种或多种症状的志愿者的血清样品，然后分别比较本发明实施例1的试剂盒一、试剂盒A(市面上销售的安徽大干生物工程有限公司基于直接法生产的甘胆酸测定试剂盒)以及试剂盒B(市面销售的宁波瑞源生物科技有限公司基于均相免疫法生产的甘胆酸测定试剂盒)的检测结果，检测结果见下表：肝功能正常人血清中甘胆酸的浓度范围在0.4-2.98mg/L，而肝炎的最低下限浓度为3.18mg/L。由下表结果可以看出30例肝功能正常但有不同程度三高的患者，试剂盒一检测结果与医院诊断结果相同，检测结果未出现肝功能异常者，说明本发明是试剂盒一的检测准确度不受患者血液中高浓度甘油三酯、胆固醇、血糖等三高检测指标的影响。而试剂盒A却检测出4例肝功能异常的结果，假阳性率为10％，试剂盒B检测出3例肝功能异常的结果，假阳性率为6.7％，说明这两种试剂盒，也就是目前常用的传统胶乳增强免疫比浊法(直接法)和免疫均相法检测三高患者时容易受到血液中三高指标物质的影响出现假阳性，而本发明的采用间接法原理制备的试剂盒检测结果稳定，检测三高患者，不易出现假阳性。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (7)
1.一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，包括甘胆酸试剂R1、甘胆酸试剂R2和甘胆酸标准品，其中，
甘胆酸试剂R1包括MEC缓冲液50～175mmol/L，牛血清蛋白0.1～2g/L，NaCl电解液100～200mmol/L，Pro-Clin3000.05～0.8g/L，乙二胺四乙酸二钠3mmol/L，叠氮钠0.6g/L，人工合成的甘胆酸0.05～1.5mg/L；
甘胆酸试剂R2的配制步骤：
S1、取5ml的包被缓冲液，加入80ul的80～300nm羧基胶乳微球，再加入50ul的20mg/mlCG抗体，37度反应1小时；
S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述S1的反应液中，继续反应1小时；
S3、反应结束后，用超声粉碎；
S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去上清等体积的偶联缓冲液，再加入400ul的封闭缓冲液，37度反应1小时；
S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；
S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去的上清等体积的存储缓冲液；
S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的胶乳微球，即为甘胆酸试剂R2；
甘胆酸标准品包括MEC缓冲液100mmol/L、牛血清蛋白1.5g/L、乙二胺四乙酸二钠3mmol/L、NaCl电解质166mmol/L和Pro-Clin300 0.5g/L并向上述配置的缓冲液中加入不同量的人源性甘胆酸得到浓度分别为0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一组标准品。
2.根据权利要求1所述的一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，其特征是：所述甘胆酸试剂R1包括MEC缓冲液100mmol/L，牛血清蛋白1.2g/L，NaCl电解液150mmol/L，Pro-Clin3000.3g/L，乙二胺四乙酸二钠3mmol/L，叠氮钠0.6g/L，人工合成的甘胆酸1mg/L；甘胆酸试剂R2的配制步骤：
S1、取5ml的包被缓冲液，加入80ul的200nm羧基胶乳微球，再加入50ul的20mg/mlCG抗体，37度反应1小时；
S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述S1的反应液中，继续反应1小时；
S3、反应结束后，用超声粉碎；
S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去上清等体积的偶联缓冲液，再加入400ul的封闭缓冲液，37度反应1小时；
S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；
S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去的上清等体积的存储缓冲液；
S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的胶乳微球，即为甘胆酸试剂R2。
3.根据权利要求1或2所述的一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，其特征是：所述包被缓冲液为20mmol/L的MES，且PH为6.0。
4.根据权利要求1或2所述的一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，其特征是：所述偶联缓冲液为20mmol/L的HEPES，且PH为7.5。
5.根据权利要求1或2所述的一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，其特征是：所述封闭缓冲液为质量分数为5％的BSA。
6.根据权利要求1或2所述的一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，其特征是：所述存储缓冲液为50mmol/L的Tris，其PH为9.0，并且含有质量分数为5％甘油。
7.如权利要求1至6中任意一项权利要求所述的一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒的应用方法，其包括以下步骤：
A1、量取100ulR2试剂；
A2、量取400ulR1试剂；
A3、向R1试剂中放入3ul甘胆酸标准品，于37度反应5分钟；
A4、加入R2试剂，混匀，于37度继续反应5分钟；
A5、在600nm波长下反应，用全自动生化分析仪进行检测，从而进行校准；
A6、重复上述A1～A5的操作步骤对样品进行检测。
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