CN109512893A - 间充质干细胞及其注射液和组合物在高尿酸血症中的应用 - Google Patents

间充质干细胞及其注射液和组合物在高尿酸血症中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了间充质干细胞及其注射液和组合物在高尿酸血症中的应用，试验证实，间充质干细胞、间充质干细胞注射剂或含有间充质干细胞的组合物对高尿酸血症具有显著的治疗效果。

Description

间充质干细胞及其注射液和组合物在高尿酸血症中的应用
技术领域
本发明涉及干细胞应用技术领域，特别涉及间充质干细胞及其注射液和组合物在高尿酸血症中的应用。
背景技术
高尿酸血症，又名痛风，是一种由于嘌呤生物合成代谢增加、尿酸产生过多或因尿酸排泄不良而致血中尿酸升高、尿酸盐结晶沉积在关节滑膜、滑囊、软骨及其他组织中引起的反复发作性炎性疾病，临床表现为急性关节炎、痛风石和间质性肾炎等，严重者见关节畸形及功能障碍，常伴尿酸性尿路结石；高尿酸血症的治疗方法纷杂，但治疗效果均不够理想。因此，寻找一种高效的抗高尿酸血症的新药物十分必要。
间充质干细胞的临床研究已经在许多国家开展，研究发现，除了用来促进恢复造血、与造血干细胞共同抑制白血病和难治性贫血等以外，还可用于心脑血管疾病、肝硬化、骨和肌肉衰退性疾病、脑和脊髓神经损伤、老年痴呆及红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，但是现有技术并没有公开间充质干细胞在治疗高尿酸血症上的用途。
发明内容
本发明提供了间充质干细胞、其制剂或含有间充质干细胞的组合物在制备治疗高尿酸血症的药物中的应用。
进一步的改进，间充质干细胞从胎盘上分离培养获得。
进一步的改进，间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.2-0.4g放置于离心管内，在该离心管内加入体积比为1:4-6的0.1％胰蛋白酶和0.25％Ⅳ型胶原酶共15mL，在6-8℃条件下冷消化10-12h，再加入8-10mL的0.25％透明质酸酶，置于32-36℃摇床中消化5-7h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心4-6min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入α-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充α-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞。
其中，α-MEM培养基包含：200.00mg/L的无水氯化钙、98.00mg/L的无水硫酸镁、400.00mg/L的氯化钾、6800.00mg/L的氯化钠、121.70mg/L的无水磷酸二氢钠、1000.00mg/L的葡萄糖和10.00mg/L的酚红钠、110.00mg/L的丙酮酸钠、25.00mg/L的丙氨酸、127.00mg/L的L-盐酸精氨酸、50.00mg/L的L-天门冬酰胺、31.00mg/L的L-盐酸半胱氨酸、100.00mg/L的L-盐酸胱氨酸、292.00mg/L的L-谷氨酰胺、75.00mg/L的L-谷氨酸、50.00mg/L的甘氨酸、42.00mg/L的L-盐酸组氨酸、52.00mg/L的L-异亮氨酸、52.00mg/L的L-亮氨酸、73.00mg/L的L-盐酸赖氨酸、15.00mg/L的L-甲硫氨酸、32.00mg/L的L-苯丙氨酸、40.00mg/L的L-脯氨酸、25.00mg/L的L-丝氨酸、48.00mg/L的L-苏氨酸、18.00mg/L的L-色氨酸、52.00mg/L的L-酪氨酸二钠盐、46.00mg/L的L-缬氨酸、0.20mg/L的亚油酸、50.00mg/L的抗坏血酸、0.10mg/L的生物素、1.00mg/L的D-泛酸钙、1.00mg/L的叶酸、2.00mg/L的肌醇、1.00mg/L的烟酰胺、1.00mg/L的氯化胆碱、1.00mg/L的盐酸吡哆辛、0.10mg/L的核黄素、1.00mg/L的盐酸硫胺、1.40mg/L的维生素B12。
进一步的改进，步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔2-3天对α-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，将换成二代培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞。
进一步的改进，二代培养基以α-MEM培养基为基础，包含以下浓度组分：10-20ng/mLⅠ型鼠尾胶原、30-40ng/mL的β-巯基乙醇和5-7ng/mL的蚕豆蛋白。
本发明通过以上方法分离培养获得的间充质干细胞，能够进一步地提高间充质干细胞治疗高尿酸血症的作用。
进一步的改进，含有间充质干细胞的组合物包括浓度为6-8×106个/mL的间充质干细胞和浓度为60-80ng/mL的中药提取物，所述中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
胖大海 10-20 柿蒂 2-6
洪连 6-10 禹州漏芦 10-16。
进一步的改进，中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
胖大海 15 柿蒂 4
洪连 8 禹州漏芦 13。
其中，浓度为6-8×106个/mL的间充质干细胞和浓度为60-80ng/mL的中药提取物指的分别是间充质干细胞和中药提取物在生理盐水中的浓度；本发明通过在间充质干细胞的基础上添加中药提取物，能够显著地提高间充质干细胞对高尿酸血症的治疗作用。
进一步的改进，中药提取物由如下方法制备而成：
取配方量的胖大海、柿蒂、洪连和禹州漏芦，烘干、粉碎，过60目筛，用100℃的水提取3次，每次20-30min，胖大海、柿蒂、洪连和禹州漏芦的总重量与水的固液比为1:10-16，合并各次滤液，用旋转蒸发仪50-60℃条件下真空浓缩至原体积的1/5-1/4，向浓缩液中加Sevage试剂混合，浓缩液与Sevage试剂的体积比为5:1，震荡，放置于离心机中以2000-3000r/min的速度离心6-8min，取上清液，加入3倍上清液体积的90％浓度的乙醇沉淀8-10h，以3000-4000r/min的速度离心5min，将沉淀用无水乙醇洗涤2次，放置于50-60℃的烘箱中干燥至粉末，即得中药提取物。
其中，固液比是指某物质的重量g与液体的体积mL的比。
通过以上制备方法制备的中药提取物，能够提高有效成分的含量，去除对治疗高尿酸血症无治疗作用的成分，达到增效减毒的作用。
进一步的改进，制剂为注射剂，所述注射剂主要由间充质干细胞和药用辅料制备而成，所述药用辅料包括重量份数为100-120份的生理盐水和0.2-0.4份的助溶稀释剂，所述助溶稀释剂包括重量份数比为1-2:3-6的二乙基乙酰胺和苯甲酸苄酯，所述间充质干细胞在生理盐水中的体积浓度为6-10×105个/mL。
本发明提供了间充质干细胞、其制剂或含有间充质干细胞的组合物在制备治疗高尿酸血症的药物中的应用，试验证实，间充质干细胞、间充质干细胞注射剂或含有间充质干细胞的组合物对高尿酸血症具有显著的治疗效果。
具体实施方式
实施例1
一种间充质干细胞，该间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.2放置于离心管内，在该离心管内加入体积比为1:4的0.1％胰蛋白酶和0.25％Ⅳ型胶原酶共15mL，在6℃条件下冷消化10h，再加入8mL的0.25％透明质酸酶，置于32℃摇床中消化5h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心4min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入α-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充α-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞；
其中，所述步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔2天对α-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，将换成二代培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞；
其中，所述二代培养基以α-MEM培养基为基础，包含以下浓度组分：10ng/mLⅠ型鼠尾胶原、30ng/mL的β-巯基乙醇和5ng/mL的蚕豆蛋白。
实施例2
一种间充质干细胞，该间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.3g放置于离心管内，在该离心管内加入体积比为1:5的0.1％胰蛋白酶和0.25％Ⅳ型胶原酶共15mL，在7℃条件下冷消化11h，再加入9mL的0.25％透明质酸酶，置于34℃摇床中消化6h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心5min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入α-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充α-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞；
其中，所述步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔2.5天对α-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，将换成二代培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞；
其中，所述二代培养基以α-MEM培养基为基础，包含以下浓度组分：15ng/mLⅠ型鼠尾胶原、35ng/mL的β-巯基乙醇和6ng/mL的蚕豆蛋白。
实施例3
一种间充质干细胞，该间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.4g放置于离心管内，在该离心管内加入体积比为1:6的0.1％胰蛋白酶和0.25％Ⅳ型胶原酶共15mL，在8℃条件下冷消化12h，再加入10mL的0.25％透明质酸酶，置于36℃摇床中消化7h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心6min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入α-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充α-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞；
其中，所述步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔3天对α-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，将换成二代培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞；
其中，所述二代培养基以α-MEM培养基为基础，包含以下浓度组分：15ng/mLⅠ型鼠尾胶原、35ng/mL的β-巯基乙醇和6ng/mL的蚕豆蛋白。
实施例4
一种含有间充质干细胞的组合物，该含有间充质干细胞的组合物包括浓度为6×106个/mL的间充质干细胞和浓度为60ng/mL的中药提取物，所述中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
胖大海 10 柿蒂 2
洪连 6 禹州漏芦 10；
其中，间充质干细胞采用实施例2的方法分离培养获得。
实施例5
一种含有间充质干细胞的组合物，该含有间充质干细胞的组合物包括浓度为7×106个/mL的间充质干细胞和浓度为70ng/mL的中药提取物，所述中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
胖大海 15 柿蒂 4
洪连 8 禹州漏芦 13；
所述中药提取物由如下方法制备而成：
取配方量的胖大海、柿蒂、洪连和禹州漏芦，烘干、粉碎，过60目筛，用100℃的水提取3次，每次20min，胖大海、柿蒂、洪连和禹州漏芦的总重量与水的固液比为1:10，合并各次滤液，用旋转蒸发仪50℃条件下真空浓缩至原体积的1/5，向浓缩液中加Sevage试剂混合，浓缩液与Sevage试剂的体积比为5:1，震荡，放置于离心机中以2000r/min的速度离心6min，取上清液，加入3倍上清液体积的90％浓度的乙醇沉淀8h，以3000r/min的速度离心5min，将沉淀用无水乙醇洗涤2次，放置于50℃的烘箱中干燥至粉末，即得中药提取物；
其中，间充质干细胞采用实施例2的方法分离培养获得。
实施例6
一种含有间充质干细胞的组合物，该含有间充质干细胞的组合物包括浓度为8×106个/mL的间充质干细胞和浓度为80ng/mL的中药提取物，所述中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
胖大海 20 柿蒂 6
洪连 10 禹州漏芦 16；
所述中药提取物由如下方法制备而成：
取配方量的胖大海、柿蒂、洪连和禹州漏芦，烘干、粉碎，过60目筛，用100℃的水提取3次，每次30min，胖大海、柿蒂、洪连和禹州漏芦的总重量与水的固液比为1:16，合并各次滤液，用旋转蒸发仪60℃条件下真空浓缩至原体积的1/4，向浓缩液中加Sevage试剂混合，浓缩液与Sevage试剂的体积比为5:1，震荡，放置于离心机中以3000r/min的速度离心8min，取上清液，加入3倍上清液体积的90％浓度的乙醇沉淀10h，以4000r/min的速度离心5min，将沉淀用无水乙醇洗涤2次，放置于60℃的烘箱中干燥至粉末，即得中药提取物；
其中，间充质干细胞采用实施例2的方法分离培养获得。
实施例7
一种注射剂，所述注射剂由间充质干细胞和药用辅料制备而成，所述药用辅料包括重量份数为100份的生理盐水和0.2份的助溶稀释剂，所述助溶稀释剂包括重量份数比为2:3的二乙基乙酰胺和苯甲酸苄酯，所述间充质干细胞在生理盐水中的体积浓度为6×105个/mL；
其中，间充质干细胞采用实施例2的方法分离培养获得。
实施例8
一种注射剂，所述注射剂由间充质干细胞和药用辅料制备而成，所述药用辅料包括重量份数为110份的生理盐水和0.3份的助溶稀释剂，所述助溶稀释剂包括重量份数比为1:3的二乙基乙酰胺和苯甲酸苄酯，所述间充质干细胞在生理盐水中的体积浓度为8×105个/mL；
其中，间充质干细胞采用实施例2的方法分离培养获得。
实施例9
一种注射剂，所述注射剂由间充质干细胞和药用辅料制备而成，所述药用辅料包括重量份数为120份的生理盐水和0.4份的助溶稀释剂，所述助溶稀释剂包括重量份数比为1:3的二乙基乙酰胺和苯甲酸苄酯，所述间充质干细胞在生理盐水中的体积浓度为10×105个/mL；
其中，间充质干细胞采用实施例2的方法分离培养获得。
对照例1
一种间充质干细胞，该间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.3g放置于离心管内，在该离心管内加入15mL的0.25％Ⅳ型胶原酶，在7℃条件下冷消化11h，再加入9mL的0.25％透明质酸酶，置于34℃摇床中消化6h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心5min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入α-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充α-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞；
其中，所述步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔2.5天对α-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，将换成二代培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞；
其中，所述二代培养基以α-MEM培养基为基础，包含以下浓度组分：15ng/mLⅠ型鼠尾胶原、35ng/mL的β-巯基乙醇和6ng/mL的蚕豆蛋白。
对照例2
一种间充质干细胞，该间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.3g放置于离心管内，在该离心管内加入体积比为1:5的0.1％胰蛋白酶和0.25％Ⅳ型胶原酶共15mL，在7℃条件下冷消化11h，再加入9mL的0.25％透明质酸酶，置于34℃摇床中消化6h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心5min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入L-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充L-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞；
其中，所述步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔2.5天对L-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，将换成二代培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞；
其中，所述二代培养基以L-MEM培养基为基础，包含以下浓度组分：15ng/mLⅠ型鼠尾胶原、35ng/mL的β-巯基乙醇和6ng/mL的蚕豆蛋白。
对照例3
一种间充质干细胞，该间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.3g放置于离心管内，在该离心管内加入体积比为1:5的0.1％胰蛋白酶和0.25％Ⅳ型胶原酶共15mL，在7℃条件下冷消化11h，再加入9mL的0.25％透明质酸酶，置于34℃摇床中消化6h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心5min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入α-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充α-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞；
其中，所述步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔2.5天对α-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，用α-MEM培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞。
对照例4
一种间充质干细胞，该间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.3g放置于离心管内，在该离心管内加入体积比为1:5的0.1％胰蛋白酶和0.25％Ⅳ型胶原酶共15mL，在7℃条件下冷消化11h，再加入9mL的0.25％透明质酸酶，置于34℃摇床中消化6h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心5min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入α-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充α-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞；
其中，所述步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔2.5天对α-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，将换成二代培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞；
其中，所述二代培养基以α-MEM培养基为基础，包含以下浓度组分：15ng/mL毛地黄黄酮、35ng/mL的β-巯基乙醇和6ng/mL的白蛋白。对照例5
一种间充质干细胞，该间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.3g放置于离心管内，在该离心管内加入体积比为1:5的0.1％胰蛋白酶和0.25％Ⅳ型胶原酶共15mL，在7℃条件下冷消化11h，再加入9mL的0.25％透明质酸酶，置于34℃摇床中消化6h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心5min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入α-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充α-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞；
其中，所述步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔2.5天对α-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，将换成二代培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞；
其中，所述二代培养基以α-MEM培养基为基础，包含以下浓度组分：15ng/mLⅠ型鼠尾胶原和6ng/mL的蚕豆蛋白。
对照例6
一种含有间充质干细胞的组合物，该含有间充质干细胞的组合物包括浓度为7×106个/mL的间充质干细胞和浓度为70ng/mL的中药提取物，所述中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
金银花 15 枇杷叶 4
洪连 8 禹州漏芦 13；
采用实施例5的方法制备中药提取物；
其中，间充质干细胞采用实施例2的方法分离培养获得。
对照例7
一种含有间充质干细胞的组合物，该含有间充质干细胞的组合物包括浓度为7×106个/mL的间充质干细胞和浓度为70ng/mL的中药提取物，所述中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
胖大海 15 柿蒂 4
车前草 8 鱼腥草 13；
采用实施例5的方法制备中药提取物；
其中，间充质干细胞采用实施例2的方法分离培养获得。
对照例8
一种含有间充质干细胞的组合物，该含有间充质干细胞的组合物包括浓度为7×106个/mL的间充质干细胞和浓度为70ng/mL的中药提取物，所述中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
胖大海 15 禹州漏芦 13；
采用实施例5的方法制备中药提取物；
其中，间充质干细胞采用实施例2的方法分离培养获得。
试验例1效果比较
一、对高尿酸的效果
1.高尿酸动物模型及给药方法：
以腺嘌呤(100mg.kg-1.d-1，ig)+氧氰酸钾(1.5g.kg-1.d-1，ig)制备高尿酸大鼠模型，SD雄性大鼠，适应性饲养五天，随机分为模型组、空白组、试验1-5组、对照1-8组、间充质细胞组、中药提取物组和阳性对照组；试验1组使用本发明实施例2的间充质干细胞，试验2组使用本发明实施例3的间充质干细胞，试验3组使用本发明实施例5的组合物，试验4组使用本发明实施例6的组合物，实施5组使用本发明实施例7的注射剂，对照1组使用对照例1的间充质干细胞，对照2组使用对照例2的间充质干细胞，对照3组使用对照例3的间充质干细胞，对照4组使用对照例4的间充质干细胞，对照5组使用对照例5的间充质干细胞，对照6组使用对照例6的间充质干细胞，对照7组使用对照例7的间充质干细胞，对照8组使用对照例8的间充质干细胞，间充质细胞组使用市场上购买的间充质干细胞，中药提取物组采用实施例5中的中药提取物，阳性对照组使用别嘌呤醇；每组10只，试验组、对照组、间充质干细胞组的给药剂量为1mL/只/天，中药提取物组和阳性对照组以0.5g/只/天的剂量计算，空白组与模型组给予等体积的PBS，共给药28天。
2.尿酸含量的测定
第28天末次给药1h后，腹腔注射戊巴比妥钠(45mg.kg-1)麻醉，大鼠腹主动脉取血，分离血清后测定其中的尿酸含量，结果见表1。
表1各组对高尿酸血症的治疗效果
3.结论
由表1可知，本发明实施例2、3、5、6、7提供的间充质干细胞和含有间充质干细胞的组合物以及间充质干细胞注射液均能够用于治疗高尿酸血症，试验2-3组的间充质干细胞对高尿酸血症的治疗效果显著的高于对照1-5组和间充质干细胞组，说明本发明提供的间充质干细胞的分离培养方法获得的间充质干细胞对高尿酸血症的治疗效果更好，当改变该方法中某个步骤或改变培养基的成分时，均会降低对高尿酸血症的治疗效果；试验3-4组的间充质干细胞对高尿酸血症的治疗效果显著的高于对照6-8组、中药提取物组和阳性对照组，说明本发明提供的含有间充质干细胞的组合物对高尿酸血症具有很好的治疗效果，当本发明提供的含有间充质干细胞的组合物中的成分减少或者被替换成别的成分后，该含有间充质干细胞的组合物对高尿酸的治疗效果显著降低，单独使用本发明中的中药提取物对高尿酸血症几乎没有治疗作用，单独使用间充质干细胞对高尿酸血症的治疗效果也不够理想，只有将间充质干细胞与中药提取物结合，发生协同作用，才能显著地提高对高尿酸血症的治疗作用。
临床试验
1.病例的选择
选取原发性高尿酸血症患者180例，其中男性114例，女性66例，年龄28-65岁，平均血尿酸值(539.18±67.25)μmol/L，采用随机数字法分为试验组、对照组、间充质细胞2组，每组60例患者，所有病例均无发作史，多在体检或因其他疾病就诊时偶然发现，均未经系统正规治疗，三组年龄、性别、病程等方面经统计学处理，无显著性意义(P＞0.05)，具有可比性。
2.诊断及纳入标准
原发性高尿酸血症西医诊断标准：男性血清尿酸水平＞416μmol/L(7.0mg/dL)，女性血清尿酸水平＞357μmol/L(7.0mg/dL)。
3.治疗方法
基础治疗：三组均对患者定期进行通风知识教育：适当休息，避免劳累、受寒、饮酒和禁食高嘌呤的食物，保持低脂、低盐、低糖饮食，多饮水，试验组在基础治疗的基础上给予本发明实施例5的组合物，对照组给予对照例4的间充质干细胞，间充质细胞2组给予市售的间充质干细胞，给药量均为每日两次，每次10g，三组患者均为4周一个疗程，两个疗程后，观察疗效。
4.疗效评价标准
参照《临床疾病诊断依据治愈好转标准》指定本疗效标准
显效：血尿酸恢复正常或治疗前降幅≥25％，停药后效果维持3个月以上；
有效：血尿酸基本恢复正常或较治疗前降幅≥15％，停药后效果维持1个月以上；
无效：血尿酸无明显改变或较治疗前降幅＜15％。
总有效率＝(显效例+有效例)/总有效例*100％。
5.试验结果见表2。
表2.三组治疗临床效果
由表2可知，治疗组的治疗效果显著地高于对照组和间充质细胞2组，证明本发明提供的组合物治疗高尿酸血症的效果较好，当改变该组合物中的组成成分或单独使用市售的间充质细胞时，均会降低对高尿酸血症的治疗作用。

Claims (9)

1.一种间充质干细胞、其制剂或含有间充质干细胞的组合物在制备治疗高尿酸血症的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞从胎盘上分离培养获得。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞通过如下方法培养获得：
1)采集胎盘样本，用0.9％的氯化钠注射液冲洗胎盘样本，去除血渍；
2)将步骤1)处理后的胎盘样本剪成1mm3大小，取0.2-0.4g放置于离心管内，在该离心管内加入体积比为1:4-6的0.1％胰蛋白酶和0.25％Ⅳ型胶原酶共15mL，在6-8℃条件下冷消化10-12h，再加入8-10mL的0.25％透明质酸酶，置于32-36℃摇床中消化5-7h，将消化后的混合液过30μm细胞筛网，收集滤液，离心4-6min，去掉上清，获得单细胞悬液；
3)向步骤2)获得的单细胞悬液中加入α-MEM培养基，吹打混匀、细胞计数，接种于培养瓶中，每瓶补充α-MEM培养基后，放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱中，于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2％的条件下进行细胞培养，即得间充质干细胞。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤3)中所述的细胞培养具体方法为：隔2-3天对α-MEM培养基进行一次全量换液，培养10天后，将换成二代培养基继续培养3天，每天换一次液，消化收获悬浮细胞。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述二代培养基以α-MEM培养基为基础，包含以下浓度组分：10-20ng/mLⅠ型鼠尾胶原、30-40ng/mL的β-巯基乙醇和5-7ng/mL的蚕豆蛋白。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述含有间充质干细胞的组合物包括浓度为6-8×106个/mL的间充质干细胞和浓度为60-80ng/mL的中药提取物，所述中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述中药提取物由以下重量份的各成分制备而成：
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述中药提取物由如下方法制备而成：
取配方量的胖大海、柿蒂、洪连和禹州漏芦，烘干、粉碎，过60目筛，用100℃的水提取3次，每次20-30min，胖大海、柿蒂、洪连和禹州漏芦的总重量与水的固液比为1:10-16，合并各次滤液，用旋转蒸发仪50-60℃条件下真空浓缩至原体积的1/5-1/4，向浓缩液中加Sevage试剂混合，浓缩液与Sevage试剂的体积比为5:1，震荡，放置于离心机中以2000-3000r/min的速度离心6-8min，取上清液，加入3倍上清液体积的90％浓度的乙醇沉淀8-10h，以3000-4000r/min的速度离心5min，将沉淀用无水乙醇洗涤2次，放置于50-60℃的烘箱中干燥至粉末，即得中药提取物。
9.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述制剂为注射剂，所述注射剂主要由间充质干细胞和药用辅料制备而成，所述药用辅料包括重量份数为100-120份的生理盐水和0.2-0.4份的助溶稀释剂，所述助溶稀释剂包括重量份数比为1-2:3-6的二乙基乙酰胺和苯甲酸苄酯，所述间充质干细胞在生理盐水中的体积浓度为6-10×105个/mL。
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