CN109512847A - 白花丹在用于制备治疗肺纤维化疾病药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了白花丹在用于制备治疗肺纤维化疾病药物中的用途。本发明还公开了一种治疗肺纤维化疾病的药物，其包含所述的白花丹和药物学可接受的载体。本申请发明人首次发现，白花丹可明显抑制肺组织成纤维细胞的增生，能有效治疗肺组织间质纤维化。本发明提供的药物价格低廉，无毒副作用，对肺纤维化疾病具有显著的疗效，治疗周期短，有利于推广。

Description

白花丹在用于制备治疗肺纤维化疾病药物中的用途
技术领域
本发明属于中医药技术领域，具体涉及白花丹在用于制备治疗肺纤维化疾病药物中的用途。
背景技术
肺纤维化(pulmonaryfibrosis,PF)是间质性肺疾病的一种，主要累及肺间质、肺泡和(或)细支气管，以成纤维细胞(fibroblast,Fb)增殖及大量细胞外基质(ECM)聚集为特征，病程多缓慢进展，逐渐丧失肺泡一毛细血管功能单位，最终发展为弥漫性肺纤维化和蜂窝肺，导致呼吸功能衰竭而死亡。多种因素均可引起肺纤维化，如职业性粉尘(SiO2等)、放射性损伤及某些药物(博莱霉素)等，此外还有一类不明病因的肺纤维化——特发性肺纤维化(idiopathicpulmonaryfibrosis,IPF)。虽然起因不同，但纤维化的发展与结局基本相似，即由下呼吸道炎症细胞浸润起始，逐步引起肺泡上皮细胞和血管内皮细胞损伤，并伴有肌成纤维细胞(myofibroblast,MF)和Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖的细胞因子等的释放，致细胞外基质蛋白和胶原沉积，最终引起肺结构的损害。肺纤维化晚期多引起心、肺功能衰竭而死亡，对人类危害极大。
白花丹(Plumbago Zeylanica L.)为蓝雪科蓝雪属植物，国内其他名称包括一见消、白雪花、白皂药、火灵丹、山波苓、假茉莉等。广泛分布于印度东南亚地区和我国华南地区，资源丰富。其味辛苦，性温，微毒，全株均可供药。具有抗微生物、抗肿瘤、护肝、抗肝纤维化、降压、扩张血管、抗凝血、抗动脉粥样硬化及止痛、消肿、消炎、祛痰等功效，民间用于跌打损伤、骨质增生、风湿骨痛、通经活络、痈症肿毒及肝脾肿大的治疗，同时治疗皮肤瘙痒、牛皮癣以及慢性支气管炎等症。临床用于治疗肝炎、肝硬化、跌打损伤、风湿性关节痛、药物性静脉炎、感染、疼痛、皮肤病、恶性肿瘤白血病等。
肺纤维化发生的确切机制尚不清楚，早期防治亦未获得突破性进展。目前治疗肺纤维化常用的药物有糖皮质激素、细胞毒性药物和免疫抑制剂。糖皮质激素往往需要大剂量、长时间的使用，可能抑制机体正常免疫反应导致感染；硫唑嘌呤耐受性好，但容易引起骨髓抑制；环磷酰胺毒性反应大，除引起骨髓抑制外，还可能损害肝功能。虽然欧美推荐糖皮质激素联合硫唑嘌呤或环磷酰胺治疗肺纤维化，但是这种治疗方法疗效不确切，而且毒副反应大。因此，寻找一种有效治疗肺纤维化、不良反应小的药物迫在眉睫。
发明内容
基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供白花丹在用于制备治疗肺纤维化疾病的药物中的用途，本申请发明人发现，白花丹可明显抑制肺组织成纤维细胞的增生，能有效治疗肺组织间质纤维化。
本发明还提供了白花丹提取物在用于制备治疗肺纤维化疾病的药物中的用途。
优选地，所述白花丹提取物为白花丹茎和/或叶的醇提取物。
优选地，所述白花丹提取物为体积分数为70～90％的乙醇提取物。
优选地，所述白花丹提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)取白花丹茎和/或叶，剪成小段，干燥；
(2)向干燥的白花丹茎和/或叶中加入体积分数为70～90％的乙醇，浸泡提取2～4天后，过滤，收集滤液；向滤渣中加入体积分数为70～90％的乙醇，继续浸泡提取2～4天后，过滤，收集滤液；
(3)合并步骤(2)中的两次滤液，浓缩干燥，即得所述白花丹提取物。
优选地，所述步骤(1)中干燥的温度为60℃以下，时间为24～48h；
所述步骤(2)中两次浸泡提取的时间均为3天；
所述步骤(3)中使用旋转蒸发器进行浓缩，使用负压干燥箱进行干燥，且浓缩和干燥温度均为60℃以下。
本发明还提供了一种治疗肺纤维化疾病的药物，包含所述白花丹和药物学可接受的载体。
优选地，所述药物剂型为汤剂、酒剂、颗粒剂、粉末剂、散剂、丸剂、丹剂、膏剂或片剂。
本发明还提供了一种治疗肺纤维化疾病的药物，包含所述的白花丹提取物和药物学可接受的载体。
优选地，所述药物剂型为汤剂、酒剂、颗粒剂、粉末剂、散剂、丸剂、丹剂、膏剂或片剂。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：(1)本申请发明人首次发现，白花丹可明显抑制肺组织成纤维细胞的增生，能有效治疗肺组织间质纤维化；(2)本发明白花丹提取物的制备均采用低温处理，保证了药物的疗效；(3)本发明药物成分简单、价格低廉，无毒副作用，对肺纤维化疾病具有显著的疗效，治疗周期短，有利于推广。
附图说明
图1为实验第15天，A组(正常对照组)小鼠肺组织结构图；
图2为实验第15天，C组(模型组)小鼠肺组织病理图；
图3为实验第29天，B组(正常对照组+高剂量组)小鼠肺组织结构图；
图4为实验第29天，C组(模型组)小鼠肺组织病理图；
图5为实验第29天，D组(模型组+高剂量组)小鼠肺组织病理图；
图6为实验第29天，E组(模型组+低剂量组)小鼠肺组织病理图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本发明白花丹提取物制备方法的一种实施例，所述白花丹提取物制备方法包括以下步骤：
(1)取新鲜白花丹茎，剪成约3～6cm的小段，于60℃干燥24h；
(2)向干燥的白花丹茎中加入体积分数为90％的乙醇，浸泡提取2天后，过滤，收集滤液；向滤渣中加入体积分数为90％的乙醇，继续浸泡提取2天后，过滤，收集滤液；
(3)合并步骤(2)中的两次滤液，滤液使用旋转蒸发器于58℃进行浓缩，获得的浓缩液使用负压干燥箱于50℃进行干燥，即得所述白花丹提取物。
实施例2
本发明白花丹提取物制备方法的一种实施例，所述白花丹提取物制备方法包括以下步骤：
(1)取新鲜白花丹叶，剪成约3～6cm的小段，于55℃干燥48h；
(2)向干燥的白花丹茎中加入体积分数为70％的乙醇，浸泡提取4天后，过滤，收集滤液；向滤渣中加入体积分数为70％的乙醇，继续浸泡提取4天后，过滤，收集滤液；
(3)合并步骤(2)中的两次滤液，滤液使用旋转蒸发器于60℃进行浓缩，获得的浓缩液使用负压干燥箱于60℃进行干燥，即得所述白花丹提取物。
实施例3
本发明白花丹提取物制备方法的一种实施例，所述白花丹提取物制备方法包括以下步骤：
(1)取新鲜白花丹茎和叶，分别剪成约3～6cm的小段，于50℃干燥35h；
(2)向干燥的白花丹茎和叶中加入体积分数为80％的乙醇，浸泡提取3天后，过滤，收集滤液；向滤渣中加入体积分数为80％的乙醇，继续浸泡提取3天后，过滤，收集滤液；
(3)合并步骤(2)中的两次滤液，滤液使用旋转蒸发器于50℃进行浓缩，获得的浓缩液使用负压干燥箱于50℃进行干燥，即得所述白花丹提取物。
实施例4
本发明治疗肺纤维化疾病的药物的一种实施例，所述药物包含实施例3所述白花丹提取物和生理盐水，用生理盐水将所述白花丹提取物配置成7mg/mL的制剂，即得所述药物。
所述药物用法为：成人每天服用5mL，21天为一个疗程。
实施例5
本实施例以实施例3制备的白花丹提取物为例，研究本发明白花丹提取物的急性毒性。
1、实验方法
参考国家标准GB 15193.3-1994开展急性毒性实验。
(1)1雌1雄2只SPF级昆明小鼠用于预试验研究：禁食过夜后，按5.0g/kg体重分上、下午两次给予实施例3制备的白花丹提取物灌胃处理(0.5ml/次)，观察24小时，动物行为没有异常。
(2)正式实验采用20只SPF级昆明小鼠，体重18–22g，雌雄各半，按体重随机分为两组，禁食过夜后，实验组按5.0g/kg体重分上、下午两次给予实施例3中制备的白花丹提取物灌胃给药，对照组给予同样剂量的生理盐水。动物饲养在SPF级饲养环境中，自由饮水和采食，连续14天观察动物的行为及死亡率。
2、实验结果
实验结果显示，动物没有出现死亡，动物的行为也未发现异常现象，表明实施例3中制备的白花丹提取物按5.0g/kg灌胃给予小鼠药后，连续观察14天，无动物死亡等急性毒性反应，可以确定实施例3制备的白花丹提取物的毒性较低。本发明其他方法制备得到的白花丹提取物急性毒性实验与本实施例类似，具体数据省略。
实施例6
本实施例以实施例3制备的白花丹提取物为例，研究本发明白花丹提取物的亚急性毒性。
1、实验方法
20只雄性C57BL/6小鼠，按体重随机分为对照组和实验组，每天分别给予生理盐水或实施例3制备的白花丹提取物(0.1g/ml)0.5ml，连续给药30天。
2、实验结果
正常组动物无一死亡；实验组小鼠，分别于第12天和第17天各死亡1只，以后没有死亡，动物的体征与对照组没有差异。实验30天后对照组和实验组小鼠的体重分别为(19.05±0.75)g和(19.88±0.30)g，实验组动物给药11天，累积给药约27.5g/kg。结果说明实施例3制备的白花丹提取物有一定毒性，但是毒性很低。本发明其他方法制备得到的白花丹提取物亚急性毒性实验与本实施例类似，具体数据省略。
实施例7
本实施例以实施例3制备的白花丹提取物为例，研究本发明白花丹提取物的药效。
1、实验方法
60只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组：A：正常对照组，B：正常对照组+高剂量组，C：模型组，D：模型组+高剂量组，E：模型组+低剂量组，每组各12只。动物饲养在广州医科大学附属第一医院动物实验屏障环境中，自由饮水和采食。用生理盐水将实施例3制备的白花丹提取物配置成高剂量(浓度为：0.06g/ml)和低剂量(浓度为：0.03g/ml)。
实验第1天，A组和B组动物腹腔注射给予生理盐水0.5mL，C组、D组和E组小鼠按体重腹腔注射给予百草枯0.5mL/20g(45mg/kg)。实验第15天，A组和C组分别麻醉、处死6只小鼠，采血备用，取右肺经中性福尔马林固定48h后送病理中心，切片经HE染色，显微镜下观察肺组织病理改变，确定小鼠肺纤维化模型的建立。其余动物在第15天处理如下：A组和C组灌胃给予生理盐水0.5ml/只，B组和D组灌胃给予实施例3制备的白花丹提取物高剂量组(0.5mL)，E组灌胃给予实施例3制备的白花丹提取物低剂量组(0.5mL)，每天一次至实验第28天。
实验第29天，动物麻醉后处死，采血备用，肺组织固定后送病理中心，切片经HE染色和Masson三色染色，显微镜下观察肺组织病理改变，比较肺纤维化的程度变化。
2、实验结果
(1)各组小鼠在实验过程中无1例死亡。与A组(正常对照组)小鼠体重相比，C组(模型组)小鼠体重除第1周出现下降外，其他时段没有显著差异。
(2)第15天，A组(正常对照组)小鼠肺组织表现正常，肺泡结构清晰完整，肺泡间隔无增宽及充血，无炎症细胞浸润及出血，结果如图1所示；C组(模型组)小鼠肺组织出现成纤维细胞，肺泡间隔增宽，肺泡有炎症细胞；血管周围淋巴细胞增生，表现为血管炎，但血管壁结构正常没有破坏，达到轻度肺纤维化模型的标准，结果如图2所示。
(3)实验第29天，A组(正常对照组)小鼠和B组(正常对照组+高剂量组)小鼠肺组织结构正常，B组小鼠肺组织结构图如图3所示。C组(模型组)小鼠有明显的间质肺纤维细胞增生，肺泡腔塌陷，支气管扩张，支气管周围炎症细胞，肺泡间隔明显增宽，结果如图4所示。
与C组(模型组)小鼠相比，D组(模型组+高剂量组)小鼠和E组(模型组+低剂量组)小鼠靠近胸膜可见支气管扩张、肺气肿；有一些纤维组织细胞，纤维组织增生程度明显减轻，图5为D组小鼠肺组织病理图，图6为E组小鼠肺组织病理图；D组(模型组+高剂量组)小鼠和E组(模型组+低剂量组)小鼠相比，E组(模型组+低剂量组)小鼠肺纤维组织增生情况最轻。
上述结果表明，B组(正常对照组+高剂量组)小鼠在给予高剂量药物14天的情况下，动物的肺组织结构表现正常。C组(模型组)小鼠在实验建模成功后第15天，连续灌胃给予实施例3制备的白花丹提取物14天后，高剂量组(D组)和低剂量组(E组)均可明显抑制肺组织成纤维细胞的增生，有显著治疗肺组织间质纤维化的疗效。本发明其他方法制备得到的白花丹提取物对肺纤维化的治疗效果与本实施例类似，具体数据省略。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.白花丹在用于制备治疗肺纤维化疾病的药物中的用途。
2.白花丹提取物在用于制备治疗肺纤维化疾病的药物中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述白花丹提取物为白花丹茎和/或叶的醇提取物。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述白花丹提取物为体积分数为70～90％的乙醇提取物。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述白花丹提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)取白花丹茎和/或叶，剪成小段，干燥；
(2)向干燥的白花丹茎和/或叶中加入体积分数为70～90％的乙醇，浸泡提取2～4天后，过滤，收集滤液；向滤渣中加入体积分数为70～90％的乙醇，继续浸泡提取2～4天后，过滤，收集滤液；
(3)合并步骤(2)中的两次滤液，浓缩干燥，即得所述白花丹提取物。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述步骤(1)中干燥的温度为60℃以下，时间为24～48h；
所述步骤(2)中两次浸泡提取的时间均为3天；
所述步骤(3)中使用旋转蒸发器进行浓缩，使用负压干燥箱进行干燥，且浓缩和干燥温度均为60℃以下。
7.一种治疗肺纤维化疾病的药物，其特征在于，包含权利要求1所述白花丹和药物学可接受的载体。
8.根据权利要求7所述的治疗肺纤维化疾病的药物，其特征在于，所述药物剂型为汤剂、酒剂、颗粒剂、粉末剂、散剂、丸剂、丹剂、膏剂或片剂。
9.一种治疗肺纤维化疾病的药物，其特征在于，包含权利要求2～6任一项所述的白花丹提取物和药物学可接受的载体。
10.根据权利要求9所述的治疗肺纤维化疾病的药物，其特征在于，所述药物剂型为汤剂、酒剂、颗粒剂、粉末剂、散剂、丸剂、丹剂、膏剂或片剂。
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