CN109477118A - 具有增加的光合效率和生长的转基因植物 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了一种转基因植物，所述转基因植物包含一个或多个核苷酸序列，所述核苷酸序列编码选自光合系统II亚基S(PsbS)、玉米黄质环氧化酶(ZEP)和紫黄质脱环氧化酶(VDE)的多肽，所述核苷酸序列可操作地连接到至少一个表达控制序列。还提供了用于制备转基因植物的表达载体，以及用于增加植物中生物质产生和/或碳固定和/或生长的方法，所述方法包括增加PsbS、ZEP和VDE多肽中的至少一者的表达。

Description

具有增加的光合效率和生长的转基因植物
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年5月27日提交的美国临时申请No.62/342,248的权益，该专利申请的全部内容由此以引用方式并入本文。
提交ASCII文本文件的序列表
以下以ASCII文本文件提交的内容全文以引用方式并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名称：335032000840SEQLIST.txt，记录日期：2017年5月26日，大小：246KB)。
技术领域
本发明涉及一种增加植物光合效率和生长的方法。
背景技术
植物冠层中的光强度是非常动态的，并且叶片常常经历吸收辐照度水平的急剧波动。当光强度太高或增加过于快速而使光化学不能利用吸收的能量时，几种光保护机制被诱导以保护光合天线复合物免于过度激发。光合系统II(PSII)天线复合物中的过量激发能量通过可诱导的保护过程而被作为热量无害地消散，这是可观察到的并且通常被称为叶绿素荧光非光化学猝灭(NPQ；等人，Plant Physiol.第125卷，1558-1566,2000)。NPQ变化可以很快但不是瞬时的，因此滞后于吸收辐照度的波动。NPQ弛豫的速率比诱导速率慢得多，并且这种不对称性因长时间或反复暴露于过量光照条件而加剧。PSII天线从猝灭状态到非猝灭状态的这种相对缓慢的恢复速率可能意味着光合量子产率和相关的CO2固定在从高光强度变为低光强度时由NPQ瞬时限制。当该假设在模型模拟中测试并整合在作物冠层上时，CO2固定的相应损失估计在7.5％-30％之间的范围(Zhu等人，J.Exp.Bot.第55卷，1167-1175,2004)。基于这些计算，增加NPQ的弛豫速率提出了提高光合效率的可能策略，然而迄今为止尚缺乏实验证据。
虽然确切的NPQ猝灭位点和所涉及的猝灭机制的性质仍然有待阐明，但很清楚，为了使NPQ发生，PSII相关的天线需要经历到猝灭状态的构象变化，其可以通过许多具有对比时间常数的不同机制诱导。NPQ在高等植物中的主要和普遍存在机制是所谓的能量依赖性猝灭(qE)。qE的诱导需要低的类囊体腔pH，并且通过光合系统II亚基S(PsbS)的存在和经由可逆的叶黄素色素循环将紫黄质脱环氧化成花药黄质和玉米黄质而得到极大帮助。
PsbS的过表达强烈影响qE形成的幅度，并且导致qE的诱导和弛豫速率增加，但是在较小的应激条件下可以与光合量子产率竞争。因此，虽然经由PsbS过表达的qE增强可以在强光或快速波动条件下提供增加的光保护，但是单独的PsbS过表达对CO2固定和植物生长的积极效应将极大地取决于主导的光照环境。另一种NPQ操纵途径是修饰可逆的叶黄素色素循环。从番茄红素生物合成类胡萝卜素(胡萝卜素和叶黄素)的途径的示意图示出在图17中。玉米黄质积累与几种NPQ组分(qE、qZ和qI)相关。通过酶紫黄质脱环氧化酶(VDE)催化紫黄质在过量光下转化为玉米黄质。通过酶玉米黄质环氧化酶(ZEP)催化玉米黄质转化为紫黄质。具有增加的叶黄素色素库大小的拟南芥突变体显示为具有较慢的NPQ形成和弛豫速率，而NPQ的幅度未受影响。有趣的是，这些突变体和野生型对照植物中的NPQ形成和弛豫的速率似乎主要受叶黄素色素库的脱环氧化状态控制。Nilkens等人，Biochimica etBiophysica Acta 1797；466–475(2010)表明，具体地，玉米黄质环氧化的动力学与NPQ弛豫速率强相关。因此，叶黄素循环平衡的调节速率也控制了NPQ形成和弛豫的速率，并且似乎在由紫黄质脱环氧化酶(VDE)和玉米黄质环氧化酶(ZEP)进行转化的速率方面受到叶黄素库大小的影响。
尚不确定是否可以操纵NPQ以在低光照强度下利用光合量子产率来减少瞬时竞争，同时在高光照强度下保持光保护。在波动的光照条件下具有改善的量子产率和CO2固定的植物可以提供改善的植物生长和作物产量。
发明内容
本公开的一个方面涉及一种具有一个或多个编码PsbS、ZEP和/或VDE的异源核苷酸序列的转基因植物。在一些实施方案中，所述核苷酸序列衍生自双子叶植物。在一些实施方案中，所述核苷酸序列衍生自拟南芥(Arabidopsis thaliana)。在一些实施方案中，所述转基因植物具有一个或多个编码PsbS、ZEP和VDE的异源核苷酸序列。在一些实施方案中，PsbS由SEQ ID NO:1的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由SEQ ID NO:2的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少90％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少90％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少90％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少70％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少70％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQID NO:3具有至少70％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，PsbS具有SEQ IDNO:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4具有至少70％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5具有至少70％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6具有至少70％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。在上述的一些实施方案中，植物是作物植物、模式植物、单子叶植物、双子叶植物、具有景天酸代谢(CAM)光合作用的植物、具有C3光合作用的植物、具有C4光合作用的植物、一年生植物、温室植物、园艺开花植物、多年生植物、柳枝稷植物、玉米植物、生物质植物或甘蔗植物。在上述的一些实施方案中，所述植物是柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱(grain sorghum)、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassicanapus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜(Brassica juncea)、珍珠粟、小米(foxtail millet)、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。在一些实施方案中，所述植物是烟草(Nicotiana tabacum)。在一些实施方案中，所述植物是玉米(Zea mays)。在一些实施方案中，所述植物是稻(Oryza sativa)。在一些实施方案中，所述植物是高粱(Sorghum bicolor)。在一些实施方案中，所述植物是大豆(Glycinemax)。在一些实施方案中，所述植物是豇豆(Vigna unguiculata)。在一些实施方案中，所述植物是杨属物种(Populus spp)。在一些实施方案中，所述植物是桉属物种(Eucalyptusspp)。在一些实施方案中，所述植物是木薯(Manihot esculenta)。在一些实施方案中，所述植物是大麦(Hordeum vulgare)。在一些实施方案中，所述植物是马铃薯(Solanumtuberosum)。在一些实施方案中，所述植物是甘蔗属物种(Saccharum spp)。在一些实施方案中，所述植物是紫花首蓿(Medicago sativa)。在上述的一些实施方案中，与波动光照条件下的对照植物相比，所述植物在波动光照条件下具有增加的生长。在上述的一些实施方案中，与波动光照条件下的对照植物相比，所述植物在波动光照条件下具有增加的光合效率。在上述的一些实施方案中，与波动光照条件下的对照植物相比，所述植物在波动光照条件下具有增强的光保护效率。在上述的一些实施方案中，与波动光照条件下的对照植物相比，所述植物在波动光照条件下具有提高的量子产率和CO2固定。在上述的一些实施方案中，所述植物是优良品系或优良株系。在上述的一些实施方案中，所述植物还包含至少一种另外的多肽的表达，所述多肽提供除草剂抗性、昆虫或害虫抗性、疾病抗性、修饰的脂肪酸代谢和/或修饰的碳水化合物代谢。
本公开的另一方面涉及一种具有一个或多个编码PsbS、ZEP和/或VDE的异源核苷酸序列的表达载体。在一些实施方案中，所述载体含有启动子Rbcs1A、GAPA-1或FBA2。在一些实施方案中，Rbcs1A启动子驱动ZEP的表达，GAPA-1启动子驱动PsbS的表达，并且FBA2启动子驱动VDE的表达。在一些实施方案中，载体是T-DNA。在一些实施方案中，所述载体具有编码提供抗生素抗性的多肽的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述载体具有位于表达控制序列和编码PsbS、ZEP和VDE多肽的核苷酸序列侧翼的左边界(LB)结构域和右边界(RB)结构域。在一些实施方案中，PsbS由SEQ ID NO:1的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由SEQ ID NO:2的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少90％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少90％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少90％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少70％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少70％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少70％序列相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，PsbS具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4具有至少70％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQID NO:5具有至少70％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ IDNO:6具有至少70％序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。在一些实施方案中，所述表达载体在细菌细胞中。在上述的一些实施方案中，所述表达载体在农杆菌(Agrobacterium)细胞中。在上述的一些实施方案中，所述表达载体用于产生转基因植物。在上述的一些实施方案中，所述转基因植物产生种子。在上述的一些实施方案中，所述种子还产生后代植物。
本公开的其他方面涉及增加植物光合作用和生长的方法，所述方法包括增加所述植物中两种或更多种本文所述多肽的表达。在一个方面，本公开涉及一种增加植物在波动光照条件下的生长的方法，包括增加植物中来自PsbS、ZEP和VDE的至少两种多肽的表达，从而产生与对照植物相比具有所述两种或更多种多肽的表达增加的植物。在一个方面，本公开涉及一种增加植物在波动光照条件下的光合效率的方法，包括增加植物中来自PsbS、ZEP和VDE的至少两种多肽的表达，从而产生与对照植物相比具有所述两种或更多种多肽的表达增加的植物。在一个方面，本公开涉及一种增加植物在波动光照条件下的光保护效率的方法，包括增加植物中来自PsbS、ZEP和VDE的至少两种多肽的表达，从而产生与对照植物相比具有所述两种或更多种多肽的表达增加的植物。在一个方面，本公开涉及一种增加植物在波动光照条件下的量子产率和CO2的方法，包括增加植物中来自PsbS、ZEP和VDE的至少两种多肽的表达，从而产生与对照植物相比具有所述两种或更多种多肽的表达增加的植物。在一个方面，本发明涉及一种增加植物中非光化学猝灭(NPQ)的弛豫速率的方法，包括增加植物中来自PsbS、ZEP和VDE的至少两种多肽的表达，从而产生与对照植物相比具有所述两种或更多种多肽的表达增加的植物。在一些实施方案中，PsbS和ZEP的表达增加。在一些实施方案中，PsbS和VDE的表达增加。在一些实施方案中，VDE和ZEP的表达增加。在一些实施方案中，PsbS、ZEP和VDE的表达增加。在一些实施方案中，通过表达一个或多个编码PsbS、ZEP和/或VDE的异源核苷酸序列来增加PsbS、ZEP和/或VDE的表达。在一些实施方案中，通过修饰PsbS、ZEP和/或VDE的启动子区域来增加PsbS、ZEP和/或VDE的表达。在一些实施方案中，由基因组编辑系统来实现启动子修饰。在一些实施方案中，基因组编辑系统是CRISPR。
本公开的另一个方面涉及一种选择在波动光照条件下具有改善的生长特征的植物的方法，包括以下步骤：提供植物群体；修饰所述植物群体以增加PsbS、ZEP和VDE中任何的活性；检测在波动光照条件下植物中非光化学猝灭(NPQ)的水平；将波动光照条件下植物中的NPQ水平与波动光照条件下的对照NPQ水平进行比较；以及选择当植物从高光强度下转变为低光强度下时具有增加的NPQ弛豫速率的植物。在一些实施方案中，对照NPQ水平是群体中的最低NPQ水平。在一些实施方案中，对照NPQ水平是群体中的中值NPQ水平。在一些实施方案中，对照NPQ水平是群体中的平均NPQ水平。在一些实施方案中，对照NPQ水平是对照植物中的NPQ水平。在一些实施方案中，通过用诱变剂诱导PsbS、ZEP和/或VDE中的一个或多个突变来修饰植物。在一些实施方案中，诱变剂是甲基磺酸乙酯(EMS)。在一些实施方案中，通过使用转基因技术引入异源PsbS、ZEP和/VDE来修饰植物。在一些实施方案中，通过使用基因组编辑系统修饰PsbS、ZEP和/VDE的相应天然启动子来修饰植物。在一些实施方案中，基因组编辑系统是CRISPR。本公开的另一方面涉及一种筛选在波动光照条件下与改善的生长特征相关的核苷酸序列多态性的方法，包括以下步骤：提供植物群体；获得所述植物群体中调节和/或编码PsbS、ZEP和VDE中的任何的核苷酸序列；获得所述植物群体中调节和/或编码PsbS、ZEP和VDE中的任何的核苷酸序列中的一个或多个多态性；检测所述植物群体在从高光强度转变为低光强度时非光化学猝灭(NPQ)的弛豫速率；进行统计分析以确定所述植物群体中的多态性与NPQ弛豫速率的关联；以及选择与NPQ弛豫速率具有统计学显著相关性的多态性。在一些实施方案中，多态性是单核苷酸多态性(SNP)。在一些实施方案中，多态性位于PsbS、ZEP和/或VDE的启动子中。在一些实施方案中，通过序列测定来检测多态性。在一些实施方案中，通过凝胶电泳检测多态性。在一些实施方案中，多态性还用于筛选植物群体以选择在波动光照条件下具有改善的生长特征的植物。在一些实施方案中，多态性还用作在PsbS、ZEP和/或VDE中进行基因组编辑的靶，以改善植物在波动光照条件下的生长特征。在上述的一些实施方案中，改善的生长特征是改善的生长、改善的光合效率、改善的光保护效率、改善的量子产率和/或改善的CO2固定。在上述的一些实施方案中，通过测量叶绿素荧光来检测植物中的NPQ。
在上述的一些实施方案中，所述改善的生长特征是改善的生长。在一些实施方案中，所述改善的生长特征是改善的光合效率。在一些实施方案中，所述改善的生长特征是改善的光保护效率。在一些实施方案中，所述改善的生长特征是改善的量子产率和CO2固定。在一些实施方案中，所述改善的生长特征是增加的非光化学猝灭(NPQ)弛豫速率。在一些实施方案中，使用叶绿素荧光成像检测NPQ。
在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，PsbS由SEQ ID NO:1的核苷酸序列编码。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，ZEP由SEQ ID NO:2的核苷酸序列编码。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，VDE由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，PsbS由与SEQ IDNO:1具有至少90％序列相同性的核苷酸序列编码。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少90％序列相同的核苷酸序列编码。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少90％序列相同性的核苷酸序列编码。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，PsbS由与SEQ IDNO:1具有至少70％序列相同性的核苷酸序列编码。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少70％序列相同性的核苷酸序列编码。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少70％序列相同性的核苷酸序列编码。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，PsbS具有SEQ IDNO:4。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，ZEP具有SEQ ID NO:5。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，VDE具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，ZEP具有与SEQ IDNO:5具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4具有至少70％序列相同性的氨基酸序列。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5具有至少70％序列相同性的氨基酸序列。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6具有至少70％序列相同性的氨基酸序列。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，植物是作物植物、模式植物、单子叶植物、双子叶植物、具有景天酸代谢(CAM)光合作用的植物、具有C3光合作用的植物、具有C4光合作用的植物、一年生植物、温室植物、园艺开花植物、多年生植物、柳枝稷植物，玉米植物、生物质植物或甘蔗植物。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是烟草(Nicotiana tabacum)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是玉米(Zea mays)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是稻(Oryza sativa)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是高粱(Sorghum bicolor)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是大豆(Glycine max)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是豇豆(Vigna unguiculata)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是杨属物种(Populus spp)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是桉属物种(Eucalyptus spp)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是木薯(Manihot esculenta)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是大麦(Hordeum vulgare)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是马铃薯(Solanum tuberosum)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是甘蔗属物种(Saccharum spp)。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述植物是紫花首蓿(Medicago sativa)。
在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的转录物水平增加3倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的转录物水平增加3倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的转录物水平增加8倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的转录物水平增加10倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的转录物水平增加3倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的转录物水平增加6倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的转录物水平增加4倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的转录物水平增加1.2倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的转录物水平增加7倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的蛋白水平增加16倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的蛋白水平增加2倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的蛋白水平增加80倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的蛋白水平增加30倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的蛋白水平增加4倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的蛋白水平增加74倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的蛋白水平增加47倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的蛋白水平增加3倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的蛋白水平增加75倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的转录物水平的增加在VDE、PsbS和ZEP之间具有3:3:8、10:3:6或4:1.2:7的比率。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的蛋白水平的增加在VDE、PsbS和ZEP之间具有16:2:80、30:4:74或47:3:75的比率。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的VDE的转录物水平的增加在3倍至10倍的范围内。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的PsbS的转录物水平的增加为约1.2倍至约3倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的ZEP的转录物水平的增加为约6倍至约8倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的VDE的蛋白水平的增加在16倍至47倍的范围内。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的PsbS的蛋白水平的增加为约2倍至约4倍。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的ZEP的蛋白水平的增加为约74倍至约80倍。
附图说明
当考虑下面的详细描述时，除了上述特征、目的和优点之外的特征、目的和优点将变得更加明显。此类详细描述参照以下附图，其中：
图1.(A)在用1000μmol m-2s-1PFD照射10min，然后暗弛豫10min的过程中，野生型和三种(VDE-PsbS-ZEP)VPZ过表达品系的幼苗中的非光化学猝灭。在用2000μmol m-2s-1PFD照射3min，然后用200μmol m-2s-1PFD照射2min的重复循环过程中，幼苗中的(B)非光化学猝灭和(C)PSII效率。误差条指示±se(n＝18)，星号表示VPZ品系与野生型之间的显著差异(α＝0.05)。
图2.天然(Nt)和转基因(At)紫黄质脱环氧化酶(VDE)、光合系统II亚基S(PsbS)和玉米黄质环氧化酶(ZEP)的mRNA和蛋白表达.(A-C)相对于肌动蛋白和微管蛋白的mRNA水平；(D-F)通过蛋白质印迹上的光密度测定法测定的相对于野生型的蛋白水平，误差条指示±se(n＝5)，星号表示VPZ品系与野生型之间的显著差异(α＝0.05)；(G)VDE、PsbS和ZEP的蛋白质印迹实例。
图3.气体交换过程中的非光化学猝灭作为野生型和VPZ过表达品系的完全展开叶片中吸收光强度的函数。光强度(A)在每个步骤处等待稳态时从低PFD增加到高PFD，或者(B)在每次光强度变化之前用4min的2000μmol m-2s-1从高PFD变化成低PFD。误差条指示±se(n＝6)，星号表示VPZ品系与野生型之间的显著差异(α＝0.05)。
图4.(A-B)线性电子传递(J)和净同化速率(An)作为光强度的函数，并且相应参数拟合初始斜率(C-D)。在每次光强度变化之前用4min的2000μmol m-2s-1PFD使光强度从高PFD变化成低PFD。误差条指示±se(n＝6)，星号表示VPZ品系与野生型之间的显著差异(α＝0.05)。
图5.在暴露于2000μmol m-2s-1PFD(λ最大＝470nm)(A)一小时或(B)两小时后VPZ过表达品系和野生型的幼苗中的光保护指数。小于1的指数值指示发生光抑制。(C)在暴露于2000μmol m-2s-1一小时(向上三角形–VPZ，圆–WT)或两小时(向下三角形–VPZ，正方形–WT)以及10min的后续暗弛豫后PSII效率随幼苗中的残余NPQ变化的图。误差条指示±se(n＝18)，星号表示VPZ品系与野生型之间的显著差异(α＝0.05)。
图6.温室实验中相对于WT的最终植物大小和重量。(A)单株总干重，(B)单株叶面积，(C)植物高度，(D)单株叶干重，(E)单株茎干重，(F)单株根干重。误差条指示±se(对于实验1和实验2为n＝20和n＝19)，星号表示VPZ品系与野生型之间的显著差异(α＝0.05)。
图7.线性电子传递和净同化速率作为光强度的函数。在每次光强度变化之前用4min的2000μmol m-2s-1PFD使光强度从高PFD变化成低PFD。(A-B)线性电子传递(J)和净同化速率(An)，并且对应的参数拟合初始斜率(C-D)、凸性(E-F)和渐近线(G-H)。误差条指示±se(n＝6)。
图8.凸性(A-B)和渐近线(C-D)参数拟合作为光强度函数的线性电子传递(J)和净同化速率(An)。在每次光强度变化之前用4min的2000μmol m-2s-1PFD使光强度从高PFD变化成低PFD。误差条指示±se(n＝6)。
图9.VDE-PsbS-ZEP构建体的质粒图谱。
图10.增加光保护响应光强度变化的速度的预期目标以及VDE、PsbS和ZEP在此过程中的作用。与橘色线(野生型)对比，蓝色线代表转基因植物。
图11.表型的快速高通量筛选。叶盘的叶绿素荧光(左)和幼苗的叶绿素荧光(右)。
图12.将VPZ-23和VPZ-34转基因植物与野生型植物进行比较的生长实验。
图13.温室实验显示所有品系显著增加的生长。
图14.在先前使叶片暴露于2000μmol m-2s-1PFD后，在各种光强度的量子产率和CO2固定结果。
图15.波动光照下的NPQ动力学。
图16.第一次诱导/弛豫中的NPQ的时间常数。
图17.与紫黄质转化为玉米黄质相关的NPQ组分(qE、qZ和qI)
图18.本氏烟(Nicotiana benthamiana)中NPQ相关基因的瞬时过表达。左上图示出了在以600μmol光子m-2s-1(白色条)照射13min，然后10min黑暗(黑色条)的过程中过表达FLAG标记的PsbS、VDE、ZEP和GUS(作为阴性对照)的叶点上的NPQ测量值。误差条指示标准偏差(n＝6)。右上图示出了在高光暴露10min后表达PSBS、VDE、ZEP和GUS的叶片的NPQ的假彩色图像。彩虹条指示NPQ的相对量。下图示出了从右上图中的叶片收集并用抗FLAG探测的组织的免疫印迹分析。
图19.VDE和ZEP在本氏烟中的瞬时共同过表达加速NPQ诱导和弛豫。误差条表示标准误差(n＝4)。
图20.转基因T1后代的NPQ动力学。使用DUAL PAM进行的NPQ测量是在以600μmol光子m-2s-1照射10min，然后10min黑暗的过程中，在以下三种不同品系的T1成株最幼嫩的完全发育叶片上进行的：一种野生型分离子(Null)，一种过表达ZEP(ZEP)，以及一种过表达ZEP和VDE(ZEP-VDE)。每条曲线对应于三种不同植物的平均NPQ测量值；误差条指示标准误差(n＝3)。
图21.烟草cv.Petite Havana的稳定转基因T1植物的光合系统II量子产率(YII)。
图22.温室中的生长实验。图中示出了四组植物，每种转基因品系一组。每组包括36株植物。
图23.NbPsbS和Rbcs1aAtZEP+Gapa1AtPsbS+Fba2AtVDE构建体在本氏烟(N.benthamiana.)中的瞬时过表达。
图24.在代表性植物物种中针对(A)PsbS、(B)ZEP和(C)VDE的NPQ基因的氨基酸比对。
图25.在温室条件下生长的转基因烟草植物叶片中VDE、PsbS和ZEP的mRNA和蛋白质水平。(A、C和E)相对于肌动蛋白和微管蛋白的mRNA水平。(B、D和F)通过免疫印迹上的光密度测定法测定的相对于野生型(WT)的蛋白水平。误差条指示测量标准误差(SEM)(n＝5生物学重复)，并且星号表示VPZ品系与WT之间的显著差异(α＝0.05)。(G)VDE、PsbS和ZEP的代表性免疫印迹。
图26.在田间条件下生长的转基因烟草植物叶片中VDE、PsbS和ZEP的mRNA和蛋白质水平。(A、C、E)相对于肌动蛋白和微管蛋白的mRNA水平。(B、D、F)通过免疫印迹上的光密度测定法测定的相对于野生型(WT)的蛋白水平。误差条指示SEM(n＝4)，并且星号表示VPZ品系与WT之间的显著差异(α＝0.05)。
图27.转基因豇豆1643B1的NPQ驰豫动力学。X轴是以秒为单位的时间。Y轴是归一化的NPQ。
图28.转基因豇豆1643B1的NPQ诱导和驰豫动力学。X是时间。Y轴是NPQ除以4。
图29.转基因豇豆1643B1在波动光照下的归一化NPQ诱导和弛豫动力学。X是时间。Y轴是NPQ除以4。数据以每组内的最高NPQ归一化。
图30.转基因豇豆CP472A的NPQ诱导和驰豫动力学。X是时间。Y轴是NPQ除以4。
图31.9种转基因稻品系的NPQ诱导和驰豫动力学。
图32.转基因稻的平均NPQ诱导和驰豫动力学。
本专利或申请文件包含至少一幅彩色附图。具有彩色附图的本专利或专利申请公开的副本将在请求和支付必要费用后由专利局提供。
具体实施方式
现在将参考附图在下文中更全面地描述植物、载体和方法，其中示出了本发明的一些但非全部实施方案。实际上，本发明可以以许多不同的形式体现，并且不应该被解释为限于在此阐述的实施方案；相反，提供这些实施方案是为了使本公开满足适用的法律要求。
同样地，本发明所属领域的技术人员受益于先前描述和相关附图中呈现的教导，将会想到本文所述的植物、载体和方法的许多修改和其他实施方案。因此，应当理解，本发明不限于所公开的具体实施方案，并且这些修改和其他实施方案也包括在所附权利要求书的范围内。尽管本文采用了特定术语，但它们仅用于一般性和描述性意义，而不是用于限制目的。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同含义。尽管与本文中描述的那些方法和材料相似或等价的任何方法和材料均可用于本发明的实践或检验，但本文描述优选的方法和材料。
定义
除非另有说明，技术术语是按照常规用法使用的。分子生物学中常见术语的定义可以在Lewin,Genes VII,2001(Oxford University Press),The Encyclopedia ofMolecular Biology,Kendrew等人编辑，1999(Wiley-Interscience)和Molecular Biologyand Biotechnology,a Comprehensive Desk Reference,Robert A.Meyers编辑,1995(VCHPublishers.Inc)，Current Protocols In Molecular Biology,F.M.Ausubel等人编辑，1987(Green Publishing),Sambrook和Russell,Molecular Cloning:A LaboratoryManual，第3版，2001中找到。
术语“多核苷酸”、“核苷酸”、“核苷酸序列”、“核酸”、“基因”和“寡核苷酸”可互换使用。它们是指任何长度的核苷酸聚合形式，为脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或其类似物。多核苷酸可以具有任何三维结构，并且可以执行任何已知或未知的功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段的编码或非编码区；由连锁分析定义的(一个或多个)基因座；外显子；内含子；信使RNA(mRNA)；转移RNA；核糖体RNA；短干扰RNA(siRNA)；短发夹RNA(shRNA)；微RNA(miRNA)；核酶；cDNA；重组多核苷酸；支链多核苷酸；质粒；载体；任何序列的分离的DNA；任何序列的分离的RNA，核酸探针；以及引物。多核苷酸可包含一个或多个经修饰的核苷酸，诸如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。可以在聚合物组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰(如果存在的话)。核苷酸序列可被非核苷酸组分打断。多核苷酸可以在聚合后进一步修饰，诸如通过与标记组分缀合。
如本文所用，“载体”是复制子，诸如质粒、噬菌体或粘粒，另一DNA区段可插入所述复制子中以引起插入区段的复制。本文描述的载体可以是表达载体。
如本文所用，“表达载体”是包括一个或多个表达控制序列的载体。
如本文所用，“表达控制序列”或“表达盒”是控制和调节另一DNA序列的转录和/或翻译的DNA序列。表达控制序列可包含异源或非异源启动子。
如本文所用，“可操作地连接”意指掺入遗传构建体中，使得表达控制序列有效地控制感兴趣的编码序列的表达。
如本文所用，“转化的”和“转染的”涵盖通过本领域已知的多种技术将核酸(例如，载体)引入细胞中。
“质粒”由小写字母“p”表示，所述小写字母前面和/或后面是大写字母和/或数字。
如本文所用，术语“表达水平”是指给定核酸或多肽的可测量表达水平。通过本领域熟知的方法测定给定核酸或多肽的表达水平。术语“差异地表达”或“差异表达”是指给定的核酸或多肽的可测量表达水平的增加或减少。“差异地表达”或“差异表达”意指用于比较的两个样品中的给定核酸或多肽的表达水平1倍或更大，多至且包括2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或更大的差异。如果两个样品之一不含给定核酸或多肽的可检测表达，则也称给定核酸或多肽在两个样品中“差异表达”。
多态性是指基因组内可能具有或可能不具有功能结果的核苷酸序列变异。这些变异可以作为遗传标记开发并用于遗传研究的所有方面，包括将遗传差异与感兴趣性状的变异相关联的分析。如本文所用，术语“多态性”包括但不限于单核苷酸多态性(SNP)、插入/缺失(InDel)、简单序列重复(SSR)、存在/不存在变异(PAV)、以及拷贝数变异(CNV)。多态性可以是天然存在的或人工诱导的。诱导和检测多态性的方法是在本领域中熟知的。
如本文所用，术语“启动子”是指能够控制编码序列或功能性RNA的表达的DNA序列。启动子序列由近端上游元件和更远端的上游元件组成，后一元件通常被称为增强子。“增强子”是可刺激启动子活性的DNA序列，并且可以是启动子的固有元件或插入的异源元件以增强启动子的水平或组织特异性。启动子可以整体衍生自天然基因，或者可由衍生自天然存在的不同启动子的不同元件组成，和/或包含合成的DNA区段。本领域技术人员应理解，不同的启动子可以指导基因在不同组织或细胞类型中表达、或在不同的发育阶段表达、或响应不同的环境条件表达。应进一步认识到，由于在大多数情况下调节序列的确切边界尚未完全确定，因此具有一些变异的DNA片段可具有相同的启动子活性。如本领域所熟知的，可以根据启动子的强度和/或启动子有活性的条件来对启动子进行分类，例如组成型启动子、强启动子、弱启动子、诱导型/阻抑型启动子、组织特异性/发育调节型启动子、细胞周期依赖性启动子等。
如本文所用，术语“基因组编辑”是一种基因工程，其中使用经人工工程化的核酸酶或“分子剪”将DNA插入基因组、置换或从基因组去除DNA。它是以序列特异性方式阐明基因的功能和作用并在基因组内进行改变以产生所需表型变化的有用工具。基因组编辑系统包括但不限于大范围核酸酶、锌指核酸酶(ZFN)、基于转录激活因子样效应因子核酸酶(TALEN)和成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)。
术语“植物”是指植物界的各种光合真核多细胞生物中的任何一种，其特征在于产生胚、含有叶绿体、具有纤维素细胞壁并且缺少移动。如本文所用，“植物”包括在任何发育阶段的任何植物或植物部分，包括种子、悬浮培养物、植物细胞、胚、分生组织区、愈伤组织、叶、根、芽、配子体、孢子体、花粉、小孢子及其后代。还包括插条、细胞或组织培养物。如与本公开结合使用，植物组织包括例如全株植物、植物细胞、植物器官(例如叶、茎、根)、分生组织、植物种子、原生质体、愈伤组织、细胞培养物，以及组织成结构和/或功能单的任何植物细胞组。
术语“植物”以其最广泛的含义使用。它包括但不限于任何木本物种、观赏或装饰物种、作物或谷类物种、果蔬植物物种，以及藻类(例如，莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii))。它还指多种植物细胞，所述植物细胞大部分分化成存在于植物发育的任何阶段的结构。这种结构包括但不限于果、芽、茎、叶、花瓣等。
如本文所用的术语“对照植物”或“野生型”是指用于与转基因或遗传修饰的植物进行比较以用于鉴定转基因或遗传修饰的植物中增强的表型或期望的性状目的的植物细胞、外植体、种子、植物组分、植物组织、植物器官或全株植物。在一些情况下，“对照植物”可以是包含空载体或标记基因但不含有存在于所评估的转基因或遗传修饰植物中的感兴趣重组多核苷酸的转基因植物品系。对照植物可以是与所测试的转基因或遗传修饰植物相同品系或品种的植物，或者它可以是另一品系或品种，诸如已知具有特定表型、特征或已知基因型的植物。合适的对照植物将包括用于产生本文的转基因植物的亲本品系的遗传上未改变的或非转基因的植物。
术语“植物组织”包括植物的分化和未分化组织，包括存在于根、芽、叶、花序、花药、花粉、子房、种子和肿瘤中的那些分化和未分化组织；以及培养物中的细胞(例如，单个细胞、原生质体、胚、愈伤组织等)。植物组织可以在植物原位中、在器官培养物中、在组织培养物或细胞培养物中。
如本文所用的术语“植物部分”是指植物结构、植物器官或植物组织。
“非天然存在的植物”是指在没有人为干预的情况下在自然界中不存在的植物。非天然存在的植物包括转基因植物、通过基因工程产生的植物和通过非转基因手段(诸如传统或市场辅助的植物育种)产生的植物。
术语“植物细胞”是指包括原生质体和细胞壁的植物结构和生理单元。植物细胞可以是分离的单个细胞或培养细胞的形式，或作为更高组织单元的一部分，所述更高组织单元为例如植物组织、植物器官或全株植物。术语“植物细胞培养物”是指植物单元的培养物，所述植物单元为诸如原生质体、液体培养基中或固体培养基中的细胞和细胞团、植物组织和器官中的细胞、小孢子和花粉、花粉管、花药、胚珠、胚囊、受精卵和处于不同发育阶段的胚。
术语“植物材料”是指叶、茎、根、花序和花或花部分、果实、花粉、花药、卵细胞、受精卵、种子、插条、细胞或组织培养物，或植物的任何其他部分或植物产品。
“植物器官”是指明显且可见的经结构化和经分化的植物部分，诸如根、茎、叶、花芽、花序、小穗、小花、种子或胚。
术语“作物植物”具体是指：单子叶植物，诸如谷物(小麦、小米、高粱、黑麦、黑小麦、燕麦、大麦、苔麸(teff)、斯佩耳特小麦、荞麦、福尼奥米和藜麦)、稻、玉米(玉米)和/或甘蔗；或双子叶作物，诸如甜菜(诸如糖用甜菜或饲用甜菜)；果实(诸如梨果、核果或软果，例如苹果、梨、李子、桃子、扁桃仁、樱桃、草莓、树莓或黑莓)；豆科植物(诸如菜豆、兵豆(lentils)、豌豆或大豆)；油料植物(诸如油菜、芥菜、罂粟、橄榄、向日葵、椰子、蓖麻油植物、可可豆或落花生)；黄瓜属(诸如西葫芦、黄瓜或甜瓜)；纤维植物(诸如棉花、亚麻、大麻或黄麻)；柑橘类水果(诸如橙子、柠檬、葡萄柚或柑桔)；蔬菜(诸如菠菜、生菜、卷心菜、胡萝卜、西红柿、土豆、葫芦或红椒)；樟科(诸如鳄梨、肉桂或樟脑)；烟草；坚果；咖啡；茶；藤；啤酒花；榴莲；香蕉；天然橡胶植物；以及观赏植物(诸如花、灌木、阔叶树或常绿植物如针叶树)。该列表不代表任何限制。
术语“木本作物”或“木本植物”是指产生木质部作为其结构组织的植物。木本作物包括树木、灌木或藤本植物。木本作物的实例包括但不限于无刺槐(thornless locust)、杂交栗树、黑胡桃木、日本枫树、桉树、木麻黄(casuarina)、云杉、冷杉、松树(例如辐射松(Pinus radiata)和加勒比松(Pinus caribaea))和多花梾木。
术语“改善的生长”或“增加的生长”在本文以其最广泛的含义使用。它包括植物生长和发育过程中的任何改善或增强。改善生长的实例包括但不限于增加的光合效率、增加的生物质、增加的产率、增加的种子数量、增加的种子重量、增加的茎高度、增加的叶面积和增加的植物干重，
“量子产率”是指每摩尔吸收量子(光子)固定的CO2的摩尔数，或者光被转换成固定碳的效率。光合作用的量子产率衍生自光强度和光合作用速率的测量。因此，量子产率是所吸收光产生特定效果的效率的量度。通过测量转基因植物或植物细胞产生的淀粉量，可间接检测植物细胞或植物中进行的光合作用的量。植物细胞培养物或植物中的光合作用量也可以使用CO2检测器(例如，CO2的减少或消耗指示光合作用水平的增加)或O2检测器(例如，O2水平的增加指示光合作用水平的增加)来检测(参见例如，在Silva等人，AquaticBiology 7:127-141,2009；和Bai等人，Biotechnol.Lett.33:1675-1681,2011中描述的方法)。光合作用也可以使用放射性标记的CO2(例如，14CO2和H14CO3-)来测量(参见例如在Silva等人，Aquatic Biology 7:127-141,2009和其中所引用的参考文献中描述的方法)。还可以通过检测叶绿素荧光来测量光合作用(例如，Silva等人，Aquatic Biology 7:127-141,2009和其中所引用的参考文献)。用于检测植物中光合作用的其他方法描述于Zhang等人，Mol.Biol.Rep.38:4369-4379,2011”中。
在物理科学中，术语“弛豫”意味着被扰动的系统恢复平衡，通常是从高能量水平到低能量水平。如本文所用，术语“非光化学猝灭弛豫”或“NPQ弛豫”是指在从高光强度转变为低光强度时NPQ水平降低的过程。
本文对“约”某值或某参数的提及是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文中对“约”某值或某参数的提及包括(并描述)针对该值或参数本身的各方面。例如，涉及“约X”的描述包括对“X”的描述。
概述
面对快速增长的世界人口，粮食生产的进一步增加是全球政治和社会稳定的必要条件，并且因此预计到2050年为满足这一需求，作物产量需要增加两倍。因此，更好地了解重要作物性状(诸如光合作用)的根本生理过程是改善世界粮食安全危机的关键。光合作用是植物和绿藻用来将光能转化为化学能的过程，所述化学能随后被释放，为生物体的活动提供燃料，在光合作用期间大气中的二氧化碳(CO2)被同化并释放出氧气。固定或同化的CO2量与吸收的光子(量子)量的比率，也称为量子产率，通常用作植物光合效率的量度。
虽然光是光合作用所必需的，但是当叶片暴露于高光强度时会发生损伤。为了避免这种情况，植物已经发展出了几种光保护机制。非光化学猝灭(NPQ)是这些机制之一，其允许过度吸收的辐照度作为热量消散。然而，当植物从高强度转变为低光强度时，由于NPQ抑制CO2固定的事实，光合作用的量子产率暂时降低。此外，NPQ在高光强度下快速开启(诱导)，但在返回到受限辐照度时更慢地关闭(弛豫)。因此，在自然田间条件下常见的波动光照下，植物的光合效率和生长受到损害。
本公开提供一种用于加快在植物从高光强度转变为低光强度后的NPQ弛豫，从而允许CO2固定的光合量子产率更快恢复的方法。该方法包括增加编码光合系统II亚基S(PsbS)、玉米黄质环氧化酶(ZEP)和紫黄质脱环氧化酶(VDE)的一个或多个核苷酸序列的表达。由于这是在不降低NPQ幅度的情况下实现的，因此在高光强度下的正常光保护不受影响。在波动光照条件下，植物往往经历从高光强度到低光强度的转变，这种方法导致改善的光保护效率，并且继而导致改善的光合效率和植物生长。
本公开还提供了一种遗传工程化植物以改善光合作用和生长的方法。可以通过目前可用的方法将包含编码PsbS、ZEP和VDE的核苷酸序列的表达载体引入植物中，所述方法包括但不限于原生质体转化、农杆菌介导的转化、电穿孔、微粒轰击。该方法可用于在包括但不限于以下的植物物种中产生具有改善的光合作用和生长的转基因植物：烟草、小麦、玉米、稻、大豆、高粱、木薯、豇豆、杨树和桉树。
在本领域中熟知的是，NPQ响应和相关的叶黄素循环的根本机制在植物和绿藻中是高度保守的。参见例如Niyogi KK,Truong TB(2013).Evolution of flexible non-photochemical quenching mechanisms that regulate light harvesting in oxygenicphotosynthesis.Curr Op Plant Biol 16:307-314,Koziol AG,Borza T,Ishida K-I,Keeling P,Lee RW,Durnford DG(2007).Tracing the evolution of the light-harvesting antennae in chlorophyll a/b-containing organisms.Plant Physiol143:1802-1816,Engelken J,Brinkmann H,Adamska I(2010).Taxonomic distributionand origins of the extended LHC(light-harvesting complex)antenna proteinsuperfamily.BMC Evol Biol 10:233,Brooks MD,Jansson S,Niyogi KK(2014).PsbS-dependent non-photochemical quenching.In:Non-photochemical quenching andenergy dissipation in plants,algae and cyanobacteria.Demmig-Adams B,Garab G,Adams WW III,Govindjee编辑(Dordrecht:Springer),第297-314页,Kasajima I,EbanaK,Yamamoto T,Takahara K,Yano M,Kawai-Yamada M,Uchimiya H(2011).Moleculardistinction in genetic regulation of nonphotochemical quenching in rice.ProcNatl Acad Sci USA 108:13835-13840,Alboresi A,Gerotto C,Giacometti GM,Bassi R,Morosinotto T(2010).Physcomitrella patens mutants affected on heatdissipation clarify the evolution of photoprotection mechanisms upon landcolonization.Proc Natl Acad Sci USA 107:11128-11133,和Goss R,Lepetit B(2015).Biodiversity of NPQ.Journal of Plant Physiology,172,13-32。因此，本发明公开的方法可以应用于所有植物和绿藻。
除非另有说明，否则本公开涵盖所有的植物转化、植物育种、微生物学、细胞生物学和重组DNA的常规技术，这些技术在本领域的技术范围内。参见例如Sambrook和Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第3版,2001；Current Protocols inMolecular Biology,F.M.Ausubel等人编辑，1987；Plant Breeding:Principles andProspects,M.D.Hayward等人，1993；Current Protocols in Protein Science,Coligan等人编辑，1995,(John Wiley&Sons,Inc.)；the series Methods in Enzymology(AcademicPress,Inc.):PCR 2:A Practical Approach,M.J.MacPherson,B.D.Hames和G.R.Taylor编辑，1995。
在一个方面，提供了转基因植物、或植物部分、或植物材料、或植物种子、或植物细胞，所述转基因植物、或植物部分、或植物材料、或植物种子、或植物细胞包含可操作地连接到表达控制序列的一个或多个异源核苷酸序列，所述异源核苷酸序列编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽。在一个实施方案中，PsbS多肽由SEQ ID NO:1的核苷酸序列编码，ZEP多肽由SEQID NO:2的核苷酸序列编码，并且VDE多肽由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。在另一实施方案中，所述转基因植物包含编码PsbS、ZEP和VDE的核苷酸序列。转基因植物可包含PsbS、ZEP和VDE中的至少两者的任意组合，或仅包含PsbS、ZEP和VDE中的一者。所述核苷酸序列可以与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:3具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的序列相同性。在另一实施方案中，PsbS多肽具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，ZEP多肽具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列，并且VDE多肽具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。所述多肽可以与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的氨基酸序列相同性。拟南芥PsbS、Zep和VDE核苷酸的同源物和由所述核苷酸序列编码的多肽存在于大多数植物物种和下面列出的植物中，并且可以用于代替拟南芥基因。
可以替代地使用具有与PsbS、ZEP和VDE相似活性的酶，或具有保守结构域的那些酶，包括但不限于柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠、甘蓝型油菜、埃塞俄比亚芥、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物和生物质作物中的同源物。PsbS具有保守的Chloroa_b–结合结构域(SEQ ID NO:7)，ZEP包含NADB_Rossman和FHA超家族结构域(SEQ ID NO:8)，并且VDE具有Lipocalin结构域(SEQID NO:9)。也可以使用具有这些结构域的同源物。
在另一实施方案中，转基因植物、或植物部分、或植物材料、或植物种子、或植物细胞是作物植物、模式植物、单子叶植物、双子叶植物、具有景天酸代谢(CAM)光合作用的植物、具有C3光合作用的植物、具有C4光合作用的植物、一年生植物、温室植物、园艺开花植物、多年生植物、柳枝稷植物，玉米植物、生物质植物或甘蔗植物。在另一实施方案中，所述植物选自柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物和生物质作物。在另一实施方案中，所述转基因植物是烟草。在另一实施方案中，所述植物在波动光照条件下具有改善的量子产率和/或CO2固定，和/或改善的生长。基因表达水平的平衡可以在植物改良中起作用。在一个实施方案中，VDE多肽和ZEP多肽以相对相似的水平表达。
在另一实施方案中，转基因植物、或植物部分、或植物材料、或植物种子、或植物细胞具有另外的特征，例如除草剂抗性、昆虫或害虫抗性、疾病抗性、修饰的脂肪酸代谢和/或修饰的碳水化合物代谢。
在另一方面，提供了表达载体，所述表达载体包含至少一个表达控制序列，所述表达控制序列可操作地连接到至少一个核苷酸序列，所述核苷酸序列编码选自PsbS、ZEP和VDE的一种或多种多肽。在一个实施方案中，载体包含至少一个表达控制序列，所述表达控制序列包含启动子，所述启动子能够在植物、植物部分或植物材料、植物种子或植物细胞中驱动编码选自PsbS、ZEP和VDE的一种或多种多肽的核苷酸序列的表达。在另一实施方案中，启动子选自Rbcs1A、GAPA-1和FBA2。在另一实施方案中，载体包含Rbcs1A启动子驱动ZEP的表达，GAPA-1启动子驱动PsbS的表达，并且FBA2启动子驱动VDE的表达。在另一实施方案中，载体是T-DNA。在另一实施方案中，载体包括如图9所示的载体。在另一实施方案中，载体可以在作物植物、模式植物、单子叶植物、双子叶植物、具有景天酸代谢(CAM)光合作用的植物、具有C3光合作用的植物、具有C4光合作用的植物、一年生植物、温室植物、园艺开花植物、多年生植物、柳枝稷植物，玉米植物、生物质植物或甘蔗植物的植物、植物部分、或植物材料、或植物种子、或植物细胞中表达编码PsbS、ZEP和VDE多肽的核苷酸序列。在另一实施方案中，所述植物选自柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物和生物质作物。
在另一方面，提供了转基因植物、或植物部分、或植物材料、或植物种子，所述转基因植物、或植物部分、或植物材料、或植物种子包含如本文所述的重组载体。
在另一方面，提供了增加植物、或植物部分、或植物材料、或植物种子或植物细胞中的生物质产生和/或碳固定和/或生长的方法，所述方法包括将可操作地连接到一个或多个表达控制序列的一个或多个编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的核苷酸序列引入植物、植物组织、植物种子或植物细胞的基因组中。据发现，掺入由核苷酸SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3编码的多肽增加了波动光照条件下的量子产率、CO2固定，并改善了植物生长。在一个实施方案中，该方法包括如本文所述的重组载体。
本公开的转基因植物
在一个方面，本文提供了一种转基因植物，所述转基因植物具有一个或多个编码一种或多种多肽PsbS、ZEP或VDE的异源核苷酸序列。在一些实施方案中，所述转基因植物具有一个或多个编码PsbS的异源核苷酸序列。在一些实施方案中，所述转基因植物具有一个或多个编码ZEP的异源核苷酸序列。在一些实施方案中，所述转基因植物具有一个或多个编码VDE的异源核苷酸序列。在一些实施方案中，所述转基因植物具有一个或多个编码PsbS和ZEP的异源核苷酸序列。在一些实施方案中，所述转基因植物具有一个或多个编码PsbS和VDE的异源核苷酸序列。在一些实施方案中，所述转基因植物具有一个或多个编码ZEP和VDE的异源核苷酸序列。在一些实施方案中，所述转基因植物具有一个或多个编码PsbS、ZEP和VDE的异源核苷酸序列。
在上述的一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自双子叶植物。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自单子叶植物。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自拟南芥。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自玉米。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自稻。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自高粱。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自大豆。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自豇豆。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自杨属物种。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自桉属物种。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自木薯。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自大麦(Hordeum vulgare)。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自马铃薯。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自甘蔗属物种。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自紫花苜蓿。在一些实施方案中，所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassicacarinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的转录物水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、或至少约30倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的蛋白水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约50倍、至少约60倍、至少约70倍、至少约80倍、至少约90倍、或至少约100倍。
光保护机制在高等植物中具有高度保守性。可以通过比较感兴趣基因的核苷酸序列或氨基酸序列来分析保守程度或同源性。如本文所用，“序列相同性”是指在被分析的序列中相同位置上相同残基的百分比。用于比较的序列比对方法是本领域技术人员熟知的，包括但不限于手动比对和计算机辅助序列比对和分析。由于计算机辅助方法提供的通量增加，所以后一种方法是本公开中的优选方法。可以使用数学算法来实现对任何两个序列之间的序列相同性百分比的确定。此类数学算法的实例是Myers和Miller,CABIOS 4:11-17(1988)的算法；Smith等人，Adv.Appl.Math.2:482(1981)的局部同源算法；Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48:443-453(1970)的同源比对算法；Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.85:2444-2448(1988)的相似性检索方法(search-for-similaritymethod)；Karlin和Altschul，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268(1990)的算法,在Karlin和Altschul,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877(1993)中修饰。这些数学算法的计算机实现可用于比较序列以确定序列相同性和/或相似性。此类实现包括例如：PC/Gene程序(可得自Intelligenetics,Mountain View,Calif.)中的CLUSTAL；AlignX程序，版本10.3.0(Invitrogen,Carlsbad,CA)和威斯康星遗传学软件包第8版(可得自GeneticsComputer Group(GCG),575Science Drive,Madison,Wis.,USA)中的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA。可以使用默认参数执行使用这些程序的比对。CLUSTAL程序由Higgins等人Gene 73:237-244(1988)；Higgins等人，CABIOS 5:151-153(1989)；Corpet等人，NucleicAcids Res.16:10881-90(1988)；Huang等人，CABIOS 8:155-65(1992)；和Pearson等人，Meth.Mol.Biol.24:307-331(1994)很好地描述。Altschul等人，J.Mol.Biol.215:403-410(1990)的BLAST程序基于Karlin和Altschul(1990)出处同上的算法。
在上述的一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ IDNO:3具有至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。。
在上述的一些实施方案中，转基因植物含有表达载体，其中所述表达载体含有一个或多个本文所述的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述转基因植物产生含有表达载体的种子，所述表达载体具有编码PsbS、ZEP或VDE中的任何的一个或多个异源核苷酸序列。在一些实施方案中，衍生自所述转基因植物的种子进一步产生后代植物。
在上述的一些实施方案中，与波动光照条件下的对照植物相比，所述转基因植物在波动光照条件下具有增加的生长。在一些实施方案中，与波动光照条件下的对照植物相比，所述转基因植物在波动光照条件下具有增加的光合效率。在一些实施方案中，与波动光照条件下的对照植物相比，所述转基因植物在波动光照条件下具有改善的光保护效率。在一些实施方案中，与波动光照条件下的对照植物相比，所述转基因植物在波动光照条件下具有改善的量子产率和CO2固定。在一些实施方案中，所述转基因植物是优良品系或优良株系。在一些实施方案中，所述转基因植物还包含至少一种另外的多肽的表达，所述多肽提供除草剂抗性、昆虫或害虫抗性、疾病抗性、修饰的脂肪酸代谢和/或修饰的碳水化合物代谢。
在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的转录物水平增加3倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的转录物水平增加3倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的转录物水平增加8倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的转录物水平增加10倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的转录物水平增加3倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的转录物水平增加6倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的转录物水平增加4倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的转录物水平增加1.2倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的转录物水平增加7倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的蛋白水平增加16倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的蛋白水平增加2倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的蛋白水平增加80倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的蛋白水平增加30倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的蛋白水平增加4倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的蛋白水平增加74倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的蛋白水平增加47倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的蛋白水平增加3倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的蛋白水平增加75倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的转录物水平的增加在VDE、PsbS和ZEP之间具有3:3:8、10:3:6或4:1.2:7的比率。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的蛋白水平的增加在VDE、PsbS和ZEP之间具有16:2:80、30:4:74或47:3:75的比率。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的VDE的转录物水平的增加在3倍至10倍的范围内。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的PsbS的转录物水平的增加为约1.2倍至约3倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的ZEP的转录物水平的增加为约6倍至约8倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的VDE的蛋白水平的增加在16倍至47倍的范围内。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的PsbS的蛋白水平的增加为约2倍至约4倍。在上述的一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的ZEP的蛋白水平的增加为约74倍至约80倍。
本公开的表达载体
在另一方面，本发明涉及一种表达载体，所述表达载体具有一个或多个编码PsbS、ZEP和VDE中任何一者的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述表达载体具有一个或多个编码PsbS的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述表达载体具有一个或多个编码ZEP的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述表达载体具有一个或多个编码VDE的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述表达载体具有一个或多个编码PsbS和ZEP的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述表达载体具有一个或多个编码PsbS和VDE的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述表达载体具有一个或多个编码ZEP和VDE的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述表达载体具有一个或多个编码PsbS、ZEP和VDE的核苷酸序列。
在上述的一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ IDNO:3具有至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99％、或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。。
在上述的一些实施方案中，载体包括一个或多个表达控制序列，所述表达控制序列具有能够驱动植物中PsbS、ZEP或VDE的核苷酸序列表达的启动子。在一些实施方案中，启动子是诱导型启动子。在一些实施方案中，启动子是组成型启动子。在一些实施方案中，启动子是弱启动子。在一些实施方案中，启动子是组织特异性启动子。在一些实施方案中，启动子是种子和/或胚胎特异性启动子。在一些实施方案中，启动子是叶特异性启动子。在一些实施方案中，启动子是时间特异性启动子。在一些实施方案中，启动子是花药和/或花粉特异性启动子。在一些实施方案中，启动子是花特异性启动子。在一些实施方案中，在表达载体中使用启动子的组合。
在上述的一些实施方案中，所述启动子是Rbcs1A、GAPA-1或FBA2。在一些实施方案中，Rbcs1A启动子驱动ZEP的表达，GAPA-1启动子驱动PsbS的表达，并且FBA2启动子驱动VDE的表达。在一些实施方案中，载体是T-DNA。在一些实施方案中，表达载体还包含编码提供抗生素抗性的多肽的核苷酸序列。在一些实施方案中，表达载体还包含位于表达控制序列和编码PsbS、ZEP和VDE多肽的核苷酸序列侧翼的左边界(LB)结构域和右边界(RB)结构域。在一些实施方案中，所述表达载体在细菌细胞中。在一些实施方案中，所述表达载体在农杆菌细胞中。
本公开的方法
在某些其他方面，本公开涉及增加植物光合作用和生长的方法，包括增加所述植物中一种或多种本文所述多肽的表达。
在一些实施方案中，通过向植物中引入一个或多个编码PsbS、ZEP和VDE中的任何的异源核苷酸序列来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过修饰编码PsbS、ZEP和VDE中的任何的内源性核苷酸序列的表达来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过修饰编码PsbS、ZEP和VDE中的任何的内源性核苷酸序列的启动子来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过修饰调节PsbS、ZEP和VDE中的任何的转录效率的转录因子来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过增加PsbS、ZEP和VDE中的任何的mRNA的稳定性来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过优化PsbS、ZEP和VDE中的任何在靶植物中的密码子使用来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过改变植物中的表观遗传学来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过改变植物中的DNA甲基化来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过改变植物中的组蛋白修饰来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过改变植物中的小RNA(sRNA)来实现增加的表达。在一些实施方案中，通过增加PsbS、ZEP和VDE中的任何的翻译效率来实现增加的表达。在一些实施方案中，使用包括但不限于ZFN、TALEN和CRISPR的基因组编辑技术来修饰调节PsbS、ZEP和VDE中的任何的表达的核苷酸序列。
在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的转录物水平增加3倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的转录物水平增加3倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的转录物水平增加8倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的转录物水平增加10倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的转录物水平增加3倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的转录物水平增加6倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的转录物水平增加4倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的转录物水平增加1.2倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的转录物水平增加7倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的蛋白水平增加16倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的蛋白水平增加2倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的蛋白水平增加80倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的蛋白水平增加30倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的蛋白水平增加4倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的蛋白水平增加74倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中VDE的蛋白水平增加47倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中PsbS的蛋白水平增加3倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中ZEP的蛋白水平增加75倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的转录物水平的增加在VDE、PsbS和ZEP之间具有3:3:8、10:3:6或4:1.2:7的比率。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的蛋白水平的增加在VDE、PsbS和ZEP之间具有16:2:80、30:4:74或47:3:75的比率。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的VDE的转录物水平的增加在3倍至10倍的范围内。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的PsbS的转录物水平的增加为约1.2倍至约3倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的ZEP的转录物水平的增加为约6倍至约8倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的VDE的蛋白水平的增加在16倍至47倍的范围内。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的PsbS的蛋白水平的增加为约2倍至约4倍。在一些实施方案中，与对照植物相比，所述植物中的ZEP的蛋白水平的增加为约74倍至约80倍。
用于增加波动光照条件下生长的方法
在一个方面，本文提供了增加植物在波动光照条件下的生长的方法，包括增加植物中PsbS、ZEP和/或VDE的表达，从而产生与对照植物相比具有所述一种或多种多肽的表达增加的植物。在一些实施方案中，增加的表达是增大的转录物水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的转录物水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、或至少约30倍。在一些实施方案中，增加的表达是增加的蛋白水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的蛋白水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约50倍、至少约60倍、至少约70倍、至少约80倍、至少约90倍、或至少约100倍。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS、ZEP和VDE的表达。
在上述的一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。
在上述的一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
在上述的一些实施方案中，所述植物是玉米(Zea mays)。在一些实施方案中，所述植物是稻(Oryza sativa)。在一些实施方案中，所述植物是高粱(Sorghum bicolor)。在一些实施方案中，所述植物是大豆(Glycine max)。在一些实施方案中，所述植物是豇豆(Vigna unguiculata)。在一些实施方案中，所述植物是杨属物种(Populus spp)。在一些实施方案中，所述植物是桉属物种(Eucalyptus spp)。在一些实施方案中，所述植物是木薯(Manihot esculenta)。在一些实施方案中，所述植物是大麦(Hordeum vulgare)。在一些实施方案中，所述植物是马铃薯(Solanum tuberosum)。在一些实施方案中，所述植物是甘蔗属物种(Saccharum spp)。在一些实施方案中，所述植物是紫花首蓿(Medicago sativa)。在一些实施方案中，所述植物是柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
用于增加波动光照条件下光合效率的方法
在另一方面，本文提供了增加植物在波动光照条件下的光合效率的方法，包括增加植物中PsbS、ZEP或VDE中的任何的表达，从而产生与对照植物相比具有所述一种或多种多肽的表达增加的植物。在一些实施方案中，增加的表达是增加的转录物水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的转录物水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、或至少约30倍。在一些实施方案中，增加的表达是增加的蛋白水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的蛋白水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约50倍、至少约60倍、至少约70倍、至少约80倍、至少约90倍、或至少约100倍。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS、ZEP和VDE的表达。
在上述的一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。
在上述的一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
在上述的一些实施方案中，所述植物是玉米(Zea mays)。在一些实施方案中，所述植物是稻(Oryza sativa)。在一些实施方案中，所述植物是高粱(Sorghum bicolor)。在一些实施方案中，所述植物是大豆(Glycine max)。在一些实施方案中，所述植物是豇豆(Vigna unguiculata)。在一些实施方案中，所述植物是杨属物种(Populus spp)。在一些实施方案中，所述植物是桉属物种(Eucalyptus spp)。在一些实施方案中，所述植物是木薯(Manihot esculenta)。在一些实施方案中，所述植物是大麦(Hordeum vulgare)。在一些实施方案中，所述植物是马铃薯(Solanum tuberosum)。在一些实施方案中，所述植物是甘蔗属物种(Saccharum spp)。在一些实施方案中，所述植物是紫花首蓿(Medicago sativa)。在一些实施方案中，所述植物是柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
用于增加波动光照条件下光保护效率的方法
在另一方面，本文提供了增加植物在波动光照条件下的光保护效率的方法，包括增加植物中PsbS、ZEP和/或VDE的表达，从而产生与对照植物相比具有所述一种或多种多肽的表达增加的植物。在一些实施方案中，增加的表达是增加的转录物水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的转录物水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、或至少约30倍。在一些实施方案中，增加的表达是增加的蛋白水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的蛋白水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约50倍、至少约60倍、至少约70倍、至少约80倍、至少约90倍、或至少约100倍。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS、ZEP和VDE的表达。
在上述的一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。
在上述的一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
在上述的一些实施方案中，所述植物是玉米(Zea mays)。在一些实施方案中，所述植物是稻(Oryza sativa)。在一些实施方案中，所述植物是高粱(Sorghum bicolor)。在一些实施方案中，所述植物是大豆(Glycine max)。在一些实施方案中，所述植物是豇豆(Vigna unguiculata)。在一些实施方案中，所述植物是杨属物种(Populus spp)。在一些实施方案中，所述植物是桉属物种(Eucalyptus spp)。在一些实施方案中，所述植物是木薯(Manihot esculenta)。在一些实施方案中，所述植物是大麦(Hordeum vulgare)。在一些实施方案中，所述植物是马铃薯(Solanum tuberosum)。在一些实施方案中，所述植物是甘蔗属物种(Saccharum spp)。在一些实施方案中，所述植物是紫花首蓿(Medicago sativa)。在一些实施方案中，所述植物是柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
用于增加波动光照条件下的量子产率和CO2固定的方法
在另一方面，本文提供了增加植物在波动光照条件下的量子产率和CO2固定的方法，包括增加植物中PsbS、ZEP和/或VDE的表达，从而产生与对照植物相比具有所述一种或多种多肽的表达增加的植物。在一些实施方案中，增加的表达是增加的转录物水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的转录物水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、或至少约30倍。在一些实施方案中，增加的表达是增加的蛋白水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的蛋白水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约50倍、至少约60倍、至少约70倍、至少约80倍、至少约90倍、或至少约100倍。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS、ZEP和VDE的表达。
在上述的一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。
在上述的一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
在上述的一些实施方案中，所述植物是玉米(Zea mays)。在一些实施方案中，所述植物是稻(Oryza sativa)。在一些实施方案中，所述植物是高粱(Sorghum bicolor)。在一些实施方案中，所述植物是大豆(Glycine max)。在一些实施方案中，所述植物是豇豆(Vigna unguiculata)。在一些实施方案中，所述植物是杨属物种(Populus spp)。在一些实施方案中，所述植物是桉属物种(Eucalyptus spp)。在一些实施方案中，所述植物是木薯(Manihot esculenta)。在一些实施方案中，所述植物是大麦(Hordeum vulgare)。在一些实施方案中，所述植物是马铃薯(Solanum tuberosum)。在一些实施方案中，所述植物是甘蔗属物种(Saccharum spp)。在一些实施方案中，所述植物是紫花首蓿(Medicago sativa)。在一些实施方案中，所述植物是柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
增加波动光照条件下非光化学猝灭NPQ)弛豫速率的方法
在另一方面，本文提供了增加植物中非光化学猝灭(NPQ)弛豫速率的方法，包括增加植物中PsbS、ZEP和/或VDE的表达，从而产生与对照植物相比具有所述一种或多种多肽的表达增加的植物。在一些实施方案中，增加的表达是增加的转录物水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的转录物水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、或至少约30倍。在一些实施方案中，增加的表达是增加的蛋白水平的形式。在一些实施方案中，与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的蛋白水平增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约50倍、至少约60倍、至少约70倍、至少约80倍、至少约90倍、或至少约100倍。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和ZEP的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加ZEP和VDE的表达。在一些实施方案中，所述方法包括增加PsbS、ZEP和VDE的表达。
在上述的一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。
在上述的一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
在上述的一些实施方案中，所述植物是玉米(Zea mays)。在一些实施方案中，所述植物是稻(Oryza sativa)。在一些实施方案中，所述植物是高粱(Sorghum bicolor)。在一些实施方案中，所述植物是大豆(Glycine max)。在一些实施方案中，所述植物是豇豆(Vigna unguiculata)。在一些实施方案中，所述植物是杨属物种(Populus spp)。在一些实施方案中，所述植物是桉属物种(Eucalyptus spp)。在一些实施方案中，所述植物是木薯(Manihot esculenta)。在一些实施方案中，所述植物是大麦(Hordeum vulgare)。在一些实施方案中，所述植物是马铃薯(Solanum tuberosum)。在一些实施方案中，所述植物是甘蔗属物种(Saccharum spp)。在一些实施方案中，所述植物是紫花首蓿(Medicago sativa)。在一些实施方案中，所述植物是柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
用于选择在波动光照条件下具有改善生长特征的植物的方法
在另一方面，本文提供了用于选择在波动光照条件下具有改善的生长特征的植物的方法，包括以下步骤：提供植物群体；修饰所述植物群体以增加PsbS、ZEP和VDE中任何的活性；检测在波动光照条件下植物中非光化学猝灭(NPQ)的水平；将波动光照条件下植物中的NPQ水平与波动光照条件下的对照NPQ水平进行比较；以及选择当从高光强度下转变为低光强度下时具有增加的NPQ弛豫速率的植物。在一些实施方案中，对照NPQ水平是群体中的最低NPQ水平。在一些实施方案中，对照NPQ水平是群体中的中值NPQ水平。在一些实施方案中，对照NPQ水平是群体中的平均NPQ水平。在一些实施方案中，对照NPQ水平是对照植物中的NPQ水平。在一些实施方案中，群体包括表达PsbS、ZEP和/或VDE的异源序列的植物，或者其中已编辑基因组以增加PsbS，ZEP和/或VDE的表达的植物。在一些实施方案中，基因组编辑技术是ZFN。在一些实施方案中，基因组编辑技术是TALEN。在一些实施方案中，基因组编辑技术是CRISPR。在一些实施方案中，修饰PsbS的启动子。在一些实施方案中，修饰ZEP的启动子。在一些实施方案中，修饰VDE的启动子。在一些实施方案中，所述群体包括已经过处理以诱导PsbS、ZEP和/或VDE突变的植物。在一些实施方案中，诱变剂是EMS。
在上述的一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。
在上述的一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
在上述的一些实施方案中，所述植物是玉米(Zea mays)。在一些实施方案中，所述植物是稻(Oryza sativa)。在一些实施方案中，所述植物是高粱(Sorghum bicolor)。在一些实施方案中，所述植物是大豆(Glycine max)。在一些实施方案中，所述植物是豇豆(Vigna unguiculata)。在一些实施方案中，所述植物是杨属物种(Populus spp)。在一些实施方案中，所述植物是桉属物种(Eucalyptus spp)。在一些实施方案中，所述植物是木薯(Manihot esculenta)。在一些实施方案中，所述植物是大麦(Hordeum vulgare)。在一些实施方案中，所述植物是马铃薯(Solanum tuberosum)。在一些实施方案中，所述植物是甘蔗属物种(Saccharum spp)。在一些实施方案中，所述植物是紫花首蓿(Medicago sativa)。在一些实施方案中，所述植物是柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
用于筛选与波动光照条件下改善的生长特征相关的多态性的方法
在另一方面，本文提供筛选与波动光照条件下改善的生长特征相关的核苷酸序列多态性的方法，包括以下步骤：提供植物群体；获得所述植物群体中调节和/或编码PsbS、ZEP和VDE中的任何的核苷酸序列；获得所述植物群体中调节和/或编码PsbS、ZEP和VDE中的任何的核苷酸序列中的一个或多个多态性；检测所述植物群体在从高光强度转变为低光强度时非光化学猝灭(NPQ)的弛豫速率；进行统计分析以确定多态性与所述植物群体中的NPQ弛豫速率的关联；以及选择与NPQ弛豫速率具有统计学显著相关性的多态性。在一些实施方案中，群体是种质的集合。在一些实施方案中，群体包括表达PsbS、ZEP和/或VDE的异源序列的植物，或者其中已编辑基因组以增加PsbS，ZEP和/或VDE的表达的植物。在一些实施方案中，所述群体包括尚未经处理来诱导突变的植物。在一些实施方案中，所述群体包括已经过处理以诱导PsbS、ZEP和/或VDE突变的植物。在一些实施方案中，多态性是单核苷酸多态性(SNP)。在一些实施方案中，多态性是插入/缺失(InDel)。在一些实施方案中，多态性是简单序列重复(SSR)。在一些实施方案中，多态性是存在/不存在变异(PAV)。在一些实施方案中，多态性是拷贝数变异(CNV)。在一些实施方案中，多态性位于PsbS的启动子中。在一些实施方案中，多态性位于ZEP的启动子中。在一些实施方案中，多态性位于VDE的启动子中。在一些实施方案中，通过Sanger测序检测多态性。在一些实施方案中，通过下一代测序检测多态性。在一些实施方案中，通过琼脂糖凝胶电泳检测多态性。在一些实施方案中，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测多态性。在一些实施方案中，多态性进一步用于筛选与鉴定出多态性的群体不同的群体。在一些实施方案中，多态性进一步用作基因组编辑的靶以改善植物的生长特征。
在上述的一些实施方案中，所述改善的生长特征是改善的生长。在一些实施方案中，所述改善的生长特征是改善的光合效率。在一些实施方案中，所述改善的生长特征是改善的光保护效率。在一些实施方案中，所述改善的生长特征是改善的量子产率和CO2固定。在一些实施方案中，所述改善的生长特征是增加的非光化学猝灭(NPQ)弛豫速率。在一些实施方案中，使用叶绿素荧光成像检测NPQ。
在上述的一些实施方案中，PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，VDE由与SEQ ID NO:3具有至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同性的核苷酸序列编码。
在上述的一些实施方案中，PsbS具有与SEQ ID NO:4至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VDE具有与SEQ ID NO:6至少约65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，PsbS还包含SEQ ID NO:7的保守结构域。在一些实施方案中，ZEP还包含SEQ ID NO:8的保守结构域。在一些实施方案中，VDE还包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
在上述的一些实施方案中，所述植物是玉米(Zea mays)。在一些实施方案中，所述植物是稻(Oryza sativa)。在一些实施方案中，所述植物是高粱(Sorghum bicolor)。在一些实施方案中，所述植物是大豆(Glycine max)。在一些实施方案中，所述植物是豇豆(Vigna unguiculata)。在一些实施方案中，所述植物是杨属物种(Populus spp)。在一些实施方案中，所述植物是桉属物种(Eucalyptus spp)。在一些实施方案中，所述植物是木薯(Manihot esculenta)。在一些实施方案中，所述植物是大麦(Hordeum vulgare)。在一些实施方案中，所述植物是马铃薯(Solanum tuberosum)。在一些实施方案中，所述植物是甘蔗属物种(Saccharum spp)。在一些实施方案中，所述植物是紫花首蓿(Medicago sativa)。在一些实施方案中，所述植物是柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠(Camelina)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
本文所述的实施方案的一般实践方法
用感兴趣的核苷酸序列转化植物
可以使用常规技术产生转基因植物以在植物或植物细胞中表达任何感兴趣的核苷酸序列(Methods in Molecular Biology,2005,第286卷，Transgenic Plants:Methodsand Protocols,Pena L.编辑，Humana Press,Inc.Totowa,NT)。通常，使用能够再生的外植体进行基因转移或转化以产生完整的、能育的植物。通常，待引入生物体的DNA或RNA分子是转化载体的部分。可以使用本领域已知的大量此类载体系统，诸如质粒。可以修饰表达系统的组分，例如以增加所引入的核酸的表达。例如，可以采用截短的序列、核苷酸取代或其他修饰。本领域中已知的表达系统可用于在合适的条件下转化几乎任何植物细胞。包含编码感兴趣基因的DNA分子的转基因优选稳定转化并整合到宿主细胞的基因组中。转化细胞优选再生成完整的植物。转化技术的详细描述在本领域技术人员的知识范围内。
用于转化的遗传构建体
可用于本文所述方法的DNA构建体包括能够将转基因引入植物中的转化载体。如本文所用，“转基因”是指这样的生物体，在所述生物体中已经引入了含有异源核苷酸序列的核酸片段。转基因生物体中的转基因优选是稳定的和可遗传的。异源核酸片段可或可不整合到宿主基因组中。
有几种植物转化载体选项可用，包括在Gene Transfer to Plants,1995,Potrykus等人编辑，Springer-Verlag Berlin Heidelberg New York,TransgenicPlants:A Production System for Industrial and Pharmaceutical Proteins,1996,Owen等人编辑，John Wiley&Sons Ltd.England,and Methods in Plant MolecularBiology:A Laboratory Course Manual,1995,Maliga等人编辑，Cold Spring LaboratoryPress,New York中所描述的那些植物转化载体。植物转化载体通常包括在5'和3'调节序列(包括启动子、转录终止和/或聚腺苷酸化信号，以及可选择的或可筛选的标记基因)的转录控制下的一种或多种感兴趣编码序列。为了从单个转录物表达两种或更多种多肽，可以将额外的RNA加工信号和核酶序列工程化到构建体中(美国专利No.5,519,164)。该方法具有在单个基因座中安置多个转基因的优点，这在后续的植物育种工作中是有利的。在一个实施方案中，载体包含至少一个表达控制序列，所述表达控制序列包含启动子，所述启动子能够在植物、植物部分或植物材料、植物种子或植物细胞中驱动编码选自PsbS、ZEP和VDE的一种或多种多肽的核苷酸序列的表达。在另一实施方案中，启动子选自Rbcs1A、GAPA-1和FBA2。在另一实施方案中，Rbcs1A启动子驱动ZEP的表达，GAPA-1启动子驱动PsbS的表达，并且FBA2启动子驱动VDE的表达。在另一实施方案中，载体是T-DNA。在另一实施方案中，载体如图9所示。如本领域技术人员已知的，在一种植物类型中起作用的特定启动子和载体可能在另一种植物类型中不起作用。如本文所述，制备转基因植物的方法是本领域中熟知的。
T-DNA
通过农杆菌介导的转化方法将转基因引入植物中的方法通常涉及T-DNA(转移DNA)，所述T-DNA掺入至少一种转基因的遗传元件并将这些遗传元件转移到植物的基因组中。(一个或多个)转基因通常在DNA质粒载体中构建，并且通常侧接农杆菌Ti质粒右边界DNA区域(RB)和左边界DNA区域(LB)。在农杆菌介导的转化过程中，DNA质粒在右边界区域和左边界区域处由核酸内切酶VirD2切割。将来自切口之间的单链DNA(称为T链)从农杆菌细胞转移至植物细胞。将对应于T-DNA区域的序列插入植物基因组中。
将T-DNA整合到植物基因组中通常在RB处开始并且持续到T-DNA末端(LB处)。然而，核酸内切酶有时在两个边界不进行平等切割。当发生这种情况时，插入植物基因组的T-DNA通常含有一些或全部质粒载体DNA。这种现象被称为“通读(read-through)”。期望的方法通常是仅将位于右边界区域和左边界区域之间的(一个或多个)转基因(所述T-DNA)转移到植物基因组中，而不转移任何相邻的质粒载体DNA(载体骨架)。载体骨架DNA含有各种质粒维持元件，包括例如复制起点、细菌选择标记基因和在植物中表达所需(一个或多个)性状不需要的其他DNA片段。
工程化的微染色体也可用于在植物细胞中表达一种或多种基因。引入细胞的克隆端粒重复序列可以通过在整合位点处形成新的端粒来截短染色体的远端部分。使用这种方法，可以通过修剪天然植物染色体的臂并添加大插入物的插入位点来制备用于基因转移的载体(Yu等人，2006,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:17331-17336；Yu等人，2007,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 104:8924-8929)。
在植物中进行染色体工程化的另选方法涉及自主植物微染色体的体内组装(Carlson等人，2007,PLoS Genet.3:1965-74)。可以用着丝粒序列转化植物细胞，并筛选具有从头组装自主染色体的植物。有用的构建体将选择标记基因与含有着丝粒卫星和反转录元件序列和/或其他重复序列的基因组DNA片段组合。
可用于所述发明的另一种方法是工程化性状基因座("ETL")技术(美国专利No.6,077,697；US 2006/0143732)。该系统将DNA靶向植物染色体的异染色质区，诸如在近端着丝染色体的短臂中的臂间异染色质。靶向序列可包括核糖体DNA(rDNA)或λ噬菌体DNA。臂间rDNA区支持稳定插入、低重组和高水平的基因表达。该技术还可用于在植物中堆叠多种性状(US 2006/0246586)。
锌指核酸酶(ZFN)、TALEN和CRISPR-Cas9还可用于实践本发明，因为它们允许在植物染色体的特定位点处进行双链DNA切割，从而可以进行靶基因插入或缺失(Shukla等人，2009,Nature 459:437-441；Townsend等人，2009,Nature 459:442-445,WO 2015089427A1)。
基于组织培养的核转化方法
转化方案以及用于将核苷酸序列引入植物的方案可以根据转化所靶向的植物或植物细胞的类型(即，单子叶植物或双子叶植物)而变化。
在Somleva&Ali的US 2010/0229256 Al和Somleva等人的US 2012/0060413中描述了将核苷酸序列引入植物细胞并随后插入植物基因组内的合适方法。
根据常规技术使转化细胞生长成植物。参见例如McCormick等人，1986,PlantCell Rep.5:81-84。然后可以使这些植物生长，并用相同的转化品种或不同品种授粉，并鉴定出具有所需表型特征的组成型表达的所得杂合体。可以生长两代或更多代以确保稳定维持和遗传所需表型特征的组成型表达，然后收获种子以确保已经实现所需表型特征的组成型表达。
植物原位转化方法
植物原位转化(in planta transformation)的程序并不复杂。避免了组织培养操纵和可能的体细胞克隆变异，并且仅需要短的时间来获得转基因植物。然而，这种接种植物的后代中转化体的频率相对较低并且可变。目前，在没有基于组织培养的再生系统的情况下，很少有物种可以常规转化。稳定的拟南芥转化体可通过几种植物原位方法获得，所述植物原位方法包括真空渗入(Clough&Bent,1998,The Plant J.16:735-743)、萌芽种子的转化(Feldmann&Marks,1987,Mol.Gen.Genet.208:1-9)、花器浸蘸法(Clough和Bent,1998,Plant J.16:735-743)和花器喷雾的转化法(Chung等人，2000,Transgenic Res.9:471-476)。已经通过植物原位方法成功转化的其他植物包括油菜籽和萝卜(真空渗入,Ian和Hong,2001,Transgenic Res.,10:363-371；Desfeux等人，2000,Plant Physiol.123:895-904)、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)(真空渗入,Trieu等人，2000,Plant J.22:531-541)、亚麻荠(花器浸蘸法,Nguyen等人的WO/2009/1 17555)和小麦(花器浸蘸法,Zale等人，2009,Plant Cell Rep.28:903-913)。植物原位方法也已经被用于转化玉米中的生殖细胞(花粉,Wang等人，2001,Acta Botanica Sin.,43,275-279；Zhang等人，2005,Euphytica,144,11-22；雌蕊,Chumakov等人，2006,Russian J.Genetics,42,893-897；Mamontova等人，2010,Russian J.Genetics,46,501-504)和Sorghum(花粉,Wang等人，2007,Biotechnol.Appl.Biochem.,48,79-83)。
报告基因和选择性标记基因
报告基因和/或选择性标记基因可以包括在表达控制序列(表达盒)中，如在美国专利申请20100229256和20120060413中所述，所述美国专利申请以引用方式并入本文。包含与感兴趣异源核苷酸序列可操作连接的启动子序列的表达盒可用于通过上述方法中的任一方法来转化任何植物。在本文的实例中描述了针对一系列不同作物物种的有用选择标记基因和选择转基因品系的方法。
植物中的核苷酸序列表达
可以选择植物启动子来控制核苷酸序列在不同植物组织或细胞器中的表达，所有这些方法都是本领域的技术人员已知的(Gasser&Fraley,1989,Science 244:1293-1299)。
可以使用的(一个或多个)启动子的选择取决于若干因素，包括但不限于效率、选择性、可诱导性、期望的表达水平和/或优选的细胞表达或组织表达。对于本领域的技术人员而言，通过相对于核苷酸序列适当地选择和定位启动子和其他调节区来调控该核苷酸序列的表达是常规事项。可以使用的启动子的实例在本领域中是已知的。可以使用的启动子包括植物基因组中存在的那些启动子，以及来自其他来源的启动子。一些合适的启动子仅在某些细胞类型中或主要在某些细胞类型中启动转录。用于鉴定和表征植物基因组DNA中的启动子区的方法包括例如在Jordano等人，Plant Cell 1:855-866,1989；Bustos等人，Plant Cell 1:839-854,1989；Green等人，EMBO J.7:4035-4044,1988；Meier等人，PlantCell 3:309-316,1991；和Zhang等人，Plant Physiology 110:1069-1079,1996中描述的。
可以使用的启动子的额外实例包括核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶(RbcS)启动子，诸如来自美洲落叶松(Larix laricina)的RbcS启动子、松cab6启动子(Yamamoto等人，PlantCell Physiol.35:773-778,1994)、来自小麦的Cab-1基因启动子(Fejes等人，PlantMol.Biol.15:921-932,1990)、来自菠菜的CAB-1启动子(Lubberstedt等人，PlantPhysiol.104:997-1006,1994)、来自稻的cab1R启动子(Luan等人，Plant Cell 4:971-981,1992)、来自玉米的GAPA-1启动子、来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的FBA2启动子、来自玉米的丙酮酸磷酸二激酶(PPDK)启动子(Matsuoka等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:9586-9590,1993)、烟草Lhcb1*2启动子(Cerdan等人，Plant Mol.Biol.33:245-255,1997)、拟南芥SUC2蔗糖-H+同向转运启动子(Truernit等人，Planta 196:564-570,1995)和来自菠菜的类囊体膜蛋白启动子(psaD、psaF、psaE、PC、FNR、atpC、atpD、cab和rbcS)。可用于驱动茎、叶和绿色组织中的基因转录的其他示例性启动子描述于美国专利申请公开No.2007/0006346中，所述美国专利申请公开全文以引用方式并入本文。导致在植物绿色组织中优选表达的其他启动子包括来自诸如以下基因的那些启动子：拟南芥核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶(Rubisco)小亚基(Fischhoff等人，PlantMol.Biol.20:81-93,1992)、醛缩酶和丙酮酸正磷酸二激酶(PPDK)(Taniguchi等人，PlantCell Physiol.41(1):42-48,2000)。
诱导型启动子
化学调节的启动子可通过应用外源化学调节剂来用于调控植物中核苷酸序列的表达。取决于目的，启动子可以是化学诱导型启动子，其中化学物质的应用诱导基因表达；或化学阻抑型启动子，其中化学物质的应用抑制基因表达。化学诱导型启动子在本领域中是已知的，并且包括但不限于玉米ln2-2启动子，所述启动子由苯磺酰胺除草剂安全剂活化；玉米GST启动子，所述启动子由用作出苗前除草剂的疏水性亲电子化合物活化；以及烟草PR-1启动子，所述启动子由水杨酸活化。其他化学调节的启动子包括类固醇反应性启动子[参见例如，糖皮质激素诱导型启动子(Schena等人，1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:10421-10425；McNellis等人，1998,Plant 14:247-257)和四环素诱导型和四环素阻抑型启动子(参见例如Gatz等人，1991,Mol.Gen.Genet.227:229-237；美国专利No.5,814,618和No.5,789,156，所述美国专利全文以引用方式并入本文中)。最近已经报道了适用于植物代谢工程的三组分渗透诱导表达系统(Feng等人，2011,PLoS ONE 6:1-9)。
组成型启动子
组成型启动子包括例如在WO 99/43838和美国专利No 6,072,050中公开的Rsyn7启动子的核心启动子和其他组成型启动子；核心CaMV 35S启动子(Odell等人，1985,Nature313:810-812)；稻肌动蛋白(McElroy等人，1990,Plant Cell 2:163-171)；泛素(Christensen等人，1989,Plant Mol.Biol.12:619-632；Christensen等人，1992,PlantMol.Biol.18:675-689)；pEMU(Last等人，1991,Theor.Appl.Genet.81:581-588)；MAS(Velten等人，1984,EMBO J.3:2723-2730)和ALS启动子(美国专利No 5,659,026)。其他组成型启动子描述于美国专利No 5,608,149；5,608,144；5,604,121；5,569,597；5,466,785；5,399,680；5,268,463；和5,608,142中。
弱启动子
在需要低水平表达的情况下，可以使用弱启动子。通常，术语“弱启动子”旨在描述驱动低水平的核苷酸序列表达的启动子。在启动子以高水平表达不可接受的情况下，可以缺失或修饰启动子序列的部分以降低表达水平。这种弱组成型启动子包括例如，Rsyn7启动子的核心启动子(WO 99/43838和美国专利No 6,072,050)。
组织特异性启动子
可使用“组织优选”启动子来靶向特定组织内的基因表达。与化学诱导系统相比，发育和空间调节的刺激更少依赖于外部因素对植物细胞的渗透。组织优选启动子包括由Van Ex等人，2009,Plant Cell Rep.28:1509-1520；Yamamoto等人，1997,Plant J.12:255-265；Kawamata等人，1997,Plant Cell Physiol.38:792-803；Hansen等人，1997,Mol.Gen.Genet.254:337-343；Russell等人，199)，Transgenic Res.6:157-168；Rinehart等人，1996,Plant Physiol.1 12:1331-1341；Van Camp等人，1996,Plant Physiol.112:525-535；Canevascini等人，1996,Plant Physiol.1 12:513-524；Yamamoto等人，1994,Plant Cell Physiol.35:773-778；Lam,1994,Results Probl.Cell Differ.20:181-196,Orozco等人，1993,Plant Mol.Biol.23:1 129-1 138；Matsuoka等人，1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:9586-9590，和Guevara-Garcia等人，1993,Plant J.4:495-505描述的那些。如果需要的话，可以修饰此类启动子以进行弱表达。
种子/胚特异性启动子
“种子优选”启动子包括“种子特异性”启动子(在种子发育期间有活性的那些启动子，诸如种子贮藏蛋白的启动子)以及“种子发芽”启动子(在种子萌芽期间有活性的那些启动子)。参见Thompson等人，1989,BioEssays 10:108-1 13，该文献以引用方式并入本文。此类种子优选启动子包括但不限于Ciml(细胞分裂素诱导的信使)、cZ19B l(玉米19kDa玉米醇溶蛋白)、milps(肌醇-1-磷酸合酶))和celA(纤维素合酶)。γ-玉米醇溶蛋白是优选的胚乳特异性启动子。Glob-1是优选的胚特异性启动子。对于双子叶植物，种子特异性启动子包括但不限于豆β-菜豆蛋白、油菜籽蛋白、β-伴大豆球蛋白、大豆凝集素、十字花科蛋白(cruciferin)等。对于单子叶植物，种子特异性启动子包括但不限于玉米15kDa玉米醇溶蛋白、22kDa玉米醇溶蛋白、27kDa玉米醇溶蛋白、g-玉米醇溶蛋白、蜡质、收缩蛋白(shrunken)1、收缩蛋白2和球蛋白1。胚胎发育晚期丰富的蛋白基因LEA的阶段特异性发育启动子已经成功地在种子终止子技术中用于驱动在胚胎发育晚期阶段驱动用于切除介导的致死基因表达的重组系统(Oliver等人的美国专利No.5,723,765)。
叶特异性启动子
叶特异性启动子在本领域中是已知的。参见例如Thilmony等人所有的WO/2011/041499和美国专利No 201 1/0179511Al；Yamamoto等人，1997,Plant J.12:255-265；Kwon等人，1994,Plant Physiol.105:357-367；Yamamoto等人，1994,Plant Cell Physiol.35:773-778；Gotor等人，1993,Plant J.3:509-518；Orozco等人，1993,Plant Mol.Biol.23:1129-1 138，和Matsuoka等人，1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:9586-9590。
时间特异性启动子
还考虑了可以在发育时间框架过程中利用的时间启动子，例如在植物达到叶成熟后开启以增强碳流动的时间启动子。
花药/花粉特异性启动子
已经鉴定了在花药和/或花粉中特异性表达的许多基因，并且已经表征了它们在花粉发育和育性中的功能。已经发现这些基因的特异性主要在转录水平上受它们的启动子调节(Ariizumi等人，2002,Plant Cell Rep.21:90-96和其中的参考文献)。已经分离并在功能上分析了大量花药和/或花粉特异性启动子及其来自不同植物物种的关键ds元件。
花特异性启动子
花优选启动子包括但不限于CHS(Liu等人，201 1,Plant Cell Rep.30:2187-2194)、OsMADS45(Bai等人，2008,Transgenic Res.17:1035-1043)、PSC(Liu等人，2008,Plant Cell Rep.27:995-1004)、LEAFY、AGAMOUS和API(Van Ex等人，2009,Plant CellRep.28:1509-1520)、API(Verweire等人，2007,Plant Physiol.145:1220-1231)、PtAGIP(Yang等人，201 1,Plant Mol.Biol.Rep.29:162-170)、Leml(Somleva&Blechl,2005,Cereal Res.Comm.33:665-671；Skadsen等人，2002,Plant Mol.Biol.45:545-555)、Lem2(Abebe等人，2005,Plant Biotechnol.J.4:35-44)、AGL6和AGL13(Schauer等人，2009,Plant J.59:987-1000)。
启动子的组合
某些实施方案使用具有携带多于一种启动子的多基因表达构建体的转基因植物或植物细胞。启动子可以相同或不同。
所述启动子中的任何启动子可用于以确定的时空方式控制本发明的核苷酸序列、其同源物和/或直系同源物以及任何其他感兴趣基因中的一者或多者的表达。
玉米启动子
用于转化植物细胞的转基因DNA构建体将包含希望引入的异源核苷酸和启动子以在宿主玉米细胞中表达异源核苷酸。如本领域中熟知的，此类构建体还可根据需要包括元件，诸如以下调节元件：3'非翻译区(诸如聚腺苷酸化位点)、转运肽或信号肽以及标记基因元件等。1.调节元件，在文献中已经描述了许多在植物细胞中有活性的启动子，包括组成型和组织特异性启动子和诱导型启动子两者。参见美国专利6,437,217的背景技术部分中对在植物中起作用的多种启动子的描述。此类启动子包括胭脂碱合酶(NOS)和章鱼碱合酶(OCS)启动子，所述启动子被根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的肿瘤诱导质粒运载；花椰菜花叶病毒属(caulimovirus)启动子，诸如花椰菜花叶病毒(cauliflower mosaicvirus)(CaMV)19S和35S启动子和玄参花叶病毒(figwort mosaic virus)(FMV)35S启动子；增强的CaMV35S启动子(e35S)；来自核酮糖二磷酸羧化酶的小亚基的光诱导型启动子(ssRUBISCO，非常丰富的植物多肽)。例如，参见美国专利6,437,217，其公开了玉米RS81启动子；5,641,876，其公开了稻肌动蛋白启动子；6,426,446，其公开了玉米RS324启动子；6,429,362，其公开了玉米PR-1启动子，6,232,526，其公开了玉米A3启动子；和6,177,611，其公开了组成型玉米启动子，所有这些都专利以引用方式并入本文。
植物表达盒的构建要求
首先在表达盒中将旨在用于在转基因植物中表达的核苷酸序列组装于在植物中有活性的合适启动子后面。表达盒还可包括转基因表达所需或选择的任何其他序列。此类序列包括但不限于转录终止子、增强表达的外来序列(诸如内含子)、要害序列(vitalsequence)、和旨在用于将基因产物靶向到特定细胞器和细胞区室的序列。然后可以将这些表达盒转移到本文所述的植物转化载体中。以下是对典型表达盒的各种部件的描述。
转录终止子
多种转录终止子可用于表达盒中。这些转录终止子负责在转基因和转录物的正确聚腺苷酸化后终止转录。适当的转录终止子是已知在植物中发挥功能的终止子，并包括CaMV 35S终止子、tm1终止子、胭脂碱合酶终止子和豌豆rbcS E9终止子。这些终止子用于单子叶植物和双子叶植物两者。
用于增强或调节表达的序列
已经发现许多序列增强来自转录单位内的基因表达，并且这些序列可与基因一起使用以增加它们在转基因植物中的表达。例如，已经证明各种内含子序列(诸如玉米Adhl基因的内含子)增强表达，特别是在单子叶植物的细胞中。此外，还已知许多衍生自病毒的非翻译前导序列增强表达，并且这些非翻译前导序列在双子叶植物的细胞中特别有效。
编码序列优化
可以通过改变编码序列来在遗传上工程化所选基因的编码序列，以在感兴趣的作物物种中进行最佳表达。用于修饰编码序列以在特定作物物种中实现最佳表达的方法是熟知的(Perlak等人，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:3324和Koziel等人，1993,Biotechnology 11:194-200)。
植物转化载体的构建
可用于植物转化的许多转化载体是植物转化领域的普通技术人员已知的。与本公开相关的基因可与任何此类载体一起使用。载体的选择取决于所选择的转化技术和靶物种。
许多载体可用于使用根癌农杆菌的转化。这些载体通常携带至少一个T-DNA序列并包括载体诸如pBIN19。适用于农杆菌转化的典型载体包括二元载体pCIB200和pCIB2001，以及二元载体pCIB10和其潮霉素选择衍生物。(参见例如美国专利No 5,639,949)。
不使用根癌农杆菌的转化避免了所选转化载体中对T-DNA序列的要求，因此除了诸如上述含有T-DNA序列的载体之外，还利用缺乏这些序列的载体。用于不依赖于农杆菌的转化技术的载体的选择在很大程度上取决于被转化物种的优选选择。适用于非农杆菌转化的典型载体包括pCIB3064、pSOG 19和pSOG35。(参见例如美国专利No 5,639,949)。
培养物与植物的转化和选择
可以使用本领域技术人员熟知的上述方法中的一种或多种方法来转化和选择植物培养物。
内源启动子的操纵
锌指核酸酶(ZFN)、TALEN和CRISPR-Cas9还可用于实践本发明，因为它们允许在植物染色体的特定位点处进行双链DNA切割，从而可以进行靶基因插入或缺失(Shukla等人，2009,Nature 459:437-441；Townsend等人，2009,Nature 459:442-445)。该方法可尤其用于本发明以修饰内源基因的启动子，来修饰与PsbS、ZEP和VDE同源的基因的表达，这些基因存在于感兴趣植物的基因组中。在这种情况下，ZFN、TALEN或CRISPR/Cas9可用于改变调节感兴趣TF的表达的序列，以增加表达或改变表达时序，超过未工程化或野生型植物中存在的表达。
实施例
通过参考以下实施例将更全面地理解本公开。然而，不应将其解释为限制本公开的范围。应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于说明目的，并且对所述实施例和实施方案进行的各种修改或改变将向本领域的技术人员建议，并且包括在本申请的精神和权限内以及所附权利要求书的范围内。
实施例1.转基因烟草
用含有三种拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因的T-DNA盒转化烟草(Nicotianatabacum)植物。拟南芥ZEP过表达以增加叶黄素环氧化速率和相应的NPQ弛豫速率，并且拟南芥PsbS过表达以刺激qE形成的幅度，以及拟南芥VDE来维持用于ROS清除的玉米黄质的临界水平。所得的转基因植物被示出为具有修饰的NPQ动力学，从而导致更高的量子产率和CO2固定，而不会在波动的光强度下损失光保护效率，并且在两个独立的温室实验中增加生长。这些结果证实，光合效率在波动的光强度下受到NPQ的瞬时限制，并且通过NPQ动力学的变化提供改善光合效率和作物产率的原理的第一证据。
实施例2.幼苗中的NPQ和PSII运行效率
在用1000μmol量子m-2s-1照射10分钟，然后进行10分钟暗弛豫期间，根据使用vde-psbs-zep(VPZ)构建体的20个独立转化事件的T1后代的叶绿素荧光成像来测定瞬时NPQ。由于目的是保持相似的非光化学猝灭能力，因此选择具有与WT相似的最大NPQ水平的品系用于进一步研究。这产生了八种品系，来自所述八种品系中具有单个T-DNA拷贝的两种品系(VPZ-34和56)和具有两个T-DNA插入的一种品系(VPZ-23)包括在本发明工作中。报告了纯合T2后代的所有结果。NPQ动力学行为显示三种VPZ品系与WT之间存在相当大的差异(图1A)。VPZ品系中的NPQ迅速增加，在两分钟到四分钟之间达到最大NPQ水平，之后NPQ水平稳定(VPZ-23)或甚至略微下降(VPZ-34和VPZ-56)。相反，WT对照中的NPQ继续增加七分钟，之后在剩余的三分钟内保持最大水平。作为这些对比诱导模式的结果，在诱导的最初五分钟期间所有三种转基因品系中的NPQ显著较高，但在最后五分钟中没有(图1A)。在关闭灯后，NPQ弛豫非常迅速，并且与WT和VPZ品系两者中的NPQ弛豫非常相似。
在2000(3min)和200(2min)μmol m-2s-1之间的光强度的重复循环导致VPZ品系与WT之间甚至更显著的NPQ差异(图1B)。VPZ品系中的NPQ在前两个循环的高光阶段期间快速增加，在第二循环的第二分钟期间达到最大水平。相比之下，NPQ在WT幼苗中更慢地增加，仅在第四循环的第三分钟达到最大水平。有趣的是，NPQ在循环的低光阶段期间显示出相反的模式。在第一循环中，在低光阶段期间VPZ品系中的NPQ水平较高，然而第二循环中VPZ品系与WT之间的NPQ水平相等，并且在最后三个循环中VPZ品系中的NPQ水平显著较低。
结合NPQ估计的光合系统II(PSII)运行效率在第一循环中显示为在VPZ品系与WT之间没有差异(图1C)。然而，在以下五个循环期间，VPZ品系在循环的低光阶段期间显示出优异的PSII运行效率，而在高光阶段期间未发现差异。该模式在第二循环中建立，并在实验的剩余部分中重复。
实施例3.转录和蛋白表达
相对于野生型，所有三种VPZ品系显示出VDE(3倍)、PsbS(3倍)和ZEP(8倍)的组合转基因(At)转录物水平和天然(Nt)转录物水平的显著增加(图2A、图2B和图2C)。对于PsbS，转录物水平的增加翻译成约2倍更高的PsbS蛋白水平(图2E)，如在约22kDa的两个近似相等的密度带中所例示(图2G，VPZ泳道)，代表天然和转基因蛋白。然而，对于VDE和ZEP，转录物水平的增加在蛋白水平上被扩大(图2G，ZEP的标记条带为约73kDa，并且VDE的标记条带为45kDa)，表明相对于WT，VDE(图2D)和ZEP(图2F)蛋白显著增加(分别为16倍和80倍)。转基因转录物与天然转录物和蛋白质水平之间的相互作用似乎可以忽略不计，因为天然蛋白质的转录物和蛋白质水平在VPZ品系和WT中相似。
实施例4.光照强度反复变化后幼苗中的NPQ动力学
为了比较动态NPQ调整的动力学，将双指数模型的时间常数拟合到幼苗中的NPQ的时间序列，作为光强度在2000与200μmol m-2s-1之间重复变化的函数(表1)。在第一2000/200循环中，没有观察到WT与VPZ过表达品系之间的一致差异。NPQ诱导的时间常数在49.3±1.9(VPZ-34)至91.8±6.2(VPZ-56)之间变化，并且从2000至200μmol m-2s-1的重新调整时间常数也在WT与所述三种VPZ品系中相似，τ1为平均10.2s，并且τ2为669.9s。在第二2000/200循环中，VPZ表达对NPQ动力学的影响变得更加明显。WT中的NPQ增加快速阶段比VPZ品系中快约2.3倍，其中WT中τ1为5.5s，对比VPZ品系中平均τ1为12.6s(表1)。至200μmol m-2s-1的第二NPQ调整显示NPQ下降慢的组分具有显著差异。发现VPZ品系的估计τ2比WT快1.9倍(464.3s对比886.4s)。因此，重复的光强度变化导致WT中NPQ的更快累积和更慢弛豫，而VPZ品系中的时间常数相对不受影响。该相同的趋势在最终3min的2000μmol m-2s-1和之后的10min黑暗中持续。WT幼苗中的NPQ增加快速阶段比VPZ品系快约2.4倍(τ1为4.3s对比10.3s)，而相对于WT，VPZ品系中在10min黑暗期间的最终NPQ弛豫快1.4倍(τ1)和3.5倍(τ2)。此外，相较于WT，VPZ品系中所测定的用于PSII运行效率恢复的τ1和τ2快2.1倍和4.1倍。
表1针对光强度反复变化进行NPQ调整的时间常数(值±se)。星号表示VPZ品系与野生型之间的显著差异(α＝0.05)。
a第1HL阶段中的数据不约束两个时间常数，所以该模型简化为单指数函数并且仅拟合一个时间常数。
b数据分辨率不足以恰当地约束快速阶段，仅拟合缓慢阶段。
实施例5.稳态中的NPQ、线性电子传递和CO2吸收
为了测量完全展开叶片中的稳态气体交换和叶绿素荧光，将光强度从低强度变化到高强度，非常小心地使气体交换和荧光在每个强度下完全稳定。WT与VPZ品系之间的NPQ非常相似，尤其是在光强度低于400μmolm-2s-1时(图3A)。作为吸收光强度的函数的线性电子传递和净同化速率的相应响应曲线未示出在WT与VPZ品系之间的显著差异(图7)。此外，衍生自CO2响应曲线的拟合参数值Vcmax、J、TPU和Rd也在WT与VPZ品系之间相似(表2)。
表2.衍生自CO2响应曲线的参数拟合。最大羧化容量(Vcmax)、最大线性电子传递速率(Jmax)、不与光呼吸相关的线粒体呼吸速率(Rd)和最大磷酸丙糖利用速率(TPU)。值±se，n＝10，野生型与VPZ品系之间未发现显著差异。
实施例6.波动光照下的NPQ、电子传递和CO2固定
为了评估VPZ过表达对光响应曲线形状的动态影响，在每次光转变之前，使用4min的2000μmol m-2s-1的间歇步骤使光强度在4min步骤中从高PFD变化成低PFD。VPZ品系中的NPQ在高光强度下与WT相似，但在低光强度下显著低于WT(图3B)。所得的线性电子传递速率和净同化速率的响应曲线在WT和VPZ品系之间明显不同(图4A和图4B)。WT和VPZ品系之间的拟合凸性和渐近线参数相似(图8A至图图8D)，但初始斜率明显不同(图4C和图4D)。WT植物中的波动强度将ΦPSIImax降低到0.541±0.012(图4C)，而VPZ品系保持在较少降低的ΦPSIImax，为0.612±0.021(VPZ-23)、0.599±0.023(VPZ-34)和0.595±0.023(VPZ-56)。相似地，WT植物中的ΦCO2-max降低到0.058±0.001(图4D)，而VPZ品系中的ΦCO2-max值更少受到间歇的高光强度影响，从而产生对于VPZ-23为0.069±0.003，对于VPZ-34为0.066±0.003，并且对于VPZ-56为0.064±0.003。因此，在这些波动条件下，VPZ品系的平均ΦPSII-max和ΦCO2-max比WT高11.3％和14.0％。
实施例7.作为不同光照处理的函数的叶黄素循环脱环氧化
为了评估VPZ过表达对叶黄素循环的影响，使叶片经受四种不同的光照处理(表3)。WT与VPZ品系之间的紫黄质、花药黄质和玉米黄质的组合库(pool)大小相似。叶黄素色素库在暗适应的叶片中被完全环氧化，并且未观察到WT与VPZ之间的差异。暴露于400μmolm-2s-1的PFD导致叶黄素组合物几乎没有变化并且DES保持接近于零，而使用2000μmol m-2s-1的PFD进行光照导致花药黄质和主要是玉米黄质的大量积累。与WT相比，VPZ品系保留显著更多的紫黄质并且积累更少的玉米黄质和花药黄质，这导致VPZ品系中的叶黄素DES几乎比WT低两倍(25.5％对比46.2％)。波动的光照处理显示出与高光照暴露相同的趋势，其中相对于WT，在VPZ品系中具有甚至更少的叶黄素脱环氧化(17.8％对比52.5％)。
表3在暗适应状态下或暴露于恒定的400或2000μmol m-2s-1PFD或3个循环的3min2000/3min 200μmol m-2s-1PFD后，完全展开叶片中的叶黄素循环色素浓度和脱环氧化状态(DES)。色素浓度(值±se，n＝3-5)已经针对每单位叶面积归一化(g m-2)。DES(％)＝(Zea+0.5Ant)/(Zea+Ant+Viola)，n.d.＝未检测到。星号表示VPZ品系与野生型之间的显著差异(α＝0.05)。
实施例8.非光化学猝灭的光保护效率
为了评估VPZ品系中相对于WT的光保护效率，使幼苗暴露于2000μmol m-2s-1的蓝光一到两个小时。高光照处理后使用光抑制和NPQ对Fo'的对比效应来计算光保护指数(图5)，其中值1等于完全保护免受光抑制损伤。一小时的高光暴露导致显著的光抑制诱导，所述光抑制诱导在WT幼苗中比在VPZ品系中略高(图5A)。两小时后的光保护效率(图5B)显著低于1小时后的光保护效率，但再次发现VPZ幼苗比WT受到更少的光抑制。暗恢复10分钟后在VPZ幼苗中残留的NPQ趋于更低(图5C)。由于更低的残留NPQ和更高的光保护指数，VPZ幼苗中的PSII效率在暗恢复10分钟后也趋于更高(图5C)。
实施例9.温室条件下的植物生长
为了研究上述光合效率差异是否会影响生长，在两项温室实验中评估了生物量积累。温度在两项实验之间相似，并且在21与25℃之间变化。在第一实验中峰值光强度超过2000μmol m-2s-1并且在第二实验中峰值光强度超过1600μmol m-2s-1，并且第一和第二实验中的日光量整合(daily light integral)平均分别为21.3和19.3mol m-2d-1。然而，在第二实验的最后一周，由于光强度的季节性下降，峰值光强度和日光量整合大幅下降到1037μmol m-2s-1和8.9mol m-2d-1。因此，第一实验中的平均植物干重显著更高，分别为35.6g对比22.5g。在两项实验中，相对于WT，来自VPZ品系的植物表现出增加的茎高(图5B)和叶面积(图5C)。此外，VPZ品系中每株植物的总干重高出10％至21％(图5A)，这主要是由于茎干重的大幅增加(14％至26％，图5D)以及叶干重的增加(7.5％至16％，图5E)和根干重的增加(12.5％至38.3％)。
实施例10.附加数据
图12和图13，与野生型相比，转基因植物品系N2-23和N2-34中的叶、茎和根大小及生长增加。图14示出了在转基因品系VPZ-56、VPZ-23和VPZ-34中NPQ动力学、量子产率和CO2固定增加。这些结果表明在先前使叶片暴露于2000μmol m-2s-1PFD后，各种光强度中量子产率和CO2固定增加。1、2和3显示了暴露后这种随时间增加的进展。
图16示出，第一诱导/弛豫中的NPQ时间常数是相似的，但后续光照循环导致转基因植物中NPQ的更慢积累(与幅度无关，这些是时间常数)和更快弛豫，以及在暗弛豫中量子产率的更快恢复。这些比较结果与转基因品系中玉米黄质的积累减少完全一致。在高光照的VPZ品系中的NPQ水平与WT相似或高于WT。通过dA532nm估计的VPZ品系中的qE水平高于WT，最可能与PsbS过表达相关。重复的高光暴露在VPZ品系中显示出更高的NPQ增加的时间常数和更低的NPQ弛豫的时间常数。由于更快的NPQ弛豫速率，所以VPZ品系在PFD快速切换期间在低PFD显示出5-10％的量子产率提高。
VDE、ZEP和PsbS的联合过表达导致幼苗和完全生长的植物中NPQ积累和弛豫的动力学得到修饰、在波动光照条件下的幼苗和完全生长的植物中量子产率更高、在完全生长的植物中没有显著的稳态气体交换差异、在波动条件下的完全生长的植物中总同化速率更高，并且温室中的生长增加约10％。
实施例11.材料和方法
转化
将烟草cv.‘Petite Havana’使用根据Clemente,Agrobacterium Protocols(WangK.编辑)，第143–154页.Humana Press Inc.,Totowa的农杆菌介导的叶盘方案转化。该二元质粒含有来自拟南芥的以下三种基因的编码序列：紫黄质脱环氧化酶(AtVDE)、AtPsbS和玉米黄质环氧化酶(AtZEP)；以及编码双丙氨膦抗性的bar基因(Thompson等人，Journal ofAgricultural and Food Chemistry 35,361–365,1987)。产生20个独立的T0转化体，并且使用根据Glowacka等人，Plant Cell and Environment doi:10.1111/pce.12693,2015的基因组DNA的数字微滴式PCR(ddPCR)分析来测定T-DNA拷贝数。使用两种具有T-DNA的单拷贝的品系(VPZ-34和VPZ-56)和一种具有T-DNA的两个拷贝的品系(VPZ-23)来产生T1后代，其中根据Glowacka等人通过ddPCR鉴定纯合植物，并进行自花授粉以获得纯合的T2后代以用于进一步分析。
植物材料的繁殖
将来自相同收获日期的VPZ品系的T2种子和WT种子在生长培养基(LC1Sunshine混合物，Sun Gro Horticulture，Agawam，MA，USA)上于受控环境步入式生长室(环境生长室，Chagrin Falls,Ohio,USA)中使用白天12h(23℃)/晚上12h(18℃)的循环在150μmol量子m- 2s-1下发芽。发芽后五天，将幼苗移植到8×12盆栽托盘(812系列，Hummert International,Earth City,MO,USA)进行叶绿素荧光成像，或移植到9×4盆栽托盘(3600系列，HummertInternational)并长到出现两个真叶。在第一次移植后，将要用于气体交换和生物质分析的幼苗移至温室。
转录和蛋白表达
从来自每个品系五株植物的最幼嫩的完全展开叶片，从还进行气体交换的叶片位置取样五个叶盘(总共2.9cm2)。从相同的叶样品中提取蛋白和mRNA(NucleoSpin RNA/Protein Kit，REF740933,Macherey-Nagel)。将提取的mRNA用DNase处理(Turbo DNA-freeKit；AM1907，Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA,USA)，并使用Superscript IIIFirst-Strand Synthesis System转录成cDNA以进行RT-PCR(18080-051；Thermo FisherScientific)。RT-qPCR用于相对于NtActin和NtTubulin定量转基因AtZEP、AtPsbS和AtVDE以及天然基因NtZEP、NtPsbS和NtVDE的表达水平(引物序列提供补充材料)。
在对总蛋白质浓度进行定量后(蛋白定量测定法ref740967.50，Macherey-Nagel)，将4μg蛋白通过SDS-PAGE电泳分离，使用半干印迹(Trans-Blot SD,Bio-Rad)转移至膜(Immobilon-P,IPVH00010,Millipore,USA)，并用针对AtPsbS的一抗(AS09533,Agrisera,Sweden)、针对AtZEP的一抗(AS08289,Agrisera)和针对AtVDE的一抗(AS153091,Agrisera)进行免疫标记，然后用二抗孵育(Promega W401B)。使用扫描仪(ImageQuant LAS-4010,Fuji,)检测化学发光，并使用ImageJ(版本1.47v，NationalInstitute of Health,USA)进行光密度测定以估计蛋白浓度，使用野生型蛋白浓度进行归一化。
幼苗中的NPQ和PSII运行效率
使用叶绿素荧光成像仪(CF Imager,Technologica,Colchester,UK)在18个幼苗中同时测定非光化学猝灭(NPQ)。幼苗首先暗适应20分钟，之后使用800ms脉冲的饱和光强度(6000μmol量子m-2s-1，λmax＝470nm)对暗适应的最小荧光(Fo)和最大荧光(Fm)成像。随后，使幼苗经受10分钟的1000μmol量子m-2s-1，然后10分钟的黑暗或六个循环的三分钟2000μmol量子m-2s-1，接着是两分钟的200μmol量子m-2s-1。以规则的间隔提供饱和闪光以成像可变荧光(F’)和照射条件下的最大荧光(Fm’)。然后根据等式1从这些测量值计算每个幼苗的平均NPQ，假设Stern-Volmer猝灭模型：
NPQ＝Fm/Fm’-1 等式1
按照Genty等人，Biochimica et Biophysica Acta 990,87–921989,1989，根据等式2和3从荧光测量值来估计最大PSII效率或运行PSII效率。
最大PSII效率＝(Fm–Fo)/Fm 等式2
PSII运行效率＝(Fm’–F’)/Fm’ 等式3
针对光强度变化调整NPQ的时间常数
使幼苗经暗适应，并且使用如上所述的叶绿素荧光成像仪测定叶绿素荧光。当光强度每3min从2000变化至200、2000、200、2000并最终0μmol量子m-2s-1时，每30秒测量最大荧光。黑暗中的最终弛豫持续10分钟。相应地测量六组18株幼苗的三种VPZ转化品系和野生型，由此在荧光测量与各组间的光强度变化之间产生5秒的移码。NPQ根据等式1计算，针对每组内的最高值进行归一化，之后将所有六组编译为时间的函数，以生成具有5秒分辨率的归一化NPQ的时间序列。将用于NPQ的诱导或弛豫的双指数函数中的时间常数与每次光强度变化后的编译时间序列进行拟合。对于黑暗中的最终恢复，还将时间常数与PSII运行效率(使用等式3估计的)进行拟合。
光保护效率
将幼苗暗适应20分钟，之后使用如上所述的叶绿素荧光成像仪测定暗适应的最大PSII效率(Fv/Fm)。随后，将幼苗暴露于2000μmol量子m-2s-1持续60min或120min。暴露后，使幼苗在黑暗中恢复10min以使qE弛豫，之后测量没有完全暗适应的最小荧光(Fo’)和最大荧光(Fm’)。将Fo'的测量值与衍生值进行比较，所述衍生值仅考虑NPQ对Fo'的影响(Oxborough和Baker，Photosynthesis Research 54:135–142,1997)。然后使用测量或衍生的Fo'的PSII效率之间的差异被用来测定光保护效率。
完全展开叶片中的气体交换和线性电子传递
对于气体交换分析，将幼苗从托盘移植到装有生长培养基(LC1 Sunshine混合物，每盆补充有10g颗粒肥料(Osmocote Plus 15/9/12,The Scotts Company LLC,Marysville,Ohio,USA))的3.8L盆(400C,Hummert International)中。将盆随机化排列并在温室桌上间隔开30cm。对植物浇水，并且每两天随机变换植物位置，直到第五片叶片完全展开。使用配备有2cm2叶室荧光计的开放式气体交换系统(LI6400XT,LI-COR,Lincoln,Nebraska,USA)进行气体交换测量。根据Gong等人，Plant,Cell and Environment 38,2417–24322015)，使用各种CO2浓度的暗测量值，针对样品池(cuvette)与周围大气之间的扩散泄漏来校正所有气体交换测量值。
为了测定完全展开叶片中净同化速率和线性电子传递的光剂量响应曲线，在一定范围的光强度测量气体交换和脉冲幅度调制的叶绿素荧光。所有叶绿素荧光测量均使用多相闪光例程(Loriaux等人，2013)。将最幼嫩的完全展开叶片(n＝6)夹在样品池中，其中将块温(block temperature)设定在25℃并且将气流中的[CO2]控制在1500ppm。在暗适应30min后，测定最小荧光(Fo)和最大荧光(Fm)。随后，以两种不同的方式改变光强度。第一个实验由从0缓慢增加至50、80、110、140、170、200、400、600、800、1000、1200、1500和2000μmolm-2s-1的光强度组成，从而试图将每种光强度的NPQ诱导保持于绝对最小值。当达成稳态时，记录气体交换参数并测量基线荧光(F’)和光适应的最大荧光(Fm’)，以估计NPQ(等式1)和PSII运行效率(等式3)。在第二实验中，使叶片在2000μmol m-2s-1达成稳态气体交换。随后，光强度从2000变为1500、1000、800、600、400、200、170、140、110、80和50，每一步持续4分钟，并且在每一步之前进行4分钟的2000μmol m-2s-1。在每个光强度中，在60s、140s和220s后测定F'和Fm'以及气体交换参数。这三次测量的平均值用于进行后续分析以重建具有间歇性高PFD的光响应曲线。
使用连接到光谱仪(USB-2000,Ocean Optics Inc,Dunedin,Florida,USA)的积分球(LI1800,LI-COR,USA)在用于气体交换分析的相同点上测量入射辐照度的叶吸收率。根据下式测定两项实验的线性电子传递速率(J)：
J＝叶吸收率*PSII运行效率*PFD*0.5 等式4
将来自两个实验的线性电子传递和气体交换的光强度剂量响应曲线根据Sharkey等人(2007)的等式调节至恒定的叶温度，并与描述性非矩形双曲线模型(Von Caemmerer,Biochemical models of leaf photosynthesis.Collingwood,Australia:CSIROPublishing 2000)进行拟合，从而产生初始斜率、凸性和渐近线的估计值。
为了分析净同化速率的CO2剂量响应曲线，将叶片夹在样品池中，其中将块温控制在25℃并将光强度设定至2000μmol m-2s-1。将气流中的CO2浓度控制在400、300、200、100、75、400、400、500、600、700、800、1200和1600ppm，并且当达到稳态时记录气体交换参数。Farquhar等人Planta 149,78–90.1980的叶片光合作用模型假设无限的叶肉传导、根据Sharkey等人Plant Cell Environ.30,1035–1040,2007进行温度校正，拟合得到最大羧化率(Vcmax)、2000μmol m-2s-1的电子传递速率(J)、磷酸丙糖利用率(TPU)和与光呼吸无关的线粒体呼吸速率(Rd)。
叶黄素循环色素浓度
将叶片夹在开放式气体交换系统的叶样品池中，并如上所述进行暗适应。随后，使CO2和H2O交换在0、400和2000μmol m-2s-1达到稳态或经受一系列光强度变化(3min 2000/3min 200μmol m-2s-1的三个循环)，紧接着从封闭的叶点取样叶盘(0.58cm2)，在液氮中快速冷冻并储存在-80℃直至提取。在Horn Point实验室(University of Maryland Centerfor Environmental Science,Cambridge,MD,USA)进行色素分析。使用超声探针将冷冻样品在90％丙酮中浸渍，并过滤(0.45μm)粗提物。将色素使用Zorbax Eclipse XDB-C8柱(963967-906,Agilent Technologies,Santa Clara,CA,USA)通过HPLC分离，并根据由VanHeukelem和Thomas(2001)提出的方案进行定量。
生长和最终生物质积累
为了评估VPZ过表达对生长的影响，在2015年5月25日至6月29日(使用WT、VPZ-23和VPZ-34)并且在2015年10月9日至11月13日(使用WT、VPZ-23、VPZ-34和VPZ-56)进行两次独立的温室实验。将幼苗如上所述繁殖(植物繁殖段落)并从托盘移植到装有生长培养基(LC1 Sunshine混合物，Sun Gro Horticulture)且每盆补充有30g缓释颗粒肥料(OsmocotePlus 15/9/12,The Scotts Company LLC)的14.5L盆(2000C,Hummert International)中。将盆随机化排列并以30cm间隔置于温室桌上。对植物浇水，并且每两天随机变换植物位置。利用位于温室桌中心的量子传感器(LI-190R,LI-COR,USA)记录叶片水平的光强度，所述量子传感器安装在三脚架上并每天进行调节以保持最幼嫩叶片上方10cm的位置。使用温度和湿度组合传感器(HMP60-L,Vaisala Oyj,Helsinki,Finland)和红外气体分析仪(SBA-5,PPsystems,Amesbury,MA,USA)在植物冠层上方约1m处测量空气温度、相对湿度和[CO2]。使用数据记录器(CR1000,Campbell Scientific Inc,Logan,UT,USA)每30min记录所有气候数据。温室中的温度通常使用通风、蒸发冷却和气体加热器的组合而保持在28℃(白天)与18℃(夜晚)之间。光照强度随入射辐照度而变化，其中第一实验中的中午峰值达到约1800μmol m-2s-1，并且第二实验中的中午峰值达到约1000-1500μmol m-2s-1。[CO2]未被控制并且在360ppm(白天)与430ppm(夜晚)之间变化。在第一朵花绽放后，测定茎长度和每株植物的叶片数，并用传送带扫描仪(LI-3100C面积计，LI-COR，USA)测量每株植物的总叶面积。随后将植物分离成叶部分、茎部分和根部分，并在70℃下干燥至恒重。
统计分析
使用SAS(版本9.3,SAS Institute Inc.,Cary,NC,USA)进行所有的统计分析。使用Brown-Forsythe检验测试数据的方差同质性，并且使用Shapiro-Wilk检验测试数据的正态性。将单向方差分析应用于经拟合的气体交换参数、转录水平和蛋白表达。通过双向方差分析(光保护)或重复测量单向(10min开/关)或双向(高/低光)方差分析来分析幼苗中NPQ的叶绿素荧光成像的数据集。使用具有两个完全随机化区组的混合模型对两个重复的温室试验进行分析。在所有情况下，在ANOVA的显著影响之后，进行对品系均值相对于WT对照的Dunnett多重比较检验(α＝0.05)。基于95％置信区间比较NPQ诱导和弛豫的拟合时间常数。
实施例12.转基因玉米(假想例)
本发明还可以提供与所述玉米品系的亲本单位中的表型相比具有改善的光合作用和生长的玉米品系。可以通过以下方式来创建所述玉米品系：产生转基因植物群，所述转基因植物群包含如本文所述编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列。每个转基因事件包括将至少一个核苷酸构建体引入亲本植物的基因组中，所述核苷酸构建体包含与如本文所述的异源核苷酸可操作地连接的启动子。将足量的所述核苷酸构建体引入所述亲本基因组中以产生转基因细胞，所述转基因细胞能够培养成具有所述增强表型的转基因玉米植物。将转基因细胞培养成产生后代转基因种子的转基因植物。筛选转基因植物群中可观察的表型。从被选择为具有出乎意料的增强表型的转基因植物收集种子。任选地，该方法包括重复以下循环：使转基因种子发芽，从所述转基因种子生长出后代植物，观察所述后代植物的表型，并且从具有增强表型的后代植物收集种子。在另一方面，该方法通过采用至少一个编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列来筛选大群。该方法的其他优选方面采用核苷酸构建体，在所述核苷酸构建体中异源DNA与所选启动子(例如启动子区的5'末端)可操作地连接。可以将DNA构建体引入基因组中的随机位置或引入基因组中的预选位点。
本文描述了玉米转化方案的实例。
开始农杆菌培养
1.将来自-80℃原种的携带简单二元载体(例如pZY102)的AGL1在含有适当抗生素(对于在此所示的载体和菌株，为100毫克/升的壮观霉素和30毫克/升的利福平)的ABC琼脂平板上划线，制备系列稀释液以获得单个菌落。将平板在黑暗中于28℃孵育3天。
2.选取单个菌落并在含有适当抗生素(对于在此所示的载体和菌株，为100毫克/升的壮观霉素和30毫克/升的利福平)的YEP琼脂平板上划线。将平板在黑暗中于20℃孵育3天。
3.将5ml无菌PHI-A(接种培养基)加入15ml锥形离心管中。
4.将满满两接种环的AGL1从YEP平板转移到步骤3中制备的试管中。2至3min后，振荡试管以彻底悬浮细菌细胞。
5.取出1ml该悬浮液，并置于分光光度计比色皿(cuvette)中以检查550nm处的光密度(OD550)。通过添加更多的农杆菌细胞或用更多的PHI-A稀释培养物，在室温(例如，24℃)将细胞悬浮液调节成OD550为0.35(0.5×109cfu/ml)。
6.在室温(例如，24℃)在摇床上以100rpm振荡培养物4至5小时。
7.将1ml悬浮液等分分装到2ml无菌微量离心管中。
胚分离、接种和共培养
8.从授粉后10至13天收获的复穗状花序中取出苞叶和穗丝(其中胚大小为1.5mm；参见支持方案)。将一对镊子插入复穗状花序的一端。
9.将新鲜的Hi-II复穗状花序完全浸没在含有0.5升30％市售漂白剂和几滴吐温20的溶液中(在无菌1升广口瓶中)达20min。
10.用无菌水冲洗复穗状花序三次(确保复穗状花序每次完全浸没在水中)，并将复穗状花序直立放在无菌的150×15mm培养皿上。
11.用无菌#11剃刀刀片从每个复穗状花序上取玉米粒的上半部分。
12.用无菌小刮勺从无菌复穗状花序分离1.5mm未成熟胚，并每1.7至2.0ml微离心管转移50至100个胚。用1ml PHI-A溶液洗涤胚三次以除去碎屑和淀粉。
13.然后立即将1ml农杆菌悬浮液加入含有未成熟胚的试管中，让所述试管在无菌罩中静置5min，然后将包括所有胚在内的全部内容物倒到PHI-B(共培养基)琼脂平板上。
14.使用带尖端的移液管吸取农杆菌悬浮液，然后将胚均匀地铺展在平板上，并将胚在培养基上放置为胚子叶面朝上和平坦侧面朝下。
15.用石蜡膜密封平板，并在黑暗中于20℃孵育3天。
静息
16.用刮刀将胚转移到PHI-C(静息培养基)平板中。避免破坏胚。
17.用石蜡膜密封平板，并在黑暗中于28℃孵育7天。
选择
18.用刮刀或镊子将胚转移至PHI-D1(选择培养基I)平板。每平板放置25个胚并密封平板。将胚在黑暗中于28℃孵育以进行第一次2周选择。
19.用镊子将愈伤组织从PHI-D1平板转移至PHI-D2(选择培养基II)平板。使用步骤18中的孵育条件，每2周将愈伤组织继代培养到新鲜的PHI-D2培养基上，共2个月。
20.通过以下方式使除草剂抗性的愈伤组织增大：在与步骤18和19中相同的条件下在新鲜PHI-D2培养基上生长除草剂抗性愈伤组织另外2周，直到愈伤组织的直径为约1.0cm。
成熟和再生
21.使用镊子将含有不透明胚的每个完整愈伤组织团块转移到20×100mm培养皿的PHI-E(成熟培养基)上(用3M多孔胶带包裹)，并将培养平板置于黑暗中于28℃达两轮2至3周以允许体细胞胚成熟。
22.将乳白色愈伤组织转移到PHI-F(再生培养基)上并在16小时光照周期下于25℃孵育，直至芽和根发育。
23.将每个小植物转移到含有PHI-F(再生培养基)的25×150mm管中，并在16小时光周期下于25℃生长2至3周。
24.将植物转移到具有土壤混合物(例如，Promix BX土壤)的小塑料盆中，放置在24℃的光照培养箱或培养室中，使用18小时/光照、6小时/黑暗循环。
实施例13.转基因高梁(假想例)
本发明还可以提供与所述高梁品系的亲本单位中的表型相比具有改善的光合作用和生长的高梁品系。可以通过以下方式来创建所述高梁品系：产生转基因植物群，所述转基因植物群包含如本文所述编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列。每个转基因事件包括将至少一个核苷酸构建体引入亲本植物的基因组中，所述核苷酸构建体包含与如本文所述的异源核苷酸可操作地连接的启动子。将足量的所述核苷酸构建体引入所述亲本基因组中以产生转基因细胞，所述转基因细胞能够培养成具有所述增强表型的转基因高梁植物。将转基因细胞培养成产生后代转基因种子的转基因植物。筛选转基因植物群中可观察的表型。从被选择为具有出乎意料的增强表型的转基因植物收集种子。任选地，该方法包括重复以下循环：使转基因种子发芽，从所述转基因种子生长出后代植物，观察所述后代植物的表型，并且从具有增强表型的后代植物收集种子。在另一方面，该方法通过采用至少一个编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列来筛选大群。该方法的其他优选方面采用核苷酸构建体，在所述核苷酸构建体中异源DNA与所选启动子(例如启动子区的5'末端)可操作地连接。可以将DNA构建体引入基因组中的随机位置或引入基因组中的预选位点。
高粱转化方案的实例描述于Guo等人，Methods Mol Biol 1223,181-188,2015和Howe等人，Plant Cell Rep 25(8):784-791,2006中。
实施例14.转基因大豆(假想例)
本发明还可以提供与所述大豆品系的亲本单位中的表型相比具有改善的光合作用和生长的大豆品系。可以通过以下方式来创建所述大豆品系：产生转基因植物群，所述转基因植物群包含如本文所述编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列。每个转基因事件包括将至少一个核苷酸构建体引入亲本植物的基因组中，所述核苷酸构建体包含与如本文所述的异源核苷酸可操作地连接的启动子。将足量的所述核苷酸构建体引入所述亲本基因组中以产生转基因细胞，所述转基因细胞能够培养成具有所述增强表型的转基因大豆植物。将转基因细胞培养成产生后代转基因种子的转基因植物。筛选转基因植物群中可观察的表型。从被选择为具有出乎意料的增强表型的转基因植物收集种子。任选地，该方法包括重复以下循环：使转基因种子发芽，从所述转基因种子生长出后代植物，观察所述后代植物的表型，并且从具有增强表型的后代植物收集种子。在另一方面，该方法通过采用至少一个编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列来筛选大群。该方法的其他优选方面采用核苷酸构建体，在所述核苷酸构建体中异源DNA与所选启动子(例如启动子区的5'末端)可操作地连接。可以将DNA构建体引入基因组中的随机位置或引入基因组中的预选位点。
本文描述了大豆转化方案的实例。
通过穿过子叶下方约3-5mm的下胚轴区域制备水平切片，来从5日龄大豆幼苗制备子叶外植体。随后在子叶之间制备垂直切片，并移除胚轴。该操纵产生2个子叶节外植体。在外植体的近轴表面上约涵盖子叶/下胚轴连接处上方3mm和子叶/下胚轴连接处下方1mm的区域制备约7至12个垂直切片。使用15号手术刀片进行外植体操纵。
将外植体浸入农杆菌接种物中30min，然后在含有用0.5％纯化琼脂(BBL Cat#11853)固化的农杆菌重悬浮培养基的100×15mm培养皿上共培养。将共培养平板用一片Whatman#1滤纸覆盖(Mullins等人，1990；Janssen和Gardner，1993；Zhang等人，1997)。将外植体(每平板5个)在用滤纸覆盖的共培养平板上，在24℃在使用80μmol s-1m-2的近似光强度(F17T8/750冷白光灯泡，Litetronics)的18/6小时光照条件下近轴侧朝下地培养3天。将共培养平板用石蜡膜包裹。
在共培养期后，将外植体在补充有1.67mg 1-1 BAP、3％蔗糖、500mg l-1替卡西林和100mg l-1头孢噻肟的B5培养基中进行简单洗涤。将培养基用pH 5.6的3mM MES缓冲。将生长调节剂、维生素和抗生素在高压灭菌后进行过滤灭菌。在洗涤步骤之后，将外植体在含有用0.8％纯化琼脂(BBL Cat#11853)固化并用3.3或5.0mg l-1草铵膦(AgrEvo USA)改良的洗涤培养基的100×20mm培养皿中培养(每个培养平板5个)，所述外植体近轴侧朝上，并且下胚轴嵌入所述培养基中。该培养基称为发芽培养基(shoot initiation medium,SI)。将平板用3M压敏胶带(ScotchTM,3M,USA)包裹，并在种子萌发步骤期间使用的环境条件下进行培养。
培养2周后，从每个外植体切下下胚轴区域，随后将剩余外植体，即具有分化节的子叶，在新鲜SI培养基上培养。在SI培养基上培养另外2周后，从分化节移除子叶。将分化节继代培养到芽伸长(shoot elongation medium,SE)培养基上，所述SE培养基由Murashige和Skoog(MS)(1962)的基础盐、B5维生素、1mgl-1玉米素核苷、0.5mg l-1 GA3和0.1mg l-1IAA、50mg l-1谷氨酰胺、50mg l-1天冬酰胺、3％蔗糖和pH 5.6的3mM MES组成。所述SE培养基用1.7或2.0mg l-1草铵膦改良。将外植体每两周继代培养到新鲜的SI培养基上，直至芽达到大于3cm的长度。伸长的芽植根于具有B5维生素、1％蔗糖、0.5mg l-1NAA的Murashige和Skoog盐上，而无需在Magenta盒或Sundae杯(Industrial Soap Company,St.Louis MO)中进一步选择。
实施例15.转基因稻(假想例)
本发明还可以提供与所述稻品系的亲本单位中的表型相比具有改善的光合作用和生长的稻品系。可以通过以下方式来创建所述稻品系：产生转基因植物群，所述转基因植物群包含如本文所述编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列。每个转基因事件包括将至少一个核苷酸构建体引入亲本植物的基因组中，所述核苷酸构建体包含与如本文所述的异源核苷酸可操作地连接的启动子。将足量的所述核苷酸构建体引入所述亲本基因组中以产生转基因细胞，所述转基因细胞能够培养成具有所述增强表型的转基因稻植物。将转基因细胞培养成产生后代转基因种子的转基因植物。筛选转基因植物群中可观察的表型。从被选择为具有出乎意料的增强表型的转基因植物收集种子。任选地，该方法包括重复以下循环：使转基因种子发芽，从所述转基因种子生长出后代植物，观察所述后代植物的表型，并且从具有增强表型的后代植物收集种子。在另一方面，该方法通过采用至少一个编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列来筛选大群。该方法的其他优选方面采用核苷酸构建体，在所述核苷酸构建体中异源DNA与所选启动子(例如启动子区的5'末端)可操作地连接。可以将DNA构建体引入基因组中的随机位置或引入基因组中的预选位点。
本文描述了稻转化方案的实例。
感染和共培养
将愈伤组织转移到无菌滤茶器中，并通过非常轻柔且间歇地振荡所述滤茶器15min来将所述滤茶器在农杆菌悬浮液中孵育，然后在无菌培养皿中堆叠的Whatmann 1无菌滤纸上吸干所述滤茶器以移除多余的细菌。将愈伤组织转移到置于MSG4K培养基上的无菌滤纸上，并在黑暗中于25℃培养48h。
静息和双丙氨膦(basta)选择
将共培养的愈伤组织转移到无菌的50ml试管中，用无菌水洗涤5次并用含有200mg/l特美汀(Timentin)的液体共培养培养基洗涤一次。将愈伤组织用无菌Whatman滤纸吸干并转移到含有MSG2K“静息”培养基的平板中。将愈伤组织平板在黑暗中于25℃培养7天。将愈伤组织转移到MSG2K双丙氨膦选择培养基中。将平板在黑暗中于25℃培养3周。重复该过程另外5周，每3周继代培养到新鲜培养基中。
愈伤组织干燥、芽再生和生根
在选择培养基中进行3-4轮选择达8周后，将愈伤组织转移到无菌培养皿中，所述培养皿在无菌罩中堆叠有2层无菌Whatman#1滤纸。将培养皿用3M手术胶带包裹并留在无菌罩中，如此使培养皿不受干扰地在黑暗中保持24小时。这些平板需要包裹在铝箔中以确保对愈伤组织的黑暗。该愈伤组织部分干燥步骤对于在芽再生培养基中诱导芽是绝对必要的。48h后，将愈伤组织转移到MSG75K芽再生培养基中并在黑暗中孵育3周。将具有体细胞胚的增殖愈伤组织转移到相同培养基中并在约20至30μEm-2s-1低光下使用12小时/8小时黑暗循环孵育。芽将在光照10天后开始出现，并且大部分愈伤组织将变绿。继续在相同光照条件下在MSG75K芽再生培养基中沿胚培养绿色愈伤组织，直至获得满意量的芽。同时，当芽长度达到大于5厘米时，将它们在基部处切开并转移到具有MSG100K生根培养基的GreinerBio-One植物培养容器(#968161-82051-508-带盖容器，330ml，无菌，68直径×110高度mm)中。
实施例16.转基因小麦(假想例)
本发明还可以提供与所述小麦品系的亲本单位中的表型相比具有改善的光合作用和生长的小麦品系。可以通过以下方式来创建所述小麦品系：产生转基因植物群，所述转基因植物群包含如本文所述编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列。每个转基因事件包括将至少一个核苷酸构建体引入亲本植物的基因组中，所述核苷酸构建体包含与如本文所述的异源核苷酸可操作地连接的启动子。将足量的所述核苷酸构建体引入所述亲本基因组中以产生转基因细胞，所述转基因细胞能够培养成具有所述增强表型的转基因小麦植物。将转基因细胞培养成产生后代转基因种子的转基因植物。筛选转基因植物群中可观察的表型。从被选择为具有出乎意料的增强表型的转基因植物收集种子。任选地，该方法包括重复以下循环：使转基因种子发芽，从所述转基因种子生长出后代植物，观察所述后代植物的表型，并且从具有增强表型的后代植物收集种子。在另一方面，该方法通过采用至少一个编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列来筛选大群。该方法的其他优选方面采用核苷酸构建体，在所述核苷酸构建体中异源DNA与所选启动子(例如启动子区的5'末端)可操作地连接。可以将DNA构建体引入基因组中的随机位置或引入基因组中的预选位点。
小麦转化方案的一个实例描述于MedveckáE,Harwood WA.Wheat(Triticumaestivum L.)Transformation Using Mature Embryos.Agrobacterium Protocols:第1卷，2015:199-209中。
实施例17.转基因豇豆
按照在Higgins等人，Innovative research along the cowpea valuechain.Ibadan,Nigeria:International Institute of Tropical Agriculture,第133-139页，2013中描述的转化方案，用含有编码PsbS、ZEP和VDE的核苷酸序列的T-DNA构建体转化豇豆植物。为了比较动态NPQ调整的动力学，将双指数模型与暴露于波动光照后T0转基因豇豆中的NPQ暗弛豫进行拟合。如表4所示，转化品系164381A中的qE弛豫(τ1)与对照相比明显更快，其中测量值为20.5s和19.7s对比35.9s和29.7s。转化品系1643B1中的NPQ弛豫的qZ阶段(τ2)与对照相比更慢，这可能是由于测量是对T0转基因植物进行的限制所致。如本领域中所公知的，对于表型测量，来自T1或T2代的转基因植物通常优选于T0。一个原因是在T0转基因植物中，来自转化和组织培养过程的胁迫可能干扰正常的植物生理并影响表型测量。另一个原因是转基因的分子表征直到T1或T2代才能完成，并且转基因特征如拷贝数和基因组中的插入位置可对转基因表达具有显著影响。如图27、图28和图29所示，转化品系1643B1中的NPQ比对照植物中更快地弛豫。如图30所示，转化品系CP472A(橙点)中的NPQ比对照植物(蓝点)中更慢地弛豫，这可能是由如上所述测量是对T0转基因植物进行的限制所致。
表4.转基因豇豆中NPQ弛豫的时间常数。
实施例18.转基因木薯(假想例)
本发明还可以提供与所述木薯品系的亲本单位中的表型相比具有改善的光合作用和生长的木薯品系。可以通过以下方式来创建所述木薯品系：产生转基因植物群，所述转基因植物群包含如本文所述编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列。每个转基因事件包括将至少一个核苷酸构建体引入亲本植物的基因组中，所述核苷酸构建体包含与如本文所述的异源核苷酸可操作地连接的启动子。将足量的所述核苷酸构建体引入所述亲本基因组中以产生转基因细胞，所述转基因细胞能够培养成具有所述增强表型的转基因木薯植物。将转基因细胞培养成产生后代转基因种子的转基因植物。筛选转基因植物群中可观察的表型。从被选择为具有出乎意料的增强表型的转基因植物收集种子。任选地，该方法包括重复以下循环：使转基因种子发芽，从所述转基因种子生长出后代植物，观察所述后代植物的表型，并且从具有增强表型的后代植物收集种子。在另一方面，该方法通过采用至少一个编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列来筛选大群。该方法的其他优选方面采用核苷酸构建体，在所述核苷酸构建体中异源DNA与所选启动子(例如启动子区的5'末端)可操作地连接。可以将DNA构建体引入基因组中的随机位置或引入基因组中的预选位点。
木薯转化方案的实例描述于Chetty等人，New Biotechnology 30.2:136-143,2013中。
实施例19.转基因杨树(假想例)
本发明还可以提供与所述杨树品系的亲本单位中的表型相比具有改善的光合作用和生长的杨树品系。可以通过以下方式来创建所述杨树品系：产生转基因植物群，所述转基因植物群包含如本文所述编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列。每个转基因事件包括将至少一个核苷酸构建体引入亲本植物的基因组中，所述核苷酸构建体包含与如本文所述的异源核苷酸可操作地连接的启动子。将足量的所述核苷酸构建体引入所述亲本基因组中以产生转基因细胞，所述转基因细胞能够培养成具有所述增强表型的转基因杨树植物。将转基因细胞培养成产生后代转基因种子的转基因植物。筛选转基因植物群中可观察的表型。从被选择为具有出乎意料的增强表型的转基因植物收集种子。任选地，该方法包括重复以下循环：使转基因种子发芽，从所述转基因种子生长出后代植物，观察所述后代植物的表型，并且从具有增强表型的后代植物收集种子。在另一方面，该方法通过采用至少一个编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列来筛选大群。该方法的其他优选方面采用核苷酸构建体，在所述核苷酸构建体中异源DNA与所选启动子(例如启动子区的5'末端)可操作地连接。可以将DNA构建体引入基因组中的随机位置或引入基因组中的预选位点。
杨树转化方案的实例描述于Movahedi等人，International Journal ofMolecular Science 15.6:10780-10793,2014中。
实施例20.转基因桉树(假想例)
本发明还可以提供与所述桉树品系的亲本单位中的表型相比具有改善的光合作用和生长的桉树品系。可以通过以下方式来创建所述桉树品系：产生转基因植物群，所述转基因植物群包含如本文所述编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列。每个转基因事件包括将至少一个核苷酸构建体引入亲本植物的基因组中，所述核苷酸构建体包含与如本文所述的异源核苷酸可操作地连接的启动子。将足量的所述核苷酸构建体引入所述亲本基因组中以产生转基因细胞，所述转基因细胞能够培养成具有所述增强表型的转基因桉树植物。将转基因细胞培养成产生后代转基因种子的转基因植物。筛选转基因植物群中可观察的表型。从被选择为具有出乎意料的增强表型的转基因植物收集种子。任选地，该方法包括重复以下循环：使转基因种子发芽，从所述转基因种子生长出后代植物，观察所述后代植物的表型，并且从具有增强表型的后代植物收集种子。在所述方法的另一方面，通过采用至少一个编码选自PsbS、ZEP和VDE的多肽的异源核苷酸序列来筛选大群。该方法的其他优选方面采用核苷酸构建体，在所述核苷酸构建体中异源DNA与所选启动子(例如启动子区的5'末端)可操作地连接。可以将DNA构建体引入基因组中的随机位置或引入基因组中的预选位点。
桉树转化方案的实例描述于Diwakar等人，Plant Tissue Culture:Propagation,Conservation and Crop Improvement,219-244,2016中。
实施例21.NPQ基因的序列相同性分析
为了鉴定与拟南芥PsbS、ZEP和VDE同源的氨基酸序列，用BLASTX程序进行BLAST蛋白搜索。通过BLAST获得的序列相似性百分比在以下表中呈现，表4中关于PsbS，在表5中关于ZEP，并在表6中关于VDE，其中列出了按照与拟南芥同源物的序列相同性百分比不断递减排序的前100个匹配序列。
为了比较与拟南芥PsbS、ZEP和VDE同源的氨基酸序列的序列相同性和/或相似性，用CLUSTAL OMEGA程序进行序列比对。图24示出了通过CLUSTAL O获得的分别关于(A)PsbS、(B)ZEP和(C)VDE的氨基酸序列相似性。
表5.关于PsbS的序列相同性百分比。
表6.关于ZEP的序列相同性百分比。
表7.关于VDE的序列相同性百分比。
实施例22.温室NPQ表达实验
在不同启动子的控制下，用拟南芥VDE、ZEP和PsbS的编码序列转化烟草以在叶中表达。基于幼苗NPQ筛选选择出两种具有单转移DNA(T-DNA)整合的转化体(VPZ-34和-56)和一种具有两个T-DNA插入的转化体(VPZ-23)，并自花授粉以获得纯合T2后代来供进一步研究。然后将这些植物在温室中生长。测量VDE、PsbS和ZEP的mRNA和蛋白水平(图25)。
相对于WT(A、C和E)的转录物水平，所有三种VPZ品系显示出VDE(10倍)、PsbS(三倍)和ZEP(六倍)的总(转基因加天然)转录物水平的增加。对于PsbS，转录物水平的增加翻译成高约四倍的PsbS蛋白水平(D)，如21kDa(AtPsbS)和24kDa(NtPsbS)处的条带中(G)所例示。对于VDE和ZEP，转录物水平的增加对应于相较于WT蛋白水平，VDE(45kDa)30倍(B和G)和ZEP(73kDa)74倍(F和G)的增加。
实施例23.田间NPQ表达实验
在不同启动子的控制下，用拟南芥VDE、ZEP和PsbS的编码序列转化烟草以在叶中表达。基于幼苗NPQ筛选选择出两种具有单转移DNA(T-DNA)整合的转化体(VPZ-34和-56)和一种具有两个T-DNA插入的转化体(VPZ-23)，并自花授粉以获得纯合T2后代来供进一步研究。然后将这些植物在田间中生长。测量VDE、PsbS和ZEP的mRNA和蛋白水平(图26)。
相对于WT的转录物水平，所有三种VPZ品系显示出VDE(4倍)、PsbS(1.2倍)和ZEP(7倍)的总(转基因加天然)转录物水平的增加。相对于WT的转录物水平，所有三种VPZ品系还显示出VDE(47倍)、PsbS(3倍)和ZEP(75倍)的总(转基因加天然)蛋白水平的增加。
实施例24.转基因稻实验
按照实施例15中描述的转化方案，用含有编码PsbS、ZEP和VDE的核苷酸序列的T-DNA构建体转化稻植物。在本实验中使用在转基因烟草实验中使用的相同表达构建体。将九种独立的T0转化体和两种GUS对照的叶片进行暗适应。随后，在10min的1000μmol m-2s-1光照之后3min黑暗期间测量NPQ。图31示出了在10min的1000μmol m-2s-1光照之后3min黑暗的过程中，九种稻转化体(点)和对照(线)的NPQ。图32示出了在10min的1000μmol m-2s-1光照之后3min黑暗的过程中，九种稻转化体(蓝点)和对照(橙点)的NPQ的平均值。
如图31和图32所示，在10min的1000μmol m-2s-1光照期间，这九种转化体的NPQ幅度低于对照。该结果与这些转化体中的ZEP表达增加一致，这阻止了玉米黄质形成并由此降低了NPQ幅度。另选的解释是PsbS过表达干扰天然PsbS的表达，并由此降低NPQ幅度。结果还表明，在黑暗中3min弛豫期间，转化体与对照之间没有显著的NPQ差异，这是由于在本实验中可能缺乏玉米黄质积累。
这些转基因稻植物中缺乏NPQ动力学变化最合理地归因于实验设计的以下限制：在本实验中稻植物是用构建用于烟草转化的表达盒转化的，所述表达盒含有设计用于在双子叶植物中进行最佳基因表达的启动子。在本领域中已知的是，双子叶植物启动子在单子叶植物中不能很好地起作用。因此，这些转基因稻植物中PsbS、ZEP和VDE的表达可能没有最佳地增加到有利于增加NPQ弛豫速率的水平。
实施例25.附加实验
NPQ相关基因的瞬时过表达是在本氏烟中进行的。NPQ测量值是在这样的叶点上获取的，所述叶点作为阴性对照在以600μmol光子m-2s-1照射13min，然后10min黑暗的过程中过表达FLAG标记的PsbS、VDE、ZEP和GUS。如图18所示，结果显示PsbS的过表达相对于GUS对照增加了NPQ能力。VDE的过表达加速了NPQ诱导。ZEP的过表达加速了NPQ弛豫，但负面地影响NPQ诱导和能力。
VDE和ZEP的瞬时共过表达是在本氏烟中进行的。结果显示NPQ诱导和弛豫的速率增加，如图19中可见。VDE的共过表达显示为对于平衡ZEP的过表达和防止ZEP过表达对NPQ诱导和能力的负面影响是必要的。
图20示出了烟草cv.Petite Havana的稳定转基因T1植物的NPQ动力学。使用DUALPAM进行的NPQ测量是在以600μmol光子m-2s-1照射10min，然后10min黑暗的过程中，在以下三种不同品系的T1成株最幼嫩的完全发育叶片上进行的：一种野生型分离子(Null)，一种过表达ZEP(ZEP)，以及一种过表达ZEP和VDE(ZEP-VDE)。结果显示，ZEP-VDE品系显示出更快的NPQ诱导和弛豫。
图21示出了烟草cv.Petite Havana的稳定转基因T1植物的光合系统II量子产率(YII)。与图20中描述的NPQ测量同时进行的YII测量是在相同植物上和相同条件下进行的。在暗恢复时段期间，与过表达ZEP或Null的品系相比，过表达ZEP-VDE的品系的YII更高。
图22示出了温室中的生长实验。结果表明，与野生型(Null)相比，过表达ZEP和VDE(ZEP-VDE)的烟草cv.Petite Havana的稳定转基因T1植物的大小和生物质增加。过表达PsbS(PsbS)或ZEP和PSBS(ZEP-PsbS)的品系显示出与野生型相似的生物质。图中示出了四组植物，每种转基因品系一组。每组包括36株植物。在生长19天后，通过收获的36株植物的总湿重和总干重来测定每组的地上生物质。数据代表单个实验的结果。
序列表
<110> 伊利诺斯大学理事会
加利福尼亚大学董事会
<120>具有增加的光合效率和生长的转基因植物
<130> 335032000840
<140> Not Yet Assigned
<141> Concurrently Herewith
<150> US 62/342,248
<151> 2016-05-27
<160> 68
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 1059
<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 1
atcttttaat ctcttcactt ccacaacaca acacaaaaca catcactgat ccttctctca 60
tcctcagaaa gaatggctca aaccatgctg cttacttcag gcgtcaccgc cggccatttt 120
ttgaggaaca agagcccttt ggctcagccc aaagttcacc atctcttcct ctctggaaac 180
tctccggttg cactaccatc taggagacaa tcattcgttc ctctcgctct cttcaaaccc 240
aaaaccaaag ctgctcctaa aaaggttgag aagccgaaga gcaaggttga ggatggcatc 300
tttggaacgt ctggtgggat tggtttcaca aaggcgaatg agctattcgt tggtcgtgtt 360
gctatgatcg gtttcgctgc atcgttgctt ggtgaggcgt tgacgggaaa agggatatta 420
gctcagctga atctggagac agggataccg atttacgaag cagagccatt gcttctcttc 480
ttcatcttgt tcactctgtt gggagccatt ggagctctcg gagacagagg aaaattcgtc 540
gacgatcctc ccaccgggct cgagaaagcc gtcattcctc ccggcaaaaa cgtccgatct 600
gccctcggtc tcaaagaaca aggtccattg tttgggttca cgaaggcgaa cgagttattc 660
gtaggaagat tggcacagtt gggaatagca ttttcactga taggagagat tattaccggg 720
aaaggagcat tagctcaact caacattgag accggtatac caattcaaga tatcgaacca 780
cttgtcctct taaacgttgc tttcttcttc ttcgctgcca ttaatcctgg taatggaaaa 840
ttcatcaccg atgatggtga agaaagctaa attatcatgt acttaaattt agtagagagt 900
gtgtgacctt ctcttcatgt tgagacaaaa ggaaatggac agcttaaatt gttgtaatac 960
ttatatcctt ttgtttttaa cttggaattt tctgattata tatagtttta ttacacctaa 1020
gtgactaggt gattgatatc atctagcatc tcttaacag 1059
<210> 2
<211> 2385
<212> DNA
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<211> 1776
<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 3
gagatatttg ggtggagaaa acaaccgcct aggacaaaaa aaaattgtgg gtagaggagg 60
aggaggaggc tttgttcaca caccacacga cggaacattc tcttccgagt cttatccaaa 120
gcaaaatcat attttgctta aatatcttct tctccggctc tgtctctgtc tctcttcttc 180
ccgcggagct ttcagttttt gtttggtatt gcttggtgtg gggaagatta gatagtgtga 240
agaatggcag tagctacaca ttgtttcact tcaccttgtc atgaccgtat tcgatttttc 300
tcaagtgatg atggtattgg taggcttggc attacaagaa agaggatcaa tggcactttc 360
ttgctcaaga ttttacctcc aatccaaagt gctgatctca gaacaactgg tgggagatcc 420
tcacgtcctt tatctgcatt caggtcagga ttctctaagg ggatatttga cattgtgcca 480
ttaccatcaa agaatgagct gaaagagctg accgctccgc tgttgctaaa actcgtgggt 540
gttttagctt gcgcgttcct tattgttcca tctgcagatg cagttgatgc acttaaaact 600
tgtgcatgct tattgaaggg atgcaggata gaactcgcaa agtgcattgc caaccctgcc 660
tgtgcagcca atgtcgcgtg ccttcagacc tgcaataacc gtccagatga aaccgagtgc 720
cagattaaat gtggggatct gtttgagaac agtgttgttg atgagttcaa cgagtgtgct 780
gtgtcgagaa aaaagtgtgt tcctagaaaa tctgatctcg gagaatttcc tgccccagac 840
ccttctgttc ttgtacagaa cttcaacatc tcggacttta acgggaagtg gtacattaca 900
agtggcttga atccaacctt tgatgccttc gactgccagc tgcatgagtt ccacacagaa 960
ggtgacaaca agcttgttgg aaacatctct tggagaataa agaccctaga cagtggattc 1020
tttactaggt cagccgtaca aaaattcgtg caagatccta accaacctgg tgttctctac 1080
aatcatgaca acgagtacct tcactatcaa gatgactggt atatcctgtc atcaaagata 1140
gagaataaac ctgaagacta tatatttgta tactaccgtg ggcgaaacga tgcttgggat 1200
ggatatggtg gtgcagttgt atacacgaga agttctgtat tacccaatag cattatacca 1260
gaactcgaaa aagcagcaaa aagcataggc agagacttca gcacattcat tagaacggat 1320
aacacatgtg gtcctgaacc tgcgctcgtg gagagaattg agaagacagt ggaagaaggt 1380
gaaaggataa tcgtaaaaga ggttgaagag atagaagaag aggtagagaa ggaagtggag 1440
aaggtcggta ggactgagat gaccttgttc cagagattgg ctgaaggatt taatgaactg 1500
aagcaagacg aggagaattt cgtgagagag ttaagtaaag aagagatgga gtttttggat 1560
gagatcaaaa tggaagcaag tgaggttgaa aaattgtttg ggaaagcttt gccaatcagg 1620
aaggtcaggt agaaacaaga accaccattg ttgtacaaac tatattatac atactgtgtt 1680
cggttcatat aaagtaatat ttttgtacac agtcatcatc attccataac aattggatac 1740
agaaaacaca aggattaaac atcctttgag cgaaac 1776
<210> 4
<211> 265
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 4
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Thr Ala Gly His Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Ser Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His His Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Asn Ser Pro Val Ala Leu Pro Ser Arg Arg Gln Ser Phe
35 40 45
Val Pro Leu Ala Leu Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Glu Lys Pro Lys Ser Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Ala Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
85 90 95
Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
145 150 155 160
Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Asn Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu
225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 5
<211> 667
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 5
Met Gly Ser Thr Pro Phe Cys Tyr Ser Ile Asn Pro Ser Pro Ser Lys
1 5 10 15
Leu Asp Phe Thr Arg Thr His Val Phe Ser Pro Val Ser Lys Gln Phe
20 25 30
Tyr Leu Asp Leu Ser Ser Phe Ser Gly Lys Pro Gly Gly Val Ser Gly
35 40 45
Phe Arg Ser Arg Arg Ala Leu Leu Gly Val Lys Ala Ala Thr Ala Leu
50 55 60
Val Glu Lys Glu Glu Lys Arg Glu Ala Val Thr Glu Lys Lys Lys Lys
65 70 75 80
Ser Arg Val Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe Ala
85 90 95
Leu Ala Ala Lys Lys Lys Gly Phe Asp Val Leu Val Phe Glu Lys Asp
100 105 110
Leu Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Lys Tyr Arg Gly Pro Ile Gln Ile
115 120 125
Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Ile Glu Val Ala
130 135 140
Glu Gln Val Met Glu Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn Gly
145 150 155 160
Leu Val Asp Gly Ile Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr Phe
165 170 175
Thr Pro Ala Ala Ser Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile Ser Arg
180 185 190
Met Thr Leu Gln Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu Asp Val Ile
195 200 205
Arg Asn Glu Ser Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Ser Gly Asp Lys Val
210 215 220
Thr Val Val Leu Glu Asn Gly Gln Arg Tyr Glu Gly Asp Leu Leu Val
225 230 235 240
Gly Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Glu Ala Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala Asp
260 265 270
Phe Ile Pro Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu Gly
275 280 285
His Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Gly Gly Lys Met Gln
290 295 300
Trp Tyr Ala Phe His Glu Glu Pro Ala Gly Gly Ala Asp Ala Pro Asn
305 310 315 320
Gly Met Lys Lys Arg Leu Phe Glu Ile Phe Asp Gly Trp Cys Asp Asn
325 330 335
Val Leu Asp Leu Leu His Ala Thr Glu Glu Glu Ala Ile Leu Arg Arg
340 345 350
Asp Ile Tyr Asp Arg Ser Pro Gly Phe Thr Trp Gly Lys Gly Arg Val
355 360 365
Thr Leu Leu Gly Asp Ser Ile His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly Gln
370 375 380
Gly Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Ser Phe Gln Leu Ala Leu Glu Leu
385 390 395 400
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405 410 415
Val Ser Ser Leu Lys Arg Tyr Glu Glu Ser Arg Arg Leu Arg Val Ala
420 425 430
Ile Ile His Ala Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr Tyr
435 440 445
Lys Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr Lys
450 455 460
Phe Arg Val Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Val Asp
465 470 475 480
Ile Ala Met Pro Ser Met Leu Asp Trp Val Leu Gly Gly Asn Ser Glu
485 490 495
Lys Leu Gln Gly Arg Pro Pro Ser Cys Arg Leu Thr Asp Lys Ala Asp
500 505 510
Asp Arg Leu Arg Glu Trp Phe Glu Asp Asp Asp Ala Leu Glu Arg Thr
515 520 525
Ile Lys Gly Glu Trp Tyr Leu Ile Pro His Gly Asp Asp Cys Cys Val
530 535 540
Ser Glu Thr Leu Cys Leu Thr Lys Asp Glu Asp Gln Pro Cys Ile Val
545 550 555 560
Gly Ser Glu Pro Asp Gln Asp Phe Pro Gly Met Arg Ile Val Ile Pro
565 570 575
Ser Ser Gln Val Ser Lys Met His Ala Arg Val Ile Tyr Lys Asp Gly
580 585 590
Ala Phe Phe Leu Met Asp Leu Arg Ser Glu His Gly Thr Tyr Val Thr
595 600 605
Asp Asn Glu Gly Arg Arg Tyr Arg Ala Thr Pro Asn Phe Pro Ala Arg
610 615 620
Phe Arg Ser Ser Asp Ile Ile Glu Phe Gly Ser Asp Lys Lys Ala Ala
625 630 635 640
Phe Arg Val Lys Val Ile Arg Lys Thr Pro Lys Ser Thr Arg Lys Asn
645 650 655
Glu Ser Asn Asn Asp Lys Leu Leu Gln Thr Ala
660 665
<210> 6
<211> 462
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 6
Met Ala Val Ala Thr His Cys Phe Thr Ser Pro Cys His Asp Arg Ile
1 5 10 15
Arg Phe Phe Ser Ser Asp Asp Gly Ile Gly Arg Leu Gly Ile Thr Arg
20 25 30
Lys Arg Ile Asn Gly Thr Phe Leu Leu Lys Ile Leu Pro Pro Ile Gln
35 40 45
Ser Ala Asp Leu Arg Thr Thr Gly Gly Arg Ser Ser Arg Pro Leu Ser
50 55 60
Ala Phe Arg Ser Gly Phe Ser Lys Gly Ile Phe Asp Ile Val Pro Leu
65 70 75 80
Pro Ser Lys Asn Glu Leu Lys Glu Leu Thr Ala Pro Leu Leu Leu Lys
85 90 95
Leu Val Gly Val Leu Ala Cys Ala Phe Leu Ile Val Pro Ser Ala Asp
100 105 110
Ala Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys Ala Cys Leu Leu Lys Gly Cys Arg
115 120 125
Ile Glu Leu Ala Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ala Cys Ala Ala Asn Val
130 135 140
Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln
145 150 155 160
Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn
165 170 175
Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Arg Lys Ser Asp Leu
180 185 190
Gly Glu Phe Pro Ala Pro Asp Pro Ser Val Leu Val Gln Asn Phe Asn
195 200 205
Ile Ser Asp Phe Asn Gly Lys Trp Tyr Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro
210 215 220
Thr Phe Asp Ala Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu Gly
225 230 235 240
Asp Asn Lys Leu Val Gly Asn Ile Ser Trp Arg Ile Lys Thr Leu Asp
245 250 255
Ser Gly Phe Phe Thr Arg Ser Ala Val Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro
260 265 270
Asn Gln Pro Gly Val Leu Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr
275 280 285
Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro Glu
290 295 300
Asp Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly
305 310 315 320
Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ser Val Leu Pro Asn Ser
325 330 335
Ile Ile Pro Glu Leu Glu Lys Ala Ala Lys Ser Ile Gly Arg Asp Phe
340 345 350
Ser Thr Phe Ile Arg Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Ala Leu
355 360 365
Val Glu Arg Ile Glu Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Arg Ile Ile Val
370 375 380
Lys Glu Val Glu Glu Ile Glu Glu Glu Val Glu Lys Glu Val Glu Lys
385 390 395 400
Val Gly Arg Thr Glu Met Thr Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe
405 410 415
Asn Glu Leu Lys Gln Asp Glu Glu Asn Phe Val Arg Glu Leu Ser Lys
420 425 430
Glu Glu Met Glu Phe Leu Asp Glu Ile Lys Met Glu Ala Ser Glu Val
435 440 445
Glu Lys Leu Phe Gly Lys Ala Leu Pro Ile Arg Lys Val Arg
450 455 460
<210> 7
<211> 46
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 7
Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr Glu Ala Glu Pro Leu
1 5 10 15
Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly Ala Ile Gly Ala Leu
20 25 30
Gly Asp Arg Gly Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile
35 40 45
<210> 8
<211> 49
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 8
Ile Gly Gly Leu Val Phe Ala Leu Ala Ala Lys Arg Lys Gly Phe Glu
1 5 10 15
Val Leu Val Phe Glu Lys Asp Leu Ser Ala Val Arg Gly Glu Gly Gln
20 25 30
Tyr Arg Gly Pro Ile Gln Ile Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ala
<210> 9
<211> 56
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 9
Cys Ala Ala Asn Ile Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp
1 5 10 15
Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Asn Val
20 25 30
Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Cys
35 40 45
Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val
50 55
<210> 10
<211> 272
<212> PRT
<213> Cucumis melo
<400> 10
Met Ala Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Cys Val Gly His
1 5 10 15
Gly Val Cys Leu Lys Arg Glu Leu Ser Leu Arg Pro Asn Asn Asn Gln
20 25 30
Phe Thr Arg Leu Phe Phe Asn Pro Leu Pro Asn His Ser Val Ser Leu
35 40 45
Pro Ala Arg Gly Phe Thr Pro Leu Ala Val Phe Lys Ser Arg Thr Lys
50 55 60
Ala Pro Pro Lys Lys Val Glu Lys Pro Lys Gln Lys Val Glu Asp Gly
65 70 75 80
Ile Phe Gly Thr Ser Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Gln Asn Glu Leu
85 90 95
Phe Val Gly Arg Val Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly
100 105 110
Glu Ala Ile Thr Gly Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr
115 120 125
Gly Ile Pro Ile Tyr Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu
130 135 140
Phe Thr Leu Leu Gly Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe
145 150 155 160
Ile Asp Asp Pro Glu Pro Ala Thr Gly Leu Glu Arg Ala Val Ile Pro
165 170 175
Pro Gly Lys Ser Phe Arg Ser Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gly Gly Pro
180 185 190
Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala
195 200 205
Gln Leu Gly Phe Ala Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys
210 215 220
Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn Ile Glu Thr Gly Val Pro Ile Asn Glu
225 230 235 240
Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu Asn Val Val Phe Phe Phe Ile Ala Ala
245 250 255
Val Asn Pro Gly Thr Gly Lys Phe Val Thr Asp Glu Glu Asp Asp Glu
260 265 270
<210> 11
<211> 272
<212> PRT
<213> Cucumis sativus
<400> 11
Met Ala Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Cys Val Gly His
1 5 10 15
Gly Val Cys Leu Lys Arg Glu Leu Ser Leu Arg Pro Asn Tyr Thr Gln
20 25 30
Phe Thr Arg Leu Phe Phe Asn Pro Leu Pro Ser His Ser Val Ser Leu
35 40 45
Pro Pro Arg Gly Phe Thr Thr Leu Ala Val Phe Lys Ser Arg Thr Lys
50 55 60
Ala Pro Pro Lys Lys Val Glu Lys Pro Lys Gln Lys Val Glu Asp Gly
65 70 75 80
Ile Phe Gly Thr Ser Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Gln Asn Glu Leu
85 90 95
Phe Val Gly Arg Val Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Ile Leu Gly
100 105 110
Glu Ala Ile Thr Gly Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr
115 120 125
Gly Ile Pro Ile Tyr Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu
130 135 140
Phe Thr Leu Leu Gly Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe
145 150 155 160
Ile Asp Asp Pro Glu Pro Ala Thr Gly Leu Glu Arg Ala Val Ile Pro
165 170 175
Pro Gly Lys Ser Phe Arg Ser Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gly Gly Pro
180 185 190
Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala
195 200 205
Gln Leu Gly Phe Ala Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys
210 215 220
Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn Ile Glu Thr Gly Val Pro Ile Asn Glu
225 230 235 240
Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu Asn Val Val Phe Phe Phe Ile Ala Ala
245 250 255
Val Asn Pro Gly Thr Gly Lys Phe Val Thr Asp Glu Glu Asp Asp Glu
260 265 270
<210> 12
<211> 267
<212> PRT
<213> Eutrema salsugineum
<400> 12
Met Ala Gln Thr Met Met Leu Thr Ser Gly Val Ser Ala Asn Gln Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Asn Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His His Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Asn Ser Pro Val Val Ile Pro Ser Arg Arg Gln Ser Leu
35 40 45
Val Pro Leu Ala Leu Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Glu Lys Val Lys Pro Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Ala Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
85 90 95
Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Val Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
145 150 155 160
Thr Pro Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Ala Pro Gly Lys Asn Val
165 170 175
Arg Ser Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr
180 185 190
Lys Ala Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala
195 200 205
Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln
210 215 220
Leu Asn Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val
225 230 235 240
Leu Leu Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn
245 250 255
Gly Lys Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Asp Met
260 265
<210> 13
<211> 265
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 13
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Thr Ala Gly His Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Ser Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His His Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Asn Ser Pro Val Ala Leu Pro Ser Arg Arg Gln Ser Phe
35 40 45
Val Pro Leu Ala Leu Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Glu Lys Pro Lys Ser Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Ala Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
85 90 95
Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
145 150 155 160
Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Asn Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu
225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 14
<211> 265
<212> PRT
<213> Arabidopsis lyrata
<400> 14
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Ser Ala Gly Gln Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Ser Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His His Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Asn Ser Pro Val Val Leu Pro Ser Arg Arg Gln Ser Phe
35 40 45
Val Pro Leu Ala Leu Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Glu Lys Pro Lys Lys Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Ala Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
85 90 95
Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Gln Phe Val Asp Asp Pro Pro
145 150 155 160
Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Asn Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu
225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 15
<211> 265
<212> PRT
<213> Camelina sativa
<400> 15
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Ser Ala Gly Gln Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Asn Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His His Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Thr Ser Pro Val Ala Leu Pro Ser Arg Arg Gln Ser Phe
35 40 45
Val Pro Leu Ala Leu Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Val Lys Pro Lys Asp Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Ala Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
85 90 95
Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
145 150 155 160
Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Gly Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu
225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 16
<211> 265
<212> PRT
<213> Capsella rubella
<400> 16
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Ser Ala Gly Gln Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Asn Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His Gln Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Thr Ser Pro Val Ala Leu Pro Ser Arg Arg Gln Ser Phe
35 40 45
Val Pro Leu Ala Leu Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Glu Lys Val Lys Pro Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Ala Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
85 90 95
Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Gly Ile Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
145 150 155 160
Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Gly Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu
225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 17
<211> 265
<212> PRT
<213> Noccaea caerulescens
<400> 17
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Ser Ala Asn Gln Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Asn Pro Leu Ala Gln Pro Lys Ile Gln His Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Asn Ser Pro Val Ala Leu Pro Ser Arg Arg Pro Ser Phe
35 40 45
Val Pro Leu Ala Leu Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Glu Lys Ala Lys Pro Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Gln Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
85 90 95
Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
145 150 155 160
Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Ser Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ser
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu
225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 18
<211> 265
<212> PRT
<213> Brassica napus
<400> 18
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1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Asn Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His His Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Asn Ser Pro Val Thr Leu Pro Ser Arg Ile Pro Ser Leu
35 40 45
Val Pro Leu Ala Ile Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Glu Lys Val Lys Pro Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Gln Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
85 90 95
Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
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Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Gly Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu
225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Ala Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 19
<211> 265
<212> PRT
<213> Raphanus sativus
<400> 19
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Ile Ser Ala Asn His Phe
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Ser Gly Asn Ser Pro Val Thr Leu Pro Ser Arg Arg Pro Ser Leu
35 40 45
Val Pro Leu Ala Ile Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Glu Lys Val Lys Pro Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Gln Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
85 90 95
Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
145 150 155 160
Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Gly Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu
225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 20
<211> 265
<212> PRT
<213> Brassica rapa
<400> 20
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Ile Ser Ala Asn His Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Asn Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His His Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Asn Ser Pro Val Thr Leu Pro Ser Arg Arg Pro Ser Leu
35 40 45
Val Pro Leu Ala Ile Phe Lys Pro Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys
50 55 60
Val Glu Lys Val Lys Pro Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Gln Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
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Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
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Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
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Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
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Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
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195 200 205
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245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
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<210> 21
<211> 265
<212> PRT
<213> Raphanus sativus
<400> 21
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Ser Ala Asn Thr Phe
1 5 10 15
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Leu Ser Gly Asn Ser His Val Ile Leu Pro Ser Arg Arg Pro Ser Leu
35 40 45
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65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Gln Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
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Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
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Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
145 150 155 160
Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Gly Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
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225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 22
<211> 265
<212> PRT
<213> Brassica napus
<400> 22
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Ser Ala Asn Gln Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Asn Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His His Phe Phe
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Leu Ser Gly Asn Ser His Val Val Leu Pro Ser Arg Arg Pro Ser Leu
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Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
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Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
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Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
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195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
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225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Ser
260 265
<210> 23
<211> 265
<212> PRT
<213> Brassica rapa
<400> 23
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Thr Ser Gly Val Ser Ala Asn Gln Phe
1 5 10 15
Leu Arg Asn Lys Asn Pro Leu Ala Gln Pro Lys Val His His Phe Phe
20 25 30
Leu Ser Gly Asn Ser His Val Val Leu Pro Ser Arg Arg Pro Ser Leu
35 40 45
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50 55 60
Val Glu Lys Val Lys Pro Lys Val Glu Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Gln Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val
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Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly
100 105 110
Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr
115 120 125
Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Lys Phe Val Asp Asp Pro Pro
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Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile Pro Pro Gly Lys Gly Val Arg Ser
165 170 175
Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gln Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ala
180 185 190
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn
210 215 220
Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile Gln Asp Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu
225 230 235 240
Asn Val Ala Phe Phe Phe Phe Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn Gly Lys
245 250 255
Phe Ile Thr Asp Asp Gly Glu Glu Arg
260 265
<210> 24
<211> 274
<212> PRT
<213> Phoenix dactylifera
<400> 24
Met Val His Ala Val Phe Thr Ser Gly Leu Gly Ala His Leu Pro Asp
1 5 10 15
Ser Lys Arg Glu Pro Leu Leu Gln Ser Gln Leu Arg Arg Leu Arg Pro
20 25 30
Thr Pro Phe Ser His Leu Leu Leu Ser Gln Pro Ser His Lys Gln Leu
35 40 45
Pro Ser Pro Ser Tyr Ser Ser Tyr Thr Pro Val Leu Ala Leu Phe Lys
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Ser Leu Leu Gly Glu Ala Ile Thr Gly Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu
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130 135 140
Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp
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Arg Gly Arg Phe Val Asp Asp Pro Pro Thr Gly Leu Asp Lys Ala Val
165 170 175
Ile Pro Pro Gly Lys Gly Ile Arg Ser Ala Leu Gly Leu Lys Glu Gly
180 185 190
Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ser Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg
195 200 205
Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser Ile Ile Gly Glu Ile Val Thr
210 215 220
Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn Ile Glu Thr Gly Val Pro Ile
225 230 235 240
Asn Glu Ile Glu Pro Leu Val Leu Phe Asn Val Ile Phe Phe Phe Ile
245 250 255
Ala Ala Leu Asn Pro Gly Asn Gly Lys Phe Val Thr Asp Val Asp Glu
260 265 270
Glu Glu
<210> 25
<211> 270
<212> PRT
<213> Anthurium amnicola
<400> 25
Met Ala Gln Ser Met Leu Met Ser Ser Leu Gly Ser Arg Leu Val Glu
1 5 10 15
Thr Lys Gly Glu Pro Leu Leu Gln Phe Gln Ile Arg Arg Leu Arg Pro
20 25 30
Thr Pro Ala Thr His Leu Leu Leu Pro Pro Pro Thr Arg Arg His Pro
35 40 45
Leu Pro Pro Ser Tyr Ala Pro Thr Leu Ala Ala Phe Lys Ser Lys Thr
50 55 60
Lys Ala Ala Pro Lys Lys Val Glu Lys Gly Asn Phe Lys Val Glu Asp
65 70 75 80
Gly Ile Phe Gly Thr Ser Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Gln Asn Glu
85 90 95
Leu Phe Val Gly Arg Val Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Leu Leu
100 105 110
Gly Glu Ala Ile Thr Gly Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu Glu
115 120 125
Thr Gly Ile Pro Ile Tyr Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe Ile
130 135 140
Leu Phe Thr Leu Leu Gly Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly Arg
145 150 155 160
Phe Val Asp Asp Pro Pro Thr Gly Leu Asp Lys Ala Val Val Pro Pro
165 170 175
Gly Lys Gly Phe Arg Ser Ser Leu Gly Leu Lys Glu Gly Gly Pro Leu
180 185 190
Phe Gly Phe Thr Lys Ser Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln
195 200 205
Leu Gly Ile Ala Phe Ser Ile Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly
210 215 220
Ala Leu Ala Gln Leu Asn Ile Glu Thr Gly Val Pro Ile Ser Asp Ile
225 230 235 240
Glu Pro Leu Val Leu Leu Asn Val Val Phe Phe Phe Leu Ala Ala Leu
245 250 255
Asn Pro Gly Thr Gly Gln Phe Val Thr Asp Asp Gly Glu Asp
260 265 270
<210> 26
<211> 269
<212> PRT
<213> Trifolium subterraneum
<400> 26
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Met Ser Ser Val Ser Ser Thr Tyr Ser
1 5 10 15
Val Glu Leu Lys Lys Asp Pro Leu Leu Gln Leu Gln Cys Gln Arg Leu
20 25 30
Arg Ser Arg Ile Ser Asp Val Ser Phe Asn Pro Leu Ser Ser Asn Ser
35 40 45
Lys Ser Leu Ser Ser Arg Thr Phe Thr Thr Leu Ala Leu Phe Lys Ser
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Pro Ala Lys Val Val Lys Pro Lys Pro Lys Val Glu
65 70 75 80
Asp Gly Ile Phe Gly Thr Ser Gly Gly Phe Gly Phe Thr Lys Gln Asn
85 90 95
Glu Leu Phe Val Gly Arg Val Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser Ile
100 105 110
Leu Gly Glu Ala Leu Thr Gly Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn Leu
115 120 125
Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe Phe
130 135 140
Ile Ile Phe Thr Leu Leu Gly Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg Gly
145 150 155 160
Lys Phe Val Asp Asp Glu Pro Thr Thr Gly Gly Val Ile Pro Pro Gly
165 170 175
Lys Gly Phe Arg Ala Ala Leu Gly Leu Arg Glu Gly Gly Pro Leu Phe
180 185 190
Gly Phe Thr Lys Ser Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu
195 200 205
Gly Phe Val Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly Ala
210 215 220
Leu Ala Gln Leu Asn Val Glu Thr Gly Val Pro Ile Thr Glu Ile Glu
225 230 235 240
Pro Leu Val Leu Phe Asn Val Ile Phe Phe Phe Ile Ala Ala Leu Asn
245 250 255
Pro Gly Thr Gly Thr Phe Val Thr Asp Glu Glu Glu Asp
260 265
<210> 27
<211> 270
<212> PRT
<213> Pisum sativum
<400> 27
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Met Ser Ser Val Ser Ser Thr Tyr Ser
1 5 10 15
Val Pro Leu Asn Lys Asp Pro Leu Leu Gln Leu Gln Cys Gln Arg Leu
20 25 30
Lys Pro Arg Phe Ser Asp Ile Ser Phe Ser Pro Leu Ser Ser Asn Ser
35 40 45
Lys Ser Phe Ser Ser Arg Thr Phe Lys Thr Leu Ala Leu Phe Lys Ser
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Pro Ala Lys Val Val Pro Lys Gln Lys Pro Lys Val
65 70 75 80
Glu Asp Gly Val Phe Gly Thr Ser Gly Gly Phe Gly Phe Thr Lys Gln
85 90 95
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser
100 105 110
Ile Leu Gly Glu Gly Ile Thr Gly Lys Gly Ile Leu Ser Gln Leu Asn
115 120 125
Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe
130 135 140
Phe Ile Ile Phe Thr Leu Leu Gly Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg
145 150 155 160
Gly Lys Phe Val Asp Asp Glu Pro Thr Thr Gly Gly Val Ile Pro Pro
165 170 175
Gly Lys Gly Phe Arg Gln Ala Leu Gly Leu Ser Glu Gly Gly Pro Leu
180 185 190
Phe Gly Phe Thr Lys Ser Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu Ala Gln
195 200 205
Leu Gly Phe Ala Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly Lys Gly
210 215 220
Ala Leu Ala Gln Leu Asn Ile Glu Thr Gly Val Pro Ile Asn Glu Ile
225 230 235 240
Glu Pro Leu Val Leu Phe Asn Val Ala Phe Phe Phe Ile Ala Ala Leu
245 250 255
Asn Pro Gly Thr Gly Lys Phe Val Thr Asp Glu Glu Glu Asp
260 265 270
<210> 28
<211> 271
<212> PRT
<213> Beta vulgaris
<400> 28
Met Ala Gln Ala Met Leu Leu Met Pro Ser Val Ser Thr Thr Asn Thr
1 5 10 15
Ile Asp Leu Lys Arg Asn Ala Leu Leu Lys Ile Gln Ile Gln Lys Ile
20 25 30
Lys Pro Lys Ser Ser Ser Ser His Leu Phe Phe Ser Pro Leu Ser Ser
35 40 45
Ser Ser Ser Ser Ser Ser Thr Phe Lys Thr Leu Ala Leu Phe Lys Pro
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Pro Val Lys Lys Val Glu Lys Pro Lys Leu Lys Val
65 70 75 80
Glu Asp Gly Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys Glu
85 90 95
Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala Ser
100 105 110
Leu Leu Gly Glu Gly Leu Thr Gly Lys Gly Ile Leu Ala Gln Leu Asn
115 120 125
Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu Phe
130 135 140
Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp Arg
145 150 155 160
Gly Arg Phe Val Asp Asp Pro Pro Thr Gly Leu Glu Lys Ala Val Ile
165 170 175
Pro Pro Gly Lys Asn Val Arg Ser Ala Leu Gly Leu Arg Glu Gly Gly
180 185 190
Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ser Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Leu
195 200 205
Ala Gln Leu Gly Phe Ala Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr Gly
210 215 220
Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn Ile Glu Thr Gly Val Pro Val Asn
225 230 235 240
Glu Ile Glu Pro Leu Val Leu Leu Asn Val Leu Phe Phe Phe Ile Ala
245 250 255
Ala Ile Asn Pro Gly Thr Gly Lys Phe Ile Thr Asp Glu Glu Glu
260 265 270
<210> 29
<211> 274
<212> PRT
<213> Cephalotus follicularis
<400> 29
Met Ala Gln Thr Met Leu Leu Met Cys Gly Ile Ser Thr Ser His Val
1 5 10 15
Val Asp Leu Arg Arg Asp Pro Leu Phe His Val Gln Ile Gln Lys Leu
20 25 30
Arg Pro Lys Ser Phe Ser His Leu Phe Phe Asn Pro Leu Ser Asn Asn
35 40 45
Gly Phe Ser Leu Ala Gln Lys Phe Asn Thr Leu Ala Leu Phe Lys Ser
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Ala Pro Lys Lys Val Ala Thr Thr Ala Lys Pro Lys
65 70 75 80
Val Glu Asp Gly Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gly Ile Gly Phe Thr Lys
85 90 95
Gln Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg Val Ala Met Ile Gly Phe Ala Ala
100 105 110
Ser Leu Leu Gly Glu Ala Val Thr Gly Lys Gly Ile Leu Ser Gln Leu
115 120 125
Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Ile Tyr Glu Ala Glu Pro Leu Leu Leu
130 135 140
Phe Phe Ile Leu Phe Thr Leu Leu Gly Ala Ile Gly Ala Leu Gly Asp
145 150 155 160
Arg Gly Arg Phe Val Asp Asp Glu Pro Thr Gly Leu Glu Arg Ala Val
165 170 175
Ile Pro Pro Gly Lys Gly Ile Arg Gly Ala Leu Gly Leu Arg Glu Gly
180 185 190
Gly Pro Leu Phe Gly Phe Thr Lys Ser Asn Glu Leu Phe Val Gly Arg
195 200 205
Leu Ala Gln Leu Gly Ile Ala Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ile Ile Thr
210 215 220
Gly Lys Gly Ala Leu Ala Gln Leu Asn Ile Glu Thr Gly Ile Pro Ile
225 230 235 240
Asn Glu Ile Glu Pro Leu Val Leu Phe Asn Val Ile Phe Phe Phe Phe
245 250 255
Ala Ala Leu Asn Pro Gly Thr Gly Lys Phe Val Thr Asp Glu Glu Ala
260 265 270
Glu Asp
<210> 30
<211> 665
<212> PRT
<213> Tarenaya hassleriana
<400> 30
Met Gly Ser Thr Leu Phe Cys Ser Pro Val Asn Pro Ser Leu Ser Lys
1 5 10 15
Leu Asp Phe Ser Arg Thr His Leu Leu Ser Pro Ala Asp Lys His Phe
20 25 30
Phe Leu Asp Leu Pro Ser Phe Met Gly Lys Val Arg Gly Lys Ser Ser
35 40 45
Val Met Ser Arg Arg Arg Val Val Gly Val Lys Ala Thr Ala Ala Val
50 55 60
Glu Glu Glu Arg Arg Glu Thr Ala Ala Glu Lys Glu Lys Leu Arg Val
65 70 75 80
Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe Ala Leu Ala Ala
85 90 95
Lys Arg Lys Gly Phe Asp Val Ala Val Phe Glu Lys Asp Leu Ser Ala
100 105 110
Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln Ile Gln Ser Asn
115 120 125
Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Met Gly Val Ala Glu Glu Val
130 135 140
Met Glu Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn Gly Leu Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Ser Gly Ser Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr Phe Thr Pro Ala
165 170 175
Ala Glu Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile Ser Arg Met Thr Leu
180 185 190
Gln Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu Asp Val Ile Gln Asn Glu
195 200 205
Ser Asn Val Val Ser Phe Ser Glu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Val
210 215 220
Leu Glu Asn Gly Glu Cys Tyr Gln Gly Asp Leu Leu Val Gly Ala Asp
225 230 235 240
Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Ser Gln Leu Phe Gly His Glu Glu Ala
245 250 255
Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala Asp Phe Val Pro
260 265 270
Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu Gly His Lys Gln
275 280 285
Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Gly Gly Lys Met Gln Trp Tyr Ala
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Lys Arg Leu Leu Glu Ile Phe Gln Gly Trp Cys Asp Asn Val Ile Asp
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Leu Leu His Ala Thr Glu Glu Asp Ala Ile Leu Arg Arg Asp Ile Tyr
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Trp Arg Arg Ser Val Glu Thr Asp Lys Pro Ile Asp Ile Val Ser Ser
405 410 415
Leu Arg Ser Tyr Glu Glu Ala Arg Lys Leu Arg Val Ala Ile Ile His
420 425 430
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450 455 460
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465 470 475 480
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515 520 525
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Val Arg Leu Asp Lys Asp Glu Asp Gln Pro Cys Ile Ile Gly Ser Glu
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565 570 575
Val Ser Lys Val His Ala Arg Ile Ile Tyr Lys Asp Gly Ala Phe Phe
580 585 590
Val Met Asp Leu Arg Ser Glu Tyr Gly Thr Tyr Ile Thr Asp Asn Glu
595 600 605
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610 615 620
Ser Asp Ile Ile Glu Leu Gly Ser Asp Lys Lys Ala Ala Phe Arg Val
625 630 635 640
Lys Val Ile Arg Lys Thr Pro Lys Met Thr Arg Arg Asp Asp Arg Glu
645 650 655
Ser Ser Ser Lys Leu Leu Gln Ala Ala
660 665
<210> 31
<211> 663
<212> PRT
<213> Arabis alpina
<400> 31
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1 5 10 15
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65 70 75 80
Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe Ala Leu Ala Ala
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Gly Val Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr Phe Thr Pro Ala
165 170 175
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195 200 205
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Leu Glu Asn Gly Gln Arg Tyr Glu Gly Asp Leu Leu Val Gly Ala Asp
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Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Glu Ala
245 250 255
Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala Asp Phe Ile Pro
260 265 270
Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu Gly His Lys Gln
275 280 285
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Lys Arg Leu Phe Asp Ile Phe Glu Gly Trp Cys Asp Asn Val Leu Asp
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Leu Leu His Ala Thr Glu Glu Glu Ala Ile Leu Arg Arg Asp Ile Tyr
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Leu Lys Arg Tyr Glu Glu Ser Arg Arg Leu Arg Val Ala Ile Ile His
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Gly Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr Tyr Lys Ala Tyr
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Gly Lys Leu Leu Gln Ala Ala
660
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<211> 665
<212> PRT
<213> Camelina sativa
<400> 32
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Ser Ser Leu Lys Arg Tyr Glu Glu Ser Arg Arg Leu Arg Val Ala Leu
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<210> 33
<211> 668
<212> PRT
<213> Camelina sativa
<400> 33
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<210> 34
<211> 669
<212> PRT
<213> Capsella rubella
<400> 34
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Tyr Leu Asp Leu Ser Ser Phe Thr Gly Lys Ser Gly Val Gly Gly Gly
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Leu Ser Gly Phe Arg Ser Arg Arg Thr Leu Val Gly Val Lys Ala Ala
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Glu Lys Asp Leu Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro
115 120 125
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145 150 155 160
Ile Asn Gly Leu Val Asp Gly Val Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe
165 170 175
Asp Thr Phe Thr Pro Ala Ala Ser Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val
180 185 190
Ile Ser Arg Met Thr Leu Gln Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu
195 200 205
Glu Val Ile Arg Asn Glu Ser Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Ser Gly
210 215 220
Asp Lys Val Thr Val Val Leu Glu Asn Gly Gln Arg Tyr Glu Gly Asp
225 230 235 240
Leu Leu Val Gly Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Asn Asn Leu
245 250 255
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260 265 270
Ile Ala Asp Phe Ile Pro Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val
275 280 285
Phe Leu Gly His Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Gly Gly
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Lys Met Gln Trp Tyr Ala Phe His Glu Glu Pro Ala Gly Gly Thr Asp
305 310 315 320
Ala Pro Asn Gly Met Lys Lys Arg Leu Phe Glu Ile Phe Asp Gly Trp
325 330 335
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Leu Thr Lys Phe Arg Val Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe
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Phe Ile Asp Ile Ala Met Pro Leu Met Leu Asn Trp Val Leu Gly Gly
485 490 495
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Arg Lys Asn Glu Ser Asn Asp Lys Leu Leu Gln Ala Ala
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<210> 35
<211> 667
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 35
Met Gly Ser Thr Pro Phe Cys Tyr Ser Ile Asn Pro Ser Pro Ser Lys
1 5 10 15
Leu Asp Phe Thr Arg Thr His Val Phe Ser Pro Val Ser Lys Gln Phe
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Tyr Leu Asp Leu Ser Ser Phe Ser Gly Lys Pro Gly Gly Val Ser Gly
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Ser Arg Val Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe Ala
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Leu Ala Ala Lys Lys Lys Gly Phe Asp Val Leu Val Phe Glu Lys Asp
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Leu Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Lys Tyr Arg Gly Pro Ile Gln Ile
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Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Ile Glu Val Ala
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Leu Val Asp Gly Ile Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr Phe
165 170 175
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Gly Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Asn Asn Leu Phe Gly Arg
245 250 255
Ser Glu Ala Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala Asp
260 265 270
Phe Ile Pro Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu Gly
275 280 285
His Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Gly Gly Lys Met Gln
290 295 300
Trp Tyr Ala Phe His Glu Glu Pro Ala Gly Gly Ala Asp Ala Pro Asn
305 310 315 320
Gly Met Lys Lys Arg Leu Phe Glu Ile Phe Asp Gly Trp Cys Asp Asn
325 330 335
Val Leu Asp Leu Leu His Ala Thr Glu Glu Glu Ala Ile Leu Arg Arg
340 345 350
Asp Ile Tyr Asp Arg Ser Pro Gly Phe Thr Trp Gly Lys Gly Arg Val
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Thr Leu Leu Gly Asp Ser Ile His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly Gln
370 375 380
Gly Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Ser Phe Gln Leu Ala Leu Glu Leu
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435 440 445
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450 455 460
Phe Arg Val Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Val Asp
465 470 475 480
Ile Ala Met Pro Ser Met Leu Asp Trp Val Leu Gly Gly Asn Ser Glu
485 490 495
Lys Leu Gln Gly Arg Pro Pro Ser Cys Arg Leu Thr Asp Lys Ala Asp
500 505 510
Asp Arg Leu Arg Glu Trp Phe Glu Asp Asp Asp Ala Leu Glu Arg Thr
515 520 525
Ile Lys Gly Glu Trp Tyr Leu Ile Pro His Gly Asp Asp Cys Cys Val
530 535 540
Ser Glu Thr Leu Cys Leu Thr Lys Asp Glu Asp Gln Pro Cys Ile Val
545 550 555 560
Gly Ser Glu Pro Asp Gln Asp Phe Pro Gly Met Arg Ile Val Ile Pro
565 570 575
Ser Ser Gln Val Ser Lys Met His Ala Arg Val Ile Tyr Lys Asp Gly
580 585 590
Ala Phe Phe Leu Met Asp Leu Arg Ser Glu His Gly Thr Tyr Val Thr
595 600 605
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610 615 620
Phe Arg Ser Ser Asp Ile Ile Glu Phe Gly Ser Asp Lys Lys Ala Ala
625 630 635 640
Phe Arg Val Lys Val Ile Arg Lys Thr Pro Lys Ser Thr Arg Lys Asn
645 650 655
Glu Ser Asn Asn Asp Lys Leu Leu Gln Thr Ala
660 665
<210> 36
<211> 667
<212> PRT
<213> Arabidopsis lyrata
<400> 36
Met Gly Ser Thr Leu Phe Cys Tyr Ser Ile Asn Pro Ser Pro Ser Lys
1 5 10 15
Leu Asp Phe Thr Arg Thr His Val Val Ser Pro Val Ala Lys Gln Phe
20 25 30
Tyr Leu Asp Leu Ser Ser Phe Ser Gly Lys Ser Gly Gly Gly Leu Ser
35 40 45
Gly Phe Arg Ser Arg Lys Thr Leu Val Gly Val Lys Ala Ala Thr Ala
50 55 60
Leu Val Glu Lys Glu Glu Lys Arg Glu Ala Val Thr Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
Lys Ser Arg Val Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe
85 90 95
Ala Leu Ala Ala Lys Lys Lys Gly Phe Asp Val Val Val Phe Glu Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln
115 120 125
Ile Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Thr Asp Val
130 135 140
Ala Glu Gln Val Met Glu Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn
145 150 155 160
Gly Leu Val Asp Gly Val Ser Gly Ser Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr
165 170 175
Phe Thr Pro Ala Ala Ser Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile Ser
180 185 190
Arg Met Thr Leu Gln Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu Asp Val
195 200 205
Ile Arg Asn Glu Ser Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Ser Gly Asp Lys
210 215 220
Val Thr Val Val Leu Glu Asn Gly Gln Arg Tyr Glu Gly Asp Leu Leu
225 230 235 240
Val Gly Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Asn Asn Leu Phe Gly
245 250 255
Arg Ser Glu Ala Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala
260 265 270
Asp Phe Val Pro Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu
275 280 285
Gly His Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Gly Gly Lys Met
290 295 300
Gln Trp Tyr Ala Phe His Glu Glu Pro Ala Gly Gly Val Asp Ala Pro
305 310 315 320
Asn Gly Met Lys Lys Arg Leu Phe Glu Ile Phe Asp Gly Trp Cys Asp
325 330 335
Asn Val Leu Asp Leu Leu His Ala Thr Glu Glu Asp Ala Ile Leu Arg
340 345 350
Arg Asp Ile Tyr Asp Arg Ser Pro Ser Phe Thr Trp Gly Lys Gly Arg
355 360 365
Val Thr Leu Leu Gly Asp Ser Ile His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly
370 375 380
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385 390 395 400
Leu Glu Glu Ala Trp Lys Gln Ser Val Gly Thr Asn Thr Pro Val Asp
405 410 415
Val Val Ser Ser Leu Lys Arg Tyr Glu Glu Ser Arg Arg Leu Arg Val
420 425 430
Ala Ile Ile His Gly Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr
435 440 445
Tyr Lys Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr
450 455 460
Lys Phe Arg Val Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Val
465 470 475 480
Asp Ile Ala Met Pro Leu Met Leu Asp Trp Val Leu Gly Gly Asn Ser
485 490 495
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500 505 510
Asp Asp Arg Leu Arg Glu Trp Phe Glu Asp Asp Asp Ala Leu Glu Arg
515 520 525
Thr Ile Lys Gly Glu Trp Tyr Leu Ile Pro His Gly Glu Asp Cys Cys
530 535 540
Val Ser Glu Thr Leu Cys Leu Thr Asn Asp Glu Asp Gln Pro Cys Ile
545 550 555 560
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565 570 575
Pro Ser Ser Gln Val Ser Lys Met His Ala Arg Val Ile Tyr Lys Asp
580 585 590
Gly Val Phe Phe Leu Met Asp Leu Arg Ser Glu His Gly Thr Tyr Val
595 600 605
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610 615 620
Arg Phe Arg Ser Ser Asp Ile Ile Glu Phe Gly Ser Asp Lys Lys Ala
625 630 635 640
Ala Phe Arg Val Lys Val Ile Arg Lys Thr Pro Lys Ser Thr Arg Lys
645 650 655
Asn Glu Ser Asn Asp Lys Leu Leu Gln Thr Ala
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<210> 37
<211> 662
<212> PRT
<213> Raphanus sativus
<400> 37
Met Gly Ser Ser Thr Leu Phe Cys Tyr Ser Ile Asn Pro Ser Pro Ser
1 5 10 15
Lys Leu Asp Phe Thr Lys Thr His Val Phe Ser Pro Val Ala Lys Gln
20 25 30
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35 40 45
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Lys Arg Glu Thr Val Thr Glu Lys Lys Lys Lys Pro Arg Val Leu Val
65 70 75 80
Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe Ala Leu Ala Ala Lys Lys
85 90 95
Lys Gly Phe Asp Val Leu Val Phe Glu Lys Asp Leu Ser Ala Ile Arg
100 105 110
Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln Ile Gln Ser Asn Ala Leu
115 120 125
Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Ile Gly Val Ala Glu Glu Val Met Glu
130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu Glu Ile Ile Arg Asn Glu Ser Asn
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Asn Gly Glu Arg Tyr Asp Gly Asp Leu Leu Val Gly Ala Asp Gly Ile
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Trp Ser Lys Val Arg Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Glu Ala Thr Tyr
245 250 255
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260 265 270
Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu Gly His Lys Gln Tyr Phe
275 280 285
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Ile Arg Thr Thr Pro Lys Leu Thr Arg Arg Asp Glu Lys Ser Asp Gly
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Lys Leu Leu Gln Ala Ala
660
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<211> 687
<212> PRT
<213> Brassica napus
<400> 38
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1 5 10 15
Glu Met Gly Ser Ser Thr Pro Phe Cys Tyr Ser Ile Asn Pro Ser Pro
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Ser Lys Leu Asp Phe Thr Arg Thr His Ala Phe Ser Pro Val Ala Lys
35 40 45
Gln Phe Tyr Leu Asp Leu Pro Ser Phe Ala Gly Lys Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Leu Ser Gly Leu Arg Lys Arg Arg Thr Leu Ile Gly Val Lys Ala Ala
65 70 75 80
Ala Ala Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu Lys Arg Glu Thr Val Thr Glu
85 90 95
Ser Lys Lys Lys Pro Arg Val Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly
100 105 110
Leu Val Phe Ala Leu Ala Ala Lys Lys Lys Gly Phe Asp Val Leu Val
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305 310 315 320
Gly Lys Met Gln Trp Tyr Ala Phe His Glu Glu Ala Ala Gly Gly Val
325 330 335
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340 345 350
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435 440 445
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660 665 670
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675 680 685
<210> 39
<211> 668
<212> PRT
<213> Brassica rapa
<400> 39
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Lys Leu Asp Phe Thr Lys Thr His Ala Phe Ser Pro Val Ala Lys Gln
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Phe Tyr Leu Asp Leu Pro Ser Phe Ala Gly Lys Ser Gly Gly Gly Leu
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Ser Gly Leu Arg Lys Arg Arg Ala Leu Val Gly Val Lys Ala Ala Thr
50 55 60
Leu Leu Ala Glu Glu Glu Lys Arg Glu Thr Val Thr Glu Ser Lys Lys
65 70 75 80
Lys Pro Arg Val Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe
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Ala Leu Ala Ala Lys Lys Lys Gly Phe Asp Val Leu Val Phe Glu Lys
100 105 110
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Ile Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Ile Gly Val
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275 280 285
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Asn Gly Met Lys Lys Arg Leu Phe Asp Ile Phe Glu Gly Trp Cys Asp
325 330 335
Asn Val Leu Asp Leu Leu Gln Ala Thr Glu Glu Glu Ala Ile Leu Arg
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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420 425 430
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435 440 445
Tyr Lys Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr
450 455 460
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
Thr Ile Asn Gly Glu Trp Tyr Leu Ile Pro His Gly Asn Glu Cys Ser
530 535 540
Val Ser Glu Thr Leu Arg Leu Thr Lys Asp Glu Glu Gln Pro Cys Ile
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Ala Phe Arg Val Lys Val Ile Arg Thr Thr Pro Lys Leu Thr Arg Arg
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Asp Glu Lys Ser Asp Gly Lys Leu Leu Gln Ala Ala
660 665
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<211> 668
<212> PRT
<213> Brassica rapa
<400> 40
Met Gly Cys Ser Thr Pro Phe Cys Tyr Ser Ile Asn Pro Ser Pro Ser
1 5 10 15
Lys Leu Asp Phe Thr Lys Thr His Ala Phe Ser Pro Val Ala Lys Gln
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Phe Tyr Leu Asp Leu Pro Ser Phe Ala Gly Lys Ser Gly Gly Gly Leu
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Leu Leu Ala Glu Glu Glu Lys Arg Glu Thr Val Thr Glu Ser Lys Lys
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Lys Pro Arg Val Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe
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Ala Leu Ala Ala Lys Lys Lys Gly Phe Asp Val Leu Val Phe Glu Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln
115 120 125
Ile Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Ile Gly Val
130 135 140
Ala Glu Glu Val Met Glu Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn
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Gly Leu Val Asp Gly Val Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr
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195 200 205
Ile Arg Asn Glu Ser Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Ser Gly Asp Lys
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Gln Trp Tyr Ala Phe His Glu Glu Ala Ala Gly Gly Val Asp Ala Pro
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Asn Val Leu Asp Leu Leu Gln Ala Thr Glu Glu Glu Ala Ile Leu Arg
340 345 350
Arg Asp Ile Tyr Asp Arg Ser Pro Ser Phe Thr Trp Gly Lys Gly Arg
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Val Thr Leu Leu Gly Asp Ser Ile His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly
370 375 380
Gln Gly Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Ser Phe Gln Leu Gly Leu Glu
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435 440 445
Tyr Lys Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr
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Lys Phe Arg Val Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Ile
465 470 475 480
Asp Ile Ala Met Pro Leu Met Leu Asn Trp Val Leu Gly Ser Asn Ser
485 490 495
Glu Lys Leu Glu Gly Arg Pro Pro Ser Cys Arg Leu Thr Asp Lys Ala
500 505 510
Asp Asp Arg Leu Arg Glu Trp Phe Glu Asp Asp Glu Ala Leu Glu Arg
515 520 525
Thr Ile Asn Gly Glu Trp Tyr Leu Ile Pro His Gly Asn Glu Cys Ser
530 535 540
Val Ser Glu Thr Leu Arg Leu Thr Lys Asp Glu Glu Gln Pro Cys Ile
545 550 555 560
Val Gly Ser Glu Pro Asp Gln Asp Phe Pro Gly Thr His Ile Val Ile
565 570 575
Pro Ser Pro Gln Val Ser Lys Met His Ala Arg Val Ile Tyr Lys Asp
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Gly Ala Phe Phe Val Met Asp Leu Arg Ser Glu His Gly Thr Tyr Leu
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Arg Phe Arg Pro Ser Asp Ile Ile Glu Phe Gly Ser Asp Lys Lys Ala
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Ala Phe Arg Val Lys Val Ile Arg Thr Thr Pro Lys Leu Thr Arg Arg
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Asp Glu Lys Ser Asp Gly Lys Leu Leu Gln Ala Ala
660 665
<210> 41
<211> 667
<212> PRT
<213> Noccaea caerulescens
<400> 41
Met Gly Ser Thr Pro Phe Cys Tyr Ser Thr Asn Pro Ser Pro Ser Lys
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Leu Asp Phe Thr Arg Thr His Ala Phe Ser Pro Leu Ala Lys Gln Phe
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Tyr Leu Asp Leu Ser Ser Leu Ala Gly Lys Ser Gly Gly Gly Leu Ser
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Gly Phe Arg Ser Pro Arg Thr Leu Val Gly Val Lys Ala Ala Ala Ala
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Thr Ala Leu Val Glu Glu Glu Lys Arg Glu Val Val Ala Glu Lys Lys
65 70 75 80
Lys Ser Arg Val Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe
85 90 95
Ala Leu Ala Ala Lys Lys Lys Gly Phe Asp Val Leu Val Phe Glu Lys
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Asp Leu Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln
115 120 125
Ile Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Thr Asp Val
130 135 140
Ala Glu Glu Val Met Glu Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn
145 150 155 160
Gly Leu Val Asp Gly Val Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr
165 170 175
Phe Thr Pro Ala Ala Ser Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile Ser
180 185 190
Arg Met Thr Leu Gln Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu Glu Ile
195 200 205
Ile Arg Asn Glu Ser Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Ser Gly Asp Lys
210 215 220
Val Thr Val Val Leu Glu Asn Gly Glu Arg Tyr Glu Gly Asp Leu Leu
225 230 235 240
Val Gly Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Asn Asn Leu Phe Gly
245 250 255
Arg Ser Glu Ala Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala
260 265 270
Asp Phe Val Pro Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu
275 280 285
Gly His Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Gly Gly Lys Met
290 295 300
Gln Trp Tyr Ala Phe His Glu Glu Pro Ala Gly Gly Val Asp Pro Pro
305 310 315 320
Asn Gly Met Lys Lys Arg Leu Phe Asp Ile Phe Glu Gly Trp Cys Asp
325 330 335
Asn Val Leu Asp Leu Leu His Ala Thr Glu Glu Asp Ala Ile Leu Arg
340 345 350
Arg Asp Ile Tyr Asp Arg Thr Pro Ser Phe Thr Trp Gly Lys Gly Arg
355 360 365
Val Thr Leu Leu Gly Asp Ser Ile His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly
370 375 380
Gln Gly Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Ser Tyr Gln Leu Ala Met Glu
385 390 395 400
Leu Glu Gly Ala Trp Lys Gln Ser Val Glu Thr Asn Thr Pro Val Asp
405 410 415
Val Val Ser Ser Leu Lys Lys Tyr Glu Glu Ser Arg Arg Leu Arg Val
420 425 430
Ala Ile Ile His Gly Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr
435 440 445
Tyr Lys Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr
450 455 460
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Glu Lys Leu Glu Gly Arg Ser Pro Ser Cys Arg Leu Thr Asp Lys Ala
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Ile Gly Ser Glu Pro Asp Gln Asp Leu Pro Gly Met His Ile Val Ile
565 570 575
Pro Ser Ser Gln Val Ser Lys Met His Ala Arg Val Thr Tyr Lys Asp
580 585 590
Gly Ala Phe Phe Leu Met Asp Leu Gly Ser Glu His Gly Thr Tyr Val
595 600 605
Val Asp Asn Glu Gly Arg Arg Tyr Arg Ala Ser Pro Asn Tyr Pro Ala
610 615 620
Arg Phe Arg Ser Ser Asp Ile Ile Glu Phe Gly Ser Asp Lys Lys Ala
625 630 635 640
Ala Phe Arg Val Lys Val Ile Arg Thr Thr Pro Lys Ser Thr Ser Lys
645 650 655
Asn Glu Ser Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ala Ala
660 665
<210> 42
<211> 666
<212> PRT
<213> Eutrema salsugineum
<400> 42
Met Gly Ser Thr Pro Phe Cys Tyr Ser Ile Asn Pro Ser Pro Ser Lys
1 5 10 15
Leu Asp Phe Thr Arg Thr His Val Phe Ser Pro Val Ala Lys Gln Phe
20 25 30
Tyr Leu Asp Leu Ser Ser Cys Ala Gly Lys Ser Gly Gly Gly Leu Ser
35 40 45
Gly Phe Arg Ser Arg Arg Ala Leu Val Gly Val Arg Ala Ala Thr Ala
50 55 60
Leu Val Glu Glu Glu Lys Arg Glu Ile Ala Lys Glu Lys Lys Lys Pro
65 70 75 80
Arg Val Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe Ala Leu
85 90 95
Ala Ala Lys Lys Lys Gly Phe Asp Val Leu Val Phe Glu Lys Asp Leu
100 105 110
Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln Ile Gln
115 120 125
Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Ile Asp Val Ala Glu
130 135 140
Glu Val Met Glu Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn Gly Leu
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr Phe Thr
165 170 175
Pro Ala Ala Ser Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile Ser Arg Met
180 185 190
Thr Leu Gln Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu Glu Val Ile Arg
195 200 205
Asn Glu Ser Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Ser Gly Asp Lys Val Thr
210 215 220
Val Val Leu Glu Asn Gly Glu Arg Tyr Glu Gly Asp Leu Leu Val Gly
225 230 235 240
Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser
245 250 255
Glu Ala Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala Asp Phe
260 265 270
Val Pro Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu Gly His
275 280 285
Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Gly Gly Lys Met Gln Trp
290 295 300
Tyr Ala Phe His Glu Glu Pro Ala Gly Gly Val Asp Ala Pro Asn Gly
305 310 315 320
Met Lys Lys Arg Leu Phe Asp Ile Phe Glu Gly Trp Cys Asp Asn Val
325 330 335
Leu Asp Leu Leu His Ala Thr Glu Glu Glu Ala Ile Leu Arg Arg Asp
340 345 350
Ile Tyr Asp Arg Thr Pro Ser Phe Asn Trp Gly Lys Gly Arg Val Thr
355 360 365
Leu Leu Gly Asp Ser Ile His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly Gln Gly
370 375 380
Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Ser Tyr Gln Leu Ala Leu Glu Leu Glu
385 390 395 400
Glu Ala Trp Glu Arg Ser Val Glu Thr Asn Ala Pro Val Asp Val Val
405 410 415
Ser Ser Leu Arg Arg Tyr Glu Glu Ser Arg Arg Leu Arg Val Ala Ile
420 425 430
Ile His Gly Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr Tyr Lys
435 440 445
Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr Lys Phe
450 455 460
Arg Val Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Ile Asp Ile
465 470 475 480
Ala Met Pro Leu Met Leu Asn Trp Val Leu Gly Gly Asn Ser Glu Lys
485 490 495
Leu Glu Gly Arg Pro Pro Ser Cys Arg Leu Thr Asp Lys Ala Asp Asp
500 505 510
Arg Leu Arg Glu Trp Phe Glu Asp Asp Asp Ala Leu Glu Arg Thr Ile
515 520 525
Asn Gly Glu Trp Tyr Leu Ile Pro Tyr Gly Asn Glu Cys Ser Val Ser
530 535 540
Glu Thr Leu Cys Leu Thr Lys Asp Glu Asp Gln Pro Cys Ile Ile Gly
545 550 555 560
Ser Glu Pro Asp Gln Asp Phe Pro Gly Met His Ile Val Ile Pro Ala
565 570 575
Pro Gln Val Ser Lys Met His Ala Arg Val Thr Tyr Lys Asp Gly Ala
580 585 590
Phe Phe Leu Met Asp Leu Arg Ser Glu His Gly Thr Tyr Val Thr Asp
595 600 605
Asn Glu Gly Arg Arg Tyr Arg Val Thr Pro Asn Phe Pro Ala Arg Phe
610 615 620
Arg Ser Ser Asp Ile Ile Glu Phe Gly Ser Asp Lys Lys Ala Ala Phe
625 630 635 640
Arg Val Lys Val Ile Arg Thr Thr Pro Lys Ser Thr Ser Lys Asn Lys
645 650 655
Glu Ser Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ala Val
660 665
<210> 43
<211> 666
<212> PRT
<213> Eutrema halophilum
<220>
<221> VARIANT
<222> 492
<223> Xaa = Any Amino Acid
<400> 43
Met Gly Ser Thr Pro Phe Cys Tyr Ser Ile Asn Pro Ser Pro Ser Lys
1 5 10 15
Leu Asp Phe Thr Arg Thr His Val Phe Ser Pro Val Ala Lys Gln Phe
20 25 30
Tyr Leu Asp Leu Ser Ser Cys Ala Gly Lys Ser Gly Gly Gly Leu Ser
35 40 45
Gly Phe Arg Ser Arg Arg Ala Leu Val Gly Val Arg Ala Ala Thr Ala
50 55 60
Leu Val Glu Glu Glu Lys Arg Glu Ile Ala Lys Glu Lys Lys Lys Pro
65 70 75 80
Arg Val Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe Ala Leu
85 90 95
Ala Ala Lys Lys Lys Gly Phe Asp Val Leu Val Phe Glu Lys Asp Leu
100 105 110
Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln Ile Gln
115 120 125
Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Ile Asp Val Ala Glu
130 135 140
Glu Val Met Glu Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn Gly Leu
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr Phe Thr
165 170 175
Pro Ala Ala Ser Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile Ser Arg Met
180 185 190
Thr Leu Gln Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu Glu Val Ile Arg
195 200 205
Asn Glu Ser Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Ser Gly Asp Lys Val Thr
210 215 220
Val Val Leu Glu Asn Gly Glu Arg Tyr Glu Gly Asp Leu Leu Val Gly
225 230 235 240
Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Asn Asn Leu Phe Gly Arg Ser
245 250 255
Glu Ala Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala Asp Phe
260 265 270
Val Pro Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu Gly His
275 280 285
Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Gly Gly Lys Met Gln Trp
290 295 300
Tyr Ala Phe His Glu Glu Pro Ala Gly Gly Val Asp Ala Pro Asn Gly
305 310 315 320
Met Lys Lys Arg Leu Phe Asp Ile Phe Glu Gly Trp Cys Asp Asn Val
325 330 335
Leu Asp Leu Leu His Ala Thr Glu Glu Glu Ala Ile Leu Arg Arg Asp
340 345 350
Ile Tyr Asp Arg Thr Pro Ser Phe Asn Trp Gly Lys Gly Arg Val Thr
355 360 365
Leu Leu Gly Asp Ser Ile His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly Gln Gly
370 375 380
Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Ser Tyr Gln Leu Ala Leu Glu Leu Glu
385 390 395 400
Glu Ala Trp Glu Arg Ser Val Glu Thr Asn Ala Pro Val Asp Val Val
405 410 415
Ser Ser Leu Arg Arg Tyr Glu Glu Ser Arg Arg Leu Arg Val Ala Ile
420 425 430
Ile His Gly Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr Tyr Lys
435 440 445
Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr Lys Phe
450 455 460
Arg Val Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Ile Asp Ile
465 470 475 480
Ala Met Pro Leu Met Leu Asn Trp Val Leu Gly Xaa Asn Ser Glu Lys
485 490 495
Leu Glu Gly Arg Pro Pro Ser Cys Arg Leu Thr Asp Lys Ala Asp Asp
500 505 510
Arg Leu Arg Glu Trp Phe Glu Asp Asp Asp Ala Leu Glu Arg Thr Ile
515 520 525
Asn Gly Glu Trp Tyr Leu Ile Pro Tyr Gly Asn Glu Cys Ser Val Ser
530 535 540
Glu Thr Leu Cys Leu Thr Lys Asp Glu Asp Gln Pro Cys Ile Ile Gly
545 550 555 560
Ser Glu Pro Asp Gln Asp Phe Pro Gly Met His Ile Val Ile Pro Ala
565 570 575
Pro Gln Val Ser Lys Met His Ala Arg Val Thr Tyr Lys Asp Gly Ala
580 585 590
Phe Phe Leu Met Asp Leu Arg Ser Glu His Gly Thr Tyr Val Thr Asp
595 600 605
Asn Glu Gly Arg Arg Tyr Arg Val Thr Pro Asn Phe Pro Ala Arg Phe
610 615 620
Arg Ser Ser Asp Ile Ile Glu Phe Gly Ser Asp Lys Lys Ala Ala Phe
625 630 635 640
Arg Val Lys Val Ile Arg Thr Thr Pro Lys Ser Thr Ser Lys Asn Lys
645 650 655
Glu Ser Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ala Val
660 665
<210> 44
<211> 665
<212> PRT
<213> Cucumis sativus
<400> 44
Met Ala Leu Thr Arg Phe His Asn Pro Phe Asn Leu Ser Ser Ser Ser
1 5 10 15
Leu Ser Arg Thr Cys Phe Pro Val Pro Ala Phe Arg Glu Tyr Leu Val
20 25 30
Glu Ile Ser Pro Cys Gln Arg Ile Gly Cys Asn Phe Gly Gly Lys Ser
35 40 45
Ala Cys Gly Arg Arg Lys Lys Leu Thr Gln Val Lys Ala Ala Val Thr
50 55 60
Glu Ala Pro Pro Ala Glu Gly Ala Ala Gly Glu Ile Ser Arg Ser Leu
65 70 75 80
Pro Thr Lys Asn Val Arg Ile Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly
85 90 95
Leu Val Phe Ala Leu Ala Ala Lys Arg Lys Gly Phe Asp Val Val Val
100 105 110
Phe Glu Lys Asp Ile Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly
115 120 125
Pro Ile Gln Ile Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp
130 135 140
Leu Asp Val Ala Glu Glu Val Met Arg Val Gly Cys Ile Thr Gly Asp
145 150 155 160
Arg Ile Asn Gly Leu Val Asp Gly Val Ser Gly Asn Trp Tyr Ile Lys
165 170 175
Phe Asp Thr Phe Thr Pro Ala Ala Glu Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg
180 185 190
Val Ile Ser Arg Met Ser Leu Gln Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly
195 200 205
Asp Asp Val Ile Ile Asn Asp Ser Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Ser
210 215 220
Gly Glu Lys Val Lys Val Thr Leu Glu Asn Gly Gln Gln His Glu Gly
225 230 235 240
Asp Leu Leu Val Gly Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Lys Asn
245 250 255
Leu Phe Gly His Ser Glu Ala Val Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr
260 265 270
Gly Ile Ala Asp Phe Ile Pro Ala Asp Ile Glu Thr Val Gly Tyr Arg
275 280 285
Val Phe Leu Gly His Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Ala
290 295 300
Gly Lys Met Gln Trp Tyr Ala Phe His Lys Glu Pro Pro Gly Gly Ala
305 310 315 320
Asp Ala Pro Asn Gly Lys Lys Glu Arg Leu Phe Lys Ile Phe Glu Gly
325 330 335
Trp Cys Asp Asn Val Thr Asp Leu Ile Gln Ala Thr Asp Glu Asp Ser
340 345 350
Val Leu Arg Arg Asp Ile Tyr Asp Arg Thr Pro Ile Phe Thr Trp Gly
355 360 365
Lys Gly Arg Val Thr Leu Leu Gly Asp Ser Val His Ala Met Gln Pro
370 375 380
Asn Met Gly Gln Gly Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Gly Tyr Gln Leu
385 390 395 400
Ala Leu Glu Leu Asp Lys Ala Trp Asn Glu Ser Val Ala Ser Gly Ser
405 410 415
Pro Ile Asp Ile Val Ser Ser Leu Lys Ser Tyr Glu Ser Ser Arg Arg
420 425 430
Ile Arg Val Ala Val Ile His Gly Met Ala Arg Met Ala Ala Leu Met
435 440 445
Ala Ser Thr Tyr Lys Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser
450 455 460
Phe Leu Thr Gln Phe Arg Ile Pro His Pro Gly Thr Phe Gly Gly Arg
465 470 475 480
Phe Phe Ile Asp Leu Ala Met Pro Leu Met Leu Asn Trp Val Leu Gly
485 490 495
Gly Asn Ser Ser Lys Leu Glu Gly Arg Pro Pro Ala Cys Arg Leu Ser
500 505 510
Asp Lys Ala Asn Asp Gln Leu Arg Lys Trp Phe Glu Asp Asp Asp Ala
515 520 525
Leu Glu Arg Ala Ile Asn Gly Asp Trp Phe Leu Leu Pro Gln Gly Gly
530 535 540
Glu Ala Ser Val Ser Gln Pro Ile Cys Leu Arg Lys Asp Glu Asn Gln
545 550 555 560
Pro Cys Leu Ile Gly Ser Val Glu Lys Glu Val Asp Ser Gly Leu Ser
565 570 575
Val Ala Ile Pro Leu Pro Gln Val Ser Glu Lys His Ala Arg Ile Tyr
580 585 590
Tyr Lys Asp Gly Ala Phe Phe Leu Thr Asp Leu Arg Ser Glu His Gly
595 600 605
Thr Trp Leu Ser Asp His Glu Gly Arg Arg Tyr Arg Ala Pro Pro Asn
610 615 620
Phe Pro Val Arg Phe His Gln Ser Asp Leu Ile Glu Phe Gly Ser Asp
625 630 635 640
Lys Lys Ala Arg Phe Arg Val Lys Val Ile Arg Ser Ser Val Glu Asn
645 650 655
Asp Arg Glu Lys Val Glu Met Asn Ser
660 665
<210> 45
<211> 658
<212> PRT
<213> Vitis vinifera
<400> 45
Met Ala Ser Ala Val Phe Tyr Ser Ser Val Gln Pro Ser Ile Phe Ser
1 5 10 15
Arg Thr His Ile Pro Ile Pro Ile Ser Lys Asp Ser Phe Glu Glu Phe
20 25 30
Gly His Ser Ile Asn Tyr Lys His Tyr Phe Arg Ser Asn Pro Cys Gly
35 40 45
Gln Lys Lys Arg Val Ala Gln Val Lys Ala Thr Leu Ala Glu Ala Thr
50 55 60
Pro Ala Pro Pro Ala Pro Ser Leu Pro Ser Lys Lys Val Arg Ile Leu
65 70 75 80
Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Leu Ala Leu Ala Ala Lys
85 90 95
Lys Lys Gly Phe Asp Val Val Val Phe Glu Lys Asp Met Ser Ala Ile
100 105 110
Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln Ile Gln Ser Asn Ala
115 120 125
Leu Ala Ala Leu Glu Ala Val Asp Met Glu Val Ala Glu Glu Val Met
130 135 140
Arg Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn Gly Leu Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Ser Gly Asp Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr Phe Thr Pro Ala Ala
165 170 175
Glu Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile Ser Arg Met Thr Leu Gln
180 185 190
Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu Asp Ile Ile Met Asn Gly Ser
195 200 205
Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Asp Gly Asn Lys Val Thr Val Ile Leu
210 215 220
Glu Asn Gly Gln Arg Tyr Glu Gly Asp Leu Leu Ile Gly Ala Asp Gly
225 230 235 240
Ile Trp Ser Lys Val Arg Lys Ser Leu Phe Gly Pro Lys Glu Ala Thr
245 250 255
Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala Asp Phe Val Pro Ala
260 265 270
Asp Ile Asp Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu Gly His Lys Gln Tyr
275 280 285
Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Ala Gly Lys Met Gln Trp Tyr Ala Phe
290 295 300
Tyr Asn Glu Pro Ala Gly Gly Val Asp Gly Pro Glu Gly Lys Lys Glu
305 310 315 320
Arg Leu Leu Lys Ile Phe Gly Gly Trp Cys Asp Asn Val Ile Asp Leu
325 330 335
Ile Leu Ala Thr Asp Glu Glu Ala Ile Leu Arg Arg Asp Ile Tyr Asp
340 345 350
Arg Thr Pro Thr Phe Thr Trp Gly Arg Gly Arg Val Thr Leu Leu Gly
355 360 365
Asp Ser Val His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly Gln Gly Gly Cys Met
370 375 380
Ala Ile Glu Asp Ser Tyr Gln Leu Ala Met Glu Leu Asp Lys Ala Trp
385 390 395 400
Glu Gln Ser Ile Lys Ser Gly Thr Pro Ile Asp Val Val Ser Cys Leu
405 410 415
Lys Ser Tyr Glu Lys Ala Arg Arg Ile Arg Val Ala Val Ile His Gly
420 425 430
Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr Tyr Lys Ala Tyr Leu
435 440 445
Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr Lys Leu Arg Ile Pro
450 455 460
His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Ile Asp Ile Ala Met Pro
465 470 475 480
Leu Met Leu Ser Trp Val Leu Gly Gly Asn Ser Ser Lys Leu Glu Gly
485 490 495
Arg Pro Pro Ser Cys Arg Leu Ser Asp Lys Ala Asn Asp Gln Leu Arg
500 505 510
Arg Trp Phe Glu Asp Asp Asp Ala Leu Glu Arg Ala Ile Gly Gly Glu
515 520 525
Trp Phe Leu Leu Pro Ser Gly Glu Ser Gly Leu Gln Pro Ile Cys Leu
530 535 540
Ser Lys Asp Glu Asn Lys Pro Cys Ile Ile Gly Ser Val Ser His Thr
545 550 555 560
Asp Phe Pro Gly Ile Ser Thr Val Ile Pro Ser Pro Lys Val Ser Lys
565 570 575
Met His Ala Arg Ile Ser Cys Lys Asp Gly Ala Phe Phe Leu Thr Asp
580 585 590
Leu Gln Ser Glu His Gly Thr Trp Ile Thr Asp Asn Val Gly Arg Arg
595 600 605
Gln Arg Val Ser Pro Asn Phe Pro Thr Arg Phe His Pro Ser Glu Val
610 615 620
Ile Asp Phe Gly Ser Glu Lys Ala Ser Phe Arg Val Lys Val Val Arg
625 630 635 640
Thr Pro Pro Asp Asn Ala Ala Lys Asn Glu Glu Ser Lys Leu Phe Gln
645 650 655
Ala Val
<210> 46
<211> 664
<212> PRT
<213> Corchorus olitorius
<400> 46
Met Ala Thr Thr Leu Phe Gln Asn Pro Ser Thr Phe Phe Thr Gly Thr
1 5 10 15
Gln Phe Pro Val Ser Ile Pro Lys Tyr Val Pro Thr Glu Ser Ser Ala
20 25 30
Cys Leu His Cys Asn Tyr His Phe Arg Gly Lys Ala Ser Lys Gln Lys
35 40 45
Lys Arg Phe Leu Gln Val Lys Ala Thr Val Ala Gly Thr Gln Ser Asp
50 55 60
Ser Lys Ser Asp Glu Lys Asn Lys Val Asp Ala Asn Gln Gln Glu Lys
65 70 75 80
Lys Lys Ala Arg Ile Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val
85 90 95
Phe Ala Leu Ala Ala Lys Asn Lys Gly Phe Asp Val Val Val Phe Glu
100 105 110
Lys Asp Leu Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile
115 120 125
Gln Ile Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Met Glu
130 135 140
Val Ala Glu Lys Val Met Glu Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile
145 150 155 160
Asn Gly Leu Val Asp Gly Val Ser Gly Ser Trp Tyr Ile Lys Phe Asp
165 170 175
Thr Phe Thr Pro Ala Ala Glu Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile
180 185 190
Ser Arg Met Thr Leu Gln Gln Ile Leu Ala Arg Ala Val Gly Glu Asp
195 200 205
Ile Ile Phe Asn Glu Ser Asn Val Val Asp Phe Glu Asp Asp Gly Asn
210 215 220
Lys Val Ser Val Val Leu Glu Asn Gly Lys Arg Phe Glu Gly Asp Leu
225 230 235 240
Leu Val Gly Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Lys Asn Leu Phe
245 250 255
Gly Pro Lys Asp Ala Val Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile
260 265 270
Ala Asp Phe Val Pro Ala Asp Ile Asp Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe
275 280 285
Leu Gly His Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Gly Gly Lys
290 295 300
Met Gln Trp Tyr Ala Phe His Lys Glu Pro Ala Gly Gly Val Asp Thr
305 310 315 320
Gln Gly Lys Lys Glu Arg Leu Leu Lys Ile Phe Glu Gly Trp Cys Asp
325 330 335
Asn Val Ile Asp Leu Leu Leu Ala Thr Asp Glu Glu Ala Ile Leu Arg
340 345 350
Arg Asp Ile Tyr Asp Arg Thr Pro Ser Leu Thr Trp Gly Lys Gly Arg
355 360 365
Val Thr Leu Leu Gly Asp Ser Ile His Ala Met Gln Pro Asn Leu Gly
370 375 380
Gln Gly Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Gly Tyr Gln Leu Ala Leu Glu
385 390 395 400
Leu Asp Lys Ala Trp Lys Gln Ser Val Glu Ser Gly Thr Pro Ile Asp
405 410 415
Val Val Ser Ser Leu Arg Ser Tyr Glu Ser Ala Arg Arg Leu Arg Val
420 425 430
Ala Ile Ile His Gly Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr
435 440 445
Tyr Lys Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr
450 455 460
Lys Tyr Arg Ile Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Ile
465 470 475 480
Asp Ile Ala Met Pro Leu Met Leu Ser Trp Val Leu Gly Gly Asn Ser
485 490 495
Ser Lys Leu Glu Gly Arg Ser Leu Thr Cys Arg Leu Ser Asp Lys Ala
500 505 510
Ser Asp Gln Leu Arg Glu Trp Phe Glu Asp Asn Asp Ala Leu Glu Arg
515 520 525
Ala Ile Ser Gly Glu Trp Phe Leu Phe Pro Ala Gly Asp Gly Val Ser
530 535 540
Ser Gln Pro Ile Cys Leu Ser Arg Asp Glu Asn Asn Pro Phe Met Ile
545 550 555 560
Gly Ser Glu Lys Lys Glu Asp Phe Pro Gly Thr Ser Val Val Ile Pro
565 570 575
Ser Ser Gln Val Ser Lys Thr His Ala Gln Ile Thr Tyr Lys Asp Gly
580 585 590
Ala Phe Phe Val Thr Asp Leu Gln Ser Glu His Gly Thr Tyr Ile Ile
595 600 605
Asn Gln Glu Gly Lys Lys Ser Arg Val Thr Pro Asn Val Pro Thr Arg
610 615 620
Ile Arg Pro Ser Asp Val Ile Glu Phe Gly Ser Asp Lys Lys Ala Ala
625 630 635 640
Phe Arg Val Lys Ala Ile Lys Ser Ala Pro Lys Ile Ala Glu Lys Glu
645 650 655
Gly Ser Gly Val Leu Gln Ala Ala
660
<210> 47
<211> 661
<212> PRT
<213> Populus euphratica
<400> 47
Met Ala Ser Ser Thr Leu Phe Gly Asn Thr Leu Thr Ala Val Ser Ser
1 5 10 15
Arg Thr His Phe Pro Thr Pro Ile Phe Asn Asn Ser Leu Glu Leu Leu
20 25 30
Ser Ser Thr His Ser Asn Tyr Asn Phe Lys Thr Lys Thr Ser Thr Ser
35 40 45
Ala Lys Lys Leu Lys Val Glu Ala Val Val Thr Glu Thr Pro Ala Val
50 55 60
Ser Lys Ser Glu Gly Lys Gln Ser Glu Gln Arg Lys Leu Lys Val Leu
65 70 75 80
Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe Ala Leu Ala Ala Lys
85 90 95
Asn Lys Gly Phe Asp Val Met Val Phe Glu Lys Asp Leu Ser Ala Val
100 105 110
Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln Ile Gln Ser Asn Ala
115 120 125
Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Leu Asp Val Ala Glu Glu Val Met
130 135 140
Arg Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn Gly Leu Val Asp Gly
145 150 155 160
Ile Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr Phe Thr Pro Ala Ala
165 170 175
Glu Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile Ser Arg Met Thr Leu Gln
180 185 190
Gln Ile Leu Ala Arg Ser Val Gly Asp Asp Thr Ile Leu Asn Asp Ser
195 200 205
Asn Val Val Ser Phe Gln Asp Asp Gly Asp Lys Val Thr Val Val Leu
210 215 220
Glu Asn Gly Gln Gln Tyr Glu Gly Asp Leu Leu Val Gly Ala Asp Gly
225 230 235 240
Ile Trp Ser Lys Val Arg Lys Asn Leu Phe Gly Pro Lys Glu Ala Val
245 250 255
Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala Asp Phe Val Pro Val
260 265 270
Asp Ile Glu Thr Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu Gly His Lys Gln Tyr
275 280 285
Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Ala Gly Lys Met Gln Trp Tyr Ala Phe
290 295 300
His Lys Glu Ser Pro Gly Gly Met Asp Ala Pro His Gly Lys Lys Asp
305 310 315 320
Arg Leu Leu Lys Ile Phe Glu Gly Trp Cys Asp Asn Val Ile Asp Leu
325 330 335
Leu Leu Thr Thr Asp Glu Asp Ser Ile Leu Arg Arg Asp Ile Tyr Asp
340 345 350
Arg Glu Pro Ile Ile Thr Trp Gly Lys Gly Arg Val Thr Leu Leu Gly
355 360 365
Asp Ser Val His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly Gln Gly Gly Cys Met
370 375 380
Ala Ile Glu Asp Ser Tyr Gln Leu Ala Ser Glu Leu Glu Arg Ala Trp
385 390 395 400
Lys Gln Ser Ile Glu Ser Gly Thr Pro Val Asp Val Leu Ser Ser Leu
405 410 415
Arg Ser Tyr Glu Asn Ala Arg Arg Leu Arg Val Ala Ile Ile His Gly
420 425 430
Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr Tyr Lys Ala Tyr Leu
435 440 445
Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr Asn Phe Arg Ile Pro
450 455 460
His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Ile Asp Ile Ala Met Pro
465 470 475 480
Val Met Leu Asp Trp Val Leu Gly Gly Asn Ser Ser Lys Leu Glu Gly
485 490 495
Arg Ser Leu Ser Cys Arg Leu Ser Asp Lys Ala Ser Asp Gln Leu Arg
500 505 510
Arg Trp Phe Val Asp Asp Asp Ala Leu Glu Arg Ser Leu Asn Gly Glu
515 520 525
Trp Phe Leu Leu Pro Cys Gly Asn Asp Ala Val Ala Ser Gln Pro Ile
530 535 540
Gly Leu Ser Arg Asp Glu Asn Lys Pro Cys Val Val Gly Ser Val Ser
545 550 555 560
Gln Glu Asp Phe Pro Gly Met Ser Ile Val Ile Pro Ala Pro Gln Val
565 570 575
Ser Lys Thr His Ala Arg Ile Thr Cys Lys Asp Gly Ala Phe Tyr Leu
580 585 590
Ile Asp Leu Arg Ser Glu His Gly Thr Phe Ile Thr Asp Ile Glu Gly
595 600 605
Arg Arg Tyr Arg Ala Pro Pro Asn Phe Pro Thr Arg Phe His Pro Ser
610 615 620
Asp Met Ile Glu Phe Gly Ser Asp Lys Lys Val Ile Phe Arg Val Lys
625 630 635 640
Val Met Arg Ser Pro Pro Lys Ile Ser Glu Lys Lys Asp Glu Gly Gln
645 650 655
Val Leu Gln Ser Val
660
<210> 48
<211> 665
<212> PRT
<213> Ricinus communis
<400> 48
Met Ala Ser Ser Ala Phe Phe Cys Asn Ser Ile Asn Pro Ser Thr Ser
1 5 10 15
Val Phe Ser Arg Thr His Phe Ser Phe Pro Ile Phe Ser Thr Ser Thr
20 25 30
Val Glu Phe Ser Ser Phe Ala Gln Tyr Asn Phe His Phe Lys Thr Lys
35 40 45
Lys Ser Asp His Gln Asn Lys Arg Phe Thr Gln Val Lys Ala Val Val
50 55 60
Thr Glu Ser Pro Thr Val Ala Glu Ser Asn Gly Lys Leu Ser Glu Gln
65 70 75 80
Lys Lys Leu Arg Ile Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val
85 90 95
Phe Ala Leu Ala Ala Lys Arg Lys Gly Phe Glu Val Leu Val Phe Glu
100 105 110
Lys Asp Leu Ser Ala Ile Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile
115 120 125
Gln Val Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Leu Glu
130 135 140
Val Ala Glu Glu Val Met Arg Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile
145 150 155 160
Asn Gly Leu Val Asp Gly Val Ser Gly Thr Trp Tyr Cys Lys Phe Asp
165 170 175
Thr Phe Thr Pro Ala Ala Glu Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile
180 185 190
Ser Arg Met Thr Leu Gln Gln Ile Leu Ala Cys Ala Val Gly Glu Asp
195 200 205
Val Ile Met Asn Ala Ser Asn Val Ile Asn Phe Gln Asp Asn Glu Asp
210 215 220
Lys Val Thr Val Thr Leu Glu Asn Gly Gln Gln Phe Glu Gly Asp Leu
225 230 235 240
Leu Val Gly Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Lys Asn Leu Phe
245 250 255
Gly Pro Lys Glu Ala Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile
260 265 270
Ala Asp Phe Val Pro Val Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe
275 280 285
Leu Gly His Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Ala Gly Lys
290 295 300
Met Gln Trp Tyr Ala Phe His Asn Glu Pro Pro Gly Gly Val Asp Ser
305 310 315 320
Pro Asn Gly Lys Lys Glu Arg Leu Leu Lys Ile Phe Glu Gly Trp Cys
325 330 335
Asp Asn Val Ile Asp Leu Leu His Ala Thr Asp Glu Asp Ala Ile Leu
340 345 350
Arg Arg Asp Ile Tyr Asp Arg Glu Pro Val Phe Thr Trp Gly Lys Gly
355 360 365
Arg Val Thr Leu Leu Gly Asp Ser Ile His Ala Met Gln Pro Asn Met
370 375 380
Gly Gln Gly Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Ser Tyr Gln Leu Ala Leu
385 390 395 400
Glu Leu Asp Lys Ala Trp Lys Gln Ser Ile Glu Ser Gly Thr Pro Val
405 410 415
Asp Val Val Ser Ser Leu Lys Ser Tyr Glu Arg Thr Arg Arg Leu Arg
420 425 430
Val Ala Ile Ile His Gly Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser
435 440 445
Thr Tyr Lys Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu
450 455 460
Thr Lys Tyr Arg Ile Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe
465 470 475 480
Ile Asp Ile Ala Met Pro Val Met Leu Asn Trp Val Leu Gly Gly Asn
485 490 495
Ser Ser Lys Leu Glu Gly Arg Pro Leu Ser Cys Arg Leu Ser Asp Lys
500 505 510
Ala Ser Asp Gln Leu Gln Thr Trp Phe Glu Asp Asp Asn Ala Leu Glu
515 520 525
Arg Ala Leu Asn Gly Glu Trp Phe Leu Leu Pro Phe Gly Asp Asp Ala
530 535 540
Val Gln Glu Pro Ile Cys Leu Ser Arg Asp Glu Asn Ile Pro Cys Met
545 550 555 560
Val Gly Ser Glu Ser Gln Glu Asp Phe Pro Gly Lys Ser Ile Val Ile
565 570 575
Ser Ser Pro Gln Val Ser Lys Met His Ala Arg Ile Ser Tyr Lys Asp
580 585 590
Gly Gly Phe Tyr Val Ile Asp Leu Gln Ser Glu His Gly Thr Phe Ile
595 600 605
Thr Asp Asn Asp Gly Arg Arg Ser Arg Val Pro Pro Asn Phe Pro Thr
610 615 620
Leu Phe His Pro Ser Glu Ala Ile Glu Phe Gly Ser Ala Gly Lys Ala
625 630 635 640
Lys Phe Arg Val Lys Val Met Lys Ser Pro Ala Lys Ile Lys Glu Lys
645 650 655
Gly Gly Asn Glu Ile Leu Gln Ser Val
660 665
<210> 49
<211> 665
<212> PRT
<213> Jatropha curcas
<400> 49
Met Ala Ser Ser Thr Leu Phe Cys Asn Leu Ile Asn Pro Ser Ile Ser
1 5 10 15
Val Phe Ser Arg Thr His Leu Pro Phe Pro Ile Val Ser Ser Ser Ser
20 25 30
Met Glu Leu Ser Ser Ser Ala His Cys Asn Phe His Phe Arg Ser Lys
35 40 45
Lys Ser Glu Gln Asn Lys Lys Leu Thr Gln Val Lys Ala Val Val Thr
50 55 60
Glu Ser Thr Ser Val Ala Gln Ser Asp Glu Lys Gln Pro Glu Gln Arg
65 70 75 80
Lys Pro Arg Ile Leu Val Ala Gly Gly Gly Ile Gly Gly Leu Val Phe
85 90 95
Ala Leu Ala Ala Lys Arg Lys Gly Phe Glu Val Leu Val Phe Glu Lys
100 105 110
Asp Leu Ser Ala Val Arg Gly Glu Gly Gln Tyr Arg Gly Pro Ile Gln
115 120 125
Ile Gln Ser Asn Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ile Asp Leu Glu Val
130 135 140
Ala Glu Glu Val Met Glu Ala Gly Cys Ile Thr Gly Asp Arg Ile Asn
145 150 155 160
Gly Leu Val Asp Gly Val Ser Gly Thr Trp Tyr Val Lys Phe Asp Thr
165 170 175
Phe Thr Pro Ala Ala Glu Arg Gly Leu Pro Val Thr Arg Val Ile Ser
180 185 190
Arg Met Thr Leu Gln Gln Ile Leu Ala Leu Ala Val Gly Glu Asp Val
195 200 205
Ile Arg Asn Glu Ser Asn Val Val Ser Phe Gln Asp Asp Gly Asp Lys
210 215 220
Val Thr Val Thr Leu Glu Asn Gly Gln His Phe Glu Gly Asp Leu Leu
225 230 235 240
Val Gly Ala Asp Gly Ile Trp Ser Lys Val Arg Lys Asn Leu Phe Gly
245 250 255
Pro Lys Asp Ala Thr Tyr Ser Asp Tyr Thr Cys Tyr Thr Gly Ile Ala
260 265 270
Asp Phe Val Pro Ala Asp Ile Glu Ser Val Gly Tyr Arg Val Phe Leu
275 280 285
Gly His Lys Gln Tyr Phe Val Ser Ser Asp Val Gly Ala Gly Lys Met
290 295 300
Gln Trp Tyr Ala Phe His Lys Glu Pro Pro Gly Gly Val Asp Arg Pro
305 310 315 320
Asn Gly Lys Lys Glu Arg Leu Leu Lys Ile Phe Glu Gly Trp Cys Asp
325 330 335
Asn Val Ile Asp Leu Leu Leu Ala Thr Asp Glu Asp Ala Ile Leu Arg
340 345 350
Arg Asp Ile Tyr Asp Arg Thr Pro Thr Leu Thr Trp Gly Arg Gly Arg
355 360 365
Val Thr Leu Leu Gly Asp Ser Val His Ala Met Gln Pro Asn Met Gly
370 375 380
Gln Gly Gly Cys Met Ala Ile Glu Asp Gly Tyr Gln Leu Ala Leu Glu
385 390 395 400
Ile Glu Lys Ala Trp Lys Gln Ser Ile Glu Ser Gly Thr Pro Ile Asp
405 410 415
Ile Val Ser Ser Leu Lys Ser Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Leu Arg Val
420 425 430
Ala Ile Ile His Gly Met Ala Arg Met Ala Ala Ile Met Ala Ser Thr
435 440 445
Tyr Lys Ala Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gly Pro Leu Ser Phe Leu Thr
450 455 460
Lys Tyr Arg Ile Pro His Pro Gly Arg Val Gly Gly Arg Phe Phe Ile
465 470 475 480
Asp Ile Ala Met Pro Val Met Leu Ser Trp Val Leu Gly Gly Asn Ser
485 490 495
Ser Lys Leu Glu Gly Arg Ser Gln Cys Cys Arg Leu Ser Asp Lys Ala
500 505 510
Ser Asp Gln Leu Arg Thr Trp Phe Glu Asp Asp Asp Ala Leu Glu Arg
515 520 525
Ala Leu Asn Ala Glu Trp Phe Leu Leu Pro Leu Gly Asn Lys Val Val
530 535 540
Val Ser Glu Pro Ile Cys Leu Ser Arg Asn Glu Asn Thr Pro Cys Val
545 550 555 560
Val Gly Lys Val Ser His Lys Asp Phe Pro Gly Met Ser Ile Val Ile
565 570 575
Pro Ser Pro Gln Val Ser Glu Met His Ala Arg Ile Ser Tyr Lys Asp
580 585 590
Gly Ala Phe Tyr Val Ile Asp Leu Gln Ser Glu His Gly Thr Tyr Ile
595 600 605
Ser Asp Ala Asp Gly Arg Arg Tyr Arg Val Pro Gln Asn Ser Pro Thr
610 615 620
Arg Phe His Pro Ser Asp Val Ile Glu Phe Gly Ser Asp Glu Lys Ala
625 630 635 640
Lys Phe Arg Val Lys Val Met Lys Ser Pro Ser Arg Ile Lys Glu Lys
645 650 655
Glu Gly Ser Glu Ile Leu Gln Ser Val
660 665
<210> 50
<211> 480
<212> PRT
<213> Eucalyptus grandis
<400> 50
Met Ala Ser Met Ala Ala Gly Ser Ile Cys Leu Phe Arg Asp Glu Ser
1 5 10 15
Ile Gly Ala Ala Ser Ile Ala Val Thr Ile Leu Ala Asn Arg Ser Ser
20 25 30
His Met Ala Lys Leu Leu Cys Tyr Arg Gly Lys Ala Arg Ala Thr Met
35 40 45
Trp Met Gly Ile Lys Thr Thr Arg Arg Leu Ala Met Lys Cys Ser Leu
50 55 60
Glu Ser His Cys Arg Ser Glu Ser Ser Cys Ser Gly Phe Pro Leu Pro
65 70 75 80
Arg Lys Glu Glu Val Thr Ser Ser Arg Gly Ser Arg Ser Gly Val Pro
85 90 95
Lys Val Thr Glu Ser Ala Arg Glu Ile Phe His Leu Val Arg Glu Trp
100 105 110
Ser Gln Arg Arg Val Ile Gln Leu Ala Ala Leu Ala Ala Cys Thr Phe
115 120 125
Leu Ile Ile Pro Ser Ala Asp Ala Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys Ala
130 135 140
Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Cys Val Ala Asn
145 150 155 160
Pro Ser Cys Ala Ala Asn Val Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg
165 170 175
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180 185 190
Ser Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys
195 200 205
Val Pro Arg Lys Ser Asp Val Gly Glu Phe Pro Val Pro Asp Pro Ala
210 215 220
Val Leu Val Lys Ser Phe Asn Met Ala Asp Phe Thr Gly Lys Trp Phe
225 230 235 240
Ile Ser Ser Gly Leu Asn Pro Thr Phe Asp Thr Phe Asp Cys Gln Leu
245 250 255
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260 265 270
Arg Ile Arg Thr Pro Asp Ser Gly Phe Phe Thr Arg Thr Ala Val Gln
275 280 285
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290 295 300
Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys
305 310 315 320
Thr Glu Asn Lys Pro Asp Asp Tyr Val Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg
325 330 335
Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser
340 345 350
Ala Val Leu Pro Asp Ser Ile Val Pro Glu Leu Glu Arg Ala Ala Lys
355 360 365
Ser Val Gly Arg Asp Phe Lys Asp Phe Ile Arg Thr Asp Asn Thr Cys
370 375 380
Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val Glu Arg Ile Glu Lys Thr Val Glu Glu
385 390 395 400
Gly Glu Lys Thr Ile Val Arg Glu Val Glu Gln Ile Glu Asp Glu Val
405 410 415
Gln Lys Val Gly Lys Thr Glu Met Thr Leu Phe Gln Arg Leu Thr Glu
420 425 430
Gly Phe Arg Glu Leu Arg Gln Asp Glu Glu Asn Phe Leu Arg Arg Leu
435 440 445
Ser Gln Glu Glu Met Glu Val Leu Asn Glu Leu Lys Met Glu Ala Thr
450 455 460
Glu Val Glu Lys Leu Phe Gly Arg Ala Leu Pro Ile Arg Lys Leu Arg
465 470 475 480
<210> 51
<211> 458
<212> PRT
<213> Tarenaya hassleriana
<400> 51
Met Ala Val Ala Val Gln Ser Phe Ser Ser Pro Cys Tyr Arg Asp Thr
1 5 10 15
Gln Phe Ile Ser Gly Asn Arg Ser Asn Arg Lys Leu Leu Arg Lys Arg
20 25 30
Met Val Asp Ser Asp Thr Ile Val Leu Val Lys Ile Cys Ser Gly Ala
35 40 45
Arg Gly Lys Ile His Cys Ser Leu Lys Ala Arg Phe Ser Ser Pro Ser
50 55 60
Ser Gly Tyr Lys Ser Gly Leu Ser Lys Gly Arg Pro Pro Phe Glu Ala
65 70 75 80
Leu Thr Leu Trp Asn Lys Leu Lys Glu Gln Ser Arg Gln Ser Leu Leu
85 90 95
Lys Leu Val Gly Ile Leu Ala Cys Thr Phe Leu Ile Val Pro Ser Val
100 105 110
Asp Ala Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys Ala Cys Leu Leu Lys Glu Cys
115 120 125
Arg Ile Glu Leu Ala Lys Cys Ile Ser Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn
130 135 140
Val Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys
145 150 155 160
Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe
165 170 175
Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Arg Lys Ser Asp
180 185 190
Leu Gly Glu Phe Pro Ala Pro Asp Pro Ala Val Leu Val Lys Arg Phe
195 200 205
Asn Ile Gly Asp Phe Ser Gly Lys Trp Tyr Ile Ser Ser Gly Leu Asn
210 215 220
Pro Thr Phe Asp Thr Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu
225 230 235 240
Ser Asp Lys Leu Val Gly Asn Leu Ser Trp Arg Ile Arg Thr Pro Asp
245 250 255
Gly Gly Phe Phe Thr Arg Ser Thr Val Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro
260 265 270
Asn Gln Pro Gly Ile Leu Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr
275 280 285
Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Val Glu Asn Gly Pro Asp
290 295 300
Asp Tyr Val Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly
305 310 315 320
Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ala Val Leu Pro Asn Asn
325 330 335
Ile Val Pro Glu Leu Glu Arg Ala Ala Lys Ser Val Gly Arg Asp Phe
340 345 350
Ser Lys Phe Ile Arg Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu
355 360 365
Val Glu Arg Ile Glu Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Arg Thr Ile Ile
370 375 380
Arg Glu Val Glu Gln Ile Glu Gly Glu Val Ala Lys Val Gly Glu Thr
385 390 395 400
Glu Met Thr Leu Leu Gln Arg Leu Val Glu Gly Phe Lys Glu Leu Lys
405 410 415
Gln Asp Glu Glu Asn Phe Leu Gln Gly Leu Asn Lys Glu Glu Met Glu
420 425 430
Leu Leu Ser Glu Leu Lys Met Glu Ala Ser Glu Val Glu Lys Leu Phe
435 440 445
Gly Lys Ala Leu Pro Ile Arg Lys Leu Arg
450 455
<210> 52
<211> 461
<212> PRT
<213> Camelina sativa
<400> 52
Met Ala Val Ala Thr His Cys Phe Thr Ser Pro Cys His Asp Arg Ile
1 5 10 15
Arg Phe Phe Ser Ser Asp Asp Gly Ile Gly Arg Leu Gly Ile Ser Arg
20 25 30
Lys Arg Ile Asn Gly Thr Phe Leu Val Lys Ile Leu Pro Pro Ile Gln
35 40 45
Asn Val Asp Leu Arg Thr Asn Gly Arg Ser Ser Arg Pro Leu Ser Ala
50 55 60
Phe Arg Ser Gly Ile Ser Lys Gly Val Phe Asp Ile Leu Ser Leu Pro
65 70 75 80
Ser Lys Asp Glu Leu Lys Glu Leu Ser Thr Pro Leu Leu Leu Lys Leu
85 90 95
Val Gly Val Phe Ala Cys Ala Phe Leu Ile Val Pro Ser Ala Glu Ala
100 105 110
Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys Ala Cys Leu Leu Lys Gly Cys Arg Ile
115 120 125
Glu Leu Ala Lys Cys Ile Ser Asn Pro Ala Cys Ala Ala Asn Ile Ala
130 135 140
Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile
145 150 155 160
Lys Cys Gly Asp Ile Phe Glu Asn Lys Val Val Asp Glu Phe Asn Glu
165 170 175
Cys Ala Val Thr Arg Lys Lys Cys Val Pro Lys Lys Ser Asp Leu Gly
180 185 190
Glu Phe Pro Ala Pro Asp Pro Ser Val Leu Val Gln Asn Phe Asn Ile
195 200 205
Gly Asp Phe Ser Gly Lys Trp Tyr Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro Thr
210 215 220
Phe Asp Ala Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu Gly Glu
225 230 235 240
Asn Lys Leu Val Gly Asn Ile Ser Trp Arg Ile Lys Thr Leu Asp Ser
245 250 255
Gly Phe Phe Thr Arg Ser Ala Val Gln Thr Phe Val Gln Asp Pro Asn
260 265 270
Gln Pro Gly Val Leu Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln
275 280 285
Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro Glu Asp
290 295 300
Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr
305 310 315 320
Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ser Val Leu Pro Asn Ser Ile
325 330 335
Val Pro Glu Leu Glu Lys Ala Ala Lys Ser Ile Gly Arg Asp Phe Ser
340 345 350
Thr Phe Ile Arg Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val
355 360 365
Glu Arg Leu Glu Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Arg Ile Ile Val Lys
370 375 380
Asp Phe Glu Glu Ile Glu Glu Glu Val Glu Lys Glu Val Glu Lys Val
385 390 395 400
Gly Lys Thr Glu Met Thr Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe Asn
405 410 415
Glu Leu Arg Lys Asp Glu Glu Asn Phe Val Arg Glu Leu Ser Lys Glu
420 425 430
Glu Met Glu Phe Leu Asp Glu Ile Lys Met Glu Ala Asn Glu Val Glu
435 440 445
Lys Leu Phe Gly Lys Ala Leu Pro Ile Arg Lys Val Arg
450 455 460
<210> 53
<211> 461
<212> PRT
<213> Capsella rubella
<400> 53
Met Ala Val Ala Thr His Cys Phe Thr Ser Pro Cys His Asp Arg Ile
1 5 10 15
Arg Phe Phe Ser Ser Asp Asp Gly Ile Ala Arg Leu Gly Ile Ser Arg
20 25 30
Lys Arg Ile Asn Gly Thr Phe Leu Val Lys Ile Leu Ser Pro Ile Gln
35 40 45
Ser Ala Asp Leu Arg Thr Ser Gly Arg Ser Ser Arg Pro Leu Ser Ala
50 55 60
Phe Arg Ser Gly Phe Ser Lys Arg Val Phe Asp Ile Val Ser Leu Pro
65 70 75 80
Ser Lys Asn Glu Leu Lys Glu Leu Ser Thr Pro Leu Leu Leu Lys Leu
85 90 95
Val Gly Val Leu Ala Cys Ala Phe Leu Ile Val Pro Ser Ala Glu Ala
100 105 110
Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys Ala Cys Leu Leu Glu Gly Cys Arg Ile
115 120 125
Glu Leu Ala Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ala Cys Ala Ala Asn Val Ala
130 135 140
Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile
145 150 155 160
Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn Glu
165 170 175
Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Arg Lys Ser Asp Leu Gly
180 185 190
Glu Phe Pro Ala Pro Asp Pro Ser Val Leu Val Gln Asn Phe Asn Ile
195 200 205
Gly Asp Phe Asn Gly Lys Trp Tyr Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro Thr
210 215 220
Phe Asp Ala Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu Gly Asp
225 230 235 240
Asn Lys Leu Val Gly Asn Ile Ser Trp Arg Ile Lys Thr Leu Asp Ser
245 250 255
Gly Phe Phe Thr Arg Ser Ala Val Gln Thr Phe Val Gln Asp Pro Asn
260 265 270
Gln Pro Gly Val Leu Tyr Asn His Asp Asn Ala Tyr Leu His Tyr Gln
275 280 285
Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro Glu Asp
290 295 300
Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr
305 310 315 320
Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ser Val Leu Pro Asn Ser Ile
325 330 335
Val Pro Glu Leu Glu Lys Ala Ala Lys Ser Ile Gly Arg Asp Phe Ser
340 345 350
Thr Phe Ile Lys Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val
355 360 365
Glu Arg Leu Glu Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Arg Ile Ile Val Lys
370 375 380
Glu Val Glu Glu Ile Glu Glu Glu Val Glu Lys Glu Val Glu Lys Val
385 390 395 400
Gly Lys Thr Glu Met Thr Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe Asn
405 410 415
Glu Leu Lys Gln Asp Glu Glu Asn Phe Val Arg Glu Leu Ser Lys Glu
420 425 430
Glu Met Glu Phe Leu Asp Glu Ile Lys Met Glu Ala Ser Glu Val Glu
435 440 445
Lys Leu Phe Gly Lys Ala Leu Pro Ile Arg Lys Val Arg
450 455 460
<210> 54
<211> 462
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 54
Met Ala Val Ala Thr His Cys Phe Thr Ser Pro Cys His Asp Arg Ile
1 5 10 15
Arg Phe Phe Ser Ser Asp Asp Gly Ile Gly Arg Leu Gly Ile Thr Arg
20 25 30
Lys Arg Ile Asn Gly Thr Phe Leu Leu Lys Ile Leu Pro Pro Ile Gln
35 40 45
Ser Ala Asp Leu Arg Thr Thr Gly Gly Arg Ser Ser Arg Pro Leu Ser
50 55 60
Ala Phe Arg Ser Gly Phe Ser Lys Gly Ile Phe Asp Ile Val Pro Leu
65 70 75 80
Pro Ser Lys Asn Glu Leu Lys Glu Leu Thr Ala Pro Leu Leu Leu Lys
85 90 95
Leu Val Gly Val Leu Ala Cys Ala Phe Leu Ile Val Pro Ser Ala Asp
100 105 110
Ala Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys Ala Cys Leu Leu Lys Gly Cys Arg
115 120 125
Ile Glu Leu Ala Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ala Cys Ala Ala Asn Val
130 135 140
Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln
145 150 155 160
Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn
165 170 175
Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Arg Lys Ser Asp Leu
180 185 190
Gly Glu Phe Pro Ala Pro Asp Pro Ser Val Leu Val Gln Asn Phe Asn
195 200 205
Ile Ser Asp Phe Asn Gly Lys Trp Tyr Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro
210 215 220
Thr Phe Asp Ala Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu Gly
225 230 235 240
Asp Asn Lys Leu Val Gly Asn Ile Ser Trp Arg Ile Lys Thr Leu Asp
245 250 255
Ser Gly Phe Phe Thr Arg Ser Ala Val Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro
260 265 270
Asn Gln Pro Gly Val Leu Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr
275 280 285
Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro Glu
290 295 300
Asp Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly
305 310 315 320
Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ser Val Leu Pro Asn Ser
325 330 335
Ile Ile Pro Glu Leu Glu Lys Ala Ala Lys Ser Ile Gly Arg Asp Phe
340 345 350
Ser Thr Phe Ile Arg Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Ala Leu
355 360 365
Val Glu Arg Ile Glu Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Arg Ile Ile Val
370 375 380
Lys Glu Val Glu Glu Ile Glu Glu Glu Val Glu Lys Glu Val Glu Lys
385 390 395 400
Val Gly Arg Thr Glu Met Thr Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe
405 410 415
Asn Glu Leu Lys Gln Asp Glu Glu Asn Phe Val Arg Glu Leu Ser Lys
420 425 430
Glu Glu Met Glu Phe Leu Asp Glu Ile Lys Met Glu Ala Ser Glu Val
435 440 445
Glu Lys Leu Phe Gly Lys Ala Leu Pro Ile Arg Lys Val Arg
450 455 460
<210> 55
<211> 455
<212> PRT
<213> Arabidopsis lyrata
<400> 55
Met Ala Val Ala Thr His Cys Phe Thr Ser Pro Cys His Gly Arg Ile
1 5 10 15
Arg Phe Phe Ser Ser Asp Asp Gly Arg Leu Gly Ile Thr Arg Lys Arg
20 25 30
Ile Asn Gly Thr Phe Leu Leu Lys Ile Leu Pro Pro Ile Gln Asn Ala
35 40 45
Gly Gly Arg Ser Ser Arg Pro Ile Ser Ala Phe Arg Ser Gly Phe Ser
50 55 60
Lys Gly Ile Phe Asp Ile Val Ala Leu Pro Ser Lys Asn Glu Leu Lys
65 70 75 80
Glu Leu Thr Thr Pro Leu Leu Leu Lys Leu Val Gly Val Leu Ala Cys
85 90 95
Ala Phe Leu Ile Val Pro Ser Ala Asp Ala Val Asp Ala Leu Lys Thr
100 105 110
Cys Ala Cys Leu Leu Lys Gly Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Cys Ile
115 120 125
Ala Asn Pro Ala Cys Ala Ala Asn Val Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn
130 135 140
Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe
145 150 155 160
Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys
165 170 175
Lys Cys Val Pro Arg Lys Ser Asp Leu Gly Glu Phe Pro Ala Pro Asp
180 185 190
Pro Ser Val Leu Val Gln Asn Phe Asn Ile Ser Asp Phe Asn Gly Lys
195 200 205
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210 215 220
Gln Val His Glu Phe His Thr Glu Gly Asp Asn Lys Leu Val Gly Asn
225 230 235 240
Ile Ser Trp Arg Ile Lys Thr Leu Asp Ser Gly Phe Phe Thr Arg Ser
245 250 255
Ala Val Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro Asn Gln Pro Gly Val Leu Tyr
260 265 270
Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Leu
275 280 285
Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro Asp Asp Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr
290 295 300
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Thr Arg Ser Ser Val Leu Pro Asn Ser Ile Ile Pro Glu Leu Glu Lys
325 330 335
Ala Ala Lys Ser Ile Gly Arg Asp Phe Ser Thr Phe Ile Arg Thr Asp
340 345 350
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Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe Asn Glu Leu Lys Gln Asp Glu
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Glu Asn Phe Val Arg Glu Phe Ser Lys Glu Glu Met Glu Phe Leu Asp
420 425 430
Glu Ile Lys Met Glu Ala Ser Glu Ile Glu Lys Leu Phe Gly Lys Ala
435 440 445
Leu Pro Ile Arg Lys Val Arg
450 455
<210> 56
<211> 457
<212> PRT
<213> Brassica napus
<400> 56
Met Ser Val Ser Thr His Cys Phe Thr Ser Pro Cys His Asp Arg Thr
1 5 10 15
Arg Phe Phe Ser Gly Asp Asp Gly Asn Lys Leu Leu Arg Lys Arg Ile
20 25 30
Lys Gly Thr Phe Leu Val Lys Ile Leu Pro Ser Ser Gln Asn Ala Tyr
35 40 45
Leu Arg Ile Thr Ala Lys Ser Ser Arg Pro Leu Ser Gly Phe Arg Ser
50 55 60
Gly Ile Ser Lys Gly Val Phe Asp Ile Val Ala Leu Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Ala Leu Lys Glu Leu Thr Thr Pro Leu Met Leu Lys Leu Val Gly Val
85 90 95
Val Ala Cys Ala Phe Leu Ile Val Pro Ser Ala Asp Ala Val Asp Ala
100 105 110
Leu Lys Thr Cys Ala Cys Leu Leu Lys Gly Cys Arg Ile Glu Leu Ala
115 120 125
Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Val Ala Cys Leu Gln
130 135 140
Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys Cys Gly
145 150 155 160
Asp Leu Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val
165 170 175
Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Arg Lys Ser Asp Leu Gly Glu Phe Pro
180 185 190
Ala Pro Asp Pro Ser Val Leu Val Lys Asn Phe Asn Ile Asn Asp Phe
195 200 205
Asp Gly Lys Trp Tyr Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro Thr Phe Asp Ala
210 215 220
Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu Asp Gly Lys Leu Val
225 230 235 240
Gly Asn Ile Ser Trp Arg Ile Lys Thr Pro Asp Ser Gly Phe Phe Thr
245 250 255
Arg Ser Thr Val Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro Asn Gln Pro Ala Val
260 265 270
Phe Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr
275 280 285
Ile Leu Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro Glu Asp Tyr Ile Phe Val
290 295 300
Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly Ala Val
305 310 315 320
Val Tyr Thr Arg Ser Ala Ser Leu Pro Asn Thr Ile Val Pro Glu Leu
325 330 335
Glu Lys Ala Ala Lys Ser Ile Gly Arg Glu Phe Ser Thr Phe Ile Lys
340 345 350
Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val Glu Arg Leu Glu
355 360 365
Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Lys Ile Ile Val Lys Glu Val Glu Glu
370 375 380
Ile Glu Glu Glu Val Glu Lys Glu Val Glu Lys Val Gly Lys Thr Glu
385 390 395 400
Met Thr Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe Glu Glu Leu Lys Gln
405 410 415
Asp Glu Glu Asn Phe Leu Arg Gly Leu Ser Lys Glu Glu Met Glu Leu
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Leu Asp Glu Leu Lys Met Glu Ala Asn Glu Val Glu Lys Leu Phe Gly
435 440 445
Lys Ala Leu Pro Ile Arg Lys Phe Arg
450 455
<210> 57
<211> 491
<212> PRT
<213> Brassica rapa
<400> 57
Met Ser Tyr Pro Lys Gly Ile Ser Ser His Pro Tyr Ile Ser Leu Phe
1 5 10 15
Leu Phe Ser Leu Tyr Leu Pro Pro Leu Leu Pro Ala Glu Leu Ser Val
20 25 30
Ser Ser Met Ser Val Ser Thr His Cys Phe Thr Ser Pro Cys His Asp
35 40 45
Arg Thr Arg Phe Phe Ser Gly Asp Asp Gly Asn Lys Leu Leu Arg Lys
50 55 60
Arg Ile Lys Gly Thr Phe Leu Val Lys Ile Leu Pro Ser Ser Gln Asn
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Arg Val Thr Ala Lys Ser Ser Arg Pro Leu Ser Gly Phe
85 90 95
Arg Ser Gly Ile Ser Lys Gly Val Phe Asp Ile Val Ala Leu Thr Ser
100 105 110
Lys Asn Ala Leu Lys Glu Leu Ser Thr Pro Leu Met Leu Lys Leu Val
115 120 125
Gly Val Val Ala Cys Ala Phe Leu Ile Val Pro Ser Ala Asp Ala Val
130 135 140
Asp Ala Leu Lys Thr Cys Ala Cys Leu Leu Lys Gly Cys Arg Ile Glu
145 150 155 160
Leu Ala Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Val Ala Cys
165 170 175
Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys
180 185 190
Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys
195 200 205
Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Arg Lys Ser Asp Leu Gly Glu
210 215 220
Phe Pro Ala Pro Asp Pro Ser Val Leu Val Lys Asn Phe Asn Val Lys
225 230 235 240
Asp Phe Asp Gly Lys Trp Tyr Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro Thr Phe
245 250 255
Asp Ala Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu Asp Gly Lys
260 265 270
Leu Val Gly Asn Ile Ser Trp Arg Ile Lys Thr Pro Asp Ser Gly Phe
275 280 285
Phe Thr Arg Ser Thr Val Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro Asn Gln Pro
290 295 300
Ala Val Phe Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp
305 310 315 320
Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro Glu Asp Tyr Ile
325 330 335
Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly
340 345 350
Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ala Ser Leu Pro Asn Thr Ile Val Pro
355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Leu Glu Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Lys Ile Ile Val Lys Glu Val
405 410 415
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Thr Glu Met Thr Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe Glu Glu Leu
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Lys Gln Asp Glu Glu Asn Phe Leu Arg Gly Leu Ser Lys Glu Glu Met
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Glu Leu Leu Asp Glu Leu Lys Met Glu Ala Asn Glu Val Glu Lys Leu
465 470 475 480
Phe Gly Lys Ala Leu Pro Ile Arg Lys Phe Arg
485 490
<210> 58
<211> 493
<212> PRT
<213> Noccaea caerulescens
<400> 58
Leu Ser Leu Ser Leu Ser Leu Ser Leu Ser Leu Ser Leu Leu Pro Ala
1 5 10 15
Glu Leu Ser Ile Phe Gly Ile Ala Ser Gly Arg Leu Ala Thr Glu Ser
20 25 30
Met Ser Val Ala Thr His Cys Phe Thr Ser Pro Thr Cys His Asp Arg
35 40 45
Ile Arg Phe Phe Ser Arg Ile Thr Ser Asp Asp Gly Arg Leu Val Arg
50 55 60
Lys Arg Ile Asn Gly Thr Phe Leu Leu Lys Ile Leu Pro Pro Ser Gln
65 70 75 80
Asn Ala His Leu Arg Thr Thr Leu Arg Ser Ser Arg Pro Leu Ser Ala
85 90 95
Gly Phe Arg Ser Gly Ile Ser Lys Gly Val Ile Asp Ile Val Ala Leu
100 105 110
Thr Ser Arg Asn Ala Leu Lys Glu Leu Ser Thr Pro Leu Leu Leu Lys
115 120 125
Leu Val Gly Val Leu Ala Cys Ala Phe Leu Ile Val Pro Ser Ala Asp
130 135 140
Ala Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys Ala Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg
145 150 155 160
Ile Glu Leu Ala Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Val
165 170 175
Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln
180 185 190
Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Ala Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn
195 200 205
Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Arg Lys Ser Asp Leu
210 215 220
Gly Glu Phe Pro Val Pro Asp Pro Ser Ala Leu Val Lys Asn Phe Asn
225 230 235 240
Ile Gln Asp Phe Asn Gly Lys Trp Tyr Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro
245 250 255
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260 265 270
Asn Lys Leu Val Gly Asn Ile Ser Trp Arg Ile Lys Thr Pro Asp Thr
275 280 285
Gly Phe Phe Thr Arg Ser Ala Val Gln Thr Phe Lys Gln Asp Pro Asn
290 295 300
Gln Pro Ala Val Leu Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln
305 310 315 320
Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro Glu Asp
325 330 335
Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr
340 345 350
Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Asn Val Leu Pro Asn Ser Ile
355 360 365
Val Pro Glu Leu Glu Lys Ala Ala Lys Ser Ile Gly Arg Asp Phe Asn
370 375 380
Thr Phe Val Arg Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val
385 390 395 400
Glu Arg Leu Glu Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Lys Met Ile Glu Lys
405 410 415
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420 425 430
Gly Lys Thr Glu Met Thr Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe Asn
435 440 445
Glu Leu Lys Gln Asp Glu Glu Asn Phe Leu Arg Gly Leu Ser Glu Glu
450 455 460
Glu Met Ala Leu Leu Asp Glu Leu Lys Met Glu Ala Gly Glu Val Glu
465 470 475 480
Lys Leu Phe Gly Lys Ala Leu Pro Ile Arg Lys Phe Arg
485 490
<210> 59
<211> 459
<212> PRT
<213> Eutrema salsugineum
<400> 59
Met Ala Val Ala Thr Tyr Cys Phe Thr Ser Pro Cys His Asp Arg Ile
1 5 10 15
Arg Phe Phe Ser Gly Val Thr Ser Phe Asp Gly Arg Leu Leu Arg Lys
20 25 30
Arg Ile Asn Gly Thr Phe Leu Val Lys Ile Leu Pro Pro Ser Gln Asn
35 40 45
Ala Asp Leu Arg Thr Thr Ser Arg Ser Ser Arg Pro Leu Ser Gly Phe
50 55 60
Arg Ser Gly Thr Ser Lys Gly Val Phe Asp Ile Val Ala Leu Thr Ser
65 70 75 80
Arg Asn Ala Leu Lys Glu Leu Ser Thr Pro Met Val Leu Lys Leu Val
85 90 95
Gly Val Leu Ala Cys Ala Phe Leu Ile Val Pro Ser Ala Asp Ala Val
100 105 110
Asp Ala Leu Lys Thr Cys Ala Cys Leu Leu Lys Gly Cys Arg Ile Glu
115 120 125
Leu Ala Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Val Ala Cys
130 135 140
Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys
145 150 155 160
Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Lys Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys
165 170 175
Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Gln Lys Ser Asp Leu Gly Glu
180 185 190
Phe Pro Val Pro Asp Pro Ser Val Leu Val Lys Asn Phe Asn Ile Ser
195 200 205
Asp Phe Asn Gly Lys Trp Tyr Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro Thr Phe
210 215 220
Asp Thr Phe Asp Cys Gln Arg His Glu Phe His Ala Asp Gly Asp Lys
225 230 235 240
Leu Val Gly Asn Ile Ser Trp Arg Ile Lys Thr Leu Asp Ser Gly Phe
245 250 255
Phe Thr Arg Ser Ala Val Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro Asn Gln Pro
260 265 270
Ala Ile Leu Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp
275 280 285
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290 295 300
Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly
305 310 315 320
Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ala Val Leu Pro Asn Ser Ile Val Pro
325 330 335
Glu Leu Glu Lys Ala Ala Lys Ser Ile Gly Arg Asp Phe Ser Thr Phe
340 345 350
Val Arg Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val Glu Arg
355 360 365
Phe Glu Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Lys Ile Ile Val Lys Glu Val
370 375 380
Glu Glu Ile Glu Glu Glu Val Glu Lys Glu Val Glu Lys Val Gly Lys
385 390 395 400
Thr Glu Met Thr Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe Asn Glu Leu
405 410 415
Lys Gln Asp Glu Glu Asn Phe Leu Arg Gly Leu Ser Glu Glu Glu Met
420 425 430
Glu Leu Leu Asn Glu Leu Lys Met Glu Ala Ser Glu Val Glu Lys Leu
435 440 445
Phe Gly Lys Ser Leu Pro Ile Arg Lys Val Arg
450 455
<210> 60
<211> 481
<212> PRT
<213> Prunus humilis
<400> 60
Met Ala Leu Ala Gly Arg Ser Ile Phe Leu Ser His Asn Asp Ser Ile
1 5 10 15
Gly Asn Thr Cys Ile Arg Leu Gly Ile Thr Ser Asp Glu Gly Phe Gln
20 25 30
Lys Arg Arg Met Val Gly Phe His Val Val Val Lys Phe Pro Ser Asn
35 40 45
Arg Arg Lys Ser Arg Tyr Ser Gln Phe Ile Arg Ser Lys Arg Asn Phe
50 55 60
Cys Val Leu Gly Ser Lys Cys Ser Ser Leu Leu Ser Ser Lys Thr Glu
65 70 75 80
Glu Ala Phe Ser Lys Cys Ser Thr Arg Thr Ser Glu Pro Glu Met Lys
85 90 95
Arg Val Ile Ser Phe Leu Leu Glu Glu Ala Ser Ser Cys Ile Lys Glu
100 105 110
Trp Ser Gln Leu His Phe Met Lys Val Ala Gly Leu Leu Ala Cys Thr
115 120 125
Phe Met Ile Met Pro Ser Ala Asn Ala Ala Asp Ala Leu Lys Thr Cys
130 135 140
Ala Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg Val Glu Leu Ala Lys Cys Ile Gly
145 150 155 160
Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Ile Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn
165 170 175
Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu
180 185 190
Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys
195 200 205
Cys Val Pro Lys Lys Ser Asp Val Gly Glu Phe Pro Ile Pro Asp Pro
210 215 220
Ala Val Leu Val Lys Ser Phe Asp Ile Glu Lys Phe Asn Gly Lys Trp
225 230 235 240
Phe Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro Thr Phe Asp Ala Phe Asp Cys Gln
245 250 255
Leu His Glu Phe His Thr Glu Ser Ser Lys Leu Val Gly Asn Leu Ser
260 265 270
Trp Arg Ile Arg Thr Pro Asp Gly Gly Phe Phe Thr Arg Ser Ala Val
275 280 285
Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro Asn Gln Pro Gly Ile Leu Tyr Asn His
290 295 300
Asp Asn Asp Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser
305 310 315 320
Lys Met Glu Asn Lys Pro Asp Asp Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr Arg Gly
325 330 335
Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly Ala Val Ile Tyr Thr Arg
340 345 350
Ser Ser Val Leu Pro Ala Ser Ile Val Pro Asp Leu Glu Lys Ala Ala
355 360 365
Ala Ser Val Gly Arg Asp Phe Ser Lys Phe Ile Arg Thr Asp Asn Thr
370 375 380
Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val Glu Arg Leu Glu Lys Thr Leu Glu
385 390 395 400
Glu Gly Glu Arg Asn Ile Ile Glu Glu Val Lys Gln Ile Glu Gly Glu
405 410 415
Val Glu Lys Val Glu Gln Thr Glu Leu Thr Leu Leu Gln Lys Leu Ala
420 425 430
Glu Gly Phe Asn Glu Leu Lys Gln Asp Glu Glu Asn Phe Leu Arg Gly
435 440 445
Leu Ser Lys Glu Glu Met Asp Ile Leu Ser Glu Leu Lys Met Glu Ala
450 455 460
Gly Glu Val Glu Lys Leu Phe Gly Gln Thr Leu Pro Leu Arg Lys Leu
465 470 475 480
Arg
<210> 61
<211> 481
<212> PRT
<213> Pyrus x bretschneideri
<400> 61
Met Ala Phe Ala Gly Arg Ser Val Phe Leu Ser His Lys Glu Ser Ile
1 5 10 15
Gly Asn Ala Cys Ile Arg Leu Gly Leu Lys Ser Asp Glu Arg Leu Gln
20 25 30
Lys Gly Arg Met Val Gly Phe His Val Val Val Lys Phe Ser Ser Gln
35 40 45
Arg Arg Lys Ser Arg Tyr Cys Gln Phe Ile Ser Ala Lys Arg Asn Phe
50 55 60
Ser Gly Leu Gly Ser Lys Arg Ser Ser Leu Leu Ser Ser Arg Thr Glu
65 70 75 80
Glu Ala Phe Ser Glu Arg Ser Thr Lys Thr Ser Glu Pro Glu Met Gly
85 90 95
Arg Ala Ile Asp Leu Met Ile Glu Glu Val Leu Ser Val Ile Lys Glu
100 105 110
Trp Ser Gln Leu His Phe Met Lys Val Ala Gly Leu Leu Leu Cys Thr
115 120 125
Phe Met Val Met Pro Ser Ala Asn Ala Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys
130 135 140
Ala Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg Val Glu Leu Ala Lys Cys Ile Gly
145 150 155 160
Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Ile Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn
165 170 175
Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu
180 185 190
Asn Lys Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys
195 200 205
Cys Val Pro Met Lys Ser Asp Val Gly Glu Phe Pro Ile Pro Asp Pro
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Ser Phe Asp Met Ser Lys Phe Asn Gly Lys Trp
225 230 235 240
Phe Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro Thr Phe Asp Val Phe Asp Cys Gln
245 250 255
Leu His Glu Phe His Thr Glu Ser Ser Lys Leu Val Gly Asn Leu Ser
260 265 270
Trp Arg Ile Lys Thr Pro Asp Gly Gly Phe Phe Thr Arg Ser Ala Val
275 280 285
Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro Asn Gln Pro Gly Ile Leu Tyr Asn His
290 295 300
Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser
305 310 315 320
Lys Ile Glu Asn Thr Pro Glu Asp Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr Arg Gly
325 330 335
Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg
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Ser Ser Val Leu Pro Glu Ser Ile Val Pro Glu Leu Glu Arg Ala Ala
355 360 365
Lys Ser Val Gly Arg Asp Phe Ser Lys Phe Ile Arg Thr Asp Asn Thr
370 375 380
Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val Glu Arg Leu Glu Lys Thr Ile Glu
385 390 395 400
Glu Gly Glu Arg Thr Ile Ile Glu Glu Val Lys Gln Ile Glu Gly Glu
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Val Glu Lys Val Glu Gln Thr Glu Leu Thr Leu Phe Gln Lys Leu Leu
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Glu Gly Phe Asn Val Leu Lys Gln Asp Glu Glu Asn Phe Leu Arg Gly
435 440 445
Leu Ser Lys Glu Glu Met Asp Leu Leu Ser Glu Leu Lys Met Glu Ala
450 455 460
Gly Glu Val Gly Lys Leu Phe Gly Lys Thr Leu Pro Leu Arg Lys Leu
465 470 475 480
Arg
<210> 62
<211> 471
<212> PRT
<213> Bixa orellana
<400> 62
Met Ala Leu Ala Pro His Ser Thr His Phe Ser Glu Leu Thr Gly Arg
1 5 10 15
Arg Phe Leu Ser Arg Lys Val Val His Leu His Gly Met Val Leu Leu
20 25 30
Arg Ile Gln Ser Ser Asp Arg Lys Ser Arg Tyr Ser Lys Ser Ile Asn
35 40 45
Pro Tyr Arg Asn His Ile Val Ser Lys Leu Arg Cys Ser Asp Gln Leu
50 55 60
Ser Glu Gly Thr His Asn Ile Ser Ser Thr Cys Ser Ser Asn Thr Arg
65 70 75 80
Arg Lys His Glu Ala Lys Glu Gly Phe Glu Phe Val Val Pro Asn Leu
85 90 95
Pro Asn Ile Leu Arg Lys Trp Ser Gln Leu Gln Ile Met Lys Val Ala
100 105 110
Gly Val Leu Ala Cys Ala Leu Leu Val Ile Pro Ser Ala Ser Ala Val
115 120 125
Asp Ala Leu Lys Thr Cys Thr Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg Ile Glu
130 135 140
Leu Ala Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Val Ala Cys
145 150 155 160
Leu Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys
165 170 175
Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Val Phe Asn Glu Cys
180 185 190
Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Gln Lys Ser Asp Val Gly Glu
195 200 205
Phe Ala Val Pro Asp Pro Ser Val Leu Val Lys Asn Phe Asn Ile Ala
210 215 220
Asp Phe Ser Gly Lys Trp Tyr Ile Ser Ser Gly Leu Asn Pro Ser Phe
225 230 235 240
Asp Thr Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu Ser Asn Lys
245 250 255
Leu Val Gly Asn Leu Ser Trp Arg Ile Arg Thr Pro Asp Gly Gly Phe
260 265 270
Phe Thr Arg Ser Thr Leu Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro Lys Gln Pro
275 280 285
Gly Ile Leu Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp
290 295 300
Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Gln Asp Asp Tyr Val
305 310 315 320
Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly
325 330 335
Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ala Val Leu Pro Glu Ser Ile Val Pro
340 345 350
Glu Leu Glu Arg Ala Ala Lys Cys Val Gly Arg Asp Phe Asn Lys Phe
355 360 365
Ile Lys Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val Glu Arg
370 375 380
Leu Glu Lys Lys Val Glu Glu Gly Glu Glu Thr Ile Ile Arg Glu Val
385 390 395 400
Glu Gln Leu Glu Gly Gln Val Glu Lys Val Gly Lys Thr Glu Met Thr
405 410 415
Leu Phe Gln Lys Leu Ala Glu Gly Phe Lys Glu Leu Gln Lys Asp Glu
420 425 430
Glu Asn Phe Leu Glu Glu Leu Ser Lys Glu Glu Met Asp Val Leu Ser
435 440 445
Glu Leu Lys Met Glu Ala Arg Glu Val Glu Lys Leu Phe Gly Gly Ala
450 455 460
Leu Pro Leu Arg Lys Leu Arg
465 470
<210> 63
<211> 487
<212> PRT
<213> Theobroma cacao
<400> 63
Met Ala Gln Ala Ala Arg Ser Leu Cys Phe Ser His Asp Lys Ser Val
1 5 10 15
Gln Val Pro Cys Arg Thr Ser Gly Leu Thr Ser Asn Glu Arg Phe His
20 25 30
Arg Arg Gln Ile Ala His Phe His Gly Ile Met Leu Val Lys Ile Gln
35 40 45
Ser Ser Gly Arg Lys Ala Arg Tyr Ser Gln Leu Asn Lys Ser Asn Pro
50 55 60
Asn Tyr Ser Ala Ser Asp Leu Arg Cys Ser Asn Gln Leu Ser Arg Arg
65 70 75 80
Lys Asp Arg Asn Phe Ser Ser Cys Ser Cys Asn Arg Arg Arg Pro Lys
85 90 95
Ala Glu Glu Ala Phe Ala Phe Leu Val Pro Thr Ile Ser Asn Val Leu
100 105 110
Lys Glu Trp Ser Gln Ser Lys Ile Val Lys Val Val Gly Leu Leu Ala
115 120 125
Cys Ala Tyr Leu Val Ile Pro Ser Ala Ser Ala Val Asp Ala Leu Lys
130 135 140
Thr Cys Thr Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Cys
145 150 155 160
Ile Ala Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Ile Ala Cys Leu Gln Thr Cys
165 170 175
Asn Asp Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu
180 185 190
Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg
195 200 205
Lys Lys Cys Val Pro Gln Lys Ser Asp Ile Gly Glu Phe Pro Val Pro
210 215 220
Ser Pro Ala Val Leu Val Lys Asn Phe Asn Ile Ala Asp Phe Ser Gly
225 230 235 240
Lys Trp Phe Ile Ser Ser Gly Leu Asn Pro Thr Phe Asp Thr Phe Asp
245 250 255
Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu Ala Gly Lys Leu Val Gly Asn
260 265 270
Leu Ser Trp Arg Ile Gly Thr Pro Asp Gly Gly Phe Phe Thr Arg Ser
275 280 285
Thr Leu Gln Arg Phe Val Gln Asp Pro Asn Tyr Pro Gly Ile Leu Tyr
290 295 300
Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Ile
305 310 315 320
Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Gln Asp Asp Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr
325 330 335
Gln Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr
340 345 350
Thr Arg Ser Ala Val Leu Pro Glu Ser Ile Val Pro Glu Leu Glu Lys
355 360 365
Ala Ala Lys Asn Val Gly Arg Asp Phe Asn Lys Phe Ile Arg Thr Asp
370 375 380
Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val Glu Arg Leu Glu Lys Lys
385 390 395 400
Val Glu Glu Gly Glu Gln Thr Leu Ile Arg Glu Val Lys Glu Ile Glu
405 410 415
Gly Glu Val Glu Lys Glu Val Lys Arg Val Glu Lys Thr Glu Met Thr
420 425 430
Leu Phe Gln Lys Leu Ala Glu Gly Phe Lys Glu Leu Gln Gln Asp Glu
435 440 445
Glu Asn Phe Leu Arg Gly Leu Ser Lys Glu Glu Met Gly Leu Leu Asn
450 455 460
Glu Leu Lys Met Glu Ala Ser Glu Val Glu Lys Leu Phe Gly Glu Ala
465 470 475 480
Leu Pro Leu Arg Lys Leu Arg
485
<210> 64
<211> 479
<212> PRT
<213> Gossypium arboreum
<400> 64
Met Ala Glu Ala Ala Arg Leu Ile Cys Phe Ser His Gly Lys Ser Val
1 5 10 15
Lys Val Pro Cys Arg Thr Ser Gly Phe Thr Arg Lys Glu Arg Phe His
20 25 30
Arg Arg Leu Val Ala His Phe His Gly Met Met Leu Leu Lys Leu Gln
35 40 45
Ser Ser Cys Arg Asn Ser Arg Tyr Ser Gln Leu Ile Lys Pro Asn Met
50 55 60
Asn Tyr Ser Ala Ser Lys Leu Arg Cys Ser His Gln Leu Ser Arg Arg
65 70 75 80
Lys Glu Arg Lys Phe Ser Ser Ser Ser Ser Asn Glu Arg Thr Pro Lys
85 90 95
Ile Pro Thr Ile Ser Asn Leu Leu Glu Gln Trp Ser Gln Ser Gln Thr
100 105 110
Val Lys Leu Val Gly Leu Leu Ala Cys Ala Tyr Leu Val Ile Pro Ser
115 120 125
Ala Ala Ala Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys Thr Cys Leu Leu Lys Glu
130 135 140
Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ser Cys Ala Ala
145 150 155 160
Asn Val Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asp Arg Pro Asp Glu Thr Glu
165 170 175
Cys Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu
180 185 190
Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Gln Lys Ser
195 200 205
Asp Ile Gly Glu Phe Pro Val Pro Asp Pro Ala Val Leu Val Glu Asn
210 215 220
Phe Asn Ile Ala Asp Phe Thr Gly Lys Trp Phe Ile Ser Ser Gly Leu
225 230 235 240
Asn Pro Thr Phe Asp Thr Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Ile
245 250 255
Glu Gly Gly Lys Leu Val Gly Asn Leu Ser Trp Arg Ile Arg Thr Pro
260 265 270
Asp Gly Gly Phe Phe Thr Arg Ser Ala Thr Gln Arg Phe Val Gln Asp
275 280 285
Pro Asn His Pro Gly Ile Leu Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His
290 295 300
Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Ile Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro
305 310 315 320
Asp Asp Tyr Val Phe Val Tyr Tyr Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp
325 330 335
Gly Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ala Val Leu Pro Glu
340 345 350
Thr Ile Val Pro Glu Leu Lys Arg Ala Ala Gln Asn Val Gly Arg Asn
355 360 365
Phe Asn Lys Phe Ile Arg Thr Asp Asn Ser Cys Gly Pro Glu Pro Pro
370 375 380
Leu Val Glu Arg Leu Glu Lys Lys Val Glu Glu Gly Glu Gln Thr Leu
385 390 395 400
Ile Arg Glu Val Glu Gln Ile Glu Gly Glu Val Glu Lys Gly Val Glu
405 410 415
Lys Val Glu Lys Thr Glu Gln Thr Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly
420 425 430
Phe Lys Glu Leu Gln Gln Asp Glu Glu Asn Phe Leu Arg Gly Leu Ser
435 440 445
Lys Glu Glu Met Glu Leu Leu Asn Asp Leu Lys Met Glu Ala Ser Glu
450 455 460
Val Glu Lys Leu Phe Gly Glu Ala Leu Pro Ile Arg Lys Leu Arg
465 470 475
<210> 65
<211> 487
<212> PRT
<213> Gossypium hirsutum
<400> 65
Met Ala Glu Ala Ala Arg Leu Ile Cys Phe Ser His Gly Lys Ser Val
1 5 10 15
Lys Val Pro Cys Arg Thr Ser Gly Phe Thr Arg Lys Glu Arg Phe His
20 25 30
Arg Arg Leu Val Ala His Phe His Gly Met Met Leu Leu Lys Leu Gln
35 40 45
Ser Ser Cys Arg Asn Ser Arg Tyr Ser Gln Leu Ile Lys Pro Asn Met
50 55 60
Asn Tyr Ser Ala Ser Lys Leu Arg Cys Ser His Gln Phe Ser Arg Arg
65 70 75 80
Lys Glu Arg Lys Phe Ser Ser Ser Ser Ser Asn Glu Arg Thr Pro Lys
85 90 95
Ala Glu Glu Val Phe Ser Phe Gln Ile Pro Thr Ile Ser Asn Leu Leu
100 105 110
Glu Gln Trp Ser Gln Ser Gln Thr Val Lys Leu Val Gly Leu Leu Ala
115 120 125
Cys Ala Tyr Leu Val Ile Pro Ser Ala Ala Ala Val Asp Ala Leu Lys
130 135 140
Thr Cys Thr Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Cys
145 150 155 160
Ile Ala Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Val Ala Cys Leu Gln Thr Cys
165 170 175
Asn Asp Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu
180 185 190
Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg
195 200 205
Lys Lys Cys Val Pro Gln Lys Ser Asp Ile Gly Glu Phe Pro Val Pro
210 215 220
Asp Pro Ala Val Leu Val Glu Asn Phe Asn Ile Ala Asp Phe Thr Gly
225 230 235 240
Lys Trp Phe Ile Ser Ser Gly Leu Asn Pro Thr Phe Asp Thr Phe Asp
245 250 255
Cys Gln Leu His Glu Phe His Ile Glu Gly Gly Lys Leu Val Gly Asn
260 265 270
Leu Ser Trp Arg Ile Arg Thr Pro Asp Gly Gly Phe Phe Thr Arg Ser
275 280 285
Ala Thr Gln Arg Phe Leu Gln Asp Pro Asn His Pro Gly Ile Leu Tyr
290 295 300
Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Ile
305 310 315 320
Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Pro Asp Asp Tyr Val Phe Val Tyr Tyr
325 330 335
Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr
340 345 350
Thr Arg Ser Ala Val Leu Pro Glu Thr Ile Val Pro Glu Leu Lys Arg
355 360 365
Ala Ala Gln Asn Val Gly Arg Asn Phe Asn Lys Phe Ile Arg Thr Asp
370 375 380
Asn Ser Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val Glu Arg Leu Glu Lys Lys
385 390 395 400
Val Glu Glu Gly Glu Gln Thr Leu Ile Arg Glu Val Glu Gln Ile Glu
405 410 415
Gly Glu Val Glu Lys Gly Val Glu Lys Val Glu Lys Thr Glu Gln Thr
420 425 430
Leu Phe Gln Arg Leu Ala Glu Gly Phe Lys Glu Leu Gln Gln Asp Glu
435 440 445
Glu Asn Phe Leu Arg Gly Leu Ser Lys Glu Glu Met Glu Leu Leu Asn
450 455 460
Asp Leu Lys Met Glu Ala Ser Glu Val Glu Lys Leu Phe Gly Glu Ala
465 470 475 480
Leu Pro Ile Arg Lys Leu Arg
485
<210> 66
<211> 489
<212> PRT
<213> Populus trichocarpa
<400> 66
Met Ala Leu Ala Ala Asn Pro Phe Cys Leu Ser Gln Glu Gln Tyr Ile
1 5 10 15
Ile Ser Ser Ser Ser Val Ala Lys Ser Gly Leu Ala Ser Asp Gly Arg
20 25 30
Phe His Arg Arg Gln Arg Leu His Phe His Gly Ala Val Leu Ser Gln
35 40 45
Phe Trp Pro Asn Ser Arg Lys Leu Arg Tyr Ile Gln Ser Ile Arg Ser
50 55 60
His Arg His His Tyr Gly Gly Val Ile Arg Cys Ser Asn Gln Leu Ser
65 70 75 80
Asp Trp Thr Lys Lys Phe Ser Ser Leu Cys Ser Ser Ser Ser Arg Ser
85 90 95
Met Pro Lys Ala Ile Glu Arg Leu Asn Phe Val Val Leu Ser Val Thr
100 105 110
Asn Ala Leu Lys Glu Arg Asn Asn Leu Glu Cys Leu Lys Leu Ala Gly
115 120 125
Ile Leu Leu Cys Ala Leu Leu Val Ile Pro Ser Ala Asp Ala Val Asp
130 135 140
Ala Leu Lys Thr Cys Thr Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg Leu Glu Leu
145 150 155 160
Ala Lys Cys Ile Ala Asn Pro Ser Cys Ala Ala Asn Val Ala Cys Leu
165 170 175
Gln Thr Cys Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ala Ser Ser
180 185 190
Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu Asn Ser Val Val Asp Glu Phe Asn
195 200 205
Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys Cys Val Pro Arg Lys Ser Asp Val
210 215 220
Gly Glu Phe Pro Val Pro Asp Pro Ala Val Leu Val Glu Asn Phe Asn
225 230 235 240
Met Ala Asp Phe Ser Gly Lys Trp Phe Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro
245 250 255
Thr Phe Asp Thr Phe Asp Cys Gln Leu His Glu Phe His Thr Glu Ser
260 265 270
Asn Lys Leu Val Gly Asn Leu Ser Trp Arg Ile Lys Thr Pro Asp Thr
275 280 285
Gly Phe Phe Thr Arg Ser Ala Val Gln Arg Phe Val Gln Asp Pro Val
290 295 300
His Pro Gly Ile Leu Tyr Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln
305 310 315 320
Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Ile Glu Asn Lys Gln Asp Asp
325 330 335
Tyr Val Phe Val Tyr Tyr Gln Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr
340 345 350
Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg Ser Ala Val Leu Pro Glu Ser Ile
355 360 365
Val Pro Glu Leu Glu Lys Ala Ala Lys Ser Val Gly Arg Asp Phe Ser
370 375 380
Lys Phe Ile Arg Thr Asp Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val
385 390 395 400
Glu Arg Leu Glu Lys Thr Val Glu Glu Gly Glu Lys Thr Ile Ile Lys
405 410 415
Glu Val Glu Glu Ile Glu Gln Lys Val Glu Lys Ala Gly Lys Thr Glu
420 425 430
Leu Ser Leu Phe Gln Arg Leu Thr Glu Gly Phe Lys Glu Ile Gln Lys
435 440 445
Asp Glu Glu Asn Phe Leu Arg Glu Leu Ser Lys Glu Glu Thr Asp Leu
450 455 460
Leu Asn Asp Leu Arg Met Glu Ala Gly Glu Val Glu Lys Leu Phe Gly
465 470 475 480
Arg Ala Leu Pro Ile Arg Lys Leu Arg
485
<210> 67
<211> 483
<212> PRT
<213> Manihot esculenta
<400> 67
Met Ala Ile Ser Ala Asn Ser Val Cys Leu Ser His Glu Glu Ser Ile
1 5 10 15
Cys Ser Ser Tyr Phe Arg Pro Gly Ile Ala Ser Tyr Glu Arg Ile His
20 25 30
Gly Arg Arg Gly Leu Asn Tyr Gln Ser Ile Val Val Leu Asn Phe Trp
35 40 45
Pro Asn Ser Arg Lys Ser Arg Tyr Val Gln Leu Met Arg Thr His Lys
50 55 60
Asn Tyr His Gly Ile Lys Leu Arg Cys Ser His Gly Phe Ser Gly Trp
65 70 75 80
Thr Lys Lys Phe Ser Ser Phe Cys Arg Thr Gly Ala Asn Val Thr Lys
85 90 95
Ala Lys Glu Val Leu Asn Phe Leu Met Phe Ser Val Ser Asn Asn Leu
100 105 110
Lys Glu Lys Ser His Leu Gln Phe Leu Lys Val Ala Ser Ile Leu Ala
115 120 125
Cys Val Leu Leu Phe Ile Pro Ser Ala Asp Ala Val Asp Ala Leu Lys
130 135 140
Thr Cys Thr Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg Leu Glu Leu Ala Lys Cys
145 150 155 160
Ile Ala Asn Pro Ala Cys Ala Ala Asn Ile Ala Cys Leu Gln Thr Cys
165 170 175
Asn Asn Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu
180 185 190
Phe Glu Asn Thr Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg
195 200 205
Lys Lys Cys Val Pro Lys Lys Ser Asp Val Gly Glu Phe Pro Val Pro
210 215 220
Asp Pro Ala Val Leu Val Lys Ser Phe Asn Ile Ala Asp Phe Asn Gly
225 230 235 240
Lys Trp Tyr Ile Thr Arg Gly Leu Asn Pro Thr Phe Asp Thr Phe Asp
245 250 255
Cys Gln Leu His Glu Phe His Val Glu Ser Asn Lys Leu Val Gly Asn
260 265 270
Ile Ser Trp Arg Ile Arg Thr Pro Asp Ser Gly Phe Phe Thr Arg Ser
275 280 285
Thr Val Gln Arg Phe Val Gln Asp Pro Met Gln Pro Gly Ile Leu Tyr
290 295 300
Asn His Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Leu
305 310 315 320
Ser Ser Lys Val Glu Asn Lys Ser Asp Asp Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr
325 330 335
Arg Gly Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr
340 345 350
Thr Arg Ser Ser Val Leu Pro Glu Ser Ile Ala Pro Glu Leu Glu Arg
355 360 365
Ala Ala Lys Ser Val Gly Arg Asp Phe Ser Lys Phe Ile Arg Thr Asp
370 375 380
Asn Thr Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Val Glu Arg Leu Glu Lys Thr
385 390 395 400
Val Glu Glu Gly Glu Lys Ser Ile Ile Arg Glu Val Gln Glu Ile Glu
405 410 415
Gly Glu Val Glu Lys Val Gly Lys Thr Glu Met Thr Leu Phe Gln Arg
420 425 430
Leu Ala Glu Gly Phe Lys Glu Leu Gln Gln Asp Glu Glu Ile Leu Leu
435 440 445
Arg Lys Leu Ser Lys Glu Glu Met Glu Leu Phe Asn Asp Leu Lys Met
450 455 460
Glu Ala Ser Glu Val Glu Lys Leu Phe Gly Gly Ala Leu Pro Leu Arg
465 470 475 480
Lys Leu Arg
<210> 68
<211> 481
<212> PRT
<213> Jatropha curcas
<400> 68
Met Ala Leu Ala Ala Asn Ser Ile Tyr Leu Ser His Glu Glu Ser Ile
1 5 10 15
Ser Ser Ser Tyr Ile Lys Ser Gly Ile Glu Arg Phe His Gly Arg Lys
20 25 30
Gly Leu His Phe Arg Ser Ile Val Val Leu Lys Ile Leu Pro Asn Ser
35 40 45
Arg Lys Ser Arg Arg His Val Gln Leu Ile Arg Ser Tyr Arg Asn Tyr
50 55 60
Cys Gly Leu Val Leu Arg Cys Ser His Gln Phe Ser Gly Trp Thr Asn
65 70 75 80
Lys Phe Pro Ser Phe Ser Ser Thr Ala Ala Ser Ile Asn Lys Ala Lys
85 90 95
Glu Val Leu Asn Phe Leu Met Leu Ser Val Ser Asn Asn Leu Lys Glu
100 105 110
Lys Gly Gln Leu Gln Phe Leu Lys Val Ala Gly Ile Leu Ala Cys Ala
115 120 125
Leu Leu Val Ile Pro Ser Ala Asp Ala Val Asp Ala Leu Lys Thr Cys
130 135 140
Ala Cys Leu Leu Lys Glu Cys Arg Leu Glu Leu Ala Lys Cys Ile Ala
145 150 155 160
Asn Pro Ala Cys Ala Ala Asn Ile Ala Cys Leu Gln Thr Cys Asn Asn
165 170 175
Arg Pro Asp Glu Thr Glu Cys Gln Ile Lys Cys Gly Asp Leu Phe Glu
180 185 190
Asn Asn Val Val Asp Glu Phe Asn Glu Cys Ala Val Ser Arg Lys Lys
195 200 205
Cys Val Pro Lys Lys Ser Asp Val Gly Glu Phe Pro Val Pro Asp Pro
210 215 220
Ala Val Leu Val Lys Ser Phe Asn Ile Ala Asp Phe Ser Gly Lys Trp
225 230 235 240
Phe Ile Thr Ser Gly Leu Asn Pro Thr Phe Asp Thr Phe Asp Cys Gln
245 250 255
Leu His Asp Phe His Arg Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly Asn Leu Ser
260 265 270
Trp Arg Ile Arg Thr Pro Asp Gly Gly Phe Phe Thr Arg Ser Thr Val
275 280 285
Gln Lys Phe Val Gln Asp Pro Leu Gln Pro Gly Ile Leu Tyr Asn His
290 295 300
Asp Asn Glu Tyr Leu His Tyr Gln Asp Asp Trp Tyr Ile Leu Ser Ser
305 310 315 320
Lys Leu Glu Asn Ser Glu Asn Asp Tyr Ile Phe Val Tyr Tyr Arg Gly
325 330 335
Arg Asn Asp Ala Trp Asp Gly Tyr Gly Gly Ala Val Val Tyr Thr Arg
340 345 350
Ser Ala Val Leu Pro Glu Ser Ile Ile Pro Glu Leu Glu Thr Ala Ala
355 360 365
Lys Lys Val Gly Arg Asp Phe Asn Lys Phe Ile Ile Thr Asp Asn Thr
370 375 380
Cys Gly Pro Glu Pro Pro Leu Ala Glu Arg Ile Glu Lys Thr Val Glu
385 390 395 400
Glu Gly Glu Lys Thr Ile Ile Arg Glu Val Glu Glu Ile Glu Gly Asn
405 410 415
Val Glu Lys Val Gly Lys Thr Glu Met Ala Leu Phe Gln Arg Leu Ala
420 425 430
Glu Gly Phe Lys Glu Leu Gln Gln Asp Glu Glu Phe Phe Val Arg Glu
435 440 445
Leu Ser Lys Glu Glu Met Asp Ile Leu Asn Asp Leu Lys Met Glu Ala
450 455 460
Gly Glu Val Glu Lys Leu Phe Gly Glu Ala Leu Pro Leu Arg Lys Leu
465 470 475 480
Arg

Claims (122)

1.一种转基因植物，其包含一个或多个异源核苷酸序列，所述异源核苷酸序列编码
光合系统II亚基S(PsbS)、玉米黄质环氧化酶(ZEP)和紫黄质脱环氧化酶(VDE)；
PsbS和ZEP；或
ZEP和VDE，所述异源核苷酸序列可操作地连接到至少一个表达控制序列。
2.根据权利要求1所述的转基因植物，其中所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自双子叶植物。
3.根据权利要求1所述的转基因植物，其中所述一个或多个异源核苷酸序列衍生自拟南芥(Arabidopsis thaliana)。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的转基因植物，包含一个或多个编码PsbS、ZEP和VDE的异源核苷酸序列。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，VDE、PsbS或ZEP中任何的转录物水平增加。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的转基因植物，其中PsbS由SEQ ID NO:1的核苷酸序列编码，ZEP由SEQ ID NO:2的核苷酸序列编码，并且VDE由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的转基因植物，其中PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少90％相同性的核苷酸序列编码，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少90％相同性的核苷酸序列编码，并且VDE由与SEQ ID NO:3具有至少90％相同性的核苷酸序列编码。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的转基因植物，其中PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少70％相同性的核苷酸序列编码，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少70％相同性的核苷酸序列编码，并且VDE由与SEQ ID NO:3具有至少70％相同性的核苷酸序列编码。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的转基因植物，其中PsbS具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，ZEP具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列，并且VDE具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
10.权利要求1至5中任一项所述的转基因植物，其中PsbS具有与SEQ ID NO:4至少90％相同的氨基酸序列，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少90％相同的氨基酸序列，并且VDE具有与SEQ ID NO:6至少90％相同的氨基酸序列。
11.根据权利要求1至5中任一项所述的转基因植物，其中PsbS具有与SEQ ID NO:4至少70％相同的氨基酸序列，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少70％相同的氨基酸序列，并且VDE具有与SEQ ID NO:6至少70％相同的氨基酸序列。
12.根据权利要求1至5中任一项所述的转基因植物，其中PsbS包含SEQ ID NO:7的保守结构域，ZEP包含SEQ ID NO:8的保守结构域，并且VDE包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是作物植物、模式植物、单子叶植物、双子叶植物、具有景天酸代谢(CAM)光合作用的植物、具有C3光合作用的植物、具有C4光合作用的植物、一年生植物、温室植物、园艺开花植物、多年生植物、柳枝稷植物，玉米植物、生物质植物或甘蔗植物。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物选自：柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠、甘蓝型油菜、埃塞俄比亚芥、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
15.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是烟草(Nicotianatabacum)。
16.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是玉米(Zeamays)。
17.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是稻(Oryzasativa)。
18.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是高梁(Sorghumbicolor)。
19.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是大豆(Glycinemax)。
20.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是豇豆(Vignaunguiculata)。
21.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是杨属物种(Populus spp.)。
22.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是桉属物种(Eucalyptus spp.)。
23.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是木薯(Manihotesculenta)。
24.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是大麦(Hordeumvulgare)。
25.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是马铃薯(Solanumtuberosum)。
26.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是甘蔗(Saccharumspp.)。
27.根据权利要求1至12中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是紫花苜蓿(Medicago sativa)。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的转基因植物，其中与波动光照条件下的对照植物相比，所述植物在波动光照条件下具有增加的生长。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的转基因植物，其中与波动光照条件下的对照植物相比，所述植物在波动光照条件下具有增加的光合效率。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的转基因植物，其中与波动光照条件下的对照植物相比，所述植物在波动光照条件下具有改善的光保护效率。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的转基因植物，其中与波动光照条件下的对照植物相比，所述植物在波动光照条件下具有改善的量子产率和CO2固定。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的转基因植物，其中所述植物是优良品系或优良株系。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的转基因植物，其中所述植物还包含至少一种另外的多肽的表达，所述多肽提供除草剂抗性、昆虫或害虫抗性、疾病抗性、修饰的脂肪酸代谢和/或修饰的碳水化合物代谢。
34.一种表达载体，其包含一个或多个核苷酸序列，所述核苷酸序列编码
PsbS、ZEP和VDE；
PsbS和ZEP；或
ZEP和VDE，
所述核苷酸序列可操作地连接到至少一个表达控制序列。
35.根据权利要求34所述的表达载体，其中所述至少一个表达控制序列包含选自以下的启动子：Rbcs1A、GAPA-1和FBA2。
36.根据权利要求34所述的表达载体，其中Rbcs1A启动子驱动ZEP的表达，GAPA-1启动子驱动PsbS的表达，并且FBA2启动子驱动VDE的表达。
37.根据权利要求34至36中任一项所述的表达载体，其中所述表达载体是T-DNA。
38.根据权利要求34至37中任一项所述的表达载体，还包含编码提供抗生素抗性的多肽的核苷酸序列。
39.根据权利要求34至38中任一项所述的表达载体，还包含位于所述表达控制序列和编码所述PsbS、ZEP和VDE多肽的所述核苷酸序列侧翼的左边界(LB)结构域和右边界(RB)结构域。
40.根据权利要求34至39中任一项所述的表达载体，其中PsbS由SEQ ID NO:1的核苷酸序列编码，ZEP由SEQ ID NO:2的核苷酸序列编码，并且VDE由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。
41.根据权利要求34至39中任一项所述的表达载体，其中PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少90％相同性的核苷酸序列编码，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少90％相同性的核苷酸序列编码，并且VDE由与SEQ ID NO:3具有至少90％相同性的核苷酸序列编码。
42.根据权利要求34至39中任一项所述的表达载体，其中PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少70％相同性的核苷酸序列编码，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少70％相同性的核苷酸序列编码，并且VDE由与SEQ ID NO:3具有至少70％相同性的核苷酸序列编码。
43.根据权利要求34至39中任一项所述的表达载体，其中PsbS具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，ZEP具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列，并且VDE具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
44.根据权利要求34至39中任一项所述的表达载体，其中PsbS具有与SEQ ID NO:4至少90％相同的氨基酸序列，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少90％相同的氨基酸序列，并且VDE具有与SEQ ID NO:6至少90％相同的氨基酸序列。
45.根据权利要求34至39中任一项所述的表达载体，其中PsbS具有与SEQ ID NO:4至少70％相同的氨基酸序列，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少70％相同的氨基酸序列，并且VDE具有与SEQ ID NO:6至少70％相同的氨基酸序列。
46.根据权利要求34至39中任一项所述的表达载体，其中PsbS包含SEQ ID NO:7的保守结构域，ZEP包含SEQ ID NO:8的保守结构域，并且VDE包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
47.一种细菌细胞，其包含根据权利要求34至46中任一项所述的表达载体。
48.一种农杆菌(Agrobacterium)细胞，其包含根据权利要求34至46中任一项所述的表达载体。
49.一种转基因植物，其包含根据权利要求34至46中任一项所述的表达载体。
50.一种种子，其包含根据权利要求34至46中任一项所述的表达载体。
51.一种来自根据权利要求50所述的种子的子代植物。
52.一种增加植物在波动光照条件下的生长的方法，包含增加所述植物中选自以下的两种或更多种多肽的表达：PsbS、ZEP和VDE，从而产生与对照植物相比具有所述两种或更多种多肽的表达增加的植物。
53.一种增加植物在波动光照条件下的光合效率的方法，所述方法包括增加所述植物中选自以下的两种或更多种多肽的表达：PsbS、ZEP和VDE，从而产生与对照植物相比具有所述两种或更多种多肽的表达增加的植物。
54.一种改善植物在波动光照条件下的光保护效率的方法，所述方法包括增加所述植物中选自以下的两种或更多种多肽的表达：PsbS、ZEP和VDE，从而产生与对照植物相比具有所述两种或更多种多肽的表达增加的植物。
55.一种改善植物在波动光照条件下的量子产率和CO2固定的方法，所述方法包括增加所述植物中选自以下的两种或更多种多肽的表达：PsbS、ZEP和VDE，从而产生与对照植物相比具有所述两种或更多种多肽的表达增加的植物。
56.一种增加植物中非光化学猝灭(NPQ)弛豫速率的方法，所述方法包括增加
PsbS、ZEP和VDE；
PsbS和ZEP；或
ZEP和VDE
在所述植物中的表达，从而产生与对照植物相比具有所述更多种中的两种多肽的表达增加的植物。
57.根据权利要求52至55中任一项所述的方法，所述方法包括增加PsbS和VDE的表达。
58.根据权利要求52至56中任一项所述的方法，所述方法包括增加PsbS和ZEP的表达。
59.根据权利要求52至56中任一项所述的方法，所述方法包括增加ZEP和VDE的表达。
60.根据权利要求52至56中任一项所述的方法，所述方法包括增加PsbS、ZEP和VDE的表达。
61.根据权利要求52至60中任一项所述的方法，其中通过表达一个或多个编码PsbS、ZEP和/或VDE的异源核苷酸序列来增加PsbS、ZEP和/或VDE的表达。
62.根据权利要求52至60中任一项所述的方法，其中通过修饰PsbS、ZEP和/或VDE的启动子来增加PsbS、ZEP和/或VDE的表达。
63.根据权利要求62所述的方法，其中由基因组编辑系统来实现启动子修饰。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述基因组编辑系统是CRISPR。
65.一种用于选择在波动光照条件下具有改善生长特征的植物的方法，所述方法包括：
(a)提供植物群体；
(b)修饰所述植物以增加PsbS、ZEP和VDE中任何的活性；
(b)检测在波动光照条件下所述植物中非光化学猝灭(NPQ)的水平；
(c)将波动光照条件下所述植物中的所述NPQ水平与波动光照条件下的NPQ对照水平进行比较；以及
(d)选择当植物从高光强度下转变为低光强度下时具有增加的NPQ弛豫速率的植物；从而选择在波动光照条件下具有改善的生长特征的植物。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述NPQ对照水平选自以下：所述群体中的最低NPQ水平；所述群体中的中值NPQ水平；所述群体中的平均NPQ水平，以及对照植物中的NPQ水平。
67.根据权利要求65至66中任一项所述的方法，其中通过用诱变剂在PsbS、ZEP和/或VDE中诱导一个或多个突变来修饰所述植物。
68.根据权利要求67所述的方法，其中所述诱变剂是甲基磺酸乙酯(EMS)。
69.根据权利要求65至66中任一项所述的方法，其中通过使用转基因技术引入异源PsbS、ZEP和/或VDE来修饰所述植物。
70.根据权利要求65至66中任一项所述的方法，其中通过使用基因组编辑系统修饰PsbS、ZEP和/或VDE的启动子来修饰所述植物。
71.根据权利要求70所述的方法，其中所述基因组编辑系统是CRISPR。
72.一种筛选与波动光照条件下改善的生长特征相关的多态性的方法，所述方法包括：
(a)提供植物群体；
(b)获得所述植物中调节和/或编码PsbS、ZEP和VDE中的任何的核苷酸序列；
(c)获得所述植物中调节和/或编码PsbS、ZEP和VDE中的任何的所述核苷酸序列中的一个或多个多态性；
(d)检测所述植物在从高光强度转变为低光强度时非光化学猝灭(NPQ)的弛豫速率；
(e)进行统计分析以确定所述植物群体中的所述多态性与所述NPQ弛豫速率的相关；以及
(f)选择与所述NPQ弛豫速率具有统计学显著相关性的多态性；从而选择与波动光照条件下改善的生长特征相关的多态性。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述多态性是单核苷酸多态性(SNP)。
74.根据权利要求72至73中任一项所述的方法，其中所述多态性位于PsbS、ZEP和/或VDE的启动子中。
75.根据权利要求72至74中任一项所述的方法，其中通过序列测定来检测所述多态性。
76.根据权利要求72至74中任一项所述的方法，其中通过凝胶电泳检测所述多态性。
77.根据权利要求72至76中任一项所述的方法，其中所述多态性还用于筛选植物群体以选择在波动光照条件下具有改善的生长特征的植物。
78.根据权利要求72至76中任一项所述的方法，其中所述多态性还用作在PsbS、ZEP和/或VDE中进行基因组编辑的靶，以改善植物在波动光照条件下的生长特征。
79.根据权利要求65至78中任一项所述的方法，其中所述改善的生长特征选自以下：改善的生长、改善的光合效率、改善的光保护效率、改善的量子产率和改善的CO2固定。
80.根据权利要求65至79中任一项所述的方法，其中通过测量叶绿素荧光来检测植物中的NPQ。
81.根据权利要求52至80中任一项所述的方法，其中PsbS由SEQ ID NO:1的核苷酸序列编码，ZEP由SEQ ID NO:2的核苷酸序列编码，并且VDE由SEQ ID NO:3的核苷酸序列编码。
82.根据权利要求52至80中任一项所述的方法，其中PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少90％相同性的核苷酸序列编码，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少90％相同性的核苷酸序列编码，并且VDE由与SEQ ID NO:3具有至少90％相同性的核苷酸序列编码。
83.根据权利要求52至80中任一项所述的方法，其中PsbS由与SEQ ID NO:1具有至少70％相同性的核苷酸序列编码，ZEP由与SEQ ID NO:2具有至少70％相同性的核苷酸序列编码，并且VDE由与SEQ ID NO:3具有至少70％相同性的核苷酸序列编码。
84.根据权利要求52至80中任一项所述的方法，其中PsbS具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列，ZEP具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列，并且VDE具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
85.根据权利要求52至80中任一项所述的方法，其中PsbS具有与SEQ ID NO:4至少90％相同的氨基酸序列，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少90％相同的氨基酸序列，并且VDE具有与SEQ ID NO:6至少90％相同的氨基酸序列。
86.根据权利要求52至80中任一项所述的方法，其中PsbS具有与SEQ ID NO:4至少70％相同的氨基酸序列，ZEP具有与SEQ ID NO:5至少70％相同的氨基酸序列，并且VDE具有与SEQ ID NO:6至少70％相同的氨基酸序列。
87.根据权利要求52至80中任一项所述的方法，其中PsbS包含SEQ ID NO:7的保守结构域，ZEP包含SEQ ID NO:8的保守结构域，并且VDE包含SEQ ID NO:9的保守结构域。
88.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是作物植物、模式植物、单子叶植物、双子叶植物、具有景天酸代谢(CAM)光合作用的植物、具有C3光合作用的植物、具有C4光合作用的植物、一年生植物、温室植物、园艺开花植物、多年生植物、柳枝稷植物，玉米植物、生物质植物或甘蔗植物。
89.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物选自由以下项组成的组：柳枝稷、芒草、苜蓿、甜高粱、高粱、甘蔗、能源甘蔗、象草、玉米、木薯、豇豆、小麦、大麦、燕麦、稻、大豆、油棕、红花、芝麻、烟草、亚麻、棉花、向日葵、亚麻荠、甘蓝型油菜、埃塞俄比亚芥、芥菜、珍珠粟、小米、其他谷物、稻、油籽、蔬菜作物、饲料作物、工业作物、木本作物或生物质作物。
90.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是烟草(Nicotianatabacum)。
91.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是玉米(Zea mays)。
92.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是稻(Oryza sativa)。
93.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是高梁(Sorghumbicolor)。
94.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是大豆(Glycine max)。
95.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是豇豆(Vignaunguiculata)。
96.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是杨属物种(Populusspp.)。
97.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是桉属物种(Eucalyptusspp.)。
98.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是木薯(Manihotesculenta)。
99.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是大麦(Hordeumvulgare)。
100.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是马铃薯(Solanumtuberosum)。
101.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是甘蔗(Saccharumspp.)。
102.根据权利要求52至87中任一项所述的方法，其中所述植物是紫花苜蓿(Medicagosativa)。
103.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，VDE的转录物水平增加3倍，其中与对照植物相比，PsbS的转录物水平增加3倍，并且其中与对照植物相比，ZEP的转录物水平增加8倍。
104.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，VDE的转录物水平增加10倍，其中与对照植物相比，PsbS的转录物水平增加3倍，并且其中与对照植物相比，ZEP的转录物水平增加6倍。
105.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，VDE的转录物水平增加4倍，其中与对照植物相比，PsbS的转录物水平增加1.2倍，并且其中与对照植物相比，ZEP的转录物水平增加7倍。
106.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，VDE的蛋白水平增加16倍，其中与对照植物相比，PsbS的蛋白水平增加2倍，并且其中与对照植物相比，ZEP的蛋白水平增加80倍。
107.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，VDE的蛋白水平增加30倍，其中与对照植物相比，PsbS的蛋白水平增加4倍，并且其中与对照植物相比，ZEP的蛋白水平增加74倍。
108.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，VDE的蛋白水平增加47倍，其中与对照植物相比，PsbS的蛋白水平增加3倍，并且其中与对照植物相比，ZEP的蛋白水平增加75倍。
109.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，转录物水平的增加在VDE、PsbS和ZEP之间具有选自以下的比率：3:3:8、10:3:6和4:1.2:7。
110.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，蛋白水平的增加在VDE、PsbS和ZEP之间具有选自以下的比率：16:2:80、30:4:74和47:3:75。
111.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，VDE的转录物水平的增加为约3倍至约10倍，其中与对照植物相比，PsbS的转录物水平的增加为约1.2倍至约3倍，并且其中与对照植物相比，ZEP的转录物水平的增加为约6倍至约8倍。
112.根据权利要求1至33中任一项所述的转基因植物，其中与对照植物相比，VDE的蛋白水平的增加为约16倍至约47倍，其中与对照植物相比，PsbS的蛋白水平的增加为约2倍至约4倍，并且其中与对照植物相比，ZEP的蛋白水平的增加为约74倍至约80倍。
113.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE的转录物水平增加3倍，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中PsbS的转录物水平增加3倍，并且其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中ZEP的转录物水平增加8倍。
114.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE的转录物水平增加10倍，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中PsbS的转录物水平增加3倍，并且其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中ZEP的转录物水平增加6倍。
115.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE的转录物水平增加4倍，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中PsbS的转录物水平增加1.2倍，并且其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中ZEP的转录物水平增加7倍。
116.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE的蛋白水平增加16倍，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中PsbS的蛋白水平增加2倍，并且其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中ZEP的蛋白水平增加80倍。
117.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE的蛋白水平增加30倍，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中PsbS的蛋白水平增加4倍，并且其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中ZEP的蛋白水平增加74倍。
118.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE的蛋白水平增加47倍，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中PsbS的蛋白水平增加3倍，并且其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中ZEP的蛋白水平增加75倍。
119.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE、PsbS和ZEP的转录物水平以选自以下的比率增加：3:3:8、10:3:6和4:1.2:7。
120.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE、PsbS和ZEP的蛋白水平以选自以下的比率增加：16:2:80、30:4:74和47:3:75。
121.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE的转录物水平增加约3倍至约10倍，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中PsbS的转录物水平增加约1.2倍至约3倍，并且其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中ZEP的转录物水平增加约6倍至约8倍。
122.根据权利要求52至64和81至102中任一项所述的方法，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中VDE的蛋白水平增加约16倍至约47倍，其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中PsbS的蛋白水平增加约2倍至约4倍，并且其中增加表达包括与对照植物相比，使所述植物中ZEP的蛋白水平增加约74倍至约80倍。
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