CN109468249A - 一种微生物菌剂及其在畜禽养殖上的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明具体公开了一种微生物菌剂，具体是公开了由一株猪源地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH‑02制备的微生物菌剂及在畜禽养殖上的应用。本发明的该菌种已在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO．15454，保藏日期为2018年3月15日。本发明的地衣芽孢杆菌YHSH‑02是从野猪肠道中分离获得的，能产生丰富的脂肽类杆菌素，抗菌蛋白等，能抑制大肠杆菌，铜绿假单胞菌，粪肠球菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌；本发明从野猪肠道获得的地衣芽孢杆菌YHSH‑02是一株防治效率高、防治范围广的能显著促生长的生物防治潜力菌株，在无抗养殖中具有良好的应用开发前景。

Description

一种微生物菌剂及其在畜禽养殖上的应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，涉及一种微生物菌剂及其在畜禽养殖上的应用，具体是由地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH-02发酵制备而成的一种微生物菌剂及其在畜禽养殖上的应用。
背景技术
虽然抗生素等添加剂能够有效预防畜禽疾病，但抗生素的滥用引起病菌产生耐药性、环境污染及药物残留等不利影响，加之人们对食品安全的要求，近年来，欧洲己有许多国家禁止使用抗生素作为饲料添加剂，各国学者着力于研究抗生素的理想替代品。微生态制剂作为一种饲料添加剂，不仅能够防病治病，促进动物生长，而且具有无污染、无残留及无抗药性的特点，是抗生素无法比拟的。地衣芽孢杆菌是常用微生态制剂之一，芽孢杆菌是一
类好氧或兼性厌氧菌，可产生芽孢，能够耐酸耐碱、耐高温和高压，具有较高的稳定性。它们在动物消化道内的繁衍及代谢，能够产生多种维生素、氨基酸、有机酸、蛋白质和多种有效的酶等，参与机体的新陈代谢，有助于动物对饲料中营养物质的消化吸收，从而促进动物生长;同时还具有生物拮抗功能，通过消耗肠道中的游离氧来维持肠道的厌氧环境，可以有效抑制动物肠道有害菌的繁殖，维持消化道菌群平衡。目前市场上己有大量芽孢杆菌制剂，但目前芽孢杆菌饲料添加剂在促生长防病方面效果不够显著，还是不能完全替代抗生素，而价格却高于抗生素，成为了取替抗生素的瓶颈。
养殖业滥用抗生素问题已严重影响了养殖业健康发展并对人体健康和环境均构成威胁。各国政府纷纷出台措施禁止以促生长为目的的抗生素在饲料添加剂中应用。2015年9月1日，农业部发布2292号公告，明确提出4类抗生素严禁在食用动物中使用。禁用饲用抗生素之后急需找到能够替代抗生素的无毒、无公害、且能够促进养殖动物健康、快速生长的饲料添加剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种微生物菌剂，具体是提供一种由一株可拮抗多种畜禽病原菌，能显著促生长的猪源地衣芽孢杆菌发酵而成的一种微生物菌剂；经过试验，该菌在0-7%的盐度中都能生长良好，并且对多种畜禽养殖病原菌如大肠杆菌，铜绿假单胞菌，粪肠球菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌具有显著抑制作用，该菌种已在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO．15454，保藏日期为2018年3月15日。
另一方面，本发明目的是提供一种地衣芽孢杆菌在制备拮抗畜禽养殖病原菌并促进畜禽生长的生物制品中的应用。
其中，所述的应用，其特征在于，所述的生物制品为发酵菌液或菌粉。其发酵菌液或菌粉可按现有发酵技术制备，本发明提供制备方法为:
一、取出地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH-02菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量，接种至装液量为2LLB培养基的5L大三角瓶中， 37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，活菌含量超过20亿/毫升，即可作为地衣芽孢杆菌液体菌种；
二、将步骤一培养的地衣芽孢杆菌液体菌种作为种子，接种至600L发酵培养基，接种量为10%，开搅拌120r/min，每分钟通气量液气比1：0.8，37℃培养24-36小时，待芽孢含量不低于150亿CFU/ml，即可结束发酵，无菌灌装得到成品地衣芽孢杆菌菌剂；或得到发酵液后加上糊精进行喷雾干燥，得到地衣芽孢杆菌粉剂，其粉剂芽孢含量不低于100亿CFU/g；
其中所述LB培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%；
其中所述发酵培养基：豆粕粉70 g/L，鱼粉10 g/L，玉米浆粉10 g/L，葡萄糖5g/L，可溶性淀粉10 g/L，硫酸镁0.3 g/L，硫酸锰0.05 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，碳酸钙5 g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
本发明的效果：本发明的地衣芽孢杆菌YHSH-02是从野猪肠道中分离获得的，能产生丰富的脂肽类杆菌素，抗菌小肽等，能抑制大肠杆菌，铜绿假单胞菌，粪肠球菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌等多种畜禽养殖病原菌的生长，并能促进畜禽的快速生长，缩短养殖时间，降低养殖成本，真正做到无抗养殖。
本发明地衣芽孢杆菌液具有免疫增强作用，属实际无毒类物质，安全度大。
本发明从野猪肠道获得的地衣芽孢杆菌YHSH-02是一株防治效率高、防治范围广的并具有显著促生作用的生物防治潜力菌株，在无抗养殖中具有良好的应用开发前景。
以本发明的地衣芽孢杆菌YHSH-02复配之后的饲料添加剂饲喂白羽肉鸡，42天出栏时体重与市场芽孢组，抗性素组（维吉尼亚霉素）比较均有显著差异。比维吉尼亚霉素增重156克/只，增重6.02%；比市场芽孢菌组增重115克/只，增重4.36%；市场芽孢组比维吉尼亚霉素增重41克/只，增重1.58%，差异不显著。并且经过多次重复试验过可以确定完全替代抗生素的使用，并保持成活率不低于97%，且同等养殖饲料与成本下，可比抗生素组个体可增重5%以上，可以做到“无抗”养殖，这对于中国养殖业会具有重大意义。
本发明微生物菌剂（地衣芽孢杆菌YHSH-02）在减少断奶仔猪腹泻率与死淘率试验中效果显著，试验组的死淘率只有1.6%，而对照组的死亡率达到10.4%,其僵猪率达到了9.6%，因此其死淘率达到了20%，具有显著经济效益。
具体实施方式
实施例1地衣芽孢杆菌的分离
2014年12月，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株是在湖南省隆回县滩头镇野外的野生野猪的肠道内容物中分离得到的。具体方法是：取野生野猪的肠道内容物加入盛有10mL灭菌水的三角瓶中，震荡培养30min (200r/min)，然后取悬浮液1mL置于9mL无菌水中，制成10-2稀释悬浮液，依次类推，制成10-5，10-6稀释悬液；在其中各吸取100 u L，加到营养肉汤培养基平板，MRS培养基，PDA培养基上，用涂布棒涂布均匀，每个处理重复3次。将上述培养皿，置于37℃恒温培养箱中培养1-2d（PDA培养基置30℃下培养）。挑选单菌落转接到对应的培养基上培养，长出菌落后，用接种环进行划线分离纯化，纯化菌株于4℃保存。总共分离得到218个形态有差异单菌落。
其中的分离、纯化获得的YHSH-02菌株在营养肉汤培养基上单细胞繁殖生长形成的菌落为杏仁白色，湿润有光泽，略有放射状条纹，培养48小时后，培养基上有明显产棕色色素；细胞形状为杆状，细胞大小为0.6 um -0.8um×1.5 um -3.5 um；两端钝圆，形成芽孢，芽孢近椭圆形，中生，具有周生鞭毛，能运动。不形成伴孢晶体；好氧与厌氧都能生长；可液化明胶，水解淀粉，V-P反应、接触酶反应，酪素分解反应，牛奶胨化反应为阳性；卵黄反应，吲哚反应，苯丙氨酸脱氨反应，酪氨酸分解反应，牛奶凝固反应为阴性；能利用葡萄糖，木糖，L-阿拉伯糖，甘露糖等。最适PH为5.5-8.7，最适生长温度为25-38℃，0-7%的盐度中都能生长良好，生长温度范围15-55℃，通过16s rDNA鉴定为地衣芽孢杆菌。
实施例2本地衣芽孢杆菌对常见致病菌的体外抑菌效果
具体实验方法如下：
1、YHSH-02菌悬液的制备:取斜面种子，接种至50m1灭菌TSB液体培养基中，恒温摇床震荡培养18h(培养温度30 ℃，转速200rpm)；将菌悬液8m1于l0ml灭菌离心管中，备用，均为现做现用。
2、大肠杆菌菌等致病菌的菌悬液的制备
(1)挑取斜面菌苔一环接种至50m1 TSB液体培养基，摇床震荡培养18h(培养温度
30 0C，转速140rpm);
(2取上述菌悬液5m1重新接种至50m1新配TSB液体培养基，摇床震荡培养18h
(培养温度30 0C，转速140rpm);
(3)离心(5000rpm,l0min)去掉上清，然后用生理盐水调整菌体浓度约1.0×108cfu/ml，取0.1 ml均匀涂板。
3、测定方法
(1)取上述制备好的大肠杆菌菌悬液108 cfu/ml其他病原菌按同样的方法进行试验)
0.1 ml，均匀涂布于TSA平板表面(每个平板约30m1 TSA固体培养基);
(2)用打孔器在涂有病原菌的琼脂培养基上均匀的打五个孔，打孔器的直径约
7mm；
(3)然后在琼脂孔中分别加入下述液体(约0.2 ml /孔)菌悬液、生理盐水阴性对照;
(4)将上述平板置恒温培养箱培养24h-48h，然后观察结果测量抑菌圈直径。实验
结果见表1。
结果表明，地衣芽孢杆菌YHSH-02对畜禽养殖中的病原菌如大肠杆菌，铜绿假单胞菌，粪肠球菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌等都具有明显的抑制效果。
表1.地衣芽孢杆菌对病原菌的体外抑菌效果
病原菌 菌悬液 阴性对照（无菌生理盐水
大肠杆菌 33±2 7
铜绿假单胞菌 30±2 7
粪肠球菌 23±1 7
阴沟肠杆菌 27±1 7
绿脓杆菌 31±1 7
变形杆菌 26±1 7
金黄色葡萄球菌 32±2 7
沙门氏菌 29±1 7
梭状芽孢杆菌 22±1 7
实施例3微生物菌剂（地衣芽孢杆菌制剂）的制备
一、取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量，接种至装液量为2LLB培养基的5L大三角瓶中， 37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，活菌含量超过20亿/毫升，即可作为地衣芽孢杆菌液体菌种；
二、将步骤一培养的地衣芽孢杆菌液体菌种作为种子，接种至600L发酵培养基，接种量为10%，开搅拌120r/min，每分钟通气量液气比1：0.8，37℃培养24-36小时，待芽孢含量不低于200亿CFU/ml，即可结束发酵，无菌灌装得到成品地衣芽孢杆菌菌剂；或得到发酵液后加上糊精进行喷雾干燥，得到地衣芽孢杆菌粉剂，其粉剂芽孢含量不低于200亿CFU/g；
其中所述LB培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%；
其中所述发酵培养基：豆粕粉70 g/L，鱼粉10 g/L，玉米浆粉10 g/L，葡萄糖5g/L，可溶性淀粉10 g/L，硫酸镁0.3 g/L，硫酸锰0.05 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，碳酸钙5 g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
实施例4地衣芽孢杆菌的安全性试验
本发明实施例2生产的地衣芽孢杆菌液在邵阳学院经大鼠急性毒性试验，结论结果表明地衣芽孢杆菌液对大鼠（按0.6ml/10g体重饲喂本发明地衣芽孢杆菌液14天）效果：大鼠全部存活,活动自如,毛发光滑,饮食正常,呼吸道、眼及口腔等处无分泌物外，未发现任何中毒症状，体重均有增加。与空白组对照组，比较，饲喂本地衣芽孢杆菌液的大鼠体重明显增加（P＜0.001）。14天观察期结束，将大鼠脱臼处死解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、肠、小肠等脏器均未见明显异常表现。另外，大鼠胸腺系数和脾脏系数结果表明，与空白对照组比较，地衣芽孢杆菌液试验组大鼠脾脏系数明显增加（P＜0.01），提示本地衣芽孢杆菌液具有免疫增强作用，属实际无毒类物质，安全度大。
实施例5 地衣芽孢杆菌抑菌物质分析
1小肽含量的测定
准确称取取发酵液6g于100ml烧杯中，准确加入15%三氯乙酸溶液50ml，混合均匀，静置5min，以中速定性滤纸过滤，弃去少许初始滤液，将滤液转移至离心管，在4000r/min下离心10min,准确移取其上清液10于消化管中，按粗蛋白测定方法测定其粗蛋白含量，同时做空白试验，测定未接种发酵液（培养基）的粗蛋白含量。
2抗菌小肽的粗提取--硫酸铵不同饱和度盐析
分别取100 ml发酵液静置于冰浴中，分别加入硫酸钱固体至20%, 30%, 40%,50%,60%, 70%, 80%饱和度，静置过夜，次日离心收集沉淀，将分别将沉淀溶于l0ml磷酸缓冲液((PB)(0.01mol/L, pH6.8)中，透析浓缩后，杯碟法测定其抗菌（大肠杆菌）活性。
3其他抑菌活性物质的粗提取
取120m1发酵液调pH值至2-3，加入等量乙酸乙酯萃取三次，并将萃取液用滤纸过滤后，40℃下旋转蒸干，得到淡黄色粗提物，用少量乙酸乙酯溶解，有机系微孔滤膜(孔径0.45μm)过滤去残渣，将上清定容至5ml，即抑菌活性物质粗提物，4℃密封保存。
4抑菌活性物质化学结构分析
(1) 薄层层析(TLC)
毛细管取少量粗提物点样在硅胶G板上(20 cm×5cm×0.25cm)边缘1.0- 1.5cm处，室温晾干，氯仿:甲醇:冰醋酸:水二6:3:1:1作为展开剂，首先将在展开剂里浸泡过的滤纸条粘贴在层析缸四壁上，向层析缸内加入展开剂，挥发10-30min，待层析缸被展开剂完全饱和后，将点好样的硅胶G板60℃倾斜放入在层析缸中，溶剂前沿低于样点，上行法展层，在展开剂前沿距硅胶G板顶部 1.0-2.0 cm时取出薄板，记好溶剂前沿，干燥后碘显色。将每个斑点对应组分刮下，用lml甲醇浸提，杯碟法测其抑菌活性，并计算各组分的Rf值。同时做硅胶G空白对照。
(2) 官能团显色反应
将抗菌活性物质粗提物薄板展层后干燥，分别用茚三酮试剂、苯酚-硫酸试剂、钼酸铵-高氯酸显色试剂、2，4-二硝基苯肼试剂、三氯化铁试剂、磷钼酸试剂、对氨基苯磺酸试剂喷雾显色，测其组分。
3结果：
地衣芽孢杆菌YHSH-02 菌株的发酵液经过检测，其小肽含量（35.92g/L）占总初始蛋白（42.2g/L）的85.12%，说明本地衣芽孢杆菌产生丰富的蛋白酶，能基本上将豆粕与鱼粉中的蛋白基本上转变为小肽物质，
我们试验发现，硫酸铵饱和度低于30%，高于80%时，盐析得到的粗蛋白很少，稍微有一点也是无抑菌性的杂蛋白。从表2可以看出，硫酸铵饱和度在30%-80%范围内有大量抗菌蛋白析出；采取直接加硫酸铵达到终点饱和度的方法，硫酸铵饱和度达到50%时粗提蛋白的抑菌活性最强，抑菌圈直径高达36.9mm。硫酸铵饱和度60%时，抑菌性次之，抑菌圈直径为32.9mm。
表2不同硫酸铵饱和度沉淀小肽蛋白抑菌效果
硫酸铵浓度（%） 20 30 40 50 60 70 80 90
抑菌圈直径（mm） 0 25.5 20.4 36.9 32.9 22.4 15.3 0
地衣芽孢杆菌YHSH-02菌株的发酵液经过盐处理后，离心取上清进行抑菌效果测定，试验结果显示上清液仍具有抑菌活性。发酵液经过80%饱和度的硫酸铵沉淀后，同时其发酵液离心取上清进行抑菌效果测定，试验结果显示上清液仍具有抑菌活性。发酵液经过80%饱和度的硫酸铵沉淀后，上清测得具有抑菌活性，说明地衣芽孢杆菌YHSH-02菌株的胞外代谢物中除了抗菌蛋白外还存在其他抑菌活性物质，如细菌素、多肽类等中的一种或几种。本试验初步确定地衣芽孢杆菌YHSH-02菌株胞外代谢物中除抗菌蛋白之外还有其它抑菌活性物质。
测定结果(见表3)表明，由乙酸乙酯提取的抑菌物质，有机粗提物经过纸层析和生物显影显示有抑菌圈，茚三酮试剂反应呈阳性，在硅胶薄板上Rf0.84处出现红色斑点，推断该物质为多肽类或氨基酸类物质；苯酚-硫酸试剂显棕色，在硅胶薄板上Rf0.47处出现棕色斑点，说明有糖脂类物质，具有抑菌活性；钼酸铵-高氯酸显色剂呈阳性反应，在硅胶薄板Rf0.47处出现蓝黑色斑点，Rf0.58处出现蓝色斑点，说明存在糖脂、磷脂类物质，具有抑菌活性；磷钼酸试剂在薄板Rf0.84处出现斑点，说明抑菌活性物质为还原性物质；三氯化铁试剂反应呈阳性，在硅胶薄板Rf0.84处出现绿色斑点，显示该物质含有酚环；2, 4一二硝基苯肼试剂反应呈阳性，显示该物质含活泼羰基，但没有抑菌活性；对氨基苯磺酸试剂反应呈阳性，显示该物质存有胺类及能偶合的杂环化合物。根据层析板显色反应初步分析该抑菌活性物质可能为肽类物质，糖脂类，磷脂类物质。
表3通过不同试剂定性检验其抑菌物质及抑菌效果
显色剂 存在物质 结果 抑菌性
茚三酮试剂 肽类、氨基酸类物质 + +
苯酚-硫酸试剂 糖脂类 + +
钼酸铵-高氯酸显色剂 磷脂类 + +
磷钼酸试剂 还原性物质、类脂等 + +
三氯化铁试剂 酚类物质 + -
2，4-二硝苯肼试剂 醛类物质 + -
对氨基苯磺酸试剂 酚类、胺类和能偶合的杂环化合物 + +
实施例6本发明微生物菌剂（地衣芽孢杆菌YHSH-02）作为饲料添加剂饲喂畜禽可以有效地提高免疫力，促进动物生长。
试验：本次试验在河北定州某白羽肉鸡养殖场；三个组初始数量为3000只。分别为地衣芽孢杆菌YHSH-02实验组：饲料中每吨加0.1%200亿CFU/g地衣芽孢杆菌YHSH-02；市场地衣芽孢杆菌对照组：饲料中每吨加0.1%200亿CFU/g购自山东X蓝生物公司地衣芽孢杆菌、抗生素组（维吉尼亚霉素）。实验从2017年10月5日开始，到11月17日结束，整个周期为42天，出栏时为42日龄。2017-11-17 42日龄称重，称重结果为屠宰场收购肉鸡时提供。因感冒腹泻使用了抗生素。市场芽孢组服用5天，抗生素组服用9天。不限食不限水，天冷饮水量减少。其饲料与其他操作都相同。
结果：试验过程中，明显试验组地衣芽孢杆菌的鸡饮食，鸡舍臭味较少，特别是其他鸡舍的鸡出现感冒腹泻时，试验组的鸡都正常没有出现问题，这是没有想到的。因此，试验组全程没有使用过抗生素，而市场地衣芽孢杆菌组出现了感冒腹泻，因此使用了5天的抗生素治治疗；但比抗生素组也治疗时间明显短一些，且鸡饮食，鸡舍臭味比抗生素组也要好。试验结果如表4出栏时实验组的总重为8029.28公斤，单只体重2.748公斤，出栏率97.4%；地衣芽孢杆菌对照组的总重为7540.91公斤，单只体重2.633公斤，出栏率95.46%，抗生素费用0.65元/只；抗生素组的总重为7272.12公斤，单只体重2.592公斤，出栏率93.53%，抗生素费用1.18元/只。按照收购价6元/公斤计算，实验组比抗生素组多收入4542元，每只增收2.69元（平均每只多收入1.51元+抗生素多投入1.18元）以上；实验组比市场芽孢组多收入2930.22元，每只增收1.63元（平均每只多收入0.98元+抗生素多投入0.65元）。
以地衣芽孢杆菌YHSH-02复配之后的饲料添加剂饲喂白羽肉鸡，42天出栏时体重与市场芽孢组，抗性素组（维吉尼亚霉素）比较均有显著差异。比维吉尼亚霉素增重156克/只，增重6.02%；比市场芽孢菌组增重115克/只，增重4.36%；市场芽孢组比维吉尼亚霉素增重41克/只，增重1.58%，差异不显著。并且经过多次重复试验过可以确定完全替代抗生素的使用，并保持成活率不低于97%，且同等养殖饲料与成本下，可比抗生素组个体可增重5%以上，可以做到“无抗”养殖，这对于中国养殖业会具有重大意义。
表4 地衣芽孢杆菌YHSH-02在白羽肉鸡上使用效果
实施例7本发明微生物菌剂（地衣芽孢杆菌YHSH-02）饲喂小鹿试验
选雌雄数相同，体重相近的小鹿各20只分栏试验，实验组：饲料中添加饲料中每吨加0.1%200亿CFU/ml地衣芽孢杆菌YHSH-02菌液；对照组1：饲料中添加饲料中每吨加0.1%实施例3地衣芽孢杆菌YHSH-02未发酵的培养基液；对照组2：常规饲料；试验开始时间为2018.3.01，结束时间为2018.4.10（共持续40天）饲喂40天。
表5地衣芽孢杆菌YHSH-02在小鹿上使用效果
分组 初始平均体重 试验结束平均体重 平均增重 增重率
试验组 36.71 42.99 6.28 38.32%
对照组1 37.02 41.60 4.58 0.88%
对照组2 36.98 41.52 4.54
从表5可以看出，实验组体重比对照组1平均增重1700克/头，且差异显著（P＜0.05）；每日饲料平均2.3 公斤/头，地衣芽孢杆菌YHSH-02饲料添加剂添加比例为0.1%，40天添加剂成本不到2元/头；鹿肉收购价为100元/公斤，实验组比对照组可增收170元/头；扣除饲料添加剂的成本1元/头，试验组比对照组可增收169元/头，其经济效益非常显著。
实施例8本发明微生物菌剂（地衣芽孢杆菌YHSH-02）饲喂肉猪的试验
广西玉林市某镇，用100头中猪阶段的小猪做饲喂实验，实验组50头小猪，地衣芽孢杆菌YHSH-02饲料添加剂的添加比例为0.1%，对照组50头小猪，常规饲料，饲喂时间20天（90-110日龄）。
表6地衣芽孢杆菌YHSH-02饲喂肉猪的试验结果
实验结果：从表6可以看出，实验组比对照组多增重2.9公斤/头，料肉比下降特别明显，试验组饲料仅仅只多喂了19公斤，但总增重了145公斤猪体重，试验组料肉比为1.929:1，且毛色发亮，粪便成型不腹泻，而对照组则达到了2.307:1。用户比较满意。地衣芽孢杆菌YHSH-02饲料添加剂成本1.8元/头，肉猪收购价为14元/公斤。使用地衣芽孢杆菌YHSH-02饲料添加剂之后，可增收38.8元/头。地衣芽孢杆菌能是显提高肉料比，降低饲料成本。
实施例9：本发明微生物菌剂（地衣芽孢杆菌YHSH-02）在减少断奶仔猪腹泻率与死淘率试验
为改善断奶保育猪的健康状态，减少断奶造成的仔猪的腹泻率与死淘率,减少僵猪率,在湖南省隆回县某养殖场利用地衣芽孢杆菌YHSH-02菌液进行断奶仔猪试验。
选择25日龄健康无病的杜洛克断奶仔猪1000头，公/母猪各半，按体重相近、性别比例相同的原则随机分2个处理组每个组为500头。实验组：断奶开始后全程饲喂加了0.2%200亿CFU/ml地衣芽孢杆菌YHSH-02菌液的乳猪饲料；对照组为加0.2%实施例3地衣芽孢杆菌YHSH-02还未发酵的培养基液的乳猪饲料，并加入适量金霉素。其它操作饲料相同。2018年4月10日至2018年4月30日，共20天.
实验结果：试验结果如表7，从表7可以看出,饲喂地衣芽孢杆菌YHSH-02菌液的实验组平均日采食量每头猪比对照组只多采食了6.8克饲料。但从日平均增重来看，实验组每头猪比对照组的每头猪每天多增重50克左右，这说明猪采食地衣芽孢杆菌YHSH-02菌液后,饲料的利用率大大增加。
从表7腹泻率也可以看出，实验组腹泻率仅仅5.6%，而对照组的腹泻率达到了33.2%。主要原因可能是本发明中地衣芽孢杆菌中含有大量的小肽与氨基酸之类的物质，可能含有猪表皮生长因子之类的多肽类物质，大大促进了猪肠道粘膜的扩展发育，提高了其肠道本身的吸收功能；另外，本发明的地衣芽孢杆菌在繁殖过程中，产生大量的蛋白酶与淀粉酶，能较好的降解乳猪饲料原料中豆粕之类的抗胰蛋白酶因子，并将豆粕的部分蛋白降解成仔猪更易吸收的小肽等成份，同时将饲料中的淀粉质原料降解成更易分解利用的糊精与多糖，增强了饲料的仔猪肠道吸收能力，减少了由于外部抗原而引起的应激；尤其重要的是本发明的地衣芽孢杆菌YHSH-02能产生多种抗菌蛋白，小肽与脂肽类杆菌素，对多种病原菌如大肠杆菌，铜绿假单胞菌，粪肠球菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌具有显著抑制作用，从而对抑制仔猪腹泻有明显的效果。
最重要的，从表7中死淘率与僵猪率可以看出，试验组的死淘率只有1.6%，而对照组的死亡率达到10.4%,其僵猪率达到了9.6%，因此其死淘率达到了20%。从性价比分析：从死淘率分析，实验组各对照组相差约18%，按照100头保育猪计算，有约18头的差距，18头保育猪按照一头300元计算，一共4800元的差距，100头保育猪饲喂饲料的量约为1吨饲料,所添加地衣芽孢杆菌YHSH-02 2公斤，加上人工与混合成本低于200元，则可多获利4600元。经济效益极其显著。
表7地衣芽孢杆菌YHSH-02在减少断奶仔猪腹泻率与死淘率试验
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。

Claims (4)

1.一种微生物菌剂，其特征在于，此微生物菌剂是由地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH-02发酵制备而成，其中，该菌种已在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO．15454，保藏日期为2018年3月15日。
2.根据权利要求1所述的一种微生物菌剂，其特征在于，该微生物菌剂在制备拮抗畜禽养殖病原菌并促进畜禽生长的生物制品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的畜禽养殖病原菌为大肠杆菌，铜绿假单胞菌，粪肠球菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的生物制品为发酵菌液或菌粉。
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