CN101986865A - 一种禽用地衣芽孢杆菌制剂的制备 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法，把地衣芽孢杆菌培育后加轻质碳酸钙脱水干燥，并用葡萄糖和白色淀维粉稀释成每克含100亿活菌的制剂，在临床上可用于治疗由大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等引起的腹泻和菌群失调。该制剂的稳定性高，贮藏简单，有利于长期使用。

Description

一种禽用地衣芽孢杆菌制剂的制备

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体的说是提供一种作为饲料添加剂的地衣芽孢杆菌制剂的制备方法。

背景技术

微生态饲料添加剂是根据微生态学理论研制的含有对动物有益微生物的活菌制剂，它们通过维持动物肠道内微生态平衡而发挥作用，具有促进动物生长发育，提高动物机体免疫力等多种功能，且无污染、无残留、无耐药性和对环境无害等，是一类新型绿色环保饲料添加剂。这些禽畜用的益生菌制剂含有芽孢杆菌，乳酸杆菌，粪链球菌，双歧杆菌，酵母等，光合细菌和梭状芽胞杆菌属的部分菌株及噬菌蛭弧菌等也偶然被用做益生菌添加到仔猪和仔鸡饲料中。

活菌制剂始于上世纪初，有人用酸牛奶来调整幼畜腹泻出现的肠道微生物菌群失调。后来，在研究中人们发现用活菌制剂可防止畜禽的腹泻和肠炎，继之又发现活菌制剂还可改善动物对饲料的利用，并有利于促进畜禽的生长发育和肠道健康，从而扩大了活菌制剂在畜牧生产中的作用和应用前景，概括起来，主要有以下几个方面的作用：

改善动物胃肠道微生态环境：研究表明，动物自身及许多致病菌不会产生各种有毒物质，如胺、氨、细菌毒素、氧自由基等代谢产物。有些有益菌可以阻止毒性胺和氨的合成或把它们分解中和细菌毒素，从而避免这些有害物质对动物机体组织细胞的损害作用。一些好氧菌则通过产生超氧化物歧化酶来消除氧自由基，减少或消除氧自由基对细胞及细胞器膜质结构的损害。乳酸菌能够产生有机酸和抗菌物质，降低肠道内pH值值和氧化还原电位，有利于宿主生长发育和维持肠道健康。

产生有益物质：动物微生态活菌制剂能够在动物体内产生各种消化酶，合成B族维生素、维生素K等动物所必需的营养物质；同时能促使动物体增加对肠道内容物中钙、镁等营养物质的吸收。

建立和维持肠道微生态平衡：研究表明，动物肠道内寄居的微生物，主要为厌氧菌。通常情况下，肠道内有益菌和致病菌会保持一定比例，当条件发生改变时，致病菌大量繁殖引起平衡失调，从而导致动物体患病。当需氧型益生菌进入消化道后，生长繁殖消耗肠道内大量氧气，通过“生物夺氧”使需氧型致病菌大幅度下降，因而起到防止动物患病的作用。研究还发现，益生菌能够有秩序地定植于粘膜、皮肤等表面或细胞之间形成生物屏障，这些屏障可以阻止病原微生物的定植，起着占位、争夺营养。互利共生或拮抗作用，形成保护屏障，阻止病原菌的侵入，从而对致病菌的定植产生抑制作用。增强动物免疫能力和促进动物生长：微生态制剂可作为非特异性免疫调节因子，增强吞噬细胞的吞噬能力和细胞产生抗体的能力，刺激动物产生干扰素，从而增强抗病能力。据报道，用活菌微生态制剂——益生素饲喂哺乳仔猪，添加组腹泻率明显比对照组减少(3.91％，P＜0.01)，成活率提高79％。在10～28日龄的仔猪饲料中添加益生素，试验组采食量平均比对照组增加70g/d，增重提高4.2％。又有研究报道，在雏鸡中分别饲喂和不饲喂乳酸杆菌制剂两个组的基础上，进行鸡的白痢沙门氏菌攻毒试验。结果表明，饲喂乳酸杆菌雏鸡组与对照组相比，死亡率明显降低了20％。还有报道称在鱼虾饲料中添加微生态制剂，可使鱼虾增重提高10％～20％。

在畜牧生产中常用的微生态添加剂，乳酸菌和芽胞杆菌类益生菌为主要的微生态添加剂。与乳酸菌、双歧杆菌等相比，芽孢杆菌的优点在于它对外界不良环境有很强的抵抗力，能耐60℃以上高温，保存时间长(常温下1年以上)，培养容易，便于加工制成各种制剂，效果稳定。本试验采用牛肉汤蛋白胨培养基为培养一级种子，用营养肉汤培养基培养二级种子，用牛肉汤蛋白胨培养基进行连续补料分批发酵方式扩增培养，发酵液经过离心，菌体用轻质碳酸钙吸附在干燥箱中40℃烘干成干粉，再与药用葡萄糖和白色淀维粉稀释制备成微生态制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种能促进畜禽类生长，防治细菌性腹泻及菌群失调的地衣芽孢杆菌制剂的制备方法。

本发明的技术方案概述如下：

(1)用牛肉汤蛋白胨培养基为种子培养基，pH值6.0～8.0，30～37℃有氧条件下培养地衣芽孢杆菌18～24h，成为一级种子；

(2)将一级种子液接种在营养肉汤培养基中培养，pH值6.0～8.0，30～37℃有氧条件下培养18～24h，成为二级种子；

(3)将二级种子液接种在牛肉汤蛋白胨培养基中发酵培养，pH值6.0～8.0，30～37℃有氧条件下，采用连续补料分批发酵方式培养48～72h，培养结束后静置24～48h使芽孢出芽率达到90％以上；

(4)发酵液经常温8000rpm 20min离心，菌体沉淀用轻质碳酸钙吸附，在干燥箱中40℃烘干成干粉；

(5)将上述干粉加入药用葡萄糖和白色淀维粉稀释，研磨混匀制成微生态制剂。

上述步骤(1)所述种子培养时间为优选20h。

上述步骤(3)所述的发酵培养为补料分批式，每隔20h流出60％～80％发酵菌液，并补加等量发酵培养基。

上述步骤(4)所述的离心后的菌体沉淀与轻质碳酸钙以1∶3比例混合，干燥。

上述步骤(5)所述干粉与药用葡萄糖和白色淀维粉的稀释比例为1∶3∶6。

根据本技术方案制备的微生态制剂以1∶5比例拌饲料使用。

本发明的有益效果是：

1、本发明提供的地衣芽孢杆菌微生态制剂对某些致病菌有明显的抑制作用，能调整肠道内的菌群，无毒、无不良反应，使用安全。

2、采用补料式发酵方式使产菌量大大提高，利于工业化大量产生。

3、用本发明的方法制备地衣芽孢杆菌微生态制剂作为饲料添加剂应用于禽类时，可不使用抗生素和激素，并能促进禽类的生长。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的描述。

实施例1：地衣芽孢杆菌制剂的制备方法，包括下述步骤：

(1)用牛肉汤蛋白胨培养基为种子培养基，pH值7.0，37℃有氧条件下培养地衣芽孢杆菌20h，成为一级种子；

(2)将一级种子液接种在营养肉汤培养基中培养，pH值7.0，37℃有氧条件下培养地衣芽孢杆菌20h，成为二级种子；

(3)将二级种子液接种在牛肉汤蛋白胨培养基中发酵培养，pH值7.0，37℃有氧条件下，采用连续补料分批发酵方式培养24h，培养结束后静置24h使芽孢出芽率达到90％以上；

(4)发酵液经常温8000rpm 20min离心，菌体沉淀与轻质碳酸钙1∶3比例混合，吸附，在干燥箱中40℃烘干成干粉，制得800g干粉；

(5)将上述800g干粉加入药用葡萄糖2400g和白色淀维粉4800g稀释，研磨混匀制成微生态制剂8kg。

实施例2：本发明的方法制备的干粉对单纯性鸡大肠杆菌病的治疗

某鸡场饲养蛋鸡5000只，曾于23日龄有50％左右的鸡发生鸡大肠杆菌病，并造成平均约每天1％的死亡率，表现症状为严重腹泻，直到35日龄就诊，其间曾用敌菌净、土霉素等治疗，连用一周病程好转，但停药后又复发，经粪涂片30份，无固定致病原，视野中大多数是革兰氏阴性杆菌。

通过地衣芽孢杆菌微生态制剂1∶5拌料饲喂，以每鸡每天0.3亿活菌剂量投服，7天内全群恢复，采食量由每天每只87g增加至98g。粪涂片20份，视野中95％为革兰氏阳性杆菌，90％杆菌为芽孢杆菌的状态。

临床结果表明，本发明制剂能够降低畜禽由于大肠杆菌等有害微生物造成腹泻的发生率，提高成活率；提高机体免疫功能，提高饲料转化利用率，并具有治疗肠道菌群失调的作用，无毒、无不良反应。

Claims (6)

1.一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

(1)用牛肉汤蛋白胨培养基为种子培养基，pH值6.0～8.0，30～37℃有氧条件下培养地衣芽孢杆菌18～24h，成为一级种子；

(2)将一级种子液接种在营养肉汤培养基中培养，pH值6.0～8.0，30～37℃有氧条件下培养18～24h，成为二级种子；

(3)将二级种子液接种在牛肉汤蛋白胨培养基中发酵培养，pH值6.0～8.0，30～37℃有氧条件下，采用连续补料分批发酵方式培养48～72h，培养结束后静置24～48h使芽孢出芽率达到90％以上；

(4)发酵液经常温8000rpm 20min离心，菌体沉淀用轻质碳酸钙吸附，在干燥箱中40℃烘干成干粉；

(5)将上述干粉加入药用葡萄糖和白色淀维粉稀释，研磨混匀制成微生态制剂。

2.根据权利要求1所述的一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法步骤(1)中种子培养时间优选为20h。

3.根据权利要求1所述的一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法步骤(3)中所述的培养方式为连续补料分批培养方式，每隔20h流出60％～80％发酵菌液，并补加等量发酵培养基。

4.根据权利要求1所述的一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法步骤(4)中所述的发酵液离心后的菌体沉淀与轻质碳酸钙以1∶3比例混合，进行干燥。

5.根据权利要求1所述的一种禽类地衣芽孢杆菌制剂的制备方法步骤(5)中所述干粉与药用葡萄糖和白色淀维粉的稀释比例为1∶3∶6。

6.根据权利要求1所述的一种禽类地衣芽孢杆菌制剂，以1∶5比例拌饲料使用。