CN109432499A - 一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明实施例公开了一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，包括制取自体纤维组织悬浮液、进行消化反应、盐析和注射剂合成。本发明实施例提供的结合私密修复自体胶原蛋白注射剂的制备方法，通过自体胶原蛋白注射的方式可在解决随着年龄增长，阴部皮肤日益松皱问题的同时，避免了对皮肤产生排斥反应、给皮肤造成伤害的问题；且胶原蛋白广泛存在于动物的结缔组织中，提取方便，生产成本低，有利于工业化生产。
Description
技术领域
本发明实施例涉及医疗领域，具体涉及一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法。
背景技术
阴道是连接女性内、外生殖器的一条非常重要的管道。上端连着子宫，下端是阴道口，是一个开放性的腔道，是女性重要的微生态区，微环境复杂而不稳定，是身体上唯一一个每个月都会有明显不同变化的器官。阴道的角质层比较薄，有毛发的保护，也有一些汗腺和特殊的皮脂腺体，维持阴部皮肤的酸碱度和润滑性。随着年龄增长，阴部皮肤日益松皱，给人们的生活带来不良影响。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，用以解决现有随着年龄增长，阴部皮肤日益松皱的问题。
为实现上述目的，本发明实施例的技术方案为：一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡，期间不停搅拌直至成糊状；将糊状的自体纤维组织粉碎并放入超纯水中，获得自体纤维组织悬浮液，向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物，混合物的浓度为0.4mg/mL，备用；
步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应，消化反应结束后静置分层，将上层悬浮液放入离心机中离心，收集上清液，备用；
步骤三、将步骤二收集的上清液与NaCl溶液混合，之后进行离心，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液；
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液浓缩、过滤除菌，之后与吐温80、透明质酸溶液、柠檬酸溶液混合，制成自体胶原蛋白注射剂，并于低温下保存即可。
在一些实施方案之中，步骤四中粗制自体胶原蛋白原液浓缩的方法包括将粗制自体胶原蛋白原液放入透析袋中，在透析袋外放置聚乙烯吡咯进行浓缩。
在一些实施方案之中，步骤四中粗制自体胶原蛋白原液过滤除菌的方法包括在温度为4—8℃的情况下，将粗制自体胶原蛋白原液浸入质量浓度为0.5—2.0mg/mL的乙酸溶液中溶解10—12h。
在一些实施方案之中，自体胶原蛋白注射剂于温度为0—10℃下保存。
在一些实施方案之中，步骤二中胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶，之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液。
在一些实施方案之中，所述的步骤二包括将上层悬浮液放入转速为3500—5000r/min的离心机中离心，收集上清液，重复上述离心过程3—5次，收集上清液，备用。
在一些实施方案之中，所述的步骤三包括将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合，在转速为3000-1000r/min的离心机中离心5-30min，弃去上清液，沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解，之后重复离心3—5次，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液。
在一些实施方案之中，步骤四中所述透明质酸溶液的质量百分比浓度为2-10％，所述柠檬酸溶液的质量百分比浓度为0.6-4％。
在一些实施方案之中，所述的步骤四中吐温80的质量百分比浓度为0.5—1％。
有技术相比，本发明实施例具有如下优点：本发明实施例提供了一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，通过自体胶原蛋白注射的方式可在解决随着年龄增长，阴部皮肤日益松皱问题的同时，避免了对皮肤产生排斥反应、给皮肤造成伤害的问题；且胶原蛋白广泛存在于动物的结缔组织中，提取方便，生产成本低，有利于工业化生产。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
实施例1
本实施例公开一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡，期间不停搅拌直至成糊状；将糊状的自体纤维组织粉碎并放入超纯水中，获得自体纤维组织悬浮液，向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物，混合物的浓度为0.4mg/mL，备用；
步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应，消化反应结束后静置分层，将上层悬浮液放入转速为3500r/min的离心机中离心，收集上清液，重复上述离心过程3次，收集上清液，备用；
步骤三、将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合，在转速为3000r/min的离心机中离心5min，弃去上清液，沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解，之后重复离心3次，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液；
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液浓缩、过滤除菌，之后与吐温80、透明质酸溶液、柠檬酸溶液混合，制成自体胶原蛋白注射剂，并于温度为0℃下保存即可。
进一步的，步骤四中粗制自体胶原蛋白原液浓缩的方法包括将粗制自体胶原蛋白原液放入透析袋中，在透析袋外放置聚乙烯吡咯进行浓缩；粗制自体胶原蛋白原液过滤除菌的方法包括在温度为4℃的情况下，将粗制自体胶原蛋白原液浸入质量浓度为0.5mg/mL的乙酸溶液中溶解10h。
进一步的，步骤二中胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶，之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液。
进一步的，步骤四中所述透明质酸溶液的质量百分比浓度为2％，所述柠檬酸溶液的质量百分比浓度为0.6％，所述的步骤四中吐温80的质量百分比浓度为0.5％。
实施例2
本实施例公开一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡，期间不停搅拌直至成糊状；将糊状的自体纤维组织粉碎并放入超纯水中，获得自体纤维组织悬浮液，向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物，混合物的浓度为0.4mg/mL，备用；
步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应，消化反应结束后静置分层，将上层悬浮液放入转速为5000r/min的离心机中离心，收集上清液，重复上述离心过程5次，收集上清液，备用；
步骤三、将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合，在转速为1000r/min的离心机中离心30min，弃去上清液，沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解，之后重复离心5次，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液；
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液浓缩、过滤除菌，之后与吐温80、透明质酸溶液、柠檬酸溶液混合，制成自体胶原蛋白注射剂，并于温度为10℃下保存即可。
进一步的，步骤四中粗制自体胶原蛋白原液浓缩的方法包括将粗制自体胶原蛋白原液放入透析袋中，在透析袋外放置聚乙烯吡咯进行浓缩；粗制自体胶原蛋白原液过滤除菌的方法包括在温度为8℃的情况下，将粗制自体胶原蛋白原液浸入质量浓度为2.0mg/mL的乙酸溶液中溶解12h。
进一步的，步骤二中胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶，之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液。
进一步的，步骤四中所述透明质酸溶液的质量百分比浓度为10％，所述柠檬酸溶液的质量百分比浓度为4％，所述的步骤四中吐温80的质量百分比浓度为1％。
实施例3
本实施例公开一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡，期间不停搅拌直至成糊状；将糊状的自体纤维组织粉碎并放入超纯水中，获得自体纤维组织悬浮液，向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物，混合物的浓度为0.4mg/mL，备用；
步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应，消化反应结束后静置分层，将上层悬浮液放入转速为4250r/min的离心机中离心，收集上清液，重复上述离心过程4次，收集上清液，备用；
步骤三、将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合，在转速为2000r/min的离心机中离心5-30min，弃去上清液，沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解，之后重复离心4次，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液；
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液浓缩、过滤除菌，之后与吐温80、透明质酸溶液、柠檬酸溶液混合，制成自体胶原蛋白注射剂，并于温度为5℃下保存即可。
进一步的，步骤四中粗制自体胶原蛋白原液浓缩的方法包括将粗制自体胶原蛋白原液放入透析袋中，在透析袋外放置聚乙烯吡咯进行浓缩；粗制自体胶原蛋白原液过滤除菌的方法包括在温度为6℃的情况下，将粗制自体胶原蛋白原液浸入质量浓度为1.25mg/mL的乙酸溶液中溶解11h。
进一步的，步骤二中胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶，之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液。
进一步的，步骤四中所述透明质酸溶液的质量百分比浓度为6％，所述柠檬酸溶液的质量百分比浓度为2.3％，所述的步骤四中吐温80的质量百分比浓度为0.75％。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将成熟的自体纤维组织加入到超纯水中浸泡，期间不停搅拌直至成糊状；将糊状的自体纤维组织粉碎并放入超纯水中，获得自体纤维组织悬浮液，向自体纤维组织悬浮液中加冰醋酸制得混合物，混合物的浓度为0.4mg/mL，备用；
步骤二、向步骤一制备的混合物中加入胃蛋白酶溶液进行消化反应，消化反应结束后静置分层，将上层悬浮液放入离心机中离心，收集上清液，备用；
步骤三、将步骤二收集的上清液与NaCl溶液混合，之后进行离心，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液；
步骤四、将粗制自体胶原蛋白原液浓缩、过滤除菌，之后与吐温80、透明质酸溶液、柠檬酸溶液混合，制成自体胶原蛋白注射剂，并于低温下保存即可。
2.根据权利要求1所述结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于：步骤四中粗制自体胶原蛋白原液浓缩的方法包括将粗制自体胶原蛋白原液放入透析袋中，在透析袋外放置聚乙烯吡咯进行浓缩。
3.根据权利要求1所述结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于：步骤四中粗制自体胶原蛋白原液过滤除菌的方法包括在温度为4-8℃的情况下，将粗制自体胶原蛋白原液浸入质量浓度为0.5-2.0mg/mL的乙酸溶液中溶解10-12h。
4.根据权利要求1所述结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于：自体胶原蛋白注射剂于温度为0-10℃下保存。
5.根据权利要求1所述结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于：步骤二中胃蛋白酶溶液的制备方法包括先称取胃蛋白酶，之后将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/mL的胃蛋白酶溶液。
6.根据权利要求1所述结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤二包括将上层悬浮液放入转速为3500-5000r/min的离心机中离心，收集上清液，重复上述离心过程3-5次，收集上清液，备用。
7.根据权利要求1所述结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤三包括将步骤二收集的上清液和NaCl溶液按重量配比混合，在转速为3000-1000r/min的离心机中离心5-30min，弃去上清液，沉淀用10倍体积的浓度为0.5mol/L的乙酸溶解，之后重复离心3-5次，收集上清液即制得粗制自体胶原蛋白原液。
8.根据权利要求1所述结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于：步骤四中所述透明质酸溶液的质量百分比浓度为2-10％，所述柠檬酸溶液的质量百分比浓度为0.6-4％。
9.根据权利要求1所述结合私密修复的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤四中吐温80的质量百分比浓度为0.5-1％。
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