CN109402157A - 一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体及应用 - Google Patents

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Abstract

一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体及应用，其表达载体由以下方法得到：A、以碱基序列为SEQ ID NO：1的(5’‑3’)引物及碱基序列为SEQ ID NO：2的(5’‑3’)引物，对pUC19载体质粒进行超保真扩增，得到碱基序列为SEQ ID NO：3的含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段；B、以碱基序列为SEQ ID NO：4的(5’‑3’)引物及碱基序列为SEQ ID NO：5的(5’‑3’)引物，对pET‑30a环状载体质粒进行反向超保真扩增，得到pET‑30a线性化载体；C、将A步的核苷酸片段与B步的pET‑30a线性化载体连接，即得。该表达载体扩大了宿主菌选择范围，利于蛋白表达。

Description

一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体及应用
技术领域
本发明涉及一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体及其构建方法。
背景技术
大肠杆菌原核表达系统具有表达背景清楚，蛋白表达水平高，操作简单，培养周期短，抗污染能力强，能在较短时间内在大肠杆菌上获得表达的蛋白产物等优点，已经被广泛应用于外源蛋白表达及抗原的制备。
pET系列载体在大肠杆菌表达系统中，不会由于产生的蛋白对细胞有毒性而引起质粒不稳定，是目前大肠杆菌原核蛋白表达中应用最多的载体。其作法是在pET载体上引入外源基因(载体质粒构建完成)之后，再转化到带有T7RNA聚合酶基因的大肠杆菌(DE3溶原菌)中实现外源基因对应的目标蛋白的表达。目前，pET系列载体有11种不同的DE3溶原菌，不同的溶原菌具有不同的优缺点；通过选择不同的宿主菌(溶原菌)，可组合得到最优的蛋白表达系统。pET30a载体是pET系列载体中的一个表达载体，它由T7启动子启动目标蛋白的表达，添加了组蛋白标签，方便了蛋白分离纯化等后续工作。但由于pET-30a载体自身带有卡那霉素抗性基因，如果选择的宿主菌具有卡那霉素抗性时，则无法通过卡那霉素抗性作为筛选标记筛选出已载入外源基因的宿主菌(转化子)，限制了pET-30a表达载体的宿主菌选择范围。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体，即在带有卡那霉素抗性基因的pET-30a表达载体中加入氨苄青霉素抗性基因，从而扩大了表达载体的宿主菌选择范围，有利于蛋白表达优化。
本发明实现其第一发明目的所采用的技术方案是，一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体，由以下方法构建得到：
A、制备含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段
以碱基序列为SEQ ID NO：1所示的(5’-3’)引物及碱基序列为SEQ ID NO：2所示的(5’-3’)引物，通过超保真DNA聚合酶对pUC19载体质粒进行扩增，得到长度为988bp的碱基序列为SEQ ID NO：3所示的核苷酸片段，即含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段；
B、pET-30a载体的线性化
以碱基序列为SEQ ID NO：4所示的(5’-3’)引物及碱基序列为SEQ ID NO：5所示的(5’-3’)引物，通过超保真DNA聚合酶对pET-30a环状载体质粒进行反向扩增，得到长度为5422bp的pET-30a线性化载体；
C、双抗生素筛选标记的原核表达载体的制备
通过一步法定向克隆技术将A步的含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段与B步的pET-30a线性化载体连接，得到同时具有氨苄青霉素抗性与卡那霉素抗性的环状的原核表达载体，即具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+。
本发明的第二发明目的是提供一种上述的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体在大肠杆菌原核表达系统中的应用，该种应用扩大了表达载体的宿主菌选择范围，有利于蛋白表达优化。
本发明实现其第二发明目的所采用的技术方案是，一种上述的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体在大肠杆菌原核表达系统中的应用，其具体作法是：
(1)用目的蛋白基因的引物，通过超保真DNA聚合酶扩增得到目标蛋白基因；
(2)选择具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+的多克隆酶切位点对应的限制性内切酶，将具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+线性化，得到线性化的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体；
(3)通过一步法定向克隆技术将(1)步的目标蛋白基因连接到(2)步的线性化的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体中，得到表达载体质粒；
(4)将(3)步得到的表达载体质粒转化到所需的宿主菌菌株中，如宿主菌菌株不具有氨苄青霉素抗性，则通过氨苄青霉素抗性标记进行筛选，如宿主菌菌株不具有卡那霉素抗性，则通过卡那霉素抗性标记进行筛选；即可获得携带有目的蛋白基因的表达菌株。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+，在带有卡那霉素抗性基因的pET-30a表达载体中加入了氨苄青霉素抗性基因；当宿主菌菌株(表达菌株)具有卡那霉素抗性、但不具备的氨苄青霉素抗性时，可通过氨苄青霉素抗性作为筛选标记筛选出已载入外源基因的宿主菌。从而解决了原核表达载体pET30a在具有卡那霉素抗性的表达菌株中，无法通过卡那霉素抗性作为筛选标记筛选出已载入外源基因的宿主菌(转化子)的问题；扩大了表达载体的宿主菌选择范围，有利于蛋白表达优化。
下面结合序列表和具体实施方式对本发明作进一步详细的描述。
具体实施方式
实施例1
本发明的一种具体实施方式是，一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体，由以下方法构建得到：
一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体，由以下方法构建得到：
A、制备含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段
以碱基序列为SEQ ID NO：1所示的(5’-3’)引物及碱基序列为SEQ ID NO：2所示的(5’-3’)引物，通过超保真DNA聚合酶对pUC19载体质粒进行扩增，得到长度为988bp的碱基序列为SEQ ID NO：3所示的核苷酸片段，即含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段。
所述的pUC19载体质粒可以公开购得，如可购买上海联硕生物科技有限公司生产的品牌为AMEKO的pUC19载体质粒产品。所述的超保真DNA聚合酶也可以公开购得，如可购买美国New England Biolabs公司的超保真DNA聚合酶。
其中，通过超保真DNA聚合酶对pUC19载体质粒进行扩增的温度循环条件如下：98℃预变性2分钟，98℃10秒、60℃15秒、72℃15秒构成一个循环，共35个循环；然后72℃保温5分钟。扩增结束后，利用1％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，随后进行胶回收。
B、pET-30a载体的线性化
以碱基序列为SEQ ID NO：4所示的(5’-3’)引物及碱基序列为SEQ ID NO：5所示的(5’-3’)引物，通过超保真DNA聚合酶对pET-30a环状载体质粒进行反向扩增，得到长度为5422bp的pET-30a线性化载体；
所述的pET-30a环状载体质粒可以公开购得，如可购买武汉淼灵生物科技有限公司生产的大肠杆菌表达载体pET-30a产品。
C、双抗生素筛选标记的原核表达载体的制备
通过一步法定向克隆技术将A步的含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段与B步的pET-30a线性化载体连接，得到同时具有氨苄青霉素抗性与卡那霉素抗性的环状的原核表达载体，即具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+。
本例的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体在大肠杆菌原核表达系统中的应用，其具体作法是：
(1)用目的蛋白基因的引物，通过超保真DNA聚合酶扩增得到目标蛋白基因；
(2)选择具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+的多克隆酶切位点对应的限制性内切酶，将具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+线性化，得到线性化的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体；
(3)通过一步法定向克隆技术将(1)步的目标蛋白基因连接到(2)步的线性化的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体中，得到表达载体质粒；
(4)将(3)步得到的表达载体质粒转化到所需的宿主菌菌株中，如宿主菌菌株不具有氨苄青霉素抗性，则通过氨苄青霉素抗性标记进行筛选，如宿主菌菌株不具有卡那霉素抗性，则通过卡那霉素抗性标记进行筛选；即可获得携带有目的蛋白基因的表达菌株。
实验验证，通过本例的方法将黄曲霉毒素氧化酶基因等多种目标蛋白基因成功转化到具有卡那霉素抗性的大肠杆菌表达菌株RosettagamiB(DE3)中。说明本发明解决了原核表达载体pET30a在具有卡那霉素抗性的表达菌株中，无法通过卡那霉素抗性作为筛选标记筛选出已载入外源基因的宿主菌(转化子)的问题；扩大了表达载体的宿主菌选择范围，有利于蛋白表达优化。
序列表
<110> 四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所
<120> 一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gatacatatt tgaatgtatt aatacattca aatatgtatc cgctcat 47
<210> 2
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cctatttgtt tatttttcta tggtctgaca gttaccaatg cttaa 45
<210> 3
<211> 988
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gatacatatt tgaatgtatt aatacattca aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc 60
tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca tttccgtgtc 120
gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc agaaacgctg 180
gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat cgaactggat 240
ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc aatgatgagc 300
acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta ttgacgccgg gcaagagcaa 360
ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc agtcacagaa 420
aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat aaccatgagt 480
gataacactg cggccaactt acttctgaca acgatcggag gaccgaagga gctaaccgct 540
tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc ggagctgaat 600
gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg tagcaatggc aacaacgttg 660
cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc ggcaacaatt aatagactgg 720
atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc tggctggttt 780
attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc agcactgggg 840
ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga cggggagtca ggcaactatg 900
gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg 960
tcagaccata gaaaaataaa caaatagg 988
<210> 4
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tagaaaaata aacaaatagg ggttccg 27
<210> 5
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aatacattca aatatgtatc cgctcat 27

Claims (2)

1.一种具有双抗生素筛选标记的原核表达载体，由以下方法构建得到：
A、制备含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段
以碱基序列为SEQ ID NO：1所示的(5’-3’)引物及碱基序列为SEQ ID NO：2所示的(5’-3’)引物，通过超保真DNA聚合酶对pUC19载体质粒进行扩增，得到长度为988bp的碱基序列为SEQ ID NO：3所示的核苷酸片段，即含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段；
B、pET-30a载体的线性化
以碱基序列为SEQ ID NO：4所示的(5’-3’)引物及碱基序列为SEQ ID NO：5所示的(5’-3’)引物，通过超保真DNA聚合酶对pET-30a环状载体质粒进行反向扩增，得到长度为5422bp的pET-30a线性化载体；
C、双抗生素筛选标记的原核表达载体的制备
通过一步法定向克隆技术将A步的含氨苄青霉素抗性基因的核苷酸片段与B步的pET-30a线性化载体连接，得到同时具有氨苄青霉素抗性与卡那霉素抗性的环状的原核表达载体，即具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+。
2.一种权利要求1所述的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体在大肠杆菌原核表达系统中的应用，其具体作法是：
(1)用目的蛋白基因的引物，通过超保真DNA聚合酶扩增得到目标蛋白基因；
(2)选择具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+的多克隆酶切位点对应的限制性内切酶，将具有双抗生素筛选标记的原核表达载体pET30aA+K+线性化，得到线性化的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体；
(3)通过一步法定向克隆技术将(1)步的目标蛋白基因连接到(2)步的线性化的具有双抗生素筛选标记的原核表达载体中，得到表达载体质粒；
(4)将(3)步得到的表达载体质粒转化到所需的宿主菌菌株中，如宿主菌菌株不具有氨苄青霉素抗性，则通过氨苄青霉素抗性标记进行筛选，如宿主菌菌株不具有卡那霉素抗性，则通过卡那霉素抗性标记进行筛选；即可获得携带有目的蛋白基因的表达菌株。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108893486A (zh) * 2018-08-01 2018-11-27 四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所 一种可用于丝状真菌基因敲除的载体及应用

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040253620A1 (en) * 2003-04-30 2004-12-16 Invitrogen Corporation Use of site specific recombination to prepare molecular markers
CN101260408A (zh) * 2008-03-27 2008-09-10 武汉大学 一种双色荧光报告载体的构建方法和应用
CN102226154A (zh) * 2011-05-12 2011-10-26 中国科学院微生物研究所 具有双重筛选标记的多形汉逊酵母菌及其应用
CN102250933A (zh) * 2011-05-30 2011-11-23 天津科技大学 利用双质粒系统在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法
CN104450766A (zh) * 2015-01-06 2015-03-25 厦门大学 一种螺旋藻基因转化筛选的方法
CN105505974A (zh) * 2016-01-21 2016-04-20 浙江大学 一种实现大肠杆菌基因无痕同源重组的方法
CN105543270A (zh) * 2015-12-24 2016-05-04 中国农业科学院作物科学研究所 双抗性CRISPR/Cas9载体及应用
CN106191043A (zh) * 2016-07-26 2016-12-07 吉林大学 一种基因片段、载体pPlasmid‑Clearance及应用
CN108893486A (zh) * 2018-08-01 2018-11-27 四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所 一种可用于丝状真菌基因敲除的载体及应用
CN109136247A (zh) * 2018-08-09 2019-01-04 天津大学 一种用于铅结合蛋白定向进化的双向筛选系统构建方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040253620A1 (en) * 2003-04-30 2004-12-16 Invitrogen Corporation Use of site specific recombination to prepare molecular markers
CN101260408A (zh) * 2008-03-27 2008-09-10 武汉大学 一种双色荧光报告载体的构建方法和应用
CN102226154A (zh) * 2011-05-12 2011-10-26 中国科学院微生物研究所 具有双重筛选标记的多形汉逊酵母菌及其应用
CN102250933A (zh) * 2011-05-30 2011-11-23 天津科技大学 利用双质粒系统在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法
CN104450766A (zh) * 2015-01-06 2015-03-25 厦门大学 一种螺旋藻基因转化筛选的方法
CN105543270A (zh) * 2015-12-24 2016-05-04 中国农业科学院作物科学研究所 双抗性CRISPR/Cas9载体及应用
CN105505974A (zh) * 2016-01-21 2016-04-20 浙江大学 一种实现大肠杆菌基因无痕同源重组的方法
CN106191043A (zh) * 2016-07-26 2016-12-07 吉林大学 一种基因片段、载体pPlasmid‑Clearance及应用
CN108893486A (zh) * 2018-08-01 2018-11-27 四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所 一种可用于丝状真菌基因敲除的载体及应用
CN109136247A (zh) * 2018-08-09 2019-01-04 天津大学 一种用于铅结合蛋白定向进化的双向筛选系统构建方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TIWA ROTCHANAPREEDA等: "The plasmid vectors, pBS2ndd and pBS3ndd, for versatile cloning with low background in Escherichia coli", 《WORLD JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY》 *
党素英等: "潮霉素和新霉素抗性基因转基因小鼠的建立及其表达研究", 《生物工程学报》 *
李坤等: "靶向人核糖核酸酶抑制因子双抗性的shRNA逆转录病毒载体构建及鉴定", 《大连医科大学学报》 *
罗进贤等: "双抗性质粒pSC33、pSC48的构建及其特性研究", 《生物化学杂志》 *
郭宁主编: "《遗传学指导》", 31 January 2015 *
陈柳霓等: "大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的共培养研究", 《生物加工过程》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108893486A (zh) * 2018-08-01 2018-11-27 四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所 一种可用于丝状真菌基因敲除的载体及应用

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