CN109369590A - 一种川陈皮素的分离制备方法 - Google Patents

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刘韶松
谷乐
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Abstract

本发明涉及一种川陈皮素的分离制备方法，该方法包括将中国台湾香檬果皮干燥粉碎后，用有机溶剂浸提3次，每次10‑20 h，合并浸提液浓缩成浸膏；再取浸膏用甲醇溶解后与硅胶拌样，装硅胶柱层析，以有机溶剂梯度洗脱；收集富含川陈皮素的洗脱部分，浓缩后经高效制备液相色谱分离纯化，收集合适时间的馏分，浓缩后减压干燥，获得川陈皮素高纯样品。本发明产品纯度高，工艺稳定，适用于从中国台湾香檬中分离制备高纯度的川陈皮素。

Description

一种川陈皮素的分离制备方法
技术领域
本发明属于植物有效成分的提取技术领域，具体涉及一种川陈皮素的分离制备方法。
背景技术
中国台湾香檬（Citrus. depressaHayata），又名扁实柠檬，为芸香科柑橘属多年生植物。中国台湾香檬是中国台湾四种原生柑橘之一，有特殊香味，病虫害少，容易栽培管理。香檬果皮中富含川陈皮素(Nobiletin，NOB)，其含量远高于普通柑橘类果实，是目前中国台湾和日本非常受欢迎的养生绿金作物。
川陈皮素(Nobiletin），又称蜜橘黄酮、川皮亭等，是从芸香科柑橘属植物果皮中提取的一种多甲氧基黄酮类化合物，无色晶体或无定形粉末，易溶于乙醇、甲醇、热水和乙酸乙酯，其分子式C21H22O8，分子量402.39。研究发现川陈皮素有抗氧化、抗癌、抗炎等作用，还具备神经营养活性，可治疗阿尔茨海默症等神经衰退性疾病，是一种重要的植物活性天然化合物。尽管已在多种芸香科植物中发现有川陈皮素，但受制于含量，大量制备仍显困难。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术中的技术问题之一，即提供一种大量生产高纯度川陈皮素的分离制备方法。
为达到上述目的，本发明的实施例提出了一种川陈皮素的分离制备方法，其包括以下步骤：
S1、取干燥粉碎的中国台湾香檬果皮，加入8~12倍的有机溶剂浸提3次，每次10~20h，收集浸提液，浓缩得浸膏；
S2、取所述浸膏用甲醇溶解后与硅胶粉拌样，进行正相硅胶柱分离，以有机溶剂梯度洗脱，收集富含川陈皮素的洗脱液，浓缩干燥得初纯化物；
S3、取初纯化物用甲醇溶解后，过高效制备液相色谱柱，收集出峰时间为25~35min的某一段馏分，浓缩减压干燥，得川陈皮素。
根据本发明实施例的一种川陈皮素的分离制备方法，其以中国台湾香檬果皮为原料，香檬果皮中川陈皮素含量高，制备工艺简单，生产规模容易放大；结合组合柱色谱技术可制备出大量高纯度的川陈皮素。
另外，根据本发明上述实施例提出的一种川陈皮素的分离制备方法，还可以具有如下附加的技术特征：
根据本发明实施例，所述步骤S1中有机溶剂为甲醇、乙醇和丙酮中的一种或几种，且有机溶剂的浓度为60%~100%。
根据本发明实施例，所述步骤S2中有机溶剂为石油醚、氯仿、乙酸乙酯和丙酮中的一种或两种。
根据本发明实施例，所述步骤S2中以石油醚和丙酮作为有机溶剂梯度洗脱，洗脱梯度设置成石油醚：丙酮为10：1、5：1、3：1、1：1、0：1。
根据本发明实施例，收集各梯度洗脱液，用高效液相检测确定石油醚：丙酮为3:1的洗脱液中富含有川陈皮素，收集此梯度洗脱液，浓缩干燥得初纯化物。
根据本发明实施例，所述步骤S3中高效制备液相色谱柱为SinoChrom ODS-BP（5um, 20*150mm）、SB-C18 PrepHT（5um, 30*150mm）、SinoChrom C8（5um, 30*250mm）和OBD-C18（5um, 30*150mm）中的一种，流动相为30-80%浓度的甲醇浓液。
附图说明
图1为川陈皮素的薄层色谱（TLC）图；
图2为川陈皮素的高效液相色谱（HPLC）图；
图3为川陈皮素的 1H-核磁共振图谱；
图4为川陈皮素的13C-核磁共振图谱。
具体实施方式
为了更好的理解上述技术方案，下面将更详细地描述本发明的示例性实施例，应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
实施例
一种川陈皮素的分离制备方法，其包括以下步骤：
S1、中国台湾香檬果皮7 kg经粗碎机切碎后，加入8~12倍的80%乙醇浸提12h，重复3次，收集浸提液，合并，浓缩得浸膏备用；
S2、取浸膏30g用甲醇溶解，加入硅胶（200目）90g进行拌样，水浴蒸发除去溶剂后装填于玻璃层析柱上（400*90 mm，柱高13 cm，硅胶重300g），以石油醚和丙酮进行梯度洗脱，洗脱梯度设置成石油醚：丙酮为10：1、5：1、3：1、1：1、0：1；收集各梯度洗脱液，用高效液相检测确定石油醚：丙酮为3：1的洗脱液中富含有川陈皮素，收集此梯度洗脱液，浓缩干燥得初纯化物。
S3、取初纯化物用甲醇溶解后，过高效制备液相色谱柱，色谱柱为SB-C18 Prep HT（5um，30*150mm）；流动相为甲醇：水=50：50；控制流速为20 mL/min；收集出峰时间为30.10min的馏分，浓缩减压干燥，得川陈皮素290 mg，纯度为98%。
S4、将川陈皮素通过TLC、HPLC检测纯度，核磁共振鉴定结构。其中，TLC检测条件：石油醚：乙酸乙酯=2：3；采用紫外分析仪、碘显色剂和5%硫酸乙醇显色剂分别显色，结果如图1所示。HPLC检测条件：waters高效液相色谱仪，色谱柱：Hypersil C18（250*4.6，5μm）；检测波长：328 nm；流动相为甲醇：水=60：40；流速：1 mL/min；保留时间：15.50 min；结果如图2所示。核磁鉴定：将川陈皮素用氘代试剂DMSO溶解后测定1H和13C核磁共振，结果如图3和图4所示。图3中化学位移值在6.7-8.8之间的4个峰是川陈皮素黄酮母核的4个质子，化学位移值在3.6-4.1之间的6个单峰是川陈皮素的6个甲氧基取代峰。图4中化学位移值在100-180的15个碳是川陈皮素黄酮母核碳原子，化学位移值在56-62的6个碳是6个甲氧基的碳原子。由此可确定分离所得的化合物即为川陈皮素。
由此可知，本发明提供一种川陈皮素的制备方法，该方法可大量生产高纯度川陈皮素。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (6)

1.一种川陈皮素的分离制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取干燥粉碎的台湾香檬果皮，加入8~12倍的有机溶剂浸提3次，每次10~20h，收集浸提液，浓缩得浸膏；
S2、取所述浸膏用甲醇溶解后与硅胶粉拌样，进行正相硅胶柱分离，以有机溶剂梯度洗脱，收集富含川陈皮素的洗脱液，浓缩干燥得初纯化物；
S3、取初纯化物用甲醇溶解后，过高效制备液相色谱柱，收集出峰时间为25~35min间的某一段馏分，浓缩减压干燥，得川陈皮素。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中有机溶剂为甲醇、乙醇和丙酮中的一种或几种，且有机溶剂的浓度为60%~100%。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中有机溶剂为石油醚、氯仿、乙酸乙酯和丙酮中的一种或两种。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中以石油醚和丙酮作为有机溶剂梯度洗脱，洗脱梯度设置成石油醚：丙酮为10：1、5：1、3：1、1：1、0：1。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，收集各梯度洗脱液，用高效液相检测确定石油醚：丙酮为3:1的洗脱液中富含有川陈皮素，收集此梯度洗脱液，浓缩干燥得初纯化物。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中高效制备液相色谱柱为SinoChrom ODS-BP（5um, 20*150mm）、SB-C18 PrepHT（5um, 30*150mm）、SinoChrom C8（5um, 30*250mm）和OBD-C18（5um, 30*150mm）中的一种，流动相为30-80%浓度的甲醇浓液。
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