CN109355207A - 一种炭疽菌产孢用液体发酵培养基 - Google Patents

一种炭疽菌产孢用液体发酵培养基 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种适宜于炭疽菌液体发酵培养的优良培养基，配制1000ml该培养基的配方如下：荠菜20g‑40g，大豆粉3g‑6g、蔗糖2g‑4g、磷酸二氢钾0.5g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为6.5。采用该培养基能够快速高效的得到大量炭疽菌分生孢子。本发明通过将杂草作为培养基主要成分，降低了炭疽菌发酵培养成本，获得了高效产孢用炭疽菌培养基。

Description

一种炭疽菌产孢用液体发酵培养基
技术领域
本发明属于微生物培养技术领域，具体涉及一种炭疽菌产孢用液体发酵培养基。
背景技术
植物炭疽病是我国作物、果蔬及观赏植物等普遍发生的一类病害，主要由炭疽菌属病原菌导致。炭疽菌分类归为子囊菌门、粪壳菌纲、肉座菌亚纲目小丛壳科、小丛壳属。炭疽菌属真菌在我国分布广泛，从东北到海南省均有分布，多种植物可以作为其寄主，具有广泛寄生性。该菌常为害植物叶、花、果、茎及嫩枝，引发各种农作物的炭疽病，造成叶斑、叶枯、花腐、果腐和枝枯等症状，影响植物的生长发育，降低作物品质，严重时可造成落花、落果，甚至植株死亡，导致农作物减产。
炭疽菌作为一种重要微生物资源也被广泛利用。例如，炭疽菌也是重要的植物内生真菌，普遍存在于各种植物中，广泛分布于植物的根、茎、叶、花、果实及及种子等各个器官组织内，可增强植物对病虫害的抗能力或产生特有的次生代谢产物，因而可以作为资源微生物开发利用；另一方面，炭疽菌属真菌也是植物病原菌生物防治领域一个重要菌种来源，例如我国早期利用炭疽菌“鲁保一号”生物防治大豆菟丝子。因此开发可用于该菌生产培养的广适型、低成本培养基显得至关重要。
我国杂草种类多样，生物质资源丰富，但是在经过了初期的化学防控之后剩余的杂草多被浪费在田间地头，或非耕地杂生的草资源被严重浪费，基本得不到利用，这对于含有大量生物质资源的杂草群体来说，无疑是巨大的浪费。目前，对于真菌液体发酵培养基原料的研究主要以粮食作物，例如小麦、玉米、大豆和马铃薯等为应用原料，或以化学试剂为主要原料，例如葡萄糖、蛋白胨和酵母浸粉等。截至目前为止，对以田间杂草为原料的发酵培养基研究则少之又少。因此，研究以杂草为基础的微生物发酵培养基，最大化的开发杂草资源，较少浪费，对于优化微生物培养基组成，降低配制成本都有重要的意义。
发明内容
针对现有技术上的不足，本发明提供了一种适宜于炭疽菌液体发酵培养的优良培养基，采用该培养基能够快速高效的得到大量炭疽菌分生孢子。本发明通过将杂草作为培养基主要成分，降低了炭疽菌发酵培养成本，获得了高效产孢用炭疽菌培养基。
本发明是通过以下措施实现的：
本发明提供一种含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基，配制1000ml该培养基的配方如下：荠菜20g-40g，大豆粉3g-6g、蔗糖2g-4g、磷酸二氢钾0.5g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为6.5。
优选的，所述组分中荠菜20g、大豆粉3g、蔗糖2g。
优选的，所述组分中荠菜20g、大豆粉6g、蔗糖4g。
优选的，所述组分中荠菜40g、大豆粉6g、蔗糖2g。
本发明还提供了含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基的制备方法：以田间或人工种植的荠菜为原料，将荠菜去除根部洗净，加入蒸馏水，煮沸30-35分钟，收集过滤后所获得汁液；在汁液中加入大豆粉、蔗糖和磷酸二氢钾；加蒸馏水，调节pH，定容；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基的应用：将培养基倒入培养瓶，培养温度为25±3℃，通过液体摇瓶小量培养法培养3-5天。
所述炭疽菌产孢用液体发酵培养基适用于炭疽菌菌株的产孢培养。
本发明的有益效果是：1.以荠菜为基础材料，田间易获得，同时人工种植简单，原材料极易获得，培养基成本低；2.该培养基配制方法简便，不需要特殊设备；3.本培养基适用于炭疽菌产孢的培养；4.培养效果优良，采用该培养基能够快速、大量的制备炭疽菌分生孢子。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，但本发明不应解释为局限于这些实施例。
炭疽菌培养方法为：PDA培养基活化保存的菌株，5 天后，选取生长一致的菌落，打取直径为9 mm的菌饼，接种到200ml各供试培养基内（500ml培养瓶）。将接种菌块的培养基放置到培养箱内，并将培养条件设定为，160rpm，25℃，黑暗培养。
观察方法为：自第3天开始，每天取出3瓶液体摇培后的菌体，摇均后吸取一定量液体，血球计数板计数孢子数量。
实施例1 本发明所提供培养基的配制方法
以田间或人工种植的荠菜为原料，将荠菜去除根部洗净，加入蒸馏水，煮沸30-35分钟，收集过滤后所获得汁液；在汁液中加入大豆粉、蔗糖和磷酸二氢钾；加蒸馏水，调节pH，定容；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。根据组成成分，将该培养基定名为荠菜大豆粉培养基（CGS medium）。
实施例2 培养基中杂草成分的筛选
将实施例1中的荠菜替换为其它杂草，其他步骤不变，制作培养基。本实施例中同时采用播娘蒿、打碗花、反枝苋、蚤缀、猪殃殃、马唐、狗尾草、牛筋草、看麦娘、节节麦、雀麦和野燕麦等12中杂草作为添加杂草，与添加荠菜的培养基进行横向比较。
自第3天开始，每天取出3瓶液体摇培后的菌体，摇均后吸取一定量液体，血球计数板计数分生孢子数量。
表1 炭疽菌在不同杂草培养基中的产孢量
由表1提供的数据可以看出，添加相同含量的13种田间最常见杂草，根据前文提供的方法，进行统计，发现添加荠菜的培养基，无论是在分生孢子产孢量和产孢时间方面都有显著优于添加其它杂草的培养基。
实施例3 本发明所提供培养基与其它常用真菌培养基的培养效果对比
马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：土豆200 g，人工切成约2×2厘米的土豆块，沸水煮30分钟，纱布过滤，留取汁液。在过滤获得汁液中加入20g葡萄糖和20g琼脂，并定容至1000 ml。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
胡萝卜培养基（CA）：胡萝卜200 g，人工切成约2×2厘米的胡萝卜块，沸水煮30分钟，纱布过滤，留取汁液。在过滤获得汁液中加入20g琼脂，并定容至1000 ml。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
葡糖糖蛋白胨培养基（DPA）：葡糖糖40g，蛋白胨10g，琼脂20g，水1000 ml；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
玉米淀粉培养基（CS）：玉米淀粉3g、七水硫酸镁 1.0g，磷酸二氢钾 1.0g，琼脂15-20g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为6.0-8.0。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
马铃薯蔗糖培养基（PSA）：土豆200 g，人工切成约2×2厘米的土豆块，沸水煮30分钟，纱布过滤，留取汁液。在过滤获得汁液中加入20g蔗糖和20g琼脂，并定容至1000 ml。将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
真菌培养基（ZJ）：蛋白胨5 g，酵母粉2 g，葡糖糖2 g，KH2PO4 1 g，MgSO4 0.5 g，琼脂20 g，水1000 ml；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
配制好的培养基用于培养炭疽菌，培养方法和分生孢子计数方法同实施例1 。
表2不同培养基的生长速率比较
注：表中数值为平均值±标准误（n=3），同行数据后的不同字母表示在 0.05 水平上差异显著。
由表2提供的数据可以看出，与目前常用的炭疽菌培养基相比，发现添加荠菜的培养基，在分生孢子产孢量方面都有显著优势。
实施例3 本发明中培养基配方的优化
以本发明所提供的培养基为基础，采用正交设计，对培养基内的主要材料（荠菜、大豆粉和蔗糖）含量进行梯度筛选。具体配比见表2。对不同配比下炭疽菌生长情况进行测定。
表3 多因素的正交设计表
根据多因素的交叉设计，参考其它真菌发酵研究因素，本实施例共设计12组处理，每组处理同时开展3个重复。
表4不同培养基的生长速率比较
因素 产孢量（10<sup>6</sup>/ml）
1 23.5±2.9d
2 41.3±6.1c
3 43.3±5.1c
4 39.7±11.1c
5 79.7±6.8a
6 73.2±4.7ab
7 60.1±4.1b
8 80.6±7.1a
9 78.3±6.5a
10 80.3±4.2a
11 73.3±7.8a
12 77.3±7.1a
注：表中数值为平均值±标准误（n=3），同行数据后的不同字母表示在 0.05 水平上差异显著。
由表4提供的数据可以看出，通过交叉配方筛选，配方5-6和8-12产孢量在 0.05水平上差异显著高于其他配方。结合减低成本保证产量的基础上，配方5在分生孢子产孢量方面都有显著优势，即荠菜20g，大豆粉3g、蔗糖2g。
以上所述仅是本专利的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以做出若干改进和替换，这些改进和替换也应视为本专利的保护范围。

Claims (7)

1.一种含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基，配制1000ml该培养基的配方如下：荠菜20g-40g，大豆粉3g-6g、蔗糖2g-4g、磷酸二氢钾0.5g，蒸馏水加至1000ml，调节pH为6.5。
2.根据权利要求1所述的一种含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基，其特征在于：所述组分中荠菜20g、大豆粉3g、蔗糖2g。
3.根据权利要求1所述的一种含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基，其特征在于：所述组分中荠菜20g、大豆粉6g、蔗糖4g。
4.根据权利要求1所述的一种含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基，其特征在于：所述组分中荠菜40g、大豆粉6g、蔗糖2g。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的一种含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基的制备方法，其特征在于：以田间或人工种植的荠菜为原料，将荠菜去除根部洗净，加入蒸馏水，煮沸30-35分钟，收集过滤后所获得汁液；在汁液中加入大豆粉、蔗糖和磷酸二氢钾；加蒸馏水，调节pH，定容；将定容后的溶液于121℃，1.05×105Pa下灭菌锅灭菌20分钟，灭菌后备用。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的一种含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基的应用，其特征在于：将培养基倒入培养瓶，培养温度为25±3℃，通过液体摇瓶小量培养法培养3-5天。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的一种含有荠菜的炭疽菌产孢用液体发酵培养基的应用，所述炭疽菌产孢用液体发酵培养基用于炭疽菌菌株的产孢培养。
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Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2454939A1 (en) * 2010-11-18 2012-05-23 Bayer CropScience AG Post-harvest treatment
CN103773712A (zh) * 2013-12-06 2014-05-07 天津大学 一种抗真菌肽高产菌株及其制备抗菌肽的方法
CN104108988A (zh) * 2014-06-20 2014-10-22 东至林野生态种植中心 一种高粱秸秆为原料的杏鲍菇培养基及其制备方法
CN104480060A (zh) * 2014-12-02 2015-04-01 福建省农业科学院果树研究所 一种胶孢炭疽菌的快速产孢方法
CN105733964A (zh) * 2016-04-27 2016-07-06 山东省农业科学院植物保护研究所 一种含有猪殃殃的弯孢霉培养基及其制备方法
CN106472108A (zh) * 2016-10-09 2017-03-08 湖北九公堂生物科技开发有限责任公司 一种以药食同源的原料人工培植肉灵芝的新方法
CN107032866A (zh) * 2016-11-09 2017-08-11 杭州千岛湖瓦洱登家庭农场 一种葡萄种植花期专用基肥复方组合配方及其生产方法
CN108048388A (zh) * 2018-01-24 2018-05-18 四川农业大学 一种胶孢炭疽菌产孢方法
CN108570442A (zh) * 2018-07-24 2018-09-25 湖北省农业科学院经济作物研究所 一种炭疽菌的快速诱导产孢方法

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2454939A1 (en) * 2010-11-18 2012-05-23 Bayer CropScience AG Post-harvest treatment
CN103773712A (zh) * 2013-12-06 2014-05-07 天津大学 一种抗真菌肽高产菌株及其制备抗菌肽的方法
CN104108988A (zh) * 2014-06-20 2014-10-22 东至林野生态种植中心 一种高粱秸秆为原料的杏鲍菇培养基及其制备方法
CN104480060A (zh) * 2014-12-02 2015-04-01 福建省农业科学院果树研究所 一种胶孢炭疽菌的快速产孢方法
CN105733964A (zh) * 2016-04-27 2016-07-06 山东省农业科学院植物保护研究所 一种含有猪殃殃的弯孢霉培养基及其制备方法
CN106472108A (zh) * 2016-10-09 2017-03-08 湖北九公堂生物科技开发有限责任公司 一种以药食同源的原料人工培植肉灵芝的新方法
CN107032866A (zh) * 2016-11-09 2017-08-11 杭州千岛湖瓦洱登家庭农场 一种葡萄种植花期专用基肥复方组合配方及其生产方法
CN108048388A (zh) * 2018-01-24 2018-05-18 四川农业大学 一种胶孢炭疽菌产孢方法
CN108570442A (zh) * 2018-07-24 2018-09-25 湖北省农业科学院经济作物研究所 一种炭疽菌的快速诱导产孢方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
胡美姣等: "两种杧果炭疽病菌生物学特性的比较", 《西南农业学报》 *

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