CN109310679A - 包含组蛋白脱乙酰酶抑制剂的组合 - Google Patents

包含组蛋白脱乙酰酶抑制剂的组合 Download PDF

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斯蒂芬·约瑟夫·沙特勒沃斯
安德鲁·大卫·惠尔
露西·玛丽·科尔曼
海伦·路易丝·罗杰斯
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Karus Therapeutics Ltd
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Karus Therapeutics Ltd
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Abstract

本发明涉及式(I)的化合物或其药物可接受的盐与至少一种第二试剂的组合，所述第二试剂选自蛋白酶体抑制剂、肿瘤免疫治疗剂或免疫调节剂、信号转导途径抑制剂、抑制BCL2蛋白质家族的试剂、抑制Mcl‑1的试剂、聚(ADP‑核糖)聚合酶(PARP)抑制剂、芳香酶抑制剂、常规细胞毒性试剂或选自阿比特龙、ARN‑509和MYC抑制剂的其他试剂。

Description

包含组蛋白脱乙酰酶抑制剂的组合
发明领域
本发明涉及新型组合，其包含用作组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的抑制剂、与其他特异性抗肿瘤化合物组合的化合物。此类组合可用于癌症的治疗。
发明背景
HDAC为锌金属酶，其催化乙酰化赖氨酸残基的水解。在组蛋白中，这使赖氨酸返回其质子化状态，并且是真核转录控制的总体机理，导致核小体中DNA的紧密包装。另外，可逆的赖氨酸乙酰化是非组蛋白蛋白质的重要调节过程。因此，能够调节HDAC的化合物具有重要的治疗潜力。
发明概述
本发明部分涉及某些HDAC抑制剂和某些其他抗肿瘤化合物的组合。这些组合可以是协同的，因此可以提供对各个组分的改进。例如，它们可以允许施用更低的剂量。本发明部分基于本文所示的数据。
本文公开的某些HDAC抑制剂也公开在WO2014/181137中。
本发明部分涉及某些HDAC抑制剂与某些抗肿瘤剂的组合。
因此，本发明为包含式(I)的HDAC抑制剂的药物组合物：
或其药物可接受的盐，其中：
每个R'独立地选自H和QR1；
每个Q独立地选自键、CO、CO2、NH、S、SO、SO2或O；
每个R1独立地选自H、C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、芳基、杂芳基、C1-C10环烷基、卤素、C1-C10烷基芳基、C1-C10烷基杂芳基或C1-C10杂环烷基；
每个L独立地选自5元至10元含氮杂芳基；
W为锌结合基团；
每个R2独立地为氢或C1至C6烷基；以及
R3为芳基或杂芳基；
每个芳基或杂芳基可以被选自C1-C6烷基、羟基、C1-C3羟基烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3单烷基氨基、C1-C3双烷基氨基、C1-C3酰氨基、C1-C3氨基烷基、单(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、双(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、C1-C3-酰氨基、C1-C3烷基磺酰基氨基、卤素、硝基、氰基、三氟甲基、羧基、C1-C3烷氧基羰基、氨基羰基、单C1-C3烷基氨基羰基、双C1-C3烷基氨基羰基、-SO3H、C1-C3烷基磺酰基、氨基磺酰基、单C1-C3烷基氨基磺酰基和双C1-C3-烷基氨基磺酰基中的多至三个取代基取代；以及
每个烷基、烯基或炔基可以被卤素、NH2、NO2或羟基取代；
与选自
信号转导途径抑制剂、肿瘤免疫治疗剂、抑制BCL2蛋白质家族的试剂、抑制Mcl-1的试剂、蛋白酶体抑制剂、聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂、芳香酶抑制剂、常规细胞毒性试剂或选自阿比特龙(abiraterone)、ARN-509和MYC抑制剂的其他试剂中的至少一种试剂组合。
优选实施方案的描述
定义
如本文所用，“烷基”意指C1-C10烷基，其可以是直链的或支链的。优选地，其为C1-C6烷基部分。更优选地，其为C1-C4烷基部分。实例包括甲基、乙基、正丙基和叔丁基。它可以是二价，例如，亚丙基。
如本文所用，“环烷基”含有3个至10个碳原子。它可以是一价的或二价的。
如本文所用，“烯基”意指C2-C10烯基。优选地，其为C2-C6烯基。更优选地，其为C2-C4烯基。烯基可以是单饱和的或二饱和的，更优选地是单饱和的。实例包括乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基和1-丁烯基。它可以是二价的，例如，亚丙烯基。
如本文所用，“炔基”为C2-C10炔基，其可以是直链的或支链的。优选地，其为C2-C4炔基或部分。它可以是二价的。
C1-C10烷基、C2-C10烯基和C2-C10炔基中的每一个可以任选地被彼此取代，即，C1-C10烷基任选地被C2-C10烯基取代。它们还可以任选地被芳基、环烷基(优选地C3-C10)、芳基或杂芳基取代。它们也可以被卤素(例如F、Cl)、NH2、NO2或羟基取代。优选地，它们可以被多至10个卤素原子或更优选地多至5个卤素原子取代。例如，它们可以被1个、2个、3个、4个或5个卤素原子取代。优选地，所述卤素为氟。例如，C1-C10烷基可以是CF3、CHF2、CH2CF3、CH2CHF2或CF2CF3或OCF3、OCHF2、OCH2CF3、OCH2CHF2或OCF2CF3。
如本文所用，“芳基”意指单环、双环或三环的一价或二价(视情况而定)芳族基团，例如苯基、联苯基、萘基、蒽基，其可以任选地被多至三个取代基取代，所述取代基优选地选自C1-C6烷基、羟基、C1-C3羟基烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3单烷基氨基、C1-C3双烷基氨基、C1-C3酰氨基、C1-C3氨基烷基、单(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、双(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、C1-C3-酰氨基、C1-C3烷基磺酰基氨基、卤素、硝基、氰基、三氟甲基、羧基、C1-C3烷氧基羰基、氨基羰基、单C1-C3烷基氨基羰基、双C1-C3烷基氨基羰基、-SO3H、C1-C3烷基磺酰基、氨基磺酰基、单C1-C3烷基氨基磺酰基和双C1-C3-烷基氨基磺酰基。
氨基意指-NH2。
如本文所用，“杂芳基”意指单环、双环或三环的一价或二价(视情况而定)的包含多至4个选自氧、氮和硫的杂原子的芳族基团，例如噻唑基、四唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻吩基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基，所述基团任选地被多至三个取代基取代，所述取代基优选地选自C1-C6烷基、羟基、C1-C3羟基烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3单烷基氨基、C1-C3双烷基氨基、C1-C3酰氨基、C1-C3氨基烷基、单(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、双(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、C1-C3-酰氨基、C1-C3烷基磺酰基氨基、卤素、硝基、氰基、三氟甲基、羧基、C1-C3烷氧基羰基、氨基羰基、单C1-C3烷基氨基羰基、双C1-C3烷基氨基羰基、-SO3H、C1-C3烷基磺酰基、氨基磺酰基、单C1-C3烷基氨基磺酰基和双C1-C3-烷基氨基磺酰基。
在本发明的化合物中，某些杂芳基(即L和R3)连接至R'。然而，它们仍可以被多至三个另外的选自上文限定的基团的取代基取代。优选地，R'是唯一的取代基。
如本文所用，术语杂环或杂环烷基是包含多至4个选自氧、氮和硫的杂原子的一价或二价碳环基团。它可以是双环的或单环的。它优选地是饱和的。本文中使用词语“连接子”意指二价的。如果所述杂环是二价连接子，则所述杂环可以通过碳原子或者通过诸如N的杂原子，连接至相邻的基团。杂环的实例为哌嗪和吗啉。
所述杂环可以是单不饱和的或双不饱和的。所述基团可以任选地被独立地选自C1-C6烷基、羟基、C1-C3羟基烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3单烷基氨基、C1-C3双烷基氨基、C1-C3酰氨基、C1-C3氨基烷基、单(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、双(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、C1-C3-酰氨基、C1-C3烷基磺酰基氨基、诸如F的卤素、硝基、氰基、三氟甲基、羧基、C1-C3烷氧基羰基、氨基羰基、单C1-C3烷基氨基羰基、双C1-C3烷基氨基羰基、-SO3H、C1-C3烷基磺酰基、氨基磺酰基、单C1-C3烷基氨基磺酰基和双C1-C3-烷基氨基磺酰基中的多至三个取代基取代。
如本文所用，上述基团之后可以接后缀亚基(-ene)。这意指该基团是二价的，即连接子基团。
如本文所用，“硫醇-保护基团”通常是：
(a)形成硫醚以保护硫醇基团的保护基团，例如任选地被C1-C6烷氧基(例如甲氧基)、C1-C6酰氧基(例如乙酰氧基)、羟基和硝基、吡啶甲基、吡啶甲基-N-氧化物、蒽基甲基、二苯基甲基、苯基、叔丁基、金刚烷基、C1-C6酰氧基甲基(例如新戊酰氧基甲基、叔丁氧基羰基氧基甲基)取代的苄基；
(b)形成单硫代、二硫代或氨基硫缩醛以保护硫醇基团的保护基团，例如C1-C6烷氧基甲基(例如甲氧基甲基、异丁氧基甲基)、四氢吡喃基、苄硫基甲基、苯硫基甲基、噻唑烷、乙酰胺甲基、苯甲酰氨基甲基；
(c)形成硫酯以保护硫醇基团的保护基团，例如叔丁氧基羰基(BOC)、乙酰基及其衍生物、苯甲酰基及其衍生物；或者
(d)形成氨基甲酸硫酯以保护硫醇基团的保护基团，例如氨基甲酰基、苯基氨基甲酰基、C1-C6烷基氨基甲酰基(例如甲基氨基甲酰基和乙基氨基甲酰基)。
本发明的优选基团-式(I)化合物
优选地，至少一个R2为H。优选地，两个R2基团均为H。
基团W是锌螯合残基，即，能够与HDAC活性位点中的锌结合的亲金属物(metallophile)。合适的亲金属物是本领域技术人员已知的。
在优选的实施方案中，W选自：
其中，R1如权利要求1中所定义，Pr2为H或硫醇保护基团，Z选自O、S或NH，以及T为N或CH。
当W为COOR1时，优选地R1不是卤素。更优选地，当W为COOR1时，R1为H或C1-C10烷基。
优选地，W为-COOH、-CONHOH、CONHSO2CH3、-CONHNHSO2CH3、-CONHNH2、-CONH(2-吡啶基)、-NHCONHOH、四唑、羟基吡啶-2-硫酮或羟基吡啶-2-酮。优选地，W不是COOR1。更优选地，W为COOMe、-CONHOH、CONHSO2CH3、-CONHNHSO2CH3、-CONHNH2、-CONH(2-吡啶基)、-NHCONHOH、四唑、羟基吡啶-2-硫酮或羟基吡啶-2-酮。甚至更优选地，W为-CONHOH、四唑、羟基吡啶-2-硫酮或羟基吡啶-2-酮。最优选地，W为-CONHOH。
在优选的实施方案中，在至少一个L基团中，优选地在两个L基团中，与X直接键合的原子为碳，并且至少一个氮原子与所述碳直接键合。
在实施方案中，至少一个L基团为5元杂芳基。优选地，至少一个L基团为6元杂芳基。甚至更优选地，两个L基团均为6元杂芳基。
优选地，至少一个L基团为吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、噁二唑基、吡唑基、噻二唑基、吡嗪基、苯并稠合噻唑基、苯并稠合噁唑基或苯并稠合咪唑基。更优选地，至少一个L基团为吡啶基或吡嗪基。最优选地，一个L为吡嗪基并且一个L为吡啶基。优选地，当L为吡啶基时，其被杂芳基取代。所述杂芳基优选地为被任选地取代的(优选被取代的)吡啶。
优选地，至少一个L基团为吡啶基、噁二唑基、吡唑基、噻二唑基、吡嗪基，苯并稠合噻唑基、苯并稠合噁唑基或苯并稠合咪唑基。
优选地，至少一个L基团为5元或6元杂芳基，其任选地与苯稠合。
优选地，Q为键或O。
优选地，R3为芳基。更优选地，R3为亚苯基或被卤素取代的亚苯基。
优选地，至少一个R2、优选地两个R2为H。
在优选的实施方案中，至少一个R'为H、卤素、CF3、C1-C6烷基、任选地被卤素取代的芳基或任选地被卤素取代的杂芳基。优选地，所述烷基被至少一个卤素取代，所述卤素优选为氟。
在优选的实施方案中，与R3连接的R'为氢或卤素。优选地，R3为氢或氟。更优选地，与R3连接的R'为氢。在优选的实施方案中，至少一个R'，优选地至少一个与L连接的R'，为H、C1-C10烷基或O-(C1-C10烷基)。优选地，至少一个R'为取代或未取代的芳基或O-(取代或未取代的芳基)。优选地，至少一个R'为芳基或O-芳基，其中每一个均可以被卤素、氨基或C1-C10烷基取代。所述芳基可以在任何位置被取代。所述芳基可以是单取代的、双取代的或三取代的。
在优选的实施方案中，至少一个R'，优选地与L连接的R'中的至少一个，为H、C1-C10烷基或O-(C1-C10烷基)、卤素、C1-C10杂环烷基、芳基(优选任选地被取代的苯基)、三氟甲基或杂芳基，优选地杂芳基。优选地，当R'为杂芳基时，其为任选地被取代的吡啶基，优选地为被取代的吡啶基。
在一个实施方案中，与L连接的至少一个R'为OCH3或CH3。优选地，与L连接的R'中的至少一个为杂环烷基。优选地，所述杂环烷基为吗啉代。
在优选的实施方案中，当Q为直接键时，R1为H、C1-C10烷基或O-(C1-C10烷基)、卤素(优选F)、C1-C10杂环烷基(优选地吗啉代)、芳基(优选任选地被取代的苯基)、三氟甲基或杂芳基，优选地为杂芳基。优选地，当R1为杂芳基时，其为任选地被取代的吡啶基，优选地为被取代的吡啶基。
在优选的实施方案中，R1为C1-C10烷基、C2-C10烯基或C2-C10炔基，优选地这些基团被卤素、NH2、NO2或羟基取代。更优选地，当R'或R1为C1-C10烷基时，其可以被卤素取代，所述卤素优选为氟。所述C1-C10烷基可以被多至10个卤素原子取代，或优选地被多至5个卤素原子取代，即，1个、2个、3个、4个或5个卤素原子。例如，R'或R1可以为CF3、CHF2、CH2CF3、CH2CHF2或CF2CF3或OCF3、OCHF2、OCH2CF3、OCH2CHF2或OCF2CF3。
R'可以在L基团的任意环原子上或R2基团的任意环原子上被取代。
优选地，所述L和R3基团除了R'外没有其他取代基。
优选地，Q为直接键。
优选地，除了N原子之外，L在杂芳基环中含有至少一个选自N、O或S的其他杂原子。
在优选的实施方案中，L为：
在优选的实施方案中，L为氢键-受体，并且优选地L也不是氢键供体。优选地，L不具有与电负性原子(例如N或O)连接的氢原子。
氢键受体/供体的定义是本领域技术人员已知的。例如，氢键供体将具有与电负性原子(例如N或O)连接的氢。例如，氢键受体将具有带有自由孤对的N或O。
优选地，与权利要求1的式中的N原子直接键合的L的原子为碳，并且至少一个氮原子直接键合至所述碳上(优选地经由双键)。更优选地，所述氮原子为氢键受体。
例如，本文提供了由以下表示的HDAC抑制剂：
AA为单环5元至6元杂芳基或8元至10元双环杂芳基，其中AA具有至少一个氮，以及任选地一个或多个另外的杂原子；
BB为具有一个或两个氮的单环5元至6元杂芳基；
X2为N或CR12；
R12为H或卤素；
其中AA或BB任选地被取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基、吡啶基和NR13R14；
R13和R14各自选自H和C1-4烷基，或者R13和R14与它们所连接的氮一起形成任选地具有另外的杂原子的5元至6元杂环；
其中C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基或吡啶基，每次出现时，可以各自任选地被选自一个、两个或三个卤素的取代基取代；NRaRb，其中Ra和Rb各自为H或C1-3烷基。
本发明的优选组合试剂
式(I)的HDAC抑制剂(例如，式(II)或如本文所公开的)可以与信号转导途径抑制剂组合。
在一些实施方案中，所述信号转导途径抑制剂选自以下所列：
i.布鲁顿氏(Bruton’s)酪氨酸激酶(BTK)抑制剂(例如依鲁替尼、CC-292、CNX-774、CGI1746、LFMA13、RN486)；
ii.脾酪氨酸激酶(SYK)抑制剂(例如R788(福他替尼(Fostamatinib))、R406、GS-9973、白皮杉醇、PRT062607)；
iii.BMX非受体酪氨酸激酶抑制剂；BMX为Tec激酶家族的成员；抑制剂包括BMX-IN-1；
iv.间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂(例如，色瑞替尼、克唑替尼、TAE684、AP26113、艾乐替尼、PF-06463922、GSK1838705A、AZD3463、ASP3016)；
v.酪氨酸激酶(包括生长因子受体酪氨酸激酶)的小分子抑制剂和靶向酪氨酸激酶(包括生长因子受体酪氨酸激酶)的生物制剂，例如：
i.表皮生长因子受体(EGFR)(例如曲妥珠单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、扎鲁木单抗(Zalutumumab)、尼妥珠单抗、马妥珠单抗、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、AP26113)；
ii.血小板衍生生长因子受体(PDGFR)(例如索拉非尼、舒尼替尼、卡博替尼、阿西替尼、AZD2932、多韦替尼、LY2874455、福来替尼(Foretinib)、凡德他尼、SKLB1002、BMS-794833、Ki8751、阿帕替尼、AEE788、替伏扎尼(Tivozanib)、布立尼布、ENMD-2076、乐伐替尼、OSI-930、帕唑帕尼、RAF265、CYC116、PD173074、PD173074、KRN633、卡博替尼、ZM306416、戈瓦替尼(Golvatinib)、ZM323881、司马沙尼(Semaxanib)、SAR131675、MGCD-265、奥安替尼(Orantinib)、Vantanalib、西地尼布、瑞戈非尼)；
iii.成纤维细胞生长因子受体(FGFR)(例如帕纳替尼、BGJ398、尼达尼布、PD173074、CH5183284、LY2874455、AZD4547、达鲁舍替、酪氨酸磷酸化抑制剂(Tyrphostin)、SSR128129E、MK-2461、布立尼布、TSU-68)；
iv.血管内皮生长因子受体(VEGFR)(例如卡博替尼、PD153035)；
vi.血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂(例如贝伐单抗、兰尼单抗)；
vii.核糖体蛋白质S6激酶的小分子抑制剂，p-70S6K(例如LY2584702、BI-D1870、PF-4708671、AT7867、AT13148)；
viii.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的抑制剂(例如西罗莫司、依维莫司、AZD8055、替西罗莫司、MHY1485、唑他莫司、KU-0063794、ETO-46464、GDC-0349、XL388、WYE-354、WYE-125132、WAY-600、WYE-687、PP121、AZD2014、INK128、沃达拉利司(Voxtalisib)、地磷莫司、拓克尼布(Torkinib)、OSI-027、帕洛米德(Palomid)529)；
ix.RAF激酶抑制剂(例如维莫非尼、达拉菲尼、索拉非尼、PLX-4720、LY3009120、RAF265、AZ638、康奈非尼(Encorafenib)、GDC-0879、CEP-32496、TAK-632、ZM-336372、NVP-BHG712、SB590885、GW5074)；
j.丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂(例如曲美替尼、司美替尼、PD0325901、U0126、PD184352、GDC-0623、BI-847325、考比替尼(Cobimetinib)、PD98059、BIX-02189、比尼替(Binimetinib)、Pimasertib、CL-327、AZD8330、TAK-733、PD318088、Redametinib)；
k.BCR-ABL抑制剂(例如伊马替尼、达沙替尼、塞卡替尼、尼罗替尼、帕纳替尼、PD173955、达鲁舍替、AT9283、GNF-5、GZD824、KW-2449、DCC-2036、NVPBHG712、GNF-2、Baferinib、Degrasyn)；
l.细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂(例如SCH772984、XMD8-92、FR-180204、GDC-0994、ERK5-IN-1、Ulixertinib)；
m.JAK-STAT信号传导抑制剂(例如帕瑞替尼(Pacritinib)、托法替尼、AZD1480、鲁索替尼、非达替尼(Fedratinib)、AT9283、赛度替尼(Cerdulatinib)、Filgotinic、Go6976、AG-490、莫罗替尼(Momelotinib)、GLPG0634、ZM039923、ZL019、莪术醇、CEP-33779、AZ-960、TG1011209、NVP-BSK805、巴瑞克替尼(Baricitinib)、AP1066、WHI-P154、Gandotinib)；
n.NF-κB-诱导激酶(NIK)抑制剂。
本文考虑了HDAC抑制剂(例如，式(I)或(II)的HDAC抑制剂与信号转导途径抑制剂组合，例如，信号转导途径抑制剂吉非替尼)。
本文还考虑了所公开的HDAC抑制剂(例如，式(I)或(II)的化合物)与肿瘤免疫治疗剂的组合。肿瘤免疫治疗剂也可以称为免疫调节剂(IMiD)。在一些实施方案中，所述肿瘤免疫治疗剂选自以下所列：
·小分子
a.PI3K抑制剂(例如WO 2011/021038和WO 2015/121657中列出的那些)；
b.吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂(例如NLG919、INCB024360、吲哚西美德(Indoximod))；
c.免疫调节剂(IMiD)(例如来那度胺、泊马度胺、沙利度胺)；
·生物试剂
a.抗PD-1试剂：(例如派姆单抗、纳武单抗、皮地珠单抗(Pidilizumab)、AMP-224)；
b.抗PD-L1制剂(例如MSB0010718C、阿特珠单抗(Atezolizumab)、MEDI4736、MPDL3280A)；
c.CTLA-4靶向制剂(例如易普利姆玛)。
在实施方案中，所公开的诸如式(I)或(II)化合物的HDAC抑制剂可以与抑制BCL2蛋白质家族的试剂(例如BCL-2、BCL-xL、BCL-w)组合。此类试剂的实例包括ABT-737、ABT-263、奥巴克拉(Obatoclax)、维奈托克(Venetoclax)、塞布妥克(Sabutoclax)、AT101、HA14-1、BAM7。
优选地，当例如式(I)化合物与肿瘤免疫治疗剂组合时，所述肿瘤免疫治疗剂为来那度胺或泊马度胺。
本文还考虑了所公开的HDAC抑制剂与抑制Mcl-1的试剂(例如UMI-77)组合。
所公开的诸如式(I)或(II)化合物的HDAC抑制剂可以与蛋白酶体抑制剂(例如卡非佐米、硼替佐米、MG-132、MLN9708、伊沙佐米(Ixazomib)、ONX-0914、奥普佐米(Oprozomib)、PI-1840、CEP-18770、南蛇藤醇)组合。优选地，当所公开的HDAC抑制剂与蛋白酶体抑制剂组合时，所述蛋白酶体抑制剂为硼替佐米或卡非佐米。
所公开的诸如式(I)或(II)化合物的HDAC抑制剂可以与聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂(例如奥拉帕尼、维利帕尼(Veliparib)、卢卡帕尼(Rucaparib)、Inipararib、他拉唑帕尼(Talazoparib)、G007-LK、NU1025、AG-14361、INO-1001、UPF-1069、AZD-2461、PJ34、ME0328、A-966492)组合。
所公开的诸如式(I)或(II)化合物的HDAC抑制剂可以与芳香酶抑制剂(例如来曲唑、阿那曲唑)组合。
所公开的诸如式(I)或(II)化合物的HDAC抑制剂可以与常规细胞毒性试剂组合，所述常规细胞毒性试剂包括：铂复合物，例如顺铂和卡铂；米托蒽醌；长春花生物碱，例如长春新碱和长春花碱；蒽环抗生素，例如道诺霉素和阿霉素；烷基化剂，例如，苯丁酸氮芥和美法仑；紫杉烷，例如紫杉醇；叶酸拮抗物，例如甲氨蝶呤和雷替曲塞；表鬼臼毒素，例如依托泊苷；喜树碱，例如伊立替康及其活性代谢产物SN38；DNA甲基化抑制剂，例如在WO02/085400中公开的DNA甲基化抑制剂。
所公开的诸如式(I)或(II)化合物的HDAC抑制剂可以与选自阿比特龙、ARN-509、MYC抑制剂的其他试剂组合。
一般说明-组合物(组合)
本发明的药物组合物包括如以上定义的化合物/组合，以及药物可接受的载体或稀释剂。典型地，本发明的药物组合物包含多至85wt％的本发明的化合物。更典型地，它包含多至50wt％的本发明的化合物。优选的药物组合物是无菌和无热原的。进一步地，本发明提供的药物组合物通常包含本发明的化合物，所述化合物基本上是纯光学异构体。优选地，所述药物组合物包含本发明的化合物的药物可接受的盐形式。例如，本文考虑了药物可接受的组合物，其包含所公开的化合物和药物可接受的赋形剂。
如本文所用，药物可接受的盐是具有药物可接受的酸或碱的盐。药物可接受的酸包括无机酸例如盐酸、硫酸、磷酸、焦磷酸、氢溴酸或硝酸，以及有机酸例如柠檬酸、富马酸、马来酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、酒石酸、苯甲酸、乙酸、甲磺酸、乙磺酸、乙二磺酸、水杨酸、硬脂酸、苯磺酸或对甲苯磺酸。药物可接受的碱包括碱金属(例如钠或钾)和碱土金属(例如钙或镁)氢氧化物以及有机碱例如烷基胺、芳基胺或杂环胺。
为避免疑义，本发明还涵盖在体内反应以产生本发明的化合物的前药。
本发明的式(I)的化合物可以通过对本领域技术人员显而易见的合成路径来制备，例如基于实施例。
本发明的式(I)的化合物和包含它们的组合物可以以多种剂型施用。在一个实施方案中，包括本发明的化合物的药物组合物可以以适于口服、直肠、肠胃外、鼻内或经皮施用或者通过吸入施用或通过栓剂的形式配制。典型的施用途径是肠胃外、鼻内或经皮施用或通过吸入施用。
本发明的式(I)的化合物和本发明的组合物可以口服施用，例如片剂、药片、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉末或颗粒。本发明优选的药物组合物是适于口服施用的组合物，例如片剂和胶囊。
本发明的式(I)的化合物和本发明的组合物还可以通过肠胃外施用，无论是皮下、静脉、肌内、胸骨内、经皮或是通过输注技术。所述化合物也可以作为栓剂施用。
本发明的式(I)的化合物和组合物也可以通过吸入施用。与通过口服途径摄取的许多药物相比，吸入药物的优势在于它们直接递送至丰富的血液供应区域。因此，吸收非常迅速，因为肺泡具有巨大的表面积和丰富的血液供应，并且绕过首过代谢。进一步的优势可以是治疗肺系统的疾病，使得通过吸入递送药物将它们递送至需要治疗的细胞附近。
本发明还提供包含这种药物组合物的吸入装置。典型地，所述装置是定量吸入器(MDI)，其含有药物可接受的化学推进剂以将药物推出所述吸入器。
本发明的组合物还可以通过鼻内施用来施用。鼻腔的高渗透性组织对药物的接受能力非常好并且快速有效地吸收它，比片剂形式的药物更能吸收。鼻腔药物递送比注射具有更少的疼痛和侵入性，使病人产生更少的焦虑。通过这种方法，吸收非常迅速，并且通常绕过首过代谢，因此减少病人间的变异性。进一步地，本发明还提供了含有这种药物组合物的鼻内装置。
本发明的组合物还可以通过经皮施用来施用。因此，本发明还提供了包含本发明的化合物的经皮贴剂。
本发明的组合物还可以通过舌下施用来施用。因此，本发明还提供了包含本发明的化合物的舌下片剂。
本发明的组合物还可以与通过除病人正常代谢之外的过程减少物质降解的试剂一起配制，例如抗菌剂，或者蛋白酶的抑制剂，所述蛋白酶可能存在于患者体内或生活在患者身上或患者体内的共生或寄生虫有机体中并且能够降解所述化合物。
用于口服施用的液体分散体可以是糖浆、乳液和悬浮液。
悬浮液和乳液可以含有如载体，例如天然树胶、琼脂、海藻酸钠、果胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇。用于肌内注射的悬浮液或溶液可以含有与活性化合物一起的药物可接受的载体，例如无菌水、橄榄油、油酸乙酯、二醇(例如丙二醇)，以及(如果需要)适量的盐酸利多卡因。
用于注射或输注的溶液可以含有如载体，例如无菌水或者优选地它们可以是无菌溶液、含水溶液、等渗盐溶液的形式。
本发明的组合物或方法可以用于治疗和预防癌症，并且可以用于单一治疗或联合治疗。当用于联合治疗时，本发明的化合物通常与小化合物一起使用，所述小化合物例如铂复合物、抗代谢物、DNA拓扑异构酶抑制剂、放射物、基于抗体的治疗剂(例如赫赛汀和利妥昔单抗)、抗癌接种疫苗、基因治疗剂、细胞治疗剂、激素治疗剂或细胞因子治疗剂。
认为HDAC有助于几种不同疾病的病理学和/或症状学，使得通过抑制HDAC降低对象中HDAC的活性可以用于治疗性地解决这些疾病状态。本文中描述了使用本发明的HDAC抑制剂可以治疗的各种疾病的实例。
可以使用本发明所考虑的组合中的HDAC抑制剂治疗的一组适应症是涉及不期望的或不受控制的细胞增殖的那些适应症。这些适应症包括良性肿瘤、各种类型的癌症例如原发性肿瘤和肿瘤转移、再狭窄(例如冠状动脉、颈动脉和脑损伤)、内皮细胞异常刺激(动脉粥样硬化)、手术引起的身体组织损伤、异常的伤口愈合、异常的血管生成、导致组织纤维化的疾病、重复性运动障碍、未高度血管化的组织障碍，以及与器官移植相关的增殖反应。HDAC抑制剂的更具体的适应症包括但不限于前列腺癌、肺癌、急性白血病、多发性骨髓瘤、膀胱癌、肾癌、乳腺癌、结肠直肠癌、成神经细胞瘤和黑素瘤。
在一个实施方案中，提供了一种用于治疗与不期望的和不受控制的细胞增殖相关的疾病的方法。所述方法包括向经受不受控制的细胞增殖的对象施用治疗有效量的根据本发明的HDAC抑制剂，使得所述不受控制的细胞增殖减少，同时施用可以改善所治疗病症的另一方面的或者还可以治疗不受控制的细胞增殖的另外的治疗剂。待使用的HDAC抑制剂的具体剂量将取决于疾病状态的严重程度、施用途径以及可以由主治医师决定的相关因素。通常，可接受的和有效的日剂量是足以有效减缓或消除不受控制的细胞增殖的量。
根据本发明的组合物还可以与其他试剂联合使用以抑制不期望的和不受控制的细胞增殖。可以与本发明的HDAC抑制剂联合使用的其他抗细胞增殖剂的实例包括但不限于视黄酸及其衍生物、2-甲氧基雌二醇、血管抑素(AngiostatinTM)蛋白质、内皮抑素(EndostatinTM)蛋白质、苏拉明、角鲨胺、金属蛋白酶-1的组织抑制剂、金属蛋白酶-2的组织抑制剂、纤溶酶原激活物抑制剂-1、纤溶酶原激活物抑制剂-2、软骨源抑制剂、紫杉醇、血小板因子4、硫酸鱼精蛋白(鲱精蛋白)、硫酸化甲壳质衍生物(由皇后蟹壳(queen crabshell)制备)、硫酸化多糖肽聚糖复合物(sp-pg)、星形孢菌素、基质代谢调节剂，包括例如脯氨酸类似物((1-氮杂环丁烷-2-甲酸(LACA)、顺式羟基脯氨酸、d,l-3,4-脱氢脯氨酸、硫代脯氨酸)、β-氨基丙腈富马酸酯、4-丙基-5-(4-吡啶基)-2(3H)-噁唑酮；甲氨蝶呤、米托蒽醌、肝素、干扰素、2巨球蛋白血清、chimp-3、胰凝乳蛋白酶抑素、β-环糊精十四硫酸酯、环氧红霉素碱(eponemycin)；夫马菌素、硫代苹果酸金钠、d-青霉胺(CDPT)、β-1-抗胶原酶血清、α-2-抗纤维蛋白溶酶、比生群、氯苯扎利二钠、n-(2-羧基苯基)-4-氯邻氨基苯甲酸(chloroanthronilic acid)二钠或“CCA”、沙利度胺；血管抑制类固醇、羧基氨基咪唑；金属蛋白酶抑制剂例如BB94。可以使用的其他抗血管生成剂包括抗体，优选针对这些血管生成生长因子的单克隆抗体：bFGF、aFGF、FGF-5、VEGF亚型、VEGF-C、HGF/SF和Ang-1/Ang-2。Ferrara N.和Alitalo，K.“Clinical application of angiogenic growth factors andtheir inhibitors”(1999)Nature Medicine 5：1359-1364。
通常，良性肿瘤中的细胞保持其分化特征并且不以完全不受控制的方式分裂。良性肿瘤通常是局部的和非转移性的。可以使用本发明的HDAC抑制剂治疗的具体类型的良性肿瘤包括血管瘤、肝细胞腺瘤、海绵状血管瘤、局灶性结节性增生、听神经瘤、神经纤维瘤、胆管腺瘤、胆管囊瘤、纤维瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤、结节性再生性增生、沙眼和化脓性肉芽肿。
在恶性肿瘤的情况下，细胞变成是未分化的，对身体的生长控制信号没有反应，并且以不受控制的方式增殖。恶性肿瘤是侵入性的并且能够扩散到远处的部位(转移)。恶性肿瘤一般分为两类：原发性和继发性。原发性肿瘤直接来自发现它们的组织。继发性肿瘤或转移瘤是起源于身体其他部位但现在已扩散到远处器官的肿瘤。转移的常见路径是直接生长进入邻近结构中、通过血管或淋巴系统扩散，以及沿组织界面和身体空间(腹膜液，脑脊髓液等)追踪。
可以使用HDAC抑制剂(例如与如本文公开的所考虑的其他治疗剂组合)治疗的特定类型的癌症或恶性肿瘤(原发性或继发性)包括但不限于白血病、乳腺癌、皮肤癌、骨癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、脑癌、喉癌、胆囊癌、胰腺癌、直肠癌、甲状旁腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、神经组织癌、头颈癌、结肠癌、胃癌、支气管癌、肾癌、基底细胞癌、溃疡型和乳头型鳞状细胞癌、转移性皮肤癌、骨肉瘤、尤因氏(Ewing’s)肉瘤、网状细胞肉瘤(veticulum cellsarcoma)、骨髓瘤、巨细胞瘤、小细胞肺瘤、胆结石、胰岛细胞瘤、原发性脑瘤、急性和慢性淋巴细胞性瘤和粒细胞性瘤、毛细胞瘤、腺瘤、增生、髓样癌、嗜铬细胞瘤、粘膜神经瘤、肠神经节瘤(intestinal ganglloneuromas)、增生性角膜神经瘤、马凡氏体型瘤(marfanoidhabitus tumour)、维尔姆斯氏瘤(Wilms’tumour)、精原细胞瘤、卵巢瘤、平滑肌瘤(leiomyomater tumour)、宫颈发育不良和原位癌、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、软组织肉瘤、恶性类癌(malignant carcinoid)、局部皮肤病变、蕈样霉菌病、横纹肌肉瘤、卡波济氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、成骨肉瘤和其他肉瘤、恶性高钙血症、肾细胞瘤、真性红细胞增多症(polycythermia vera)、腺癌、多形性胶质母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、噁性黑素瘤、表皮样癌以及其他癌和肉瘤。
所述HDAC抑制剂，例如与如本文公开的考虑的其他治疗剂组合，也可用于治疗由于在手术期间对身体组织的损伤引起的异常细胞增殖。这些损伤可能是由于各种外科手术例如关节手术、肠道手术和瘢痕瘤疤痕的结果。产生可以使用本发明的HDAC抑制剂治疗的纤维化组织的疾病包括肺气肿。可以使用本发明治疗的重复性运动障碍包括腕管综合征。可以使用本发明治疗的细胞增殖性病症的实例是骨肿瘤。
可以使用本发明的HDAC抑制剂治疗的与器官移植相关的增殖反应包括促发潜在器官排斥或相关并发症的增殖反应。具体地，这些增殖反应可以在心脏、肺、肝脏、肾脏以及其他身体器官或器官系统的移植期间发生。
可以使用本发明治疗的异常血管生成包括那些异常血管生成，所述异常血管生成伴随类风湿性关节炎、缺血性再灌注相关的脑水肿和损伤、皮质缺血、卵巢增生和血管增多、多囊卵巢综合征、子宫内膜异位症、银屑病、糖尿病性视网膜病变(diabeticretinopathy)以及诸如早产儿视网膜病变(晶状体后纤维形成)的其他眼部血管生成疾病、黄斑变性、角膜移植排斥反应、神经性血管性青光眼(neuroscular glaucoma)和奥斯特韦伯(Oster Webber)综合征。
可根据本发明治疗的与不受控制的血管生成相关的疾病的实例包括但不限于视网膜/脉络膜新血管形成和角膜新血管形成。包括视网膜/脉络膜新血管形成的一些组分的疾病的实例包括但不限于贝斯特氏(Best’s)疾病、近视、视盘小凹(optic pit)、Stargart氏疾病、Paget氏疾病、静脉阻塞、动脉闭塞、镰状细胞贫血、肉状瘤、梅毒、弹性假黄瘤颈动脉载脂蛋白结构性疾病、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、分枝杆菌感染、莱姆病(Lyme’sdisease)、系统性红斑狼疮、早产儿视网膜病变、Eale氏疾病、糖尿病视网膜病变、黄斑变性、Bechet氏疾病、引起视网膜炎或脉络膜炎的感染、拟眼组织胞浆菌病、睫状体扁平部炎、慢性视网膜脱落、高粘滞综合征、弓形虫病、创伤和激光后并发症、与虹膜发红(rubesis)(角的新血管形成)相关的疾病和由纤维血管或纤维组织的异常增殖引起的疾病(包括所有形式的增生性玻璃体视网膜病变)。角膜新血管形成的实例包括但不限于流行性角膜结膜炎、维生素A缺乏症、隐形眼镜致使过度磨损、特应性角膜炎、上边缘性角膜炎、翼状胬肉干燥性角膜炎、舍格伦综合征(sjogrens)、红斑痤疮、疱性角结膜病(phylectenulosis)、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病、角膜移植物排斥反应、蚕食性角膜溃疡、Terrien氏边缘变性、边缘角质层分离、多动脉炎、韦格纳(Wegener)结节病、巩膜炎、放射状角膜切开术、新生血管性青光眼和晶状体后纤维形成、梅毒、分枝杆菌感染、脂质变性、化学烧伤、细菌性溃疡、真菌性溃疡、单纯疱疹感染、带状疱疹感染、原生动物感染以及卡波西肉瘤。
还可以使用本发明的HDAC抑制剂治疗与不受控制的血管生成相关的慢性炎症性疾病。慢性炎症依赖于毛细管芽的连续形成以维持炎症细胞的流入。炎症细胞的流入与存在产生肉芽肿，从而维持慢性炎症性病症。单独使用HDAC抑制剂或与其他抗炎剂联合使用抑制血管生成，可以防止肉芽肿的形成，从而减轻疾病。慢性炎症性疾病的实例包括但不限于诸如克罗恩(Crohn’s)氏疾病和溃疡性结肠炎的炎症性肠病、银屑病、结节病以及类风湿性关节炎。
诸如克罗恩氏疾病和溃疡性结肠炎的炎症性肠病的特征在于胃肠道中各个部位的慢性炎症和血管生成。例如，克罗恩氏疾病作为慢性透壁炎症性疾病发生，其最常见影响回肠末端和结肠，但也可能发生在从口腔至肛门及肛周区域的胃肠道的任何部分。患有克罗恩氏疾病的患者通常患有与腹痛、发烧、厌食、体重减轻和腹部肿胀相关的慢性腹泻。溃疡性结肠炎也是在结肠粘膜中出现的慢性、非特异性、炎症性和溃疡性的疾病，其特征在于存在血性腹泻。这些炎症性肠病通常由贯穿胃肠道中的慢性肉芽肿性炎症引起，涉及由一群炎症性细胞包围的新毛细管芽。通过这些抑制剂抑制血管生成应该抑制芽的形成并且防止肉芽肿的形成。炎症性肠病也表现出肠外表现，例如皮肤病变。这种病变的特征在于炎症和血管生成，并且可以发生在胃肠道以外的许多部位。通过根据本发明的HDAC抑制剂抑制血管生成可以减少炎症性细胞的流入并且防止病变形成。
结节病是另一种慢性炎症性疾病，其特征在于多系统肉芽肿性病症。这种疾病的肉芽肿可以在体内的任何地方形成。因此，症状取决于肉芽肿的部位以及疾病是否活跃。肉芽肿由血管生成毛细管芽形成，其提供恒定的炎症细胞供应。通过使用根据本发明的HDAC抑制剂来抑制血管生成，可以抑制这种肉芽肿的形成。银屑病也是一种慢性和复发性炎症性疾病，其特征在于丘疹以及各种大小的斑块。单独使用这些抑制剂或与其他抗炎剂联合使用的治疗应该防止维持特性病变所必需的新血管的形成，并且减轻患者的症状。
类风湿性关节炎(RA)也是一种慢性炎症性疾病，其特征在于外周关节的非特异性炎症。认为关节滑膜内壁中的血管经受血管生成。除了形成新的血管网络外，内皮细胞释放因子和活性氧物质，导致血管翳生长和软骨破坏。涉及血管生成的因子可以积极地促进并帮助维持类风湿性关节炎的慢性发炎状态。单独使用根据本发明的HDAC抑制剂或与其他抗RA剂联合使用的治疗可以防止维持慢性炎症所必需的新血管的形成。
本发明的组合物可进一步用于治疗心脏/脉管系统疾病，例如肥大、高血压、心肌梗塞、再灌注、缺血性心脏病、心绞痛、心律失常、高胆固醇血症、动脉粥样硬化以及中风。所述化合物可以进一步用于治疗神经退行性病症/CNS病症，例如急性和慢性神经疾病，包括中风、亨廷顿氏病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症和阿尔茨海默氏病。
本发明的组合物也可以用作抗微生物剂，例如抗菌剂。因此，本发明还提供了用于治疗细菌感染的化合物。本发明的化合物可以用作针对病毒、细菌、真菌和寄生虫感染的抗感染性化合物。因此，本发明还提供了用于治疗病毒感染(作为抗病毒剂)、真菌感染(作为抗真菌剂)或寄生虫感染(作为抗寄生虫剂)的化合物。感染的实例包括原生动物寄生性感染(包括疟原虫、隐孢子虫、弓形虫、筋脉肉孢子虫和艾美球虫属)。本发明的组合物特别适用于不期望的或不受控制的细胞增殖的治疗，优选地用于良性肿瘤/增生和恶性肿瘤的治疗，更优选地用于恶性肿瘤的治疗，最优选地用于慢性淋巴细胞白血病(CLL)、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、间皮瘤、T细胞淋巴瘤的治疗。
优选地，本发明的化合物用于实体肿瘤和血液学肿瘤的治疗。
在本发明优选实施方案中，本发明的组合物用于减轻癌症、心脏肥大、慢性心力衰竭、炎症性病况、心血管疾病、血红蛋白病、地中海贫血、镰状细胞病、CNS病症、自身免疫疾病、器官移植排斥反应、糖尿病、骨质疏松症、MDS、良性前列腺增生、口腔粘膜白斑、基因相关的代谢病症、感染、鲁宾斯-泰比(Rubens-Taybi)、脆性X综合征或α-1抗胰蛋白酶缺乏症，或促进伤口愈合、保护毛囊或作为免疫抑制剂。
通常，所述炎症性病况为皮肤炎症性病况(例如银屑病、痤疮和湿疹)、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎(RA)、炎症性肠病(IBD)、克罗恩氏疾病或结肠炎。
通常，所述癌症为慢性淋巴细胞白血病、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、间皮瘤或T-细胞淋巴瘤。
通常，所述心血管疾病为高血压、心肌梗塞(MI)、缺血性心脏病(IHD)(再灌注)、心绞痛、心律失常、高胆固醇血症、高脂血症、动脉粥样硬化、中风、心肌炎、充血性心力衰竭、原发性和继发性(即扩张性)(充血性)心肌病、肥厚型心肌病、限制性心肌病、外周性血管疾病、心动过速、高血压或血栓症。
通常，所述基因相关的代谢病症为囊胞性纤维症(CF)、过氧化物酶体生物发生病症或肾上腺脑白质营养不良。
通常，本发明的所述化合物在器官移植后用作免疫抑制剂。
通常，所述感染为病毒、细菌、真菌或寄生虫感染，特别是S金黄色葡萄球菌、P痤疮、假丝酵母或曲霉菌的感染。
通常，所述CNS病症为亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、多发性硬化症或肌萎缩性脊髓侧索硬化症。
在该实施方案中，本发明的组合物可以用于减轻癌症、心脏肥大、慢性心力衰竭、炎症性病况、心血管疾病、血红蛋白病、地中海贫血、镰状细胞病、CNS病症、自身免疫疾病、糖尿病或骨质疏松症，或用作免疫抑制剂。
本发明的组合物还可以用于减轻慢性淋巴细胞白血病(CLL)、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、间皮瘤、T细胞淋巴瘤、心脏肥大、慢性心力衰竭或皮肤炎症性病况，特别是银屑病、痤疮或湿疹。
本发明的组合物可以用于动物的治疗，优选地用于哺乳动物的治疗，更优选地用于人的治疗。
在适当的情况下，本发明的组合物可以预防性地用于降低这些病况的发病率。
在使用中，向患者施用治疗有效量的本发明的化合物。根据具体化合物的活性、待治疗对象的年龄、体重和病况、疾病的类型和严重程度、以及施用频率和途径，典型的剂量为约0.001mg/kg体重至50mg/kg体重。
在本发明的试剂盒和/或方法提供用于施用多于一种药的情况下，它们可以同时、依次或单独施用。它们不必包装在一起(但这是本发明的一个实施方案)。它们也不必同时施用或者它们不必为相同的剂型。如本文所用，“单独”施用意指药物作为相同总剂量方案的一部分施用(其可以包括许多天)，但优选地在同一天施用。如本文所用，“同时”意指药物一起服用或配制成单一组合物。如本文所用，“依次”意指药物在大约相同的时间施用，并且优选地在彼此约1小时内施用。
在一些实施方案中，所公开的HDAC抑制剂可以以特定剂量(例如，比单一治疗更低的剂量)施用，但当与某些抗肿瘤化合物(例如本文公开的那些)组合时可以以治疗有效量施用。例如，式(I)的HDAC抑制剂与本文所公开的某些抗肿瘤化合物的组合，可以在需要其的对象的治疗中实现协同作用，其中所述组合以当一种或两种化合物均单独施用时无效但组合使用时有效的剂量施用。
实施例
一般方法
i.用于合成仲胺的一般程序
方法A(使用BINAP)：将4,6-二甲基吡啶-2-胺(200mg，1.63mmol)、2-溴-5-氟吡啶(317mg，1.8mmol)、叔丁醇钾(236mg，2.45mmol)和(±)-BINAP(40mg，0.06mmol)在甲苯(4mL)中搅拌，并使用Ar(g)脱气30分钟。然后加入Pd2(dba)3(45mg，0.049mmol)，并将反应混合物在90℃和Ar(g)下搅拌12小时。通过TLC监测反应。在起始材料完全消耗后，将反应混合物用CH2Cl2(20mL)稀释，并加入二氧化硅。真空除去溶剂，将所得的干燥的负载材料用己烷/EtOAc(4:1-1:1)通过硅胶柱色谱法纯化，以提供N-(5-氟吡啶-2-基)-4,6-二甲基吡啶-2-胺。
方法B(使用SPhos)：将2-溴吡啶(200mg，1.26mmol)、5-甲基吡啶-2-胺(150mg，1.38mmol)、叔丁醇钾(182mg，1.89mmol)和2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯(SPhos)(20mg，0.05mmol)在甲苯(4mL)中搅拌，并将反应混合物使用Ar(g)脱气30分钟。然后加入Pd2(dba)3(34mg，0.037mmol)，并将反应混合物在90℃和Ar(g)下搅拌12小时。通过TLC监测反应。在起始材料完全消耗后，将反应混合物用CH2Cl2(20mL)稀释，并加入二氧化硅。真空除去溶剂，将所得的干燥的负载物质用己烷/EtOAc(4:1-1:1)通过硅胶柱色谱法纯化，以提供N-(吡啶-2-基)-5-甲基吡啶-2-胺。
a)3-甲氧基-N-(5-甲基吡啶-2-基)吡啶-2-胺
根据一般程序方法B(使用SPhos)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:8.44(d,J＝8.6Hz,1H),8.02-8.13(m,1H),7.73-7.93(m,2H),7.48(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),6.99(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),6.83-6.71(m,1H),3.89(s,3H),2.27(s,3H)。
b)5-甲氧基-N-(5-甲基吡啶-2-基)吡啶-2-胺
根据一般程序方法B(使用SPhos)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:8.04(d,J＝2.5Hz,1H),7.95(d,J＝3.0Hz,1H),7.50(d,J＝9.0Hz,1H),7.40(dd,J＝8.4,2.6Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),7.22(dd,J＝9.0,3.1Hz,1H),3.87(m,3H),2.25(s,3H)。
c)3-甲氧基-N-(5-吗啉代吡啶-2-基)吡啶-2-胺
根据一般程序方法B(使用SPhos)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:8.45(d,J＝9.1Hz,1H),7.94(d,J＝3.0Hz,1H),7.83(dd,J＝5.1,1.5Hz,1H),7.31(dd,J＝9.1,3.1Hz,1H),6.98(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),6.73(dd,J＝7.8,5.1Hz,1H),3.76-3.98(m,7H),3.06-3.16(m,4H)。
d)5-甲氧基-N-(5-吗啉代吡啶-2-基)吡啶-2-胺
根据一般程序方法B(使用SPhos)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:7.90(dd,J＝15.8,3.0Hz,2H),7.43(d,J＝9.0Hz,2H),7.19-7.30(m,2H),3.87(t,J＝4.8Hz,4H),3.82(s,3H),3.00-3.16(m,4H)。
e)N-(吡啶-2-基)噻吩并[3,2-c]吡啶-4-胺
根据一般程序方法B(使用SPhos)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:8.58(d,J＝8.4Hz,1H),8.26(dd,J＝5.1,2.0Hz,1H),8.12(d,J＝5.7Hz,1H),7.72(ddd,J＝8.8,7.1,1.9Hz,1H),7.51(d,J＝5.9Hz,1H),7.46(d,J＝5.4Hz,1H),7.38(d,J＝5.7Hz,1H),6.93(ddd,J＝7.1,4.8,1.0Hz,1H)。
f)6-甲基-N-(5-吗啉代吡啶-2-基)吡啶-2-胺
根据一般程序方法B(使用SPhos)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:7.94(d,J＝3.0Hz,1H),7.40-7.59(m,2H),7.24(d,J＝8.1Hz,2H),6.66(d,J＝7.3Hz,1H),3.80-3.96(m,4H),3.01-3.17(m,4H),2.45(s,3H)。
g)N-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)噻吩并[3,2-c]吡啶-4-胺
根据一般程序方法A(使用BINAP)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:8.82(d,J＝8.5Hz,1H),8.14(d,J＝5.7Hz,1H),7.83(dd,J＝18.3,10.3Hz,2H),7.51(s,1H),7.44(d,J＝5.7Hz,1H),7.29(d,J＝7.4Hz,1H)。
h)N5-(2-甲氧基乙基)-N5-甲基-N2-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶-2,5-二胺
根据一般程序方法A(使用BINAP)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:8.32(d,J＝5.2Hz,1H),7.87(d,J＝3.1Hz,1H),7.70-7.78(m,1H),7.29-7.37(m,1H),7.15(dd,J＝9.0,3.1Hz,1H),6.88-6.98(m,1H),3.54-3.59(m,2H),3.48(t,J＝5.5Hz,2H),3.37(s,3H),2.98(s,3H)。
i)N5-(2-甲氧基乙基)-N2-(3-甲氧基吡啶-2-基)-N5-甲基吡啶-2,5-二胺
根据一般程序方法B(使用SPhos)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:8.37(d,J＝9.1Hz,1H),7.80-7.82(m,2H),7.19(dd,J＝9.1,3.1Hz,1H),6.96(dd,J＝7.7,1.5Hz,1H),6.70(dd,J＝7.8,5.1Hz,1H),3.88(s,3H),3.56(t,J＝5.8Hz,2H),3.45(t,J＝5.8Hz,2H),3.36(s,3H),2.96(s,3H)。
j)N5-(2-甲氧基乙基)-N2-(5-甲氧基吡啶-2-基)-N5-甲基吡啶-2,5-二胺
根据一般程序方法B(使用SPhos)合成。
1H NMR(400MHz,氯仿-d),δH ppm:7.89(d,J＝3.0Hz,1H),7.74(d,J＝3.1Hz,1H),7.45(d,J＝9.1Hz,1H),7.37(d,J＝9.0Hz,1H),7.16-7.22(m,2H),3.82(s,3H),3.55(t,J＝5.8Hz,2H),3.43(t,J＝5.8Hz,2H),3.36(s,3H),2.94(s,3H)。
iii.烷基化和异羟肟酸形成的一般程序
将NaH(12mg，0.5mmol，2当量)在0℃和Ar(g)下分批加入至在DMF(2mL)中的仲胺(50mg，0.25mmol，1当量)中。在添加之后，将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(57mg，0.25mmol，1当量)。将反应混合物在室温和Ar(g)下搅拌2小时，并通过TLC监测反应。在起始材料完全消耗后，将反应混合物倾倒在盐水(25mL)中，用EtOAc(3×25mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。所得粗产物用己烷/EtOAc(19:1-3:1)通过硅胶柱色谱法纯化，以提供呈粘性黄色固体状的期望的甲酯。
在惰性气氛下，向甲酯(70mg，0.20mmol)在MeOH/CH2Cl2(3:1,4mL)中的搅拌溶液在0℃下加入50％的羟胺水溶液(2.5mL)，并将所得反应混合物搅拌20分钟。然后将氢氧化钠溶液(54mg在1mL水中，1.35mmol)加入反应混合物中；接着搅拌30分钟，然后将混合物升温至室温并且搅拌2小时。通过TLC监测反应。在起始材料完全消耗后，将挥发物在真空下浓缩。将残余物用乙酸酸化至pH～6。用CH2Cl2/MeOH(9:1)(3×20mL)萃取化合物；将合并的有机萃取物在真空下浓缩，以得到粗产物，将所述粗产物通过硅胶柱色谱法(1％至10％MeOH/CH2Cl2)纯化，以得到呈粘性黄色固体状的期望产物。
具体实施例
实施例A
4-{[双(吡啶-2-基)氨基]甲基}-N-羟基苯甲酰胺
将NaH(83mg，2.18mmol)在室温下加入2,2’-二吡啶基胺(2)(373mg，2.18mmol)的DMF(5mL)溶液中。15分钟后，加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(1)(500mg，2.18mmol)，随后将反应混合物在90℃和Ar(g)下搅拌1小时。一旦冷却至室温，将反应混合物倾倒在盐水(50mL)中，并用EtOAc(2×25mL)萃取。合并有机相，经MgSO4干燥、过滤，然后在真空下浓缩。将所得的残余物用己烷/EtOAc(4:1)通过硅胶柱色谱法纯化，以提供白色固体(3)(429mg，62％)。
LCMS(ES):实测值319.9[M+H]+。
将新制备的NH2OH在MeOH中的溶液(0.4M，20mL)在0℃下加入4-{[双(吡啶-2-基)氨基]甲基}苯甲酸酯(3)(100mg，0.3mmol)中，然后加入溶于MeOH(0.8M，4mL)中的KOH。然后将反应混合物在室温下搅拌18小时，随后在真空中浓缩(约5mL)并且倾倒在水(50mL)中。首先用EtOAc(25mL)萃取碱性水相，并分离各相。然后将水层用2NHCl中和，并再次用EtOAc(25mL)萃取。将得到的有机相经MgSO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩，以提供呈白色固体状的实施例A(51mg，51％)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.20-8.28(m,2H),7.59-7.67(m,4H),7.43(d,J＝8.6Hz,2H),7.17(d,J＝8.1Hz,2H),6.96(dd,J＝6.6,5.1Hz,2H),5.48(s,2H)。
LCMS(ES):实测值321.1[M+H]+。
实施例B
4-{[双(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基]甲基}-2-氟-N-羟基苯甲酰胺
将NaH(60％在油中)(50mg)加入3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-胺(1)(115mg，1mmol)在NMP(2mL)的溶液中。10分钟后，加入5-氯-3-甲基-1,2,4-噻二唑(2)(140mg，1.05mmol)，并将所得混合物在45℃和N2(g)下搅拌。4小时后，将反应混合物用EtOAc稀释，并用饱和碳酸氢盐溶液(×3)萃取。分析表明，所有期望产物均在水相中。将合并的水相浓缩至干燥；将得到的残余物用MeCN(2×100mL)浆化并过滤。浓缩滤液，以得到呈油状/NMP溶液状的(3)(700mg)。
LCMS(ES):实测值214.0[M+H]+。
将碳酸钾(360mg)和4-(溴甲基)-2-氟苯甲酸甲酯(4)(160mg，0.65mmol)加入3-甲基-N-(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(<1mmol)的MeCN(10mL)溶液中，在N2(g)下，在50℃搅拌下，加热反应混合物。2小时后，将反应混合物冷却，用EtOAc稀释，依次用水、饱和碳酸氢盐溶液和饱和盐水溶液萃取，然后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。用CH2Cl2/MeOH(1:0-97:3)在二氧化硅上纯化呈固体状的(5)(180mg，73％)。
LCMS(ES):实测值380.0[M+H]+。
将50％的羟胺水溶液(2ml)加入4-{[双(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基]甲基}-2-氟苯甲酸甲酯(5)(180mg，0.47mmol)的MeOH(8mL)溶液中。将溶液在45℃下搅拌7天，密封在小瓶中。所得反应混合物变得不均匀；冷却，通过过滤收集白色固体，用冷甲醇洗涤并真空干燥，以得到实施例B中呈固体状的标题产物(50mg，28％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:10.90(br.s.,1H),9.17(br.s.,1H),7.51(t,J＝7.6Hz,1H),7.27(d,J＝10.8Hz,1H),7.16(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),5.57(s,2H),2.50(s,6H)。
LCMS(ES):实测值381.0[M+H]+。
实施例C
2-氟-N-羟基-4-{[(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基]甲基}苯甲酰胺
将NaH(60％在油中)(50mg)加入3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-胺(1)(100mg，1mmol)的NMP(2mL)溶液中。10分钟后，加入5-氯-3-甲基-1,2,4-噻二唑(2)(150mg，1.1mmol)，并将所得混合物在45℃和N2(g)下搅拌。18小时后，进行通过LCMS的分析。
LCMS(ES):实测值198.0[M+H]+。
将NaH(60％在油中)(70mg)和4-(溴甲基)-2-氟苯甲酸甲酯(4)(200mg，0.81mmol)加入上述反应混合物中，并在45℃和N2(g)下继续加热。3小时后，加入另外量的(4)(90mg，0.36mmol)。在额外2小时后，将反应混合物冷却，用EtOAc稀释，并依次用水和饱和碳酸氢盐溶液(×2)萃取，然后经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。用CH2Cl2/MeOH(1:0-97:3)通过硅胶色谱法纯化，得到(5)(350mg，96％，经2步)。
LCMS(ES):实测值364.0[M+H]+。
将50％的羟胺水溶液(1ml)加入4-{[双(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基]甲基}-2-氟苯甲酸甲酯(5)(350mg，0.96mmol)的甲醇(5mL)粗制溶液中。将所得溶液在45℃至50℃下搅拌5天，密封在小瓶中。反应混合物变得不均匀，冷却，过滤出白色固体，浓缩所得滤液。将滤液通过RP-HPLC在Xterra 10％至70％MeCN/水+0.1％甲酸上纯化，以得到实施例C(30mg，8％)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:7.69(t,J＝7.6Hz,1H),7.12-7.22(m,2H),5.48(s,2H),2.44(s,3H),2.32(s,3H)。
LCMS(ES):实测值365.0[M+H]+。
实施例D
N-羟基-4-(((3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
将2-溴吡啶(1)(1.0g，6.32mmol)、3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-胺(2)(0.940g，9.49mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.366g，0.63mmol)和Cs2CO3(4.1g，12.64mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后将Pd2(dba)3(0.28g，0.31mmol)加入反应混合物中，将其在90℃下加热30小时。然后将其倾倒入去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈白色固体状的3-甲基-N-(吡啶-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-胺(3)(0.7g，63％)。
LCMS(ES):实测值177.1[M+H]+。
将NaH(60％)(52.5mg，1.31mmol)在5℃下和Ar(g)下分批加入3-甲基-N-(吡啶-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-胺(3)(220mg，1.25mmol)的DMF(5ml)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(372mg，1.62mmol)，并在80℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈白色固体状的4-(((3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(130mg，40％)。
LCMS(ES):实测值325.1[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(0.91g，16.3mmol)的MeOH(10mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(1.12g，16.3mmol)的MeOH(10mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(105.5mg，0.3mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(181mg，3.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(15mL/35mL)中，并用CH2Cl2(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(10:90)纯化，以提供呈淡黄色固体状的N-羟基-8-((3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)(吡啶-2-基)氨基)辛酰胺，实施例D(12.2mg，40％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.14(br.s.,1H),9.01(br.s.,1H),8.42(dd,J＝4.8,1.1Hz,1H),8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.92(ddd,J＝8.5,7.4,2.0Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,2H),7.34(d,J＝8.3Hz,2H),7.23(ddd,J＝7.3,4.9,0.8Hz,1H),5.48(s,2H),2.23(s,3H)。
LCMS(ES):实测值326.1[M+H]+。
实施例E
N-羟-4-(((1-甲基-1H-吡唑-3-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
将2-溴吡啶(1)(1.0g，6.3mmol)、1-甲基-1H-吡唑-3-胺(2)(0.79g，8.2mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.37g，0.63mmol)和Cs2CO3(4.1g，12.6mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。然后将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。加入Pd2(dba)3(0.29g，0.31mmol)，并将所得的反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-胺(3)(0.75g，68％)。
LCMS(ES):实测值175.2[M+H]+。
将NaH(60％)(60.4mg，1.5mmol)在5mC和Ar(g)下分批加入N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-胺(3)(220mg，1.4mmol)的DMF(8ml)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(428mg，1.8mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-(((1-甲基-1H-吡唑-3-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(440mg，82％)。
LCMS(ES):实测值323.1[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(3.83g，68.3mmol)的MeOH(20mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(4.74g，68.3mmol)的MeOH(20mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((1-甲基-1H-吡唑-3-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸酯(4)(440mg，1.3mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(766mg，13.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈淡棕色液体状的N-羟基-4-(((1-甲基-1H-吡唑-3-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺，实施例E(50mg，11％)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.09(ddd,J＝5.0,1.9,0.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,2H),7.52(d,J＝2.3Hz,1H),7.49(ddd,J＝8.7,7.0,1.9Hz,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),6.91(d,J＝8.6Hz,1H),6.73(ddd,J＝7.1,5.1,0.7Hz,1H),6.10(d,J＝2.4Hz,1H),5.26(s,2H),3.81(s,3H)。
LCMS(ES):实测值324.4[M+H]+。
实施例F
N-羟基-4-((吡啶-2-基(1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
将2-溴吡啶(1)(1.0g，6.3mmol)、1,3,4-噻二唑-2-胺(2)(0.64g，6.3mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.37g，0.63mmol)和Cs2CO3(3.1g，9.4mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.29g，0.31mmol)，并将所得的反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(3)(0.33g，30％)。
LCMS(ES):实测值179.0[M+H]+。
将NaH(60％)(53mg，1.3mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(3)(225mg，1.26mmol)的DMF(8ml)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(336mg，1.6mmol)，并在70℃和Ar(g)下于黑暗中继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-((吡啶-2-基(1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(118mg，33％)。
LCMS(ES):实测值327.3[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.01g，18.1mmol)的MeOH(20mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(1.26g，18.1mmol)的MeOH(20mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-((吡啶-2-基(1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(118mg，0.36mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(203mg，3.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈淡棕色液体状的N-羟基-4-((吡啶-2-基(1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺，实施例F(15mg，13％)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.96(s,1H),8.44(dd,J＝5.0,1.1Hz,1H),7.72-7.78(m,1H),7.69(d,J＝8.2Hz,2H),7.33(d,J＝8.2Hz,2H),7.06-7.11(m,2H),5.79(s,2H)。
LCMS(ES):实测值328.1[M+H]+。
实施例G
N-羟基-4-((吡嗪-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
将2-溴吡啶(1)(1.0g，6.3mmol)、吡嗪-2-胺(2)(0.67g，6.9mmol)、BINAP(0.12g，0.18mmol)、t-BuOK(0.99g，8.8mmol)合并在无水甲苯(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。加入Pd2(dba)3(0.11g，0.12mmol)，并将混合物在90℃下加热3小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1：1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(吡啶-2-基)吡嗪-2-胺(3)(0.9g，83％)。
LCMS(ES):实测值173.1[M+H]+。
将NaH(60％)(61mg，1.52mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(吡啶-2-基)吡嗪-2-胺(3)(250mg，1.45mmol)的DMF(10ml)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(432mg，1.88mmol)，并在70℃和Ar(g)下于黑暗中继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3：7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-((吡嗪-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(380mg，81％)。
LCMS(ES):实测值321.3[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(3.33g，59.0mmol)的MeOH(20mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(4.1g，59.0mmol)的MeOH(20mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-((吡嗪-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(380mg，1.1mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(666mg，11.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈淡奶油固体状的N-羟基-4-((吡嗪-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺，实施例G(20mg，5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.10(br.s.,1H),8.99(br.s.,1H),8.65(d,J＝1.4Hz,1H),8.32(ddd,J＝4.9,1.9,0.8Hz,1H),8.27(dd,J＝2.7,1.5Hz,1H),8.10(d,J＝2.6Hz,1H),7.74(ddd,J＝8.4,7.3,2.0Hz,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,2H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),7.06(ddd,J＝7.3,4.9,0.8Hz,1H),5.45(s,2H)。
LCMS(ES):实测值322.3[M+H]+。
实施例H
N-羟基-4-(((5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
将2-溴吡啶(1)(1.0g，6.3mmol)、5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-胺(2)(0.947g，8.2mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.366g，0.63mmol)和Cs2CO3(3.09g，9.4mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.289g，0.31mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1：1)纯化，以提供呈黄色固体状的5-甲基-N-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(3)(0.22g，18％)。
LCMS(ES):实测值193.2[M+H]+。
将NaH(60％)(109.3mg，1.3mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入5-甲基-N-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(3)(500mg，2.6mmol)的DMF(8ml)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(775mg，3.3mmol)中，并在70℃和Ar(g)下于黑暗中继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1：3)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-(((5-甲基-13,4-噻二唑-2-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(134mg，39％)。
LCMS(ES):实测值341.4[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.0g，19.7mmol)的MeOH(20mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(1.36g，19.7mmol)的MeOH(20mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(134g，0.39mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(221mg，3.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈淡棕色液体状的N-羟基-4-(((5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺，实施例H(15mg，11％)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.42(dd,J＝4.9,1.1Hz,1H),7.73(ddd,J＝8.6,7.2,1.8Hz,1H),7.69(d,J＝8.3Hz,2H),7.33(d,J＝8.2Hz,2H),7.02-7.09(m,2H),5.72(s,2H),2.65(s,3H)。
LCMS(ES):实测值342.1[M+H]+。
实施例I
4-((苯并[d]噁唑-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将2-溴吡啶(1)(1.0g，6.3mmol)、苯并[d]噁唑-2-胺(2)(0.871g，6.4mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.37g，0.63mmol)和Cs2CO3(3.09g，9.4mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.289g，0.31mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(吡啶-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(3)(0.8g，60％)。
LCMS(ES):实测值212.1[M+H]+。
将NaH(60％)(53mg，1.3mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(吡啶-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(3)(265mg，1.28mmol)的DMF(8mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(380mg，1.66mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-((苯并[d]噁唑-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(220mg，48％)。
LCMS(ES):实测值360.1[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.75g，31.0mmol)的MeOH(15mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(2.16g，31.0mmol)的MeOH(15mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-((苯并[d]噁唑-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(220mg，0.62mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(348mg，6.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈淡橙色固体状的4-((苯并[d]噁唑-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例I(50mg，23％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.12(br.s.,1H),9.00(br.s.,1H),8.40(dd,J＝4.7,1.8Hz,1H),8.17(d,J＝8.4Hz,1H),7.88-7.94(m,1H),7.65(d,J＝8.2Hz,2H),7.47-7.55(m,2H),7.41(d,J＝8.2Hz,2H),7.26(t,J＝7.8Hz,1H),7.14-7.22(m,2H),5.59(s,2H)。
LCMS(ES):实测值361.1[M+H]+。
实施例J
N-羟基-4-(((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
将2-溴吡啶(1)(1.0g，6.3mmol)、1-甲基-1H-吡唑-3-胺(2)(1.21g，6.9mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.37g，0.63mmol)和Cs2CO3(4.1g，12.6mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.29g，0.31mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1：1)纯化，以提供呈黄色固体状的1-甲基-N-(吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(3)(0.35g，25％)。
LCMS(ES):实测值225.1[M+H]+。
将NaH(60％)(32.8mg，0.82mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入1-甲基-N-(吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(3)(175mg，0.78mmol)的DMF(5mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(232mg，1.01mmol)，并在70℃和Ar(g)下于黑暗中继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-(((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(42mg，16％)。
LCMS(ES):实测值373.2[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.07g，19mmol)的MeOH(10mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(530mg，19.0mmol)的MeOH(10mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(142mg，0.38mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(214mg，3.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(10:90)纯化，以提供呈灰白色固体状的N-羟基-4(((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺，实施例J(9mg，7％)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.23(dd,J＝5.0,1.1Hz,1H),7.65(d,J＝8.3Hz,2H),7.58-7.63(m,2H),7.52(d,J＝8.2Hz,2H),7.41(dd,J＝6.8,1.9Hz,1H),7.24-7.32(m,2H),6.92(dd,J＝6.8,5.1Hz,1H),6.56(d,J＝8.4Hz,1H),5.37(s,2H),3.37-3.42(m,3H)。
LCMS(ES):实测值374.3[M+H]+。
实施例K
N-羟基-4-((吡啶-2-基(1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
将2-溴吡啶(1)(1.0g，6.3mmol)、1,2,4-噻二唑-5-胺(2)(0.830g，8.22mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.366g，0.63mmol)和Cs2CO3(3.09g，9.4mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.29g，0.31mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1：1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(吡啶-2-基)-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(0.188g，16％)。
LCMS(ES):实测值179.0[M+H]+。
将NaH(60％)(49mg，1.23mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(吡啶-2-基)-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(210mg，1.19mmol)的DMF(8mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(351mg，1.5mmol)，并在70℃和Ar(g)下于黑暗中继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-((吡啶-2-基(1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(110mg，28％)。
LCMS(ES):实测值327.4[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(949mg，16.9mmol)的MeOH(10mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(1.17g，16.9mmol)的MeOH(10mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-((吡啶-2-基(1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(110mg，0.33mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(185mg，3.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈淡橙色固体状的N-羟基-4-((吡啶-2-基(1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酰胺，实施例K(11mg，10％)。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.54(d,J＝4.3Hz,1H),8.22-8.31(m,1H),7.81(br.s.,1H),7.65-7.76(m,2H),7.08-7.38(m,4H),5.82(s,2H)。
LCMS(ES):实测值328.0[M+H]+。
实施例L
4-(((5-氟吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将2-溴-5-氟吡啶(1)(1.0g，5.71mmol)、吡嗪-2-胺(2)(543mg，5.71mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.330g，0.57mmol)和Cs2CO3(2.79g，8.56mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。加入Pd2(dba)3(0.26g，0.28mmol)，并将反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(5-氟吡啶-2-基)吡嗪-2-胺(3)(0.56g，51％)。
LCMS(ES):实测值191.1[M+H]+。
将NaH(60％)(39mg，0.99mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(5-氟吡啶-2-基)吡嗪-2-胺(3)(180mg，0.94mmol)的DMF(5mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(281mg，1.23mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(190mg，59％)。
LCMS(ES):实测值339.1[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.57g，28.1mmol)的MeOH(15mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(1.95g，28.1mmol)的MeOH(15mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((5-氟吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(190mg，0.56mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(315mg，5.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈奶油色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例L(40mg，21％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.08(br.s,1H),8.84-9.09(m,1H),8.54(d,J＝1.4Hz,1H),8.34(d,J＝3.1Hz,1H),8.24(dd,J＝2.7,1.5Hz,1H),8.09(d,J＝2.7Hz,1H),7.72(ddd,J＝9.0,8.2,3.1Hz,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,2H),7.46(dd,J＝9.1,3.7Hz,1H),7.37(d,J＝8.3Hz,2H),5.42(s,2H)。
LCMS(ES):实测值340.1[M+H]+。
实施例M
4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将2-溴-5-氟吡啶(1)(1.0g，5.71mmol)、3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-胺(2)(566mg，5.71mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.330g，0.57mmol)和Cs2CO3(2.79g，8.56mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.261g，0.28mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(5-氟吡啶-2-基)-3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-胺(3)(0.70g，63％)。
LCMS(ES):实测值195.0[M+H]+。
将NaH(60％)(56mg，1.4mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(5-氟吡啶-2-基)-3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-胺(3)(260mg，1.34mmol)的DMF(10ml)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(398mg，1.7mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(170mg，37％)。
LCMS(ES):实测值343.1[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.39g，24.8mmol)的MeOH(15mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(1.72g，24.8mmol)的MeOH(15mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(170mg，0.49mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(278mg，4.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈淡橙色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例M(20mg，12％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.11(br.s.,1H),9.01(br.s.,1H),8.43(d,J＝3.0Hz,1H),8.11(dd,J＝9.2,3.8Hz,1H),7.89(td,J＝8.6,3.1Hz,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,2H),7.34(d,J＝8.2Hz,2H),5.43(s,2H),2.22(s,3H)。
LCMS(ES):实测值344.1[M+H]+。
实施例N
4-(((5-氟吡啶-2-基)(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将2-溴-5-氟吡啶(1)(1.0g，5.71mmol)、1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(2)(840mg，5.71mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.33g，0.57mmol)和Cs2CO3(2.79g，8.56mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.26g，0.28mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)上，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(5-氟吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(3)(0.56g，41％)。
LCMS(ES):实测值243.1[M+H]+。
将NaH(60％)(27mg，0.66mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(5-氟吡啶-2-基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(3)(154mg，0.63mmol)的DMF(5mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(189mg，0.82mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(165mg，66％)。
LCMS(ES):实测值391.2[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.20g，21.4mmol)的MeOH(15mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(1.48g，21.4mmol)的MeOH(15mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((5-氟吡啶-2-基)(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(165mg，0.40mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(240mg，4.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈淡橙色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例N(20mg，12％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.19(d,J＝2.9Hz,1H),7.66(d,J＝8.2Hz,1H),7.55-7.63(m,3H),7.42-7.54(m,3H),7.15-7.27(m,2H),6.74(dd,J＝9.2,3.4Hz,1H),5.22-5.31(m,2H),3.42(s,3H)。
LCMS(ES):实测值392.25[M+H]+。
实施例O
4-(((5-氟吡啶-2-基)(1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将2-溴-5-氟吡啶(1)(1.0g，5.71mmol)、1-甲基-1H-吡唑-3-胺(2)(554mg，5.71mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.330g，0.57mmol)和Cs2CO3(2.79g，8.56mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。加入Pd2(dba)3(0.261g，0.28mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的5-氟-N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-胺(3)(0.65g，61％)。
LCMS(ES):实测值193.0[M+H]+。
将NaH(60％)(50mg,1.25mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入5-氟-N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-胺(3)(230mg,1.19mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(356mg,1.55mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(312mg,76％)。
LCMS(ES):实测值341.1[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(2.57g,45.8mmol)的MeOH(15mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(3.18g,45.8mmol)的MeOH(15mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((5-氟吡啶-2-基)(1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(312mg,0.91mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(512mg,9.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈奶油固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例O(65mg,20％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.11(br.s,1H),8.96(br.s,1H),8.10(d,J＝3.1Hz,1H),7.59-7.66(m,3H),7.51(ddd,J＝9.3,8.2,3.1Hz,1H),7.31(d,J＝8.1Hz,2H),7.19(dd,J＝9.4,3.7Hz,1H),6.13(d,J＝2.3Hz,1H),5.21(s,2H),3.76(s,3H)。
LCMS(ES):实测值342.1[M+H]+。
实施例P
4-((苯并[d]噁唑-2-基(5-氟吡啶-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将2-溴-5-氟吡啶(1)(1.0g，5.71mmol)、苯并[d]噁唑-2-胺(2)(766mg，5.71mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.33g，0.57mmol)和Cs2CO3(2.79g，8.56mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.261g，0.28mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(5-氟吡啶-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(3)(0.6g,46％)。
LCMS(ES):实测值230.1[M+H]+。
将NaH(60％)(36mg,0.91mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(5-氟吡啶-2-基)苯并[d]噁唑-2-胺(3)(200mg,0.87mmol)的DMF(8mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(259mg,1.13mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-((苯并[d]噁唑-2-基(5-氟吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(144mg,43％)。
LCMS(ES):实测值378.1[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.07g,19.0mmol)的MeOH(15mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(1.33g,19.0mmol)的MeOH(15mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-((苯并[d]噁唑-2-基(5-氟吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(144mg,0.38mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(214mg,3.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈橙色固体状的4-((苯并[d]噁唑-2-基(5-氟吡啶-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例P(30mg,20％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.13(br.s,1H),9.01(br.s.,1H),8.41(d,J＝3.1Hz,1H),8.25(dd,J＝9.2,3.8Hz,1H),7.89(ddd,J＝9.2,8.1,3.1Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,2H),7.47-7.54(m,2H),7.41(d,J＝8.2Hz,2H),7.26(td,J＝7.7,1.1Hz,1H),7.13-7.20(m,1H),5.54(s,2H)。
LCMS(ES):实测值379.1[M+H]+。
实施例Q
4-(((4-氟苯基)吡啶-2-基)(1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将2-氯-4-(4-氟苯基)吡啶(1)(1.0g，4.8mmol)、1-甲基-1H-吡唑-3-胺(2)(470mg,4.8mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.28g,0.48mmol)和Cs2CO3(2.35g,7.24mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.22g,0.24mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的4-(4-氟苯基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-胺(3)(1.0g,71％)。
LCMS(ES):实测值269.1[M+H]+。
将NaH(60％)(37mg,0.93mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入到4-(4-氟苯基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-胺(3)(250mg,0.93mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(277mg,1.2mmol)，并在70℃和Ar(g)下于黑暗中继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥、过滤，然后在真空下浓缩。所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈淡黄色固体状的4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(267mg,68％)。
LCMS(ES):实测值417.4[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.79g,32.0mmol)的MeOH(15mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(2.23g,32.0mmol)的MeOH(15mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(267mg,0.64mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(359mg,6.41mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈灰白色固体状的4-(((4-氟苯基)吡啶-2-基)(1-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例Q(30mg,11％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.11(br.s,1H),9.00(br.s,1H),8.19(d,J＝5.3Hz,1H),7.59-7.71(m,5H),7.24-7.39(m,5H),6.98-7.05(m,1H),6.26(d,J＝2.2Hz,1H),5.30(s,2H),3.74-3.79(m,3H)。
LCMS(ES):实测值418.2[M+H]+。
实施例R
4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将5-氟吡啶-2-胺(1)(1.0g,8.9mmol)、5-氯-3-甲基-1,2,4-噻二唑(2)(1.19g,8.9mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.52g,0.89mmol)和Cs2CO3(4.35g,13.3mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.41g,0.44mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(5-氟吡啶-2-基)-3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(1.2g,67％)。
LCMS(ES):实测值211.1[M+H]+。
将NaH(60％)(59mg,1.49mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(5-氟吡啶-2-基)-3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(300mg,1.42mmol)的DMF(7mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(425mg,1.85mmol)，并在70℃和Ar(g)下于黑暗中继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈黄色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(480mg,90％)。
LCMS(ES):实测值359.3[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(4.63g,67.0mmol)的MeOH(20mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(3.76g,67.0mmol)的MeOH(20mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(480mg,1.3mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(750mg,1.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈橙色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例R(90mg,19％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.16(br.s.,1H),9.03(br.s.,1H),8.60(d,J＝2.9Hz,1H),7.86(td,J＝8.7,2.8Hz,1H),7.64-7.76(m,2H),7.19-7.34(m,3H),5.77(s,2H),2.39(s,3H)。
LCMS(ES):实测值359.8[M+H]+。
实施例S
4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将2-氯-4-(4-氟苯基)吡啶(1)(1.0g，4.8mmol)、3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-胺(2)(0.56g,4.8mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.279g,0.48mmol)和Cs2CO3(2.35g,7.24mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.22g,0.24mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)-3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(1.1g,80％)。
LCMS(ES):实测值287.1[M+H]+。
将NaH(60％)(42mg,1.05mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)-3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(300mg,1.05mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(312mg,1.36mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)上，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈黄色固体状的4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(325mg,74％)。
LCMS(ES):实测值421.1[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.96g,35mmol)的MeOH(10mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(2.43g,35mmol)的MeOH(10mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(319mg,0.69mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(392mg,7.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70m L)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈灰白色固体状的4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例S(58mg,19％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.13(br.s.,1H),9.02(br.s.,1H),8.59(d,J＝5.3Hz,1H),7.82(dd,J＝8.7,5.3Hz,2H),7.67(d,J＝8.2Hz,2H),7.43-7.51(m,2H),7.27-7.40(m,4H),5.92(s,2H),2.40(s,3H)。
LCMS(ES):实测值436.4[M+H]+。
实施例T
4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将5-氟吡啶-2-胺(1)(1.0g,8.9mmol)、5-氯-3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑(2)(1.68g,8.9mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.52g,0.89mmol)和Cs2CO3(4.35g,13.3mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.41g,0.44mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)上，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(5-氟吡啶-2-基)-3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(900mg,38％)。
LCMS(ES):实测值265.1[M+H]+。
将NaH(60％)(61mg,1.51mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(5-氟吡啶-2-基)-3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(400mg,1.51mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(451mg,1.85mmol)，并在70℃和Ar(g)下于黑暗中继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈黄色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(3)(535mg,82％)。
LCMS(ES):实测值413.3[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(3.63g,64.0mmol)的MeOH(20mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(4.47g,64.0mmol)的MeOH(20mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(3)(535mg,1.2mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(720mg,13.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈橙色固体状的4-(((5-氟吡啶-2-基)(3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例T(90mg,17％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.18(br.s.,1H),9.06(br.s.,1H),8.73(d,J＝2.7Hz,1H),7.97(td,J＝8.6,2.6Hz,1H),7.69(d,J＝8.2Hz,2H),7.46(dd,J＝9.0,2.8Hz,1H),7.31(d,J＝7.8Hz,2H),5.80(br.s.,2H),5.72-5.87(m,1H)。
LCMS(ES):实测值414.3[M+H]+。
实施例U
4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将NaH(60％)(47mg,1.19mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)吡嗪-2-胺(3)(使用如以上实施例中的条件制备)(300mg,1.13mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(337mg,1.47mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈黄色固体状的4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(220mg,46％)。
LCMS(ES)：实测值414.4[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(1.49g,26.9mmol)的MeOH(10mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(1.86g,26.9mmol)的MeOH(10mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(220mg,0.53mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(298mg,5.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)上，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈灰白色固体状的4-(((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例U(35mg,16％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.10(br.s.,1H),8.99(br.s.,1H),8.69(d,J＝1.4Hz,1H),8.36(d,J＝5.3Hz,1H),8.28(dd,J＝2.7,1.5Hz,1H),8.11(d,J＝2.7Hz,1H),7.76-7.86(m,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.2Hz,2H),7.38(dd,J＝5.3,1.4Hz,1H),7.34(t,J＝8.9Hz,2H),5.53(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值416.1[M+H]+。
实施例V
4-((苯并[d]噻唑-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将NaH(60％)(75mg,1.8mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(吡啶-2-基)苯并[d]噻唑-2-胺(3)(使用如以上实施例中的条件制备)(430mg,1.8mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(563mg,2.4mmol)，并在70℃和Ar(g)下继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈黄色固体状的4-((苯并[d]噻唑-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(300mg,42％)。
LCMS(ES)：实测值376.1[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(2.24g,40.0mmol)的MeOH(15mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(2.78g,40.0mmol)的MeOH(15mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-((苯并[d]噻唑-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(300mg,0.8mmol)中，接着加入溶解在MeOH(5mL)中的KOH(449mg,8.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)上，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈淡橙色固体状的4-((苯并[d]噻唑-2-基(吡啶-2-基)氨基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺，实施例V(60mg,20％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.15(br.s,1H),8.99(br.s,1H),8.50(dd,J＝4.8,1.4Hz,1H),7.93(d,J＝7.6Hz,1H),7.78-7.86(m,1H),7.68(d,J＝8.2Hz,2H),7.64(d,J＝7.9Hz,1H),7.33-7.39(m,1H),7.21-7.31(m,3H),7.11-7.20(m,2H),5.82(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值377.1[M+H]+。
实施例W
N-羟基-4-((吡啶-2-基(3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
将吡啶-2-胺(1)(1.0g,10.6mmol)、5-氯-3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑(2)(1.82g,10.6mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.61g,1.06mmol)和Cs2CO3(5.18g,15.9mmol)合并在无水1,4-二氧六环(15mL)中。将反应混合物用N2(g)脱气并在真空下放置10分钟。然后加入Pd2(dba)3(0.49g,0.53mmol)，并将所得反应混合物在90℃下加热30小时。然后将其倾倒在去矿质水(200mL)中，并用EtOAc(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(1:1)纯化，以提供呈黄色固体状的N-(吡啶-2-基)-3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(1.4g,57％)。
LCMS(ES)：实测值247.2[M+H]+。
将NaH(60％)(49mg,1.21mmol)在5℃和Ar(g)下分批加入N-(吡啶-2-基)-3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-胺(3)(300mg,1.21mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(363mg,1.58mmol)，并在70℃和Ar(g)下于黑暗中继续搅拌1小时。然后将反应混合物倾倒在去矿质水(100mL)中，并用EtOAc(3×50mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用EtOAc/己烷(3:7)纯化，以提供呈黄色固体状的4-((吡啶-2-基(3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(450mg,90％)。
LCMS(ES)：实测值395.3[M+H]+。
制备新鲜的NH2OH的MeOH溶液：[将KOH(3.56g,63.4mmol)的MeOH(20mL)溶液在0℃下加入NH2OH.HCl(4.41g,63.4mmol)的MeOH(20mL)溶液中]。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后过滤除去盐；然后将其加入4-((吡啶-2-基(3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(4)(500mg,1.2mmol)中，接着加入溶解在MeOH(10mL)中的KOH(712mg,12.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌21小时，然后在真空下浓缩，倾倒在盐水/H2O(30mL/70mL)中，并用CH2Cl2(3×100mL)萃取。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。将所得残余物通过快速色谱法用MeOH/CH2Cl2(1:9)纯化，以提供呈灰白色固体状的N-羟基-4-((吡啶-2-基(3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)甲基)苯甲酰胺，实施例W(20mg,4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.15(br.s.,1H),9.03(br.s.,1H),8.63-8.68(m,J＝5.0,0.9Hz,1H),7.97(ddd,J＝8.7,7.2,1.8Hz,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.6Hz,1H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),7.28(dd,J＝7.0,5.3Hz,1H),5.80(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值396.3[M+H]+。
实施例X
N-羟基-4-(((3-甲氧基吡啶-2-基)-(5-甲基吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:7.97(d,J＝4.9Hz,1H),7.89(d,J＝2.3Hz,1H),7.61(d,J＝7.8Hz,2H),7.46(m,3H),7.33(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.22(dd,J＝8.2,4.8Hz,1H),6.41(d,J＝8.5Hz,1H),5.31(s,2H),3.73(s,3H),2.20(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值365.0[M+H]+。
实施例Y
N-羟基-4-(((5-甲氧基吡啶-2-基)(5-甲基吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:7.99(dd,J＝4.8,2.6Hz,2H),7.62(d,J＝8.0Hz,2H),7.41(m,3H),7.31(dd,J＝9.1,3.1Hz,1H),7.14(d,J＝8.9Hz,1H),6.84(d,J＝8.5Hz,1H),5.36(s,2H),3.83(s,3H),2.22(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值365.0[M+H]+。
实施例Z
N-羟基-4-(((3-甲氧基吡啶-2-基)(5-吗啉代吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:7.94(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),7.78(d,J＝3.0Hz,1H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.38-7.51(m,3H),7.27(dd,J＝9.0,3.1Hz,1H),7.17(dd,J＝8.1,4.8Hz,1H),6.51(d,J＝9.0Hz,1H),5.31(s,2H),3.77-3.89(m,4H),3.72(s,3H),2.97-3.08(m,4H)。
LCMS(ES)：实测值436.0[M+H]+。
实施例AA
N-羟基-4-(((5-甲氧基吡啶-2-基)(5-吗啉代吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:7.88-7.95(m,2H),7.58-7.66(m,2H),7.42(d,J＝8.0Hz,2H),7.33(dd,J＝9.0,3.1Hz,1H),7.26(dd,J＝9.1,3.1Hz,1H),6.99(dd,J＝9.0,4.5Hz,2H),5.34(s,2H),3.71-3.94(m,7H),3.04-3.15(m,4H)。
LCMS(ES)：实测值436.0[M+H]+。
实施例BB
N-羟基-4-((吡啶-2-基(噻吩并[3,2-c]-4-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:7.97-8.10(m,1H),7.76(dd,J＝9.3,7.1Hz,3H),7.33-7.69(m,5H),7.14(d,J＝5.4Hz,1H),6.98(d,J＝9.1Hz,1H),6.64(t,J＝6.8Hz,1H),5.56(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值377.0[M+H]+。
实施例CC
N-羟基-4-(((6-甲基吡啶-2-基)(5-吗啉代吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
1H NMR(400MHz,甲醇-d4),δH ppm:7.99(d,J＝3.0Hz,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,2H),7.42(d,J＝8.1Hz,2H),7.34-7.39(m,2H),7.14(d,J＝8.9Hz,1H),6.64(dd,J＝8.1,7.8Hz,2H),5.39(s,2H),3.79-3.86(m,4H),3.14(dd,J＝6.1,3.6Hz,4H),2.37(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值420.0[M+H]+。
实施例DD
N-羟基-4-{[(吡嗪-2-基)(嘧啶-4-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
2-碘吡嗪(1)(1.2g,5.83mmol)、嘧啶-4-胺(2)(609mg,6.41mmol)、Cs2CO3(3.80g,11.65mmol)以及4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(148mg,0.26mmol)的1,4-二氧六环(15mL)溶液用N2(g)吹扫10分钟。加入Pd2(dba)3(107mg,0.12mmol)，并将混合物加热至90℃持续3小时。将反应物冷却至室温，并在水(300mL)与EtOAc(3×100mL)之间分配。将合并的有机物用水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/MeOH(1:0-9:1)纯化，以得到(3)(678mg，66％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:9.06(d,J＝1.3Hz,1H),8.74(s,1H),8.42(d,J＝6.0Hz,1H),8.34(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),8.19(d,J＝2.7Hz,1H),7.72(dd,J＝6.0,1.0Hz,1H)。
LCMS(ES)：实测值174.0[M+H]+。
将NaH(60％,48.5mg,1.21mmol)在5℃和N2(g)下加入(3)(200mg,1.15mmol)的DMF(7mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(344mg，1.5mmol)的DMF(3mL)溶液，在70 0C下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(100mL)中。加入盐水(25mL)，并将水层用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，得到(4)(187mg，50％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.85(d,J＝1.4Hz,1H),8.77-8.80(m,1H),8.34-8.38(m,2H),8.29(d,J＝2.6Hz,1H),7.95(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),6.91(dd,J＝6.0,1.2Hz,1H),5.49(s,2H),3.87(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值322.0[M+H]+。
将(4)(0.09mL，0.58mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌40小时。真空下除去溶剂，将残余物经反相HPLC纯化，以得到实施例DD(30mg，15％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.89(d,J＝1.4Hz,1H),8.69(s,1H),8.47(dd,J＝2.5,1.5Hz,1H),8.25-8.37(m,2H),7.68(d,J＝8.3Hz,2H),7.38(d,J＝8.3Hz,2H),7.08(dd,J＝6.2,1.2Hz,1H),5.51(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值323.0[M+H]+。
实施例EE
N-羟基-4-{[(吡嗪-2-基)(嘧啶-4-基)氨基)甲基)苯甲酰胺
将NaH(60％,48.5mg,1.21mmol)在5mC和N2(g)下加入(3)(200mg,1.15mmol)的DMF(7mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)-3-氟苯甲酸甲酯(371mg,1.5mmol)的DMF(3mL)溶液。在70℃下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(100mL)中。加入盐水(25mL)，并将水层用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过快速柱色谱法用EtOAc/CH2Cl2(0:1-1:0)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，得到(4)(158mg,40％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.87(d,J＝1.4Hz,1H),8.76-8.78(m,1H),8.36-8.40(m,2H),8.31(d,J＝2.6Hz,1H),7.69(d,J＝9.2Hz,2H),7.30(t,J＝7.6Hz,1H),6.92(dd,J＝6.1,1.2Hz,1H),5.50(s,2H),3.87(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值340.0[M+H]+。
将(4)(0.08mL，0.47mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌18小时。将溶剂浓缩至干燥，残余物经中性pH反相HPLC纯化，得到实施例EE(25mg，15％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.91(d,J＝1.4Hz,1H),8.70(s,1H),8.48(dd,J＝2.5,1.5Hz,1H),8.31-8.38(m,2H),7.43-7.50(m,2H),7.35(t,J＝7.9Hz,1H),7.09(dd,J＝6.2,1.2Hz,1H),5.53(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值341.0[M+H]+。
实施例FF
N-羟基-6-{[(吡嗪-2-基)(嘧啶-4-基)氨基]甲基}吡啶-3-甲酰胺
将NaH(60％,48.5mg,1.21mmol)在5mC和N2(g)下加入(3)(200mg,1.15mmol)的DMF(7mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入6-(溴甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(345mg,1.5mmol)的DMF(3mL)溶液。在70℃下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(100mL)中。加入盐水(25mL)，并将水层用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)纯化，得到(4)(116mg,27％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:9.11(d,J＝1.6Hz,1H),8.97(d,J＝1.4Hz,1H),8.70-8.77(m,1H),8.34-8.40(m,2H),8.31(d,J＝2.6Hz,1H),8.18(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.01(dd,J＝6.1,1.2Hz,1H),5.56(s,2H),3.90(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值322.9[M+H]+。
将(4)(0.06mL，0.31mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌18小时。将反应混合物浓缩至干燥。将残余物通过反相HPLC纯化，得到实施例FF(25.7mg,26％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.99(d,J＝4.9Hz,1H),8.64-8.76(m,2H),8.32-8.51(m,3H),7.82-7.93(m,1H),7.03-7.30(m,2H),5.45(m,2H)。
LCMS(ES)：实测值324.1[M+H]+。
实施例GG
4-{[双(吡嗪-2-基)氨基]甲基}-N-羟基苯甲酰胺
将2-碘吡嗪(1)(1.2g,5.83mmol)、吡嗪-2-胺(2)(609mg,6.4mmol)、Cs2CO3(3.80g,11.7mmol)以及4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(148mg,0.26mmol)的二氧六环(25mL)溶液用N2(g)吹扫10分钟。加入Pd2(dba)3(107mg,0.12mmol)，并将混合物加热至90℃持续3小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(200mL)中，用EtOAc(2×150mL)和CH2Cl2-IPA(150mL,4:1)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过快速柱色谱法用庚烷/EtOAc(4:1-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-3:1)纯化，得到呈灰白色固体状的(3)(210mg,51％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.99(d,J＝1.4Hz,2H),8.30(dd,J＝2.6,1.5Hz,2H),8.11(d,J＝2.7Hz,2H)。
LCMS(ES)：实测值174.1[M+H]+。
将NaH(60％,48.5mg,1.21mmol)在5℃和N2(g)下加入(3)(200mg,1.15mmol)的DMF(7mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(344mg,1.5mmol)的DMF(3mL)溶液。在70℃下继续搅拌1小时。将反应冷却至室温并倾倒在水(100mL)中。加入盐水(25mL)，并用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，得到(4)(196mg,53％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.59-8.65(m,2H),8.23-8.26(m,2H),8.16(d,J＝2.5Hz,2H),7.94(d,J＝8.3Hz,2H),7.38(d,J＝8.2Hz,2H),5.50(s,2H),3.86(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值321.9[M+H]+。
将(4)(0.09mL，0.61mmol)在0.85M羟胺中的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌72小时。将溶剂浓缩至干燥，将残余物经中性pH反相HPLC纯化，以得到实施例GG(23mg,12％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.66(d,J＝1.3Hz,2H),8.28-8.36(m,2H),8.16(d,J＝2.6Hz,2H),7.67(d,J＝8.2Hz,2H),7.45(d,J＝8.2Hz,2H),5.56(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值323.1[M+H]+。
实施例HH
4-{[双(吡嗪-2-基)氨基]甲基}-3-氟-N-羟基苯甲酰胺
将NaH(60％,49mg,1.21mmol)在5℃和N2(g)下加入(3)(200mg,1.15mmol)的DMF(7mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)-3-氟苯甲酸甲酯(371mg,1.5mmol)的DMF(3mL)溶液。在70℃下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(100mL)中。加入盐水(25mL)，并将水层用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，得到(4)(195mg，50％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.65(d,J＝1.4Hz,2H),8.25(dd,J＝2.5,1.5Hz,2H),8.18(d,J＝2.6Hz,2H),7.65-7.72(m,2H),7.31(t,J＝7.8Hz,1H),5.53(s,2H),3.87(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值339.9[M+H]+。
将(4)(0.09mL，0.57mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌18小时。将溶剂在真空下浓缩，将残余物经反相HPLC纯化，以得到实施例HH(81mg,41％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.76(d,J＝1.4Hz,2H),8.34(dd,J＝2.5,1.5Hz,2H),8.25(d,J＝2.6Hz,2H),7.51(dd,J＝11.1,1.3Hz,1H),7.45(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.34(t,J＝7.8Hz,1H),5.50(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值341.1[M+H]+。
实施例II
6-{[双(吡嗪-2-基)氨基]甲基}-N-羟基吡啶-3-甲酰胺
将NaH(60％,48.5mg,1.21mmol)在5℃和N2(g)下加入(3)(200mg,1.15mmol)的DMF(7mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入6-(溴甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(345mg,1.5mmol)的DMF(3mL)溶液。在70℃下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(100mL)中。加入盐水(25mL)，并将水层用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，得到(4)(129mg,35％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:9.04-9.13(m,1H),8.70(s,2H),8.19(s,2H),8.13(dd,J＝5.6,2.3Hz,3H),7.32(d,J＝8.2Hz,1H),5.55(s,2H),3.86(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值322.9[M+H]+。
将(4)(0.06mL，0.4mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌18小时。将溶剂浓缩至干燥，将残余物经反相HPLC纯化，以得到实施例II(37mg,28％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.75(d,J＝1.3Hz,3H),8.31(dd,J＝2.6,1.5Hz,2H),8.21(d,J＝2.6Hz,2H),7.89(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H),7.18(d,J＝8.1Hz,1H),5.47(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值324.1[M+H]+。
实施例JJ
N-羟基-4-{[(3-甲氧基吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基]甲基}苯甲酰胺
吡嗪-2-胺(2)(557mg,5.85mmol)、2-溴-3-甲氧基吡啶(1)(1.0g,5.32mmol)、Cs2CO3(3.47g,10.64mmol)以及4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(135mg,0.23mmol)的二氧六环(15mL)溶液用N2(g)吹扫10分钟。加入Pd2(dba)3(97.4mg,0.11mmol)，并将混合物加热至90℃持续3小时。将反应物冷却至室温，并在水(200mL)与EtOAc(3×200mL)之间分配。分离各相，并用EtOAc(200+100+50mL)洗涤水层。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用梯度CH2Cl2/MeOH(1:0-0:1)纯化，以得到(3)(1.0g,88％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:9.91(d,J＝1.2Hz,1H),8.11-8.20(m,2H),7.91(dd,J＝5.0,1.4Hz,1H),7.80(s,1H),7.06(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),6.85(dd,J＝7.9,5.0Hz,1H),3.92(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值203.2[M+H]+。
将NaH(60％,41.5mg,1.04mmol)在5℃和N2(g)下加入(3)(200mg,0.99mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(294mg,1.29mmol)。在70℃和N2(g)下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(150mL)和盐水(50mL)中，用EtOAc(3×100mL)萃取水层。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，以得到(4)(251mg,73％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.06-8.10(m,2H),7.87-7.92(m,3H),7.78(d,J＝1.5Hz,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.23(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.15(dd,J＝8.1,4.7Hz,1H),5.42(s,2H),3.85(s,3H),3.73(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值350.9[M+H]+。
将(4)(251mg，0.72mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌72小时。将溶剂浓缩至干燥，将残余物经反相HPLC纯化，以得到呈米黄色固体状的实施例JJ(101mg,40％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.11(dd,J＝2.6,1.6Hz,1H),8.07(dd,J＝4.7,1.3Hz,1H),7.93(d,J＝2.7Hz,1H),7.79(d,J＝1.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.2Hz,2H),7.58(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,2H),7.32(dd,J＝8.2,4.7Hz,1H),5.30(s,2H),3.76(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值352.1[M+H]+。
实施例KK
3-氟-N-羟基-4-{[(3-甲氧基吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基]甲基}苯甲酰胺
将NaH(60％,41.5mg,1.04mmol)在5℃和N2(g)下加入(3)(200mg,0.99mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)-3-氟苯甲酸甲酯(318mg,1.29mmol)。在70℃和N2(g)下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(150mL)和盐水(50mL)中，用EtOAc(3×100mL)萃取水层。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，以得到(4)(269mg,74％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.09(dd,J＝4.7,1.4Hz,1H),8.06(dd,J＝2.6,1.6Hz,1H),7.90(d,J＝2.7Hz,1H),7.80(d,J＝1.3Hz,1H),7.68(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.62(dd,J＝10.5,1.4Hz,1H),7.56(t,J＝7.7Hz,1H),7.27(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),7.18(dd,J＝8.2,4.7Hz,1H),5.43(s,2H),3.86(s,3H),3.77(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值368.9[M+H]+。
将(4)(269mg,0.73mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌72小时。将溶剂浓缩至干燥，将残余物经反相HPLC纯化，以得到实施例KK(93mg,35％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.13(dd,J＝2.6,1.6Hz,1H),8.08(dd,J＝4.7,1.3Hz,1H),7.95(d,J＝2.7Hz,1H),7.80(d,J＝1.3Hz,1H),7.61(dd,J＝8.3,1.2Hz,1H),7.48-7.43(m,3H),7.35(dd,J＝8.2,4.7Hz,1H),5.32(s,2H),3.78(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值370.1[M+H]+。
实施例LL
N-羟基-6-{[(3-甲氧基吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基]甲基}吡啶-3-甲酰胺
将NaH(60％,41.5mg,1.04mmol)在5℃和N2(g)下加入(3)(200mg,0.99mmol)的DMF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入6-(溴甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(296mg,1.29mmol)。在70℃下N2(g)下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(150mL)和盐水(50mL)上，然后用EtOAc(3×100mL)萃取水层。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，以得到(4)(191mg,55％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:9.07(d,J＝1.9Hz,1H),8.12(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),8.06(dd,J＝4.7,1.4Hz,1H),8.01(dd,J＝2.6,1.6Hz,1H),7.88(d,J＝2.7Hz,1H),7.84(d,J＝1.4Hz,1H),7.54(d,J＝8.2Hz,1H),7.27(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.17(dd,J＝8.2,4.7Hz,1H),5.46(s,2H),3.86(s,3H),3.76(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值352.0[M+H]+。
将(4)(191mg,0.54mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌72小时。在这之后，将溶剂浓缩至干燥，将残余物经反相HPLC纯化，以得到实施例LL(35mg,19％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.72(d,J＝1.8Hz,1H),8.12-8.08(m,1H),8.06(dd,J＝4.7,1.3Hz,1H),7.93(d,J＝2.7Hz,1H),7.81-7.87(m,2H),7.56-7.61(m,1H),7.32(dd,J＝8.2,4.7Hz,1H),7.25(d,J＝8.1Hz,1H),5.29(s,2H),3.77(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值353.1[M+H]+。
实施例MM
N-羟基-4-{[(吡嗪-2-基)(哒嗪-3-基)氨基]甲基}苯甲酰胺
将2-碘吡嗪(1)(2.40g,11.65mmol)、哒嗪-3-胺(2)(1.2g,12.82mmol)、Cs2CO3(7.6g,23.3mmol)以及4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(297mg,0.51mmol)的二氧六环(45mL)溶液用N2(g)吹扫10分钟。加入Pd2(dba)3(214mg,0.23mmol)的二氧六环(5mL)溶液，并将混合物加热至90℃持续3小时。将反应物冷却至室温，并在水(200mL)与EtOAc(3×200mL)之间分配。过滤不溶性固体并储存备用。分离各相，并用EtOAc(200mL)、然后用CH2Cl2-IPA(200mL,4:1)洗涤水层。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，以得到(3)。用水(100mL)洗涤固体(来自过滤)，用热MeOH(3×100mL)研磨并过滤。浓缩滤液，以得到第二批(3)。将固体进一步用水(100mL)洗涤并吸干，以得到第三批(3)。将所有三批合并，得到(3)(1.63g，80％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:10.49(s,1H),9.00(d,J＝1.2Hz,1H),8.83(dd,J＝4.6,1.2Hz,1H),8.27(dd,J＝2.5,1.5Hz,1H),8.16(d,J＝2.7Hz,1H),8.06(dd,J＝9.1,1.2Hz,1H),7.60(dd,J＝9.1,4.6Hz,1H)。
LCMS(ES)：实测值174.2[M+H]+。
将NaH(60％,49mg,1.21mmol)在5℃和N2(g)下加入(3)(200mg,1.15mmol)的DMF(8mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(344mg,1.5mmol)的DMF(2mL)溶液。在70℃和N2(g)下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(200mL)和盐水(50mL)中，用EtOAc(2×150mL)萃取水层。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用庚烷/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，以得到呈棕色油状的(4)(119mg,32％)。
1H NMR(250MHz,氯仿-d),δH ppm:8.85(dd,J＝4.6,1.4Hz,1H),8.56(d,J＝1.4Hz,1H),8.25(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),8.17(d,J＝2.6Hz,1H),7.89-7.97(m,2H),7.48(dd,J＝9.1,1.4Hz,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),7.33(dd,J＝9.1,4.6Hz,1H),5.64(s,2H),3.86(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值321.0[M+H]+。
将(4)(119mg,0.37mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌72小时。在这之后，将溶剂浓缩至干燥，将残余物经反相HPLC纯化，以得到呈米黄色固体状的实施例MM(24mg,20％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.81(dd,J＝4.6,1.2Hz,1H),8.65(d,J＝1.4Hz,1H),8.33(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),8.16(d,J＝2.6Hz,1H),7.68(m,3H),7.56(dd,J＝9.1,4.6Hz,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,2H),5.57(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值322.2[M+H]+。
实施例NN
3-氟-N-羟基-4-{[(吡嗪-2-基)(哒嗪-3-基)氨基]甲基}苯甲酰胺
将NaH(60％,73mg,1.82mmol)在5℃和N2(g)下加入(3)(300mg,1.73mmol)的DMF(11mL)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入4-(溴甲基)-3-氟苯甲酸甲酯(556mg,2.25mmol)的DMF(4mL)溶液。在70℃和N2(g)下继续搅拌1小时。将反应物冷却至室温并倾倒在水(150mL)和盐水(25mL)中，用EtOAc(150+100mL)萃取水层。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-4:1)纯化，以得到呈棕色油状的(4)(141mg,24％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.85(dd,J＝4.6,1.3Hz,1H),8.59(d,J＝1.4Hz,1H),8.23(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),8.18(d,J＝2.6Hz,1H),7.61-7.71(m,2H),7.50(dd,J＝9.1,1.3Hz,1H),7.32-7.42(m,2H),5.64(s,2H),3.86(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值339.9[M+H]+。
将(4)(141mg，0.42mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌18小时。将溶剂浓缩至干燥，将残余物经反相HPLC纯化，以得到呈米黄色固体状的实施例NN(51mg,36％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.83(dd,J＝4.6,1.1Hz,1H),8.67(d,J＝1.3Hz,1H),8.34(dd,J＝2.5,1.5Hz,1H),8.18(d,J＝2.6Hz,1H),7.70(dd,J＝9.1,1.2Hz,1H),7.59(dd,J＝9.1,4.6Hz,1H),7.47(d,J＝11.7Hz,2H),7.32(t,J＝8.0Hz,1H),5.60(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值341.0[M+H]+。
实施例OO
N-羟基-4-{[(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)(吡嗪-2-基)氨基]甲基}苯甲酰胺
将NaH(60％,120mg,3.3mmol)在N2(g)下加入(2)(140mg,1.47mmol)的THF(10mL)溶液中。将反应混合物搅拌10分钟，然后加入5-氯-3-甲基-1,2,4-噻二唑(1)(190mg,1.41mmol)。在50℃下N2(g)下加热24小时。
LCMS(ES)：实测值194.0[M+H]+。
向该混合物中加入MeCN(10mL)、4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(400mg，1.74mmol)以及碳酸钾(350mg，1.65mmol)。然后在50℃下继续加热2小时。一旦冷却，将混合物在H2O(10mL)与EtOAc(3×20mL)之间分配。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用汽油/EtOAc(1:0-1:1)纯化，以得到呈白色固体状的(4)(300mg,60％，经2步)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.55-8.77(m,2H),8.41(s,1H),7.92(d,J＝7.9Hz,2H),7.39(d,J＝7.9Hz,2H),5.92(s,2H),3.82(s,3H),2.42(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值342.0[M+H]+。
将(4)(174mg，0.51mmol)在0.85M羟胺中的MeOH(10mL)溶液在70℃下搅拌8小时。将溶剂浓缩至干燥状态，残余物经反相HPLC纯化，得到实施例OO的产物(44mg,25％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.45-10.94(m,1H),9.43-8.80(m,1H),8.70(d,J＝1.3Hz,1H),8.61(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),8.40(d,J＝2.6Hz,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,2H),7.31(d,J＝8.3Hz,2H),5.88(s,2H),2.43(s,3H)
LCMS(ES)：实测值343.0[M+H]+。
实施例PP
N-羟基-4-{[(4-甲氧基吡啶-2-基)(吡嗪-2-基)氨基]甲基}苯甲酰胺
将2-碘吡嗪(1)(1.34g,6.51mmol)、4-甲氧基吡啶-2-胺(2)(0.85g,6.83mmol)、Cs2CO3(4.24g,13.01mmol)以及4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(0.17g,0.29mmol)的二氧六环(22mL)溶液用N2(g)吹扫10分钟，然后加入Pd2(dba)3(0.12g,0.13mmol)，再次吹扫约5分钟，并将反应物加热至90℃持续4小时。一旦冷却至室温，将混合物在H2O(150mL)与EtOAc(3×120mL)之间分配。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(9:1-0:1)纯化，以得到呈黄色固体状的(3)(809mg,61％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.70(d,J＝1.3Hz,1H),8.11-8.22(m,3H),8.08(d,J＝2.7Hz,1H),7.43(d,J＝2.2Hz,1H),6.52(dd,J＝5.8,2.3Hz,1H),3.88(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值203.2[M+H]+。
将NaH(60％,42mg,1.04mmol)在室温和N2(g)下加入(3)(200mg,0.99mmol)的DMF(7mL)溶液中。将反应混合物搅拌30分钟，然后加入4-(溴甲基)-3-氟苯甲酸甲酯(249mg,1.09mmol)的DMF(2mL)溶液。将反应物在N2(g)下加热至70℃羲族2小时，然后在室温下过夜。将反应物冷却至室温，并在H2O(150mL)与EtOAc(2×100mL)之间分配。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用CH2Cl2/EtOAc(1:0-0:1)纯化，以得到呈粘性油状的(4)(173mg,50％)。
1H NMR(300MHz,氯仿-d),δH ppm:8.63(dd,J＝1.4Hz,1H),8.14-8.22(m,2H),8.01(d,J＝2.6Hz,1H),7.92(d,J＝8.2Hz,2H),7.39(d,J＝8.2Hz,2H),6.61(d,J＝2.1Hz,1H),6.54(dd,J＝5.8,2.2Hz,1H),5.46(s,2H),3.85(s,3H),3.75(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值350.9[M+H]+。
将(4)(173mg,0.49mmol)在0.85M羟胺的MeOH(10mL)溶液中的溶液在室温下搅拌72小时。将溶剂浓缩至干燥，将残余物经反相HPLC纯化，以得到实施例PP(15mg,9％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.46(d,J＝1.4Hz,1H),8.24(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),8.14(d,J＝5.9Hz,1H),8.00(d,J＝2.7Hz,1H),7.65(d,J＝8.3Hz,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),6.79(d,J＝2.2Hz,1H),6.73(dd,J＝5.9,2.2Hz,1H),5.45(s,2H),3.82(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值352.0[M+H]+。
实施例QQ
N-羟基-4-{[(吡嗪-2-基)[6-(三氟甲基)吡嗪-2-基]氨基]甲基}苯甲酰胺
在Ar(g)下，向4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯盐酸盐(1.47g，7.3mmol)的DMSO(14mL)溶液中加入2-碘吡嗪(1g，4.9mmol)，然后加入K2CO3(1.7g，12.1mmol)。剧烈搅拌2分钟后，加入CuI(46mg，0.2mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜。将其在EtOAc(150mL)与50％盐水(50mL)之间分配，分离有机层，用EtOAc(2×15mL)萃取水层，然后将合并的有机相用50％盐水(15mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法用己烷/EtOAc(7:3-0:1)纯化，以得到(3)白色固体(670mg,57％)。
1H NMR(300MHz,氯仿-d),δH ppm:7.76-8.11(m,5H),7.43(d,J＝8.5Hz,2H),5.01-5.16(m,1H),4.66(d,J＝5.8Hz,2H),3.92(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值352.0[M+H]+。
在Ar(g)下，向化合物(2)(60mg，0.25mmol)、Pd2(dba)3(11mg，0.01mmol)、(±)-BINAP(15mg，0.025mmol)以及Cs2CO3(241mg，0.74mmol)中加入2-氯-6-(三氟甲基)吡嗪(90mg，0.49mmol)的二氧六环(2mL)溶液。将反应混合物在90℃下加热4小时，然后冷却至室温过夜。然后加入EtOAc(15mL)、水(4mL)以及盐水(2mL)。分离有机相，用EtOAc(10mL)萃取水层。将合并的有机相干燥(MgSO4)并在真空下浓缩，以得到粗残余物(153mg)。将残余物通过溶解在CH2Cl2/MeOH(1:1,10mL)中清除，然后加入MP-TMT(370mg，0.68mmol/g)。将混合物搅拌24小时，然后滤除树脂，用CH2Cl2/MeOH(1:1,2×5mL)洗涤。然后将滤液在真空下浓缩，以得到呈棕色固体状的粗制的(3)(132mg)，其直接用于下一步骤。
向粗制的(3)(总共132mg，最多含有0.25mmol)的THF/MeOH(1:1,4mL)溶液中加入NH2OH溶液(50重量％H2O，0.306mL，5mmol)，然后加入NaOH(6M，0.083mL，0.5mmol)。在室温下搅拌50分钟后，加入KHSO4(1M，2mL)、水(5mL)和CH2Cl2(6mL)。分离有机相，并用EtOAc(2×5mL)萃取水层。将合并的有机相干燥(MgSO4)并在真空下浓缩，以得到黄色固体。通过反相C-18色谱法用MeCN/H2O(19:1-1:1)纯化，以得到呈淡棕色固体状的实施例QQ(81mg，83％，经2步)。
1H NMR(DMSO-d6)δH ppm:8.93(s,1H),8.88(d,J＝1.7Hz,1H),8.62(s,1H),8.42(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),8.34(d,J＝2.6Hz,1H),7.62(d,J＝8.3Hz,2H),7.27(d,J＝8.3Hz,2H),5.46(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值391.1[M+H]+。
实施例RR
4-{[(5-(6-氨基吡啶-3-基)吡啶-2-基](吡嗪-2-基)氨基}甲基)-N-羟基苯甲酰胺
将2,4-二溴吡啶(1)(5.0g,21.1mmol)、吡嗪-2-胺(2)(2.21g,23.22mmol)、Cs2CO3(15.1g,46.4mmol)以及4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(611mg,1.05mmol)的混合物悬浮在二氧六环(50mL)中。将混合物用N2(g)吹扫1分钟，然后加入Pd2(dba)3(386mg,0.422mmol)。将混合物再次用N2(g)吹扫，并将其加热至90℃过夜。一旦冷却，将混合物在H2O(150mL)与EtOAc(3×150mL)之间分配。将合并的有机相萃取物用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过快速柱色谱法用庚烷/EtOAc(9:1-2:3)纯化，以得到呈淡黄色固体状的(3)(2.6g,49％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.74(d,J＝1.3Hz,1H),8.22(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),8.15(d,J＝2.7Hz,1H),8.11(d,J＝5.4Hz,1H),8.07(d,J＝1.5Hz,1H),7.63(s,1H),7.10(dd,J＝5.4,1.6Hz,1H)。
LCMS(ES)：实测值251.0-253.0[M+H]+。
在N2(g)下，向冷却至0℃的(3)(1.08g,4.3mmol)的DMF(15mL)溶液中加入NaH(60％,206mg,5.16mmol)。将混合物搅拌30分钟。然后，加入4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(1.08g,4.73mmol)的DMF(5mL)溶液，并将混合物加热至50℃持续1.5小时。一旦冷却，将反应物在H2O(150mL)与EtOAc(3×150mL)之间分配。将合并的有机相萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过快速柱色谱法用庚烷/EtOAc(9:1-2:3)纯化，以得到呈白色固体状的(4)(915mg,53％)。
1H NMR(500MHz,氯仿-d),δH ppm:8.66(d,J＝1.4Hz,1H),8.25(dd,J＝2.5,1.6Hz,1H),8.15(d,J＝5.3Hz,1H),8.13(d,J＝2.6Hz,1H),7.95(d,J＝8.3Hz,2H),7.39(d,J＝8.3Hz,2H),7.33(d,J＝1.4Hz,1H),7.10(dd,J＝5.3,1.5Hz,1H),5.49(s,2H),3.88(s,3H)
LCMS(ES)：实测值399.0-401.0[M+H]+。
向(4)(200mg，0.50mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷基-2-基)吡啶-2-胺(132.3mg，0.6mmol)以及Cs2CO3(326mg，1.0mmol)在DMF(4mL)和H2O(1mL)的悬浮液中加入Pd(PPh3)4(58mg，0.05mmol)。将混合物用N2(g)吹扫，然后将其加热至90℃持续2小时。一旦冷却，加入H2O(20mL)，使沉淀物在室温下沉淀72小时。过滤后，用H2O(2mL)洗涤并干燥，得到呈棕色固体状的(5)(219mg，定量)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.54(s,1H),8.31(d,J＝5.3Hz,1H),8.25-8.28(m,1H),8.23(d,J＝2.3Hz,1H),8.02(d,J＝2.6Hz,1H),7.92(d,J＝8.2Hz,2H),7.77(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.50(s,1H),7.48(d,J＝5.5Hz,2H),7.32(d,J＝5.4Hz,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,1H),5.55(s,2H),3.86(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值413.0[M+H]+。
将(5)(219mg,0.53mmol)在0.85M NH2OH的MeOH(5mL)溶液中的溶液在室温下搅拌过夜。将挥发物在真空下除去，将残余物经反相制备型HPLC纯化，以得到呈淡黄色固体状的实施例RR(19mg,8％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.63(d,J＝1.4Hz,1H),8.35(d,J＝2.3Hz,1H),8.27-8.28(m,1H),8.26-8.27(m,1H),8.07(d,J＝2.6Hz,1H),7.76(d,J＝2.6Hz,1H),7.61(d,J＝8.3Hz,2H),7.51(s,1H),7.30(dd,J＝5.3,1.5Hz,1H),7.26(d,J＝8.2Hz,2H),6.52(d,J＝8.7Hz,1H),6.36(s,2H),5.45(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值414.0[M+H]+。
实施例SS
4-{[(5-(2-氨基吡啶-4-基)吡啶-2-基](吡嗪-2-基)氨基}甲基)-N-羟基苯甲酰胺
向(4)(200mg，0.50mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷基-2-基)吡啶-2-胺(132.3mg，0.6mmol)以及Cs2CO3(326mg，1.0mmol)在DMF(4mL)和H2O(1mL)中的悬浮液加入Pd(PPh3)4(58mg，0.05mmol)。将混合物用N2(g)吹扫，然后将其加热至90℃持续2小时。一旦冷却，加入H2O(20mL)，使沉淀物在室温下沉淀3小时。
过滤后，用H2O(2mL)洗涤并干燥，获得淡橙色固体，其通过快速柱色谱法用庚烷/EtOAc(4:1-0:1)、然后用EtOAc/MeOH(1:0-7:3)纯化，以得到呈黄色固体状的(5)(82mg,40％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.60(s,1H),8.41(d,J＝5.2Hz,1H),8.29(d,J＝1.3Hz,1H),8.06(d,J＝2.5Hz,1H),7.97(d,J＝5.4Hz,1H),7.93(d,J＝8.3Hz,2H),7.53(s,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,2H),7.34(d,J＝5.2Hz,1H),6.81-6.84(m,1H),6.81(s,1H),5.58(s,2H),3.86(s,3H)。
LCMS(ES)：实测值413.0[M+H]+。
将(5)(82mg,0.20mmol)在0.85M NH2OH的MeOH(5mL)溶液中的溶液在室温下搅拌过夜。然后将挥发物在真空下除去，将残余物经反相制备型HPLC纯化，以得到呈白色固体状的实施例SS(19mg,8％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:8.59(d,J＝1.4Hz,1H),8.39(d,J＝5.2Hz,1H),8.29(dd,J＝2.7,1.5Hz,1H),8.05(d,J＝2.7Hz,1H),7.97(d,J＝5.5Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,2H),7.49(s,1H),7.45(d,J＝8.2Hz,2H),7.32(dd,J＝5.2,1.2Hz,1H),6.82(dd,J＝5.5,1.3Hz,1H),6.78(s,1H),5.55(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值414.0[M+H]+。
实施例TT
N-羟基-4-({[2’-(甲基氨基)-[4,4’-联吡啶]-2-基](吡嗪2-基)氨基]甲基}苯甲酰胺
向(4)(120mg,0.3mmol)、N-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基1,3,-二氧戊环-2-基)吡啶-2-胺(84mg,0.36mmol)以及Cs2CO3(196mg,0.6mmol)在DMF(2mL)和H2O(0.5mL)中的悬浮液加入Pd(PPh3)4(58mg，0.05mmol)。将混合物用N2(g)吹扫，然后将其加热至90℃持续4小时。一旦冷却，加入H2O(10mL)，并将反应物搅拌20分钟。
过滤后，用MeCN(2mL)洗涤并干燥，获得黑色固体，其通过制备型HPLC纯化，以得到呈白色固体状的(5)(80mg,59％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:8.70(d,J＝1.4Hz,1H),8.39(d,J＝5.2Hz,1H),8.29(dd,J＝2.6,1.5Hz,1H),8.14(d,J＝2.6Hz,1H),8.07(d,J＝5.3Hz,1H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.54-7.56(m,1H),7.50(d,J＝8.3Hz,2H),7.32(dd,J＝5.2,1.4Hz,1H),6.77(dd,J＝5.3,1.5Hz,1H),6.65-6.67(m,1H),6.61(d,J＝5.2Hz,1H),5.56(s,2H),3.80(s,3H),2.80(d,J＝4.9Hz,3H)。
LCMS(ES)：实测值427.5[M+H]+。
向(5)(80mg,0.20mmol)的MeOH/THF(1:1,2mL)溶液中加入羟胺(在水中50％w/w；0.11mL,3.75mmol)，然后加入6N NaOH(0.063mL,0.38mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时。然后，加入1M的KHSO4(2mL)，再加入H2O(6mL)。将其用异丙醇/氯仿(1:2,3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过制备型HPLC纯化，以得到呈淡橙色固体状的实施例TT(21mg,25％)。
1H NMR(500MHz,甲醇-d4),δH ppm:11.08(br.s.,1H),8.69(dd,J＝6.3,1.4Hz,1H),8.39(dd,J＝5.0,1.4Hz),8.28-8.32(m,1H),8.13(dd,J＝6.0,2.6Hz,1H),8.07(dd,J＝5.2,3.3Hz,1H),7.63-7.67(m,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.53(m,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(ddd,J＝8.5,5.3,1.4,1H),6.65(ddd,J＝8.5,5.4,1.5Hz),6.66(d,J＝9.1Hz,1H),6.58-6.63(m,1H),5.51(m,1H),2.80(m,3H)。
LCMS(ES)：实测值428.2[M+H]+。
实施例UU
4-[({[4,4’-联吡啶]-2-基}(吡嗪-2-基)氨基)甲基]-N-羟基苯甲酰胺
向(4)(120mg,0.3mmol)、(吡啶-4-基)硼酸(49mg,0.36mmol)以及Cs2CO3(196mg,0.6mmol)在DMF(2mL)和H2O(0.5mL)中的悬浮液加入Pd(PPh3)4(35mg,0.03mmol)。将混合物用N2(g)吹扫，然后将其加热至90℃持续4小时。一旦冷却，加入H2O(10mL)，并将反应物搅拌20分钟。过滤后，获得胶状物，其通过制备型HPLC、然后通过SCX柱纯化，以得到呈无色油状的(5)(82mg,65％)。
LCMS(ES)：实测值398.5[M+H]+。
向(5)(82mg,0.21mmol)的MeOH/THF(1:1,2mL)溶液中加入羟胺(在水中50％w/w；0.15mL,0.42mmol)，然后加入6N NaOH(0.08mL,0.42mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将挥发物在真空下除去，将残余物经反相制备型HPLC纯化，以得到呈白色固体状的实施例SS(39mg,48％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6),δH ppm:11.05(br.s.,1H),8.95(br.s.,1H),8.68-8.71(m,3H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.28-8.31(m,1H),8.14(d,J＝2.6Hz,1H),7.72-7.78(m,3H),7.64(d,J＝8.2Hz,2H),7.47(dd,J＝5.2,1.4Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,2H),5.55(s,2H)。
LCMS(ES)：实测值399.4[M+H]+。
生物化学测定和数据
1)测定
i.生物化学测定描述
通过使用乙酰化AMC标记的肽底物评估针对所有锌依赖性的HDAC1至HDAC11的活性。底物RHKK(Ac)AMC用于HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC6、HDAC10和HDAC11；对于HDAC8，使用的底物是RHKAcKAc。使用IIa类特异性底物乙酰基-赖氨酸(三氟乙酰基)-AMC(Lahm等人，2007，PNAS，104,17335-17340)测定针对HDAC4、HDAC5、HDAC7、HDAC9的活性。所有分析均基于AMC标记的底物和显影剂组合。
该方案涉及两步反应：首先，将具有乙酰化赖氨酸侧链的底物与含有HDAC活性的样品一起孵育，以产生脱乙酰化产物，然后其在第二步中通过添加显影剂被消化，以产生与脱乙酰化底物的量成比例的荧光信号。
ii.酶
人HDAC1(基因库登录号NM_004964)，具有C-末端His-标签和C-末端FLAG-标签的全长，MW＝56kDa，在杆状病毒表达系统中表达。
人HDAC2(基因库登录号NM_001527)，具有C-末端His-标签的全长，MW＝56kDa，或者具有C-末端GST-标签的全长，MW＝82.9kDa，在杆状病毒表达系统中表达。
人HDAC3复合物(基因库登录号NM_003883)，具有C-末端His标签的全长，MW＝49.7kDa，以及人NCOR2(氨基酸395-489)(基因库登录号NM_006312)，N-末端GST标签，MW＝37.6kDa，在杆状病毒表达系统中共表达。
人HDAC4(基因库登录号NM_006037)，具有N-末端GST标签的氨基酸627-1085，MW＝75.2kDa，在杆状病毒表达系统中表达。
人HDAC5(基因库登录号NM_005474)，具有N-末端GST标签的全长，MW＝150kDa，或者具有C-末端His标签的全长，MW＝51.1kDa，在杆状病毒表达系统中表达。
重组人HDAC6(基因库登录号NBC069243)，全长，MW＝159kDa，使用N-末端GST标签在Sf9昆虫细胞中通过杆状病毒表达。
人HDAC7(基因库登录号AY302468)，具有N-末端GST标签的(氨基酸518-末端)，MW＝78kDa，在杆状病毒表达系统中表达。
人HDAC8(基因库登录号NM_018486)，具有C-末端His标签的全长，MW＝42.6kDa，在杆状病毒表达系统中表达。
人HDAC9(基因库登录号NM_178423)，具有C-末端His标签的氨基酸604-1066，MW＝50.7kDa，在杆状病毒表达系统中表达。
人类HDAC10(氨基酸1-481)，基因库登录号NM_032019，具有N-末端GST标签和C-末端His标签，MW＝78kDa，在杆状病毒表达系统中表达。
人HDAC11(全长)(基因库登录号No.NM_024827)，具有N-末端GST标签，MW＝66kDa，在杆状病毒表达系统中表达。
iii.反应条件
或者，反应条件A：
测定缓冲液：50mM Tris-HCl,pH8.0,137mM NaCl,2.7mM KCl,1mM MgCl2。使用前，加入1mg/ml的BSA和DMSO。
HDAC1：2.68nM的HDAC1和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育2小时。
HDAC2：3.33nM的HDAC2和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育2小时。
HDAC3：1.13nM的HDAC3和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育2小时。
HDAC6：0.56nM的HDAC6和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育2小时。
HDAC8：46.4nM的HDAC8和50μM的HDAC8底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育2小时。
HDAC10：96.15nM的HDAC10和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育2小时。
HDAC11：227.27nM的HDAC11和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育2小时。
对于IIa类HDAC，测定缓冲液是相同的。
其他反应条件如下：
HDAC4：0.03nM的HDAC4和50mM的IIa类HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在室温下孵育30分钟。
HDAC5：0.67nM的HDAC5和50mM的IIa类HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在室温下孵育30分钟。
HDAC7：0.26nM的HDAC7和50mM的IIa类HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在室温下孵育30分钟。
HDAC9：2.37nM的HDAC9和50mM的IIa类HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在室温下孵育30分钟。
或者，反应条件B：
测定缓冲液：50mM Tris-HCl,pH8.0,137mM NaCl,2.7mM KCl,1mM MgCl2。
使用前，加入1mg/ml的BSA和DMSO。
HDAC1：0.3ng/ul的HDAC1和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育1小时。
HDAC2：0.07ng/ul的HDAC2和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育1小时。
HDAC3：0.1ng/ul的HDAC3和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育1小时。
HDAC6：0.3ng/ul的HDAC6和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育1小时。
HDAC8：1ng/ul的HDAC8和100μM的HDAC8底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育2小时。
HDAC10：12ng/ul的HDAC10和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育2小时。
HDAC11：5ng/ul的HDAC11和50μM的HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在30℃下孵育30分钟。
对于IIa类HDAC，测定缓冲液是相同的。
其他反应条件如下：
HDAC4：0.004ng/ul的HDAC4和50μM的IIa类HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在室温下孵育30分钟。
HDAC5：0.05ng/ul的HDAC5和50μM的IIa类HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在室温下孵育30分钟。
HDAC7：0.001ng/ul的HDAC7和50μM的IIa类HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在室温下孵育30分钟。
HDAC9：0.06ng/ul的HDAC9和50μM的IIa类HDAC底物在最终含有1％DMSO的反应缓冲液中。在室温下孵育30分钟。
对照抑制剂:曲古抑菌素A(TSA)
荧光脱乙酰化标准：Biomol，Cat#KI-142；
对于标准对照，将化合物以测定浓度添加至2.5μM荧光脱乙酰haul标准中；在6μL中10次剂量。
对于荧光背景对照，将化合物以测定浓度添加至50mM的HDAC底物中；在6μL中10次剂量。
然后从化合物数据信号中减去荧光背景信号。
转化率％必须为5％至15％以获得最佳结果。
iv.测定程序
阶段1：通过将HDAC酶与化合物一起孵育使底物脱乙酰化
阶段2：通过添加显影剂消化脱乙酰基底物并产生荧光颜色来显影；检测：360/460Ex/Em
2)HDAC酶的抑制
关键词：
****≥10uM
***≤10uM≥1uM
**≤1uM≥500nM
*≤500nM
组合数据
介绍
下面提供了体外组合研究的数据。
测试了一组HDAC抑制剂单独或与以下试剂组合对癌细胞系生长的作用，所述HDAC抑制剂为本文所公开的实施例GG(下文称为化合物A)：
i.万珂(Velcade)(硼替佐米)，蛋白酶体抑制剂(在MM1.R多发性骨髓瘤(MM)细胞中(研究LNB013_070_210814和013_051_140814，Karus)和在KMS-12-BM、OPM-2、RPMI-8226、U266和LP-1MM细胞系中(研究10922，ProQinase))
ii.卡非佐米(Kyprolis/Carfilzomib)，蛋白酶体抑制剂(在KMS-12-BM、OPM-2、RPMI-8226、U266和LP-1MM细胞系中(研究10922，ProQinase))
iii.雷利米得(Revlimid)(来那度胺(Lenalidomide))，免疫调节剂(IMiD)(在MM1.R多发性骨髓瘤(MM)细胞中(研究LNB 011_174_180914，Karus)和在KMS-12-BM、OPM-2、RPMI-8226、U266和LP-1MM细胞系中(研究10922，ProQinase))
iv.泊马度胺(Imnovid/Pomalidomide)，一种免疫调节剂(IMiD)(在KMS-12-BM、OPM-2、RPMI-8226、U266和LP-1MM细胞系中(研究10922，ProQinase))
v.纳武单抗(Opdivo/Nivolumab)，抗PD-1剂(研究KRS018-01-b(DiscoverX))
材料和方法
研究LNB 013_070_210814、013_051_140814和011_174_180914(Karus)
增殖测定
将MM.1R细胞维持在RPMI 1640(Life Tech)+10％FCS+2mM谷氨酰胺和盘尼西林(10μg/mL)以及链霉素(100mg/mL)中。将100μL的每孔5000个细胞(5×104个细胞mL-1)接种在96孔组织培养板(Corning)中。将化合物在培养基中稀释至2×最终检测浓度至最终DMSO浓度0.26％(1.3％为化合物A-雷利米得组合)。细胞接种后24小时，向细胞加入100μL的2×化合物或DMSO对照(最终DMSO浓度为0.26％，对照未处理细胞接受100μL培养基)。将细胞单独或以恒定比例组合暴露于化合物，并在37℃下在含有5％CO2的加湿气氛中孵育96小时(对于化合物A与雷利米得组合，将细胞暴露于化合物A持续24小时，然后加入雷利米得并进一步暴露于这两种试剂持续72小时)。
使用CyQuant Assay(Life Tech)进行化合物对细胞活力的影响的测量。简单地，将检测板以1300rpm离心3分钟并从孔中除去培养基。用PBS洗涤细胞一次，再次离心并吸出PBS，然后在-80℃下冷冻最少1小时。将板在室温下完全解冻，然后加入CyQuant GR试剂-细胞裂解缓冲液混合物。细胞通过孵育裂解，无需在室温下暴露于光持续3分钟。使用Varioskan闪光板读数器定量荧光性(480nm激发/520nm发射滤波器装置)。
数据分析
相对于DMSO处理的对照的平均值和使用GraphPad Prism软件通过非线性回归将0％用作底部约束、100％用作顶部约束计算的细胞生长抑制的IC50值计算细胞活力的抑制百分比。使用Calcusyn软件生成作为协同作用量度的组合指数(CI)值。
研究10922(ProQinase)
增殖测定
KMS-12-BM、OPM-2、RPMI-8226、U266以及LP-1细胞系在含有10％FCS和盘尼西林/链霉素的RPMI-1640中培养。对于增殖测定，将每孔5000个细胞接种在96-孔细胞培养板中的150μL培养基中，并在加入化合物之前在37℃下孵育过夜。将化合物或DMSO对照在培养基中以最终测定浓度的16倍(单一处理)或32倍(组合)进行稀释。细胞接种后24小时，向细胞(1:16或1:32稀释)中加入10μL(单一处理)或5μL(组合)的各稀释化合物、DMSO(最终测定浓度0.1％)或10μM星形孢菌素对照，并在37℃和5％CO2下孵育72小时(或96小时，对于KA507与泊马度胺和雷利米得的组合)。
使用Alamar蓝测定法进行化合物对细胞活力的影响的测量。简单地，将15μL的Alamar蓝试剂加入细胞中，并在37℃、5％CO2下孵育3-5小时后使用荧光计测量590nm处的荧光性。
数据分析
对于单一试剂(单一)处理，将原始数据转换成相对于0.1％DMSO对照和阳性对照(10μM星形孢菌素)的细胞活力百分比，上述对照分别设定为100％和0％。使用具有可变斜率S形响应拟合模型的GraphPadPrism软件进行IC50计算，使用0％细胞生长作为底部约束或无约束(如所示)或100％细胞生长作为顶部约束。对于组合处理，测试的组合化合物浓度基于通过细胞单一处理产生的IC50值的倍数。将原始数据转换成相对于0.1％DMSO对照和阳性对照(10μM星形孢菌素)的细胞活力百分比，上述对照分别设定为100％和0％。将细胞活力转化为受影响的分数((100细胞活力)/100)。根据Bliss独立模型(E1+2＝E1+E2-E1×E2)将受影响的分数的数据与预期值进行比较。
研究KRS018-01-b(DiscoverX)
溶于DMSO中的测试化合物在市售的肿瘤微环境(TME)模型系统中分析，所述肿瘤微环境模型系统由表达PD-L1的HT29结肠直肠腺癌细胞、原发基质成纤维细胞和PBMC组成，其中免疫细胞反应被癌细胞的存在所抑制。将共培养的细胞暴露于2.5μM、5μM、10μM、20μM的测试化合物或作为对照的DMSO中，并用SAg刺激48小时。使用ELISA终点测定法检测共培养系统中的活性谱，以检测与免疫耐受、炎症、血管生成和基质重塑以及磺酰罗丹明B(SRB)相关的蛋白质标记物的调节，并用Alamar蓝测定法测量粘附的结肠直肠腺癌细胞和成纤维细胞，以及PBMC的活力。具有与媒介物对照(p<0.01)显著不同的值的实试验测量被认为是显著的，所述试验测量与DMSO媒介物对照相比超出了对照实验间的变化(显著性包络(envelope))并且效应量>20％(log10比率>0.1)。
结果
蛋白酶体抑制剂
万珂(Velcade)(硼替佐米)：
在两项独立的研究(013_070_210814,013_051_140814，Karus和10922，ProQinase)中，在6种细胞系中测试了HDAC抑制剂化合物A与万珂组合对多发性骨髓瘤(MM)癌细胞生长的作用。
CI指数表明在几种组合浓度下对MM1.R细胞的生长抑制具有协同作用(图1)。在KMS-12-BM、RPMI-8226和U266细胞(图2A)和OPM-2中以及在一定程度的LP-1细胞中，观察到在增加浓度的万珂存在下化合物A介导的生长抑制的增强作用(数据未显示)。Bliss独立分析(横跨所有测试浓度)表明，当组合化合物A与万珂时，在一些组合的测试浓度下对KMS-12-BM、RPMI-8226和U266细胞系的生长抑制具有协同作用。
卡非佐米(Kyprolis/Carfilzomib)：
在5个细胞系(10922)中测试了化合物A与卡非佐米组合对MM细胞生长的作用。在KMS-12-BM、RPMI-8226、U266、OPM-2以及LP-1细胞(图3A)中，观察到在增加浓度的卡非佐米存在下化合物A介导的生长抑制的增强作用。Bliss独立分析(横跨所有测试浓度)表明，当组合化合物A与卡非佐米时，在一些组合的测试浓度下对KMS-12-BM、RPMI-8226、U266、OPM-2以及一定程度的LP-1细胞系的生长抑制具有协同作用。
免疫调节剂(IMiD)：
雷利米得(Revlimid/Lenalidomide)：
测试了化合物A与雷利米得组合对MM细胞生长的作用。Bliss独立分析(横跨所有测试浓度)表明，当组合化合物A与雷利米得时，在一些组合的测试浓度下对KMS-12-BM和RPMI-8226细胞系的生长抑制具有适度的协同作用。
泊马度胺(Imnovid/Pomalidomide)：
在5个细胞系(10922)中测试了化合物A与泊马度胺组合对MM细胞生长的作用。Bliss独立分析(横跨所有测试浓度)表明，当组合化合物A与泊马度胺时，在一些组合的测试浓度下对KMS-12-BM和RPMI-8226细胞系的生长抑制具有适度的协同作用。
抗PD-1单克隆抗体(纳武单抗，Nivolumab):
在市售的TME模型系统中测试化合物A调节肿瘤微环境(TME)中的免疫反应的潜力，所述TME模型系统由表达PD-L1的HT29结肠直肠腺癌细胞、原发基质成纤维细胞和PBMC组成，其中免疫细胞反应被癌细胞的存在所抑制。当以2.5μM至10μM的浓度测试时，化合物A以剂量依赖性方式增加分泌的颗粒酶-B、IFNγ、IL-10、IL-17A、IL-2、IL-6和TNFα的水平。
进一步测试在与治疗性抗-PD1单克隆抗体纳武单抗(nivolumab/Opdivo)的组合中化合物A在TME模型中的活性。将共培养的细胞暴露于2.5μM、5μM、10μM和20μM的化合物A和10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL和10000ng/mL的纳武单抗的组合中。仅使用最高浓度的两种测试试剂(20μM化合物A和10000ng/mL纳武单抗(Opdivo))的组合表现出一些PBMC细胞毒性。总之，16个组合浓度中的15个调节1个至6个终点测定标记物，其值与两种单独测试的试剂显著不同(并且与DMSO媒介物对照相比，单一治疗效果>20％(log10比率>0.1))。据报道，最有效的组合是10μM化合物A与10ng/mL纳武单抗，其降低了胶原蛋白-1和胶原蛋白-III的水平，并将颗粒酶-B、IFNγ、IL-17A和IL-6的分泌增加至与DMSO对照相比单独测试两种试剂的统计学上的显著水平。活性谱中颗粒酶-B和IFNγ水平的增加(被HT29癌细胞的存在抑制)与免疫抑制的BioMAP TME模型中免疫功能恢复的假设一致。
体内组合功效研究
A.总结
研究名称 携带RPMI8226肿瘤的雄性SCID小鼠的肿瘤生长延迟研究
肿瘤类型 RPMI8226
测试物质ID 化合物A
制剂 30/30/40(v/v/v)丙二醇/PEG400/含水(20％)HPβCD
给药时长 26天(26次剂量，动物在第27天被处死)
将雄性SCID小鼠在皮下植入RPMI8226多发性骨髓瘤细胞。一旦肿瘤形成(体积为约130mm3)，就开始治疗。每天通过口服化合物A、每周两次静脉注射硼替佐米、每天腹腔注射来那度胺/地塞米松持续治疗。
在两种组合研究中，化合物A在所有剂量下都耐受良好。在研究结束时，所有治疗组的肿瘤均显著小于媒介物治疗的对照组。
在研究结束时，血浆的生物分析确认了非常低水平的化合物(大多数化合物<LLOQ)。尽管水平较低，但所有测试的化合物均在肿瘤组织中被检测到。
Western印迹分析表明，从用化合物A治疗的动物中取出的肿瘤组织中乙酰化微管蛋白的表达增加。
该研究表明在RPMI8226模型中化合物A的功效。
B.方法
总共115只雄性SCID小鼠(C.B-17/Hsd-PrKdcscid)购自Harlan(UK)并在研究开始前适应7天。将动物圈养在IVC笼中(每笼5只)，通过尾部标记识别各小鼠。在研究期间允许所有动物自由获得标准认证的商业饮食和干净的水。将保持室维持在标准条件下：20℃至24℃、40％至70％湿度以及12h光/暗循环。
使用25号针将RPMI细胞(在基质胶中1×107)皮下植入雄性SCID小鼠的后背部。当肿瘤为100mm3至150mm3时，将动物随机分配至各治疗组。
硼替佐米给药剂量为0.5mg/kg，静脉注射，每周2次
￥来那度胺给药剂量为15mg/kg，腹腔注射，每日1次
§地塞米松给药剂量为5mg/kg，腹腔注射，每日1次
C.结果
临床症状(硼替佐米组合)
对于硼替佐米组合，在研究期间化合物A耐受性良好，未观察到显著的体重变化。
治疗 在第26天的小组平均值 标准偏差(SD) 对比媒介物(p-值) 显著性
第1组 103.5 6.1 - -
第2组 98.5 5.2 0.2794 n/s
第4组 102.4 6.4 >0.999 n/s
第5组 99.0 4.5 0.4505 n/s
肿瘤体积(硼替佐米组合)
媒介物治疗的对照(第1组)中的肿瘤生长如预期，所有肿瘤在整个治疗期间稳定地生长。用化合物A治疗的动物(第4组和第5组)在治疗8天后表现出显著的肿瘤控制。第26天的T/C值百分比(治疗肿瘤体积/媒介物对照肿瘤体积)如下所示。T/C值越低，治疗组合越有效。
第26天的平均肿瘤体积。使用双向ANOVA分析与仅媒介物对照或硼替佐米单独治疗相比的统计学差异。

Claims (32)

1.药物组合物，包含式(I)的化合物或其药物可接受的盐与至少一种第二试剂的组合，所述第二制剂选自蛋白酶体抑制剂、肿瘤免疫治疗剂或免疫调节剂、信号转导途径抑制剂、抑制BCL2蛋白质家族的试剂、抑制Mcl-1的试剂、聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂、芳香酶抑制剂、常规细胞毒性试剂或选自阿比特龙、ARN-509和MYC抑制剂的其他试剂；
其中所述式(I)的化合物表示为：
或其药物可接受的盐，其中：
每个R'独立地选自H和QR1；
每个Q独立地选自键、CO、CO2、NH、S、SO、SO2或O；
每个R1独立地选自H、C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、芳基、杂芳基、C1-C10环烷基、卤素、C1-C10烷基芳基、C1-C10烷基杂芳基或C1-C10杂环烷基；
每个L独立地选自5元至10元含氮杂芳基；
W为锌结合基团；
每个R2独立地为氢或C1至C6烷基；以及
R3为芳基或杂芳基；
每个芳基或杂芳基可以被多至三个取代基取代，所述取代基选自C1-C6烷基、羟基、C1-C3羟基烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基、氨基、C1-C3单烷基氨基、C1-C3双烷基氨基、C1-C3酰氨基、C1-C3氨基烷基、单(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、双(C1-C3烷基)氨基C1-C3烷基、C1-C3-酰氨基、C1-C3烷基磺酰基氨基、卤素、硝基、氰基、三氟甲基、羧基、C1-C3烷氧基羰基、氨基羰基、单C1-C3烷基氨基羰基、双C1-C3烷基氨基羰基、-SO3H、C1-C3烷基磺酰基、氨基磺酰基、单C1-C3烷基氨基磺酰基和双C1-C3-烷基氨基磺酰基；以及
每个烷基、烯基或炔基可以被卤素、NH2、NO2或羟基取代。
2.试剂盒，包含至少一种如权利要求1中所定义的式(I)的化合物或其药物可接受的盐和至少一种第二试剂作为同时、依次或单独用于治疗的组合制剂，所述第二制剂选自蛋白酶体抑制剂、肿瘤免疫治疗剂或免疫调节剂、信号转导途径抑制剂、抑制BCL2蛋白质家族的试剂、抑制Mcl-1的试剂、聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂、芳香酶抑制剂、常规细胞毒性试剂或选自阿比特龙、ARN-509和MYC抑制剂的其他试剂。
3.治疗或预防患者中的病况的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的至少一种如权利要求1中所定义的式(I)的化合物或其药物可接受的盐和至少一种第二试剂，所述第二制剂选自蛋白酶体抑制剂、肿瘤免疫治疗剂或免疫调节剂、信号转导途径抑制剂、抑制BCL2蛋白质家族的试剂、抑制Mcl-1的试剂、聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂、芳香酶抑制剂、常规细胞毒性试剂或选自阿比特龙、ARN-509和MYC抑制剂的其他试剂。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述至少一种第二试剂为蛋白酶体抑制剂，优选地为硼替佐米或卡非佐米。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述至少一种第二制剂为肿瘤免疫治疗剂或免疫调节剂，优选地为小分子免疫调节剂或抗PD-1或抗PD-L1试剂。
6.根据权利要求5所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述肿瘤免疫治疗剂或免疫调节剂为纳武单抗(Nivolumab)、来那度胺或泊马度胺。
7.根据权利要求3至6中任一项所述的方法，其中所述施用是单独的、依次的或同时的。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中W选自：
其中，R1如权利要求1中所定义，Pr2为H或硫醇保护基团，Z选自O、S或NH，以及T为N或CH。
9.根据权利要求8所述的组合物、试剂盒或方法，其中W为-CONHOH。
10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中每个L独立地选自5元或6元含氮杂芳基，其任选地与苯稠合。
11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中在至少一个L基团中，优选地在两个L基团中，与N直接键合的原子为碳，并且至少一个氮原子与所述碳直接键合。
12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中L独立地选自吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、噁二唑基、吡唑基、噻二唑基、吡嗪基，苯并稠合噻唑基、苯并稠合噁唑基或苯并稠合咪唑基，优选地，L独立地选自吡啶基和吡嗪基。
13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中至少一个L基团为吡啶基、噁二唑基、吡唑基、噻二唑基、吡嗪基、苯并稠合噻唑基、苯并稠合噁唑基或苯并稠合咪唑基，优选地，至少一个L基团为吡啶基或吡嗪基。
14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中R3为亚苯基或被卤素取代的亚苯基。
15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中至少一个R2为H，优选地两个R2为H。
16.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中与L连接的R'独立地选自H、C1-C10烷基或O-(C1-C10烷基)、卤素、C1-C10杂环烷基、芳基、三氟甲基或杂芳基。
17.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中至少一个R'为H、卤素、CF3、C1-C6烷基、任选地被卤素取代的芳基、任选地被卤素取代的杂芳基、或杂环烷基。
18.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中至少一个与L连接的R'为杂环烷基。
19.根据权利要求18所述的组合物、试剂盒或方法，其中与R3连接的R'为氢或卤素。
20.根据权利要求18所述的组合物、试剂盒或方法，其中至少一个R'为任选地被卤素、NH2、NO2或羟基取代的C1-C6烷基。
21.根据权利要求20所述的组合物、试剂盒或方法，其中至少一个R'为任选地被卤素取代的C1-C6烷基。
22.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述式(I)的化合物如本文所例示。
23.根据权利要求22所述的组合，其中所述式(I)的化合物为：
或其药物可接受的盐。
24.根据前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述第二试剂选自蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂或肿瘤免疫治疗剂和信号转导途径抑制剂。
25.药物组合物，包含前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法，以及药物可接受的赋形剂。
26.用于治疗的前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法。
27.用于治疗或预防由组蛋白脱乙酰酶(HDAC)介导的病况的前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法。
28.根据权利要求27所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述病况为癌症、心脏肥大、慢性心力衰竭、炎症性病况、心血管疾病、血红蛋白病、地中海贫血、镰状细胞病、CNS病症、自身免疫疾病、糖尿病、骨质疏松症、MDS、良性前列腺增生、子宫内膜异位症、口腔粘膜白斑、基因相关的代谢病症、感染、鲁宾斯-泰比(Rubens-Taybi)、脆性X综合征或α-1抗胰蛋白酶缺乏症。
29.根据权利要求27或28所述的组合物、试剂盒或方法，其中所述病况为慢性淋巴细胞白血病、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、间皮瘤、T细胞淋巴瘤、心脏肥大、慢性心力衰竭、皮肤炎症性病况(尤其是银屑病、痤疮或湿疹)、肌肉骨骼炎症性病况(尤其是类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、强直性脊柱炎或骨关节炎)，或胃肠道的炎症性病况(尤其是炎症性肠病、克罗恩氏(Crohn’s)病、溃疡性结肠炎或肠易激综合症)。
30.用于治疗癌症、优选地治疗多发性骨髓瘤的前述权利要求中任一项所述的组合物、试剂盒或方法。
31.用于治疗实体瘤或血液学癌症的权利要求1至23中任一项所述的组合物、试剂盒或方法。
32.用于加速伤口愈合、保护毛囊或用作免疫抑制剂的权利要求1至23中任一项所述的组合物、试剂盒或方法。
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