CN109306018A - 一种生长抑素免疫原复合物及其制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法 - Google Patents

一种生长抑素免疫原复合物及其制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种生长抑素免疫原复合物及用其制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法，属于动物免疫技术领域。本发明所述生长抑素免疫原复合物，包括蛋白质载体和生长抑素，所述生长抑素偶联在所述蛋白质载体上。利用该生长抑素免疫原复合物制备得到的生长抑素抗独特型卵黄抗体效价为10‑5～10‑4，且只和小鼠抗生长抑素特异性抗体发生免疫反应，特异性好；用其作疫苗，以较低剂量免疫不同动物，相较于对照组均起到明显增重效果。

Description

一种生长抑素免疫原复合物及其制备生长抑素抗独特型卵黄 抗体的方法
技术领域
本发明属于动物免疫技术领域，具体涉及一种生长抑素免疫原复合物及其制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法。
背景技术
动物生长主要依靠下丘脑垂体轴进行调节，下丘脑产生两种重要激素，生长激素释放激素(GHRH)和生长激素释放抑制激素(简称生长抑素， Somatostatin，SS)，这两种激素随着血液循环到脑垂体，共同调节动物的生长。其中生长激素释放激素促进脑垂体生长激素的释放，进而促进动物的生长，而生长抑素(SS)则抑制脑垂体生长激素的释放，进而抑制动物生长。
根据动物生长的调控原理，人们早就探讨通过增加外源性生长激素或促进动物分泌生长激素以达到促进动物生长，增加养殖动物的肉类、奶类、蛋类的产量。有报道，用基因重组表达的生长激素加给养殖动物，能有效促进动物生长，但需要大剂量多次给药，才能获得好的效果，另外重组表达的生长激素有种族界限，只能对本种动物起作用，其它种动物对它不反应。
有报道称，用生长激素抗独特型抗体代替生长激素加给养殖动物，虽然都能促进动物的生长，但需要大剂量多次给药才能起到好的效果。
有人用人工重组表达生长抑素做疫苗免疫动物使动物产生生长抑素抗体，免疫中和体内的生长抑素，减少体内生长抑素水平，从而促进生长激素释放，以促进动物的生长。但是基因重组表达的生长抑素分子量小，稳定性差，注射到动物体内后容易被分解失效，另外也存在种族界限。
目前并没有一种可以克服种族界限并且低成本促进动物生长的免疫制剂。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种生长抑素免疫原复合物及其制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法，将所述生长抑素抗独特型卵黄抗体用做疫苗免疫动物，免疫剂量小、打破种族界限，可用于多种动物，且没有食品安全风险。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种生长抑素免疫原复合物，包括蛋白质载体和生长抑素，所述生长抑素偶联在所述蛋白质载体上；所述蛋白质载体和生长抑素的质量比为(8～13)：(0.6～1.5)。
优选的，所述蛋白质载体包括血清蛋白，所述血清蛋白的分子量大于 10000Da。
本发明提供了所述生长抑素免疫原复合物的制备方法，包括：将载体蛋白与PBS缓冲液按照8～13mg：1mL的质量体积比混合，得载体蛋白液；将生长抑素与蒸馏水按照0.6～1.5mg：1mL的质量体积比混合，得生长抑素液；将所述载体蛋白液与所述生长抑素液等体积混合，所述混合时滴加戊二醛溶液，得生长抑素免疫原复合物；所述戊二醛溶液与所述载体蛋白液与所述生长抑素液的混合液的体积比为0.8～1.3：2；所述戊二醛溶液的体积分数为0.25％。
本发明还提供了上述生长抑素免疫原复合物或利用上述制备方法制备得到的生长抑素免疫原复合物制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法，包括以下步骤：1)将所述生长抑素免疫原复合物与不完全弗氏佐剂混合后免疫动物，采集免疫后动物的血清，得抗生长抑素抗血清；2)将步骤1)得到的所述抗生长抑素抗血清与不完全佐剂混合后免疫蛋鸡，收集免疫后蛋鸡所产的鸡蛋，得抗独特型抗体高免鸡蛋；3)分离步骤2)得到的所述高免鸡蛋的蛋黄，去除杂蛋白后得生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品；4)将步骤3)得到的所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精混合后，收集沉淀，得生长抑素抗独特型卵黄抗体。
优选的，步骤1)所述免疫动物的方法包括：每次每只动物免疫5～40μ g生长抑素免疫原复合物与不完全弗氏佐剂的混合物；所述免疫的次数为3～4 次，每次免疫的间隔为7～10天。
优选的，步骤2)所述免疫蛋鸡的方法包括：每次每只蛋鸡免疫 0.35～0.6mL的抗生长抑素抗血清与不完全佐剂的混合物；所述免疫的次数为3～4次，每次免疫的间隔为7～10天。
优选的，步骤3)所述去除杂蛋白的方法包括：对所述分离得到的高免鸡蛋的蛋黄进行均质破碎，与10～40倍体积蒸馏水混合后，得卵黄溶液；调节所述卵黄溶液的pH值为5.2～6.0，4～8℃静置后收集上清。
优选的，步骤4)所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精的混合方法，包括：将所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精第一混合，将收集得到的第一沉淀用蒸馏水复溶进行第二混合，将收集得到的第二沉淀用蒸馏水复溶进行第三混合；所述第一混合时酒精体积为所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品体积的50～60％；所述第二混合时酒精体积为所述第一沉淀复溶后溶液体积的25～30％；所述第三混合时酒精体积为所述第二沉淀复溶后溶液体积的25～30％。
本发明还提供了一种利用上述方法制备得到的生长抑素抗独特型卵黄抗体。
本发明还提供了一种所述生长抑素抗独特型卵黄抗体在促进动物生长中的应用。
本发明提供了一种生长抑素免疫原复合物其制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法，将所述生长抑素免疫原复合物制备成生长抑素抗独特型卵黄抗体后，将其用作疫苗免疫动物，使动物产生生长抑素抗体，免疫中和体内的生长抑素，从而促进生长激素的释放，进而促进动物的生长。本发明所述生长抑素抗独特型卵黄抗体，免疫剂量小，只需要免疫一次即可获得显著的效果，成本低，效力高；打破种族界限，一种疫苗可用于多种动物，起到一举多得的功效。本发明所述生长抑素抗独特型卵黄抗体对动物增重的调节是一种暂时性、良性的激素免疫调节过程，随时间推移，通过动物自身反馈性调节，体内激素会逐渐恢复到正常水平，对动物没有伤害，免疫动物产生的肉、蛋、奶对人类也不会产生食品安全风险。在本发明实施例中，利用生长抑素抗独特型卵黄抗体0.8～3.2μg/只的量免疫动物，相比于对照，可增重 25.6～37.9％。
附图说明
图1为卵黄抗体标准曲线。
具体实施方式
本发明提供了一种生长抑素免疫原复合物，包括蛋白质载体和生长抑素，所述生长抑素偶联在所述蛋白质载体上；所述蛋白质载体与生长抑素的质量比为(8～13)：(0.6～1.5)。
在本发明所述生长抑素免疫原复合物中，所述蛋白质载体优选包括血清蛋白，更优选包括牛血清白蛋白或血蓝蛋白。本发明所述血清蛋白的分子量优选大于10000Da。本发明所述生长抑素为14个氨基酸的生长抑素，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys。本发明对所述生长抑素的来源并没有特殊限定，优选购买自从美国sigma公司。本发明所述蛋白质载体与生长抑素的质量比优选为(8.5～12)：(0.7～1.3)，更优选为 (9.5～11)：(0.85～1.2)。
本发明提供了所述生长抑素免疫原复合物的制备方法，包括：将载体蛋白与PBS缓冲液按照8～13mg：1mL的质量体积比混合，得载体蛋白液；将生长抑素与蒸馏水按照0.6～1.5mg：1mL的质量体积比混合，得生长抑素液；将所述载体蛋白液与所述生长抑素液等体积混合，所述混合时滴加戊二醛溶液，室温下静置，得生长抑素免疫原复合物；所述戊二醛溶液与所述载体蛋白液与所述生长抑素液的混合液的体积比为0.8～1.3：2；所述戊二醛溶液的体积份数为0.25％。
在本发明所述生长抑素免疫原复合物的制备方法中，将载体蛋白与PBS 缓冲液按照8～13mg：1mL的质量体积比混合，得载体蛋白液。本发明所述载体蛋白与PBS缓冲液的质量体积比优选为8.5～12mg：1mL，更优选为 9.5～11mg：1mL，最优选为10mg：1mL。
本发明将生长抑素与蒸馏水按照0.6～1.5mg：1mL的质量体积比混合，得生长抑素液。本发明所述生长抑素与蒸馏水的质量体积比优选为 0.7～1.3mg：1mL，更优选为0.85～1.2mg：1mL，最优选为1mg：1mL。
得载体蛋白液和生长抑素液后，本发明将将所述载体蛋白液与所述生长抑素液等体积混合，所述混合时滴加戊二醛溶液，室温下静置，得生长抑素免疫原复合物；所述戊二醛溶液与所述载体蛋白液与所述生长抑素液的混合液的体积比为0.8～1.3：2；所述戊二醛溶液的体积分数为0.25％。本发明所述混合优选为搅拌混合，所述搅拌的速度优选为30～100rpm，更优选 50～80rmp。本发明所述滴加的速度优选5～30滴/min，更优选10～20滴/min。本发明所述戊二醛溶液与所述载体蛋白液与所述生长抑素液的混合液的体积比优选为0.85～1.25：2，更优选为0.95～1.05：2，最优选为1：2。本发明在所述滴加完成后优选还包括第二搅拌，所述第二搅拌的速度优选与所述搅拌相同，所述第二搅拌的时间优选为3～20min，更优选为5～10min。本发明所述室温下静置的时间优选为2～3h，以便于生长抑素和载体蛋白的偶合反应。
本发明还提供了上述生长抑素免疫原复合物或利用上述制备方法制备得到的生长抑素免疫原复合物制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法，包括以下步骤：1)将所述生长抑素免疫原复合物与不完全弗氏佐剂混合后免疫动物，采集免疫后动物的血清，得抗生长抑素抗血清；2)将步骤1)得到的所述抗生长抑素抗血清与不完全佐剂混合后免疫蛋鸡，收集免疫后蛋鸡所产的鸡蛋，得抗独特型抗体高免鸡蛋；3)分离步骤2)得到的所述高免鸡蛋的蛋黄，去除杂蛋白后得生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品；4)将步骤3)得到的所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精混合后，收集沉淀，得生长抑素抗独特型卵黄抗体。
在本发明所述制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法中，将所述生长抑素免疫原复合物与不完全弗氏佐剂混合后免疫动物，采集免疫后动物的血清，得抗生长抑素抗血清。本发明所述所述生长抑素免疫原复合物与不完全弗氏佐剂的体积比优选为1：(0.85～1.25)，更优选为1：(0.92～1.1)。本发明所述免疫动物的量优选为每次每只动物免疫5～40μg生长抑素免疫原复合物与不完全弗氏佐剂的混合物，当所述动物为小鼠时，所述免疫量优选为 5～10μg；当所述动物为家兔时，所述免疫量优选为20～40μg。本发明所述免疫的次数优选为3～4次，每次免疫的间隔优选为7～10天。本发明在进行第二次免疫3～5天后还包括动物血清中抗体效价检测，具体包括：分别采集动物的血液(小鼠剪尾取血，家兔从耳缘静脉抽血)，离心取血清，用ELISA 法检测血清中生长抑素抗体的效价，如果效价达到10-4以上，第三次免疫后第5～7天放血收取血清，所述血清即为抗生长抑素抗血清。如果生长抑素抗体的效价达不到所需10-4效价，则作淘汰处理，换动物重新免疫。得抗生长抑素抗血清后，本发明将所述抗生长抑素抗血清与不完全佐剂混合后免疫蛋鸡，收集免疫后蛋鸡所产的鸡蛋，得抗独特型抗体高免鸡蛋。本发明所述抗生长抑素抗血清与不完全弗氏佐剂的体积比优选为1：(0.85～1.25)，更优选为1：(0.92～1.1)。本发明所述免疫蛋鸡时每次每只蛋鸡免疫量优选为 0.35～0.6mL的抗生长抑素抗血清与不完全佐剂的混合物，更优选为 0.4～0.55mL，最优选为0.5mL。本发明所述免疫的次数优选为3～4次，每次免疫的间隔为7～10天。本发明在所述免疫蛋鸡后优选还包括生长抑素抗独特型抗体及效价检测，具体为：第二次免疫后3～5天，采集产蛋鸡当天产的蛋，用ELISA法检测其卵黄是否有生长抑素抗独特型抗体及效价，如果卵黄内有生长抑素抗独特型抗体，且效价达10-4，该产蛋鸡则选为采集鸡蛋制备生长抑素抗独特型抗体的对象，达不到此标准的产蛋鸡不采集其鸡蛋。本发明所述高免鸡蛋的采集方法，包括：将符合采集鸡蛋标准的产蛋鸡，在第三次免疫后3天，开始采集鸡蛋，连续采集20天。本发明在采集所述高免鸡蛋时，优选在采集20天后，再追加免疫一次，然后继续采集20天，直到产蛋鸡被淘汰。
得高免鸡蛋后，本发明分离所述高免鸡蛋的蛋黄，去除杂蛋白后得生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品。本发明在所述蛋黄的分离之前，优选包括高免鸡蛋的消毒，具体包括：将所述高免鸡蛋用自来水洗净，放入体积浓度为70％酒精浸泡10分钟杀菌消毒，捞出晾干。本发明所述去除杂蛋白的方法优选包括：对所述分离得到的高免鸡蛋的蛋黄进行均质破碎，与10～40倍体积蒸馏水混合后，得卵黄溶液；调节所述卵黄溶液的pH值为5.2～6.0，4～8℃过夜，收集上清。本发明所述均质的压力优选为45～75Pa，更优选为55～70Pa。本发明对所述卵黄溶液的pH值的调节方法并没有特殊限定，优选利用盐酸和氢氧化钠溶液调节，在酸性条件下，卵黄溶液产生混浊沉淀。本发明所述收集上清优选包括过夜沉淀后吸取的上清以及将所述浑浊沉淀的底部液体离心后的上清液。本发明所述离心的转速优选为3500～4000rpm。本发明所述离心的时间优选为20～40min，更优选为25～35min。本发明优选将两种上清液混合后，后经微孔过滤进一步去除脂蛋白和脂肪，取滤液，即为生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品。本发明所述微孔过滤用筛的孔径优选为0.22μm。
得生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品后，本发明将所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精混合后，收集沉淀，得生长抑素抗独特型卵黄抗体。本发明所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精的混合方法，优选包括：将所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精第一混合，将收集得到的第一沉淀用蒸馏水复溶进行第二混合，将收集得到的第二沉淀用蒸馏水复溶进行第三混合；所述第一混合时酒精体积为所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品体积的50～60％；所述第二混合时酒精体积为所述第一沉淀复溶后溶液体积的 25～30％；所述第三混合时酒精体积为所述第二沉淀复溶后溶液体积的 25～30％。本发明所述酒精优选为-20℃预冷的纯酒精。本发明对所述收集第一沉淀和第二沉淀的方法并没有特殊限定，优选为离心后收集沉淀，所述离心的转速优选为3500～4000rpm。本发明所述离心的时间优选为20～40min，更优选为25～35min。本发明所述复溶优选为利用蒸馏水使所述沉淀溶解，并达到与所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品相同的体积。
本发明还提供了一种利用上述方法制备得到的生长抑素抗独特型卵黄抗体。
本发明所述生长抑素抗独特型卵黄抗体中抗体含量优选为7～8mg/mL。
本发明还提供了一种所述生长抑素抗独特型卵黄抗体在促进动物生长中的应用。本发明所述动物包括农业生产中产肉、蛋或奶的动物，如牛、羊、猪、鸡和鱼等。本发明对所述促进动物生长的方式并没有特殊限定，包括注射、浸泡(用于鱼类免疫)或口服。本发明所述生长抑素抗独特型卵黄抗体对动物增重的调节是一种暂时性、良性的激素免疫调节过程，随时间推移，通过动物自身反馈性调节，体内激素会逐渐恢复到正常水平，对动物没有伤害，免疫动物产生的肉、蛋、奶对人类也不会产生食品安全风险。
下面结合实施例对本发明提供的生长抑素免疫原复合物其制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将10mg牛血清白蛋白溶解到1mL PBS(pH7.0)，将1mg生长抑素溶解于1mL蒸馏水，将两者混合搅匀，然后边搅拌边滴加1mL0.25％戊二醛溶液，滴加完后继续搅拌10分钟，然后在室温下静置让其继续反应3小时，即制成SS免疫原复合物。
实施例2
用等体积的SS免疫原复合物和不完全弗氏佐剂混合，搅匀后分别皮下注射小鼠和家兔，小鼠每次每只免疫10μg生长抑素，家兔每只每次免疫40 μg生长抑素。共免疫3次，间隔7天。
第二次免疫后5天经过试血，SS抗体的效价达到10-4的小鼠和家兔，第三次免疫后5天即可放血，小鼠通过断颈髓后，摘眼球取血，家兔通过颈动脉插管放血，离心后取血清，分装置于-20℃冰箱保存。
将兔抗生长抑素抗血清(鼠抗生长抑素抗体留作检测用)和等体积不完全佐剂混合后，肌肉注射产蛋鸡，每次注射0.5ml，含生长抑素抗体40μg。每隔7天免疫一次，共免疫3次。
第二次免疫后5天，采集产蛋鸡当天产的蛋，用ELISA法检测其卵黄是否有生长抑素抗独特型抗体及效价，将效价达10-4的产蛋鸡选为采集鸡蛋制备生长抑素抗独特型抗体的对象，第三次免疫后三天，开始采集鸡蛋，连续采集20天。
将鸡蛋用自来水洗净，放入70％酒精浸泡10分钟杀菌消毒，捞出晾干，转入洁净间，人工分离蛋黄，用高压均质机(60pa)进行卵黄组织破碎，破碎后加30倍蒸馏水，搅拌均匀。
将卵黄溶液的pH值调至5.2～6.0，使卵黄溶液产生混浊沉淀。置于4℃冰箱过夜，使杂蛋白继续沉淀。第二天吸管吸取上清，底部混浊部分液体放入4000r/min离心机中离心30分钟，取上清。将两部分上清混和后经微孔过滤(孔径0.22um)进一步去除脂蛋白和脂肪，取滤液，该滤液为生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品。
在生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品中加入冷酒精，使其浓度达到粗制卵黄抗体体积的60％，充分搅拌使其混浊沉淀，在4000r/min离心机离心30 分钟，取沉淀物，加蒸馏水恢复到粗制卵黄抗体的体积，然后再加入冷酒精，使其浓度达粗制卵黄抗体体积的30％，充分搅拌使其混浊沉淀，同上进行离心取沉淀物。再加蒸馏水使其恢复到粗制卵黄抗体的体积。加冷酒精，使其浓度达粗制卵黄抗体的30％，充分搅拌使其混浊沉淀，同上进行离心取沉淀物。加入适量蒸馏水使其沉淀物溶解即制成SS抗独特型卵黄抗体。
试验1：效价检测
用间接ELISA法，检测实施例2得到的生长抑素抗独特型卵黄抗体的效价：
1.1用包被缓冲液(0.05M pH9.6碳酸盐包被缓冲液)将生长抑素抗体进行1:1000稀释，分别加到酶标板小孔内，每孔100μL，置37℃孵育0.5～1 小时。
1.2弃去小孔内生长抑素抗体，用洗涤缓冲液洗三次，每次三分钟。
1.3用抗体稀释液对本发明的抗独特型卵黄抗体进行10倍系列稀释 (10n)，一直稀释到10级。将不同稀释度的抗独特型卵黄抗体依次加到酶标版小孔内，每孔100μL，置37℃孵育0.5～1小时。
1.4重复1.2步骤。
1.5加兔抗卵黄抗体(用抗体稀释液稀释1:1000)，每孔100μL，置37℃孵育0.5～1小时。
1.6重复1.2程序。
1.7加HRP标记的羊抗兔IgG抗体(1:1000稀释)，每孔100μL，置37℃孵育0.5～1小时。
1.8重复1.2程序。
1.9加显色剂(含0.045％过氧化氢液体和10～20mg邻苯二胺的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液)每孔100μL，在常温避光显色15～20分钟。
1.10加终止液(10.6％硫酸溶液)每孔50μL。
1.11在ELISA检测仪上于490nm波长处，空白对照调零后，测各孔OD 值，大于或等于阴性对照孔2.1倍即为阳性反应。结果如表1所示：
表1.SS抗独特型卵黄抗体的效价检测结果
效价 10<sup>-1</sup> 10<sup>-2</sup> 10<sup>-3</sup> 10<sup>-4</sup> 10<sup>-5</sup> 10<sup>-6</sup> 10<sup>-7</sup> 10<sup>-8</sup> 10<sup>-9</sup> 10<sup>-10</sup>
SS抗独特型卵黄抗体 + + + + + - - - - -
可见，本发明提供的所述SS抗独特型卵黄抗体的效价为10-4～10-5。
试验2：特异性检测
用间接ELISA法，检测本发明实施例2所得到的SS抗独特型卵黄抗体的特异性，具体程序如下：
2.1用包被缓冲液(成分同1.1)分别将鼠抗生长抑素抗体、鼠抗胃泌素抗体、鼠抗生长激素抗体、鼠抗胰岛素抗体进行1:1000稀释，分别加到酶标板小孔内，每种加两个重复孔，每孔100μL，置37℃孵育0.5～1小时。
2.2同1.2
2.3用抗体稀释液将本发明抗独特型卵黄抗体进行1：1000稀释，分别加到以上酶标板小孔内，每孔100μL，置37℃孵育0.5～1小时。
2.4～2.11分别同1.4～1.11。
结果如表2所示：
表2.生长抑素抗独特型卵黄抗体的特异性检测结果
可见，本发明提供的SS抗独特型卵黄抗体只和小鼠抗生长抑素特异性抗体发生免疫反应，不和其它肽类抗体发生免疫反应。
试验3：含量检测
用定量ELISA法检测本发明抗独特型卵黄抗体的含量，具体程序如下：
3.1用包被缓冲液(配方同1.1的包被缓冲液)将卵黄抗体标准品和本发明的抗独特型卵黄抗体分别以2n(平方倍数)稀释至n12(12级稀释)。
3.2将以上2倍系列稀释的卵黄抗体标准品及本发明的抗独特型卵黄抗体分别依序加到酶标板反应小孔内，每种12孔，每孔100uL，置37℃孵育1小时。
3.3弃去小孔内的液体，用洗涤缓冲液洗三次，每次三分钟，拍干。
3.4加兔抗卵黄抗体的抗体(用抗体稀释液稀释为1:1000)，每孔100μ L，置37℃孵育0.5～1小时。
3.5重复3.3程序。
3.6～3.10分别同1.7～1.11。
检测结果如表3所示：
表3.待测生长抑素抗独特型卵黄抗体不同稀释度OD值
其中卵黄抗体标准品浓度与OD值之间关系如表4所示：
表4.卵黄抗体标准品浓度与OD值关系
注：标准品液的原始浓度为1mg/mL。
依据表3所述OD值，通过曲线专家软件绘制标准曲线，如附图1所示，其中R值达到0.98以上，本发明提供的SS抗独特型卵黄抗体中抗体含量为 7～8mg/mL。
试验4：效力检测
用不同剂量生长抑素抗独特型卵黄抗体和不完全佐剂混合后分别皮下或肌肉注射免疫小鼠和鸡。将6ul抗独特型卵黄抗体溶解到1.5升海水中，搅匀后，将15尾多宝鱼放入其中浸泡免疫30分钟。然后正常饲养。免疫时和免疫后一个月称重，计算出免疫组动物比对照组动物平均体重增加的百分率。结果如表5所示：
表5.生长抑素抗独特型卵黄抗体对动物增重影响的实验结果
可见，利用本发明提供的SS抗独特型卵黄抗体以较小剂量(0.8～3.2μg) 免疫不同动物，30d后可相较于对照组增重显著。
综上可知，本发明提供了一种生长抑素免疫原复合物其制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法，制备得到的生长抑素抗独特型卵黄抗体效价为 10-5～10-4，且只和小鼠抗生长抑素特异性抗体发生免疫反应，特异性好；可对多种动物起免疫反应，以较低剂量免疫不同动物，相较于对照组增重显著
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种生长抑素免疫原复合物，包括蛋白质载体和生长抑素，所述生长抑素偶联在所述蛋白质载体上；所述蛋白质载体和生长抑素的质量比为(8～13)：(0.6～1.5)。
2.根据权利要求1所述生长抑素免疫原复合物，其特征在于，所述蛋白质载体包括血清蛋白，所述血清蛋白的分子量大于10000Da。
3.权利要求1～2任一项所述生长抑素免疫原复合物的制备方法，包括：将载体蛋白与PBS缓冲液按照8～13mg：1mL的质量体积比混合，得载体蛋白液；将生长抑素与蒸馏水按照0.6～1.5mg：1mL的质量体积比混合，得生长抑素液；将所述载体蛋白液与所述生长抑素液等体积混合，所述混合时滴加戊二醛溶液，得生长抑素免疫原复合物；所述戊二醛溶液与所述载体蛋白液与所述生长抑素液的混合液的体积比为0.8～1.3：2；所述戊二醛溶液的体积分数为0.25％。
4.一种利用权利要求1～2任一项所述生长抑素免疫原复合物或利用权利要求3所述制备方法制备得到的生长抑素免疫原复合物制备生长抑素抗独特型卵黄抗体的方法，包括以下步骤：1)将所述生长抑素免疫原复合物与不完全弗氏佐剂混合后免疫动物，采集免疫后动物的血清，得抗生长抑素抗血清；2)将步骤1)得到的所述抗生长抑素抗血清与不完全佐剂混合后免疫蛋鸡，收集免疫后蛋鸡所产的鸡蛋，得抗独特型抗体高免鸡蛋；3)分离步骤2)得到的所述高免鸡蛋的蛋黄，去除杂蛋白后得生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品；4)将步骤3)得到的所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精混合后，收集沉淀，得生长抑素抗独特型卵黄抗体。
5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤1)所述免疫动物的方法包括：每次每只动物免疫5～40μg生长抑素免疫原复合物与不完全弗氏佐剂的混合物；所述免疫的次数为3～4次，每次免疫的间隔为7～10天。
6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤2)所述免疫蛋鸡的方法包括：每次每只蛋鸡免疫0.35～0.6mL的抗生长抑素抗血清与不完全佐剂的混合物；所述免疫的次数为3～4次，每次免疫的间隔为7～10天。
7.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤3)所述去除杂蛋白的方法包括：对所述分离得到的高免鸡蛋的蛋黄进行均质破碎，与10～40倍体积蒸馏水混合后，得卵黄溶液；调节所述卵黄溶液的pH值为5.2～6.0，4～8℃静置后收集上清。
8.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤4)所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精的混合方法，包括：将所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品与酒精第一混合，将收集得到的第一沉淀用蒸馏水复溶进行第二混合，将收集得到的第二沉淀用蒸馏水复溶进行第三混合；所述第一混合时酒精体积为所述生长抑素抗独特型卵黄抗体粗品体积的50～60％；所述第二混合时酒精体积为所述第一沉淀复溶后溶液体积的25～30％；所述第三混合时酒精体积为所述第二沉淀复溶后溶液体积的25～30％。
9.利用权利要求4～8所述方法制备得到的生长抑素抗独特型卵黄抗体。
10.权利要求9所述生长抑素抗独特型卵黄抗体在促进动物生长中的应用。
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