CN1092972C - 一种抗肿瘤及抗癌转移的药物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗肿瘤及抗癌转移的药物，该药物由黄芪150-900龟板150-900鳖甲150-900川芎100-600白术100-600益母草100-600焦山楂100-600组成。

Description

一种抗肿瘤及抗癌转移的药物

本发明涉及一种中药，特别是涉及一种治疗肿瘤及抗癌转移的中药。

随着现代医学的发展，抗癌药物研究与开发进入了新的阶段，应用传统中医药治疗人类肿瘤已得到国内外专家的广泛关注。

侵袭转移是恶性肿瘤的基本特征之一，约有80％以上肿瘤患者死于侵袭和转移。目前肿瘤化学治疗效果已经进入平台期，且现有的治疗方案主要针对原发癌、即使化疗转移癌的抗药能力明显高于原发癌，再加上这些病例往往是接受过放疗、化疗而失败的，较难承受再次强力的化疗，为此，开发针对转移过程的抗癌转移药，是提高恶性肿瘤治愈率、延长患者生命的一个最主要的途径。

目前虽已有许多种化合物对肿瘤细胞在动物体内转移有一定抑制作用的报道，也有些化合物已成功用于转移的实验治疗。但至今尚在开发研究阶段。众所周知，在癌被诊断时往往已存在着转移现象，故抗转移药的目的是阻止转移和阻止病灶的进一步扩散、或作为手术切除原发灶预防术后转移的辅助用药。从这种意义上讲，抗转移药应该低毒，能够长期服用而不带来明显的累积毒性，应与抗癌化疗药，在概念上有所不同。鉴于中医药在调节宿主组织各种病理性失衡，作用于多个环节，双相性、无明显毒副作用等方面具有特点。使其在抗转移药开发研究中具有明显的优势。

本发明目的在于提供一种能治疗肿瘤的中药；本发明的目的还在于提供一种能治疗抗癌转移的中药。

本发明是通过如下技术方案实现的：按下述重量份称取原料药，黄芪150-900  龟板150-900  鳖甲150-900  川芎100-600  白术100-600益母草100-600  焦山楂100-600，按常规制剂工艺将原料药制成临床上可接受的剂型。

根据中医理论，大多数癌症术后患者存在着气阴两虚或气虚血瘀证候，再融合理代医学对癌转移认识，综合起来，我们构思了一个“益气养阴、行气活血、扶正驱邪”的中药抗癌术后转移的思路，根据这个思路我们结合以往临床经验，研制了本发明药物“复方长必安胶囊”。经动物实验证实它有提高机体免疫功能，并对与转移有关的肿瘤细胞粘附分子(CD44)，多药耐药基因(MDR)、β2-MG有显著阳性变化，在流式细胞仪上显示肠癌细胞G2+M期的细胞阻滞，并诱导肠癌细胞凋亡，对Lemis肺癌和B16黑色素瘤的血道转移有一定抑制作用。实验还显示“长必安胶囊”协同顺铂在高转移人卵巢癌裸鼠体内抗肿瘤生长和抗转移的作用。经临床近一年来试用观察，“复方长必安胶囊”能明显改善癌术后气阴两虚证候，能稳定与提高患者免疫功能，无明显毒副反应，经1年内随访观察无1例出现淋巴或血道转移。因此，本发明药物不仅有抗肿瘤和提高机体免疫功能的作用，而且具有抗肿瘤转移的作用。主要药效学研究如下：

一.中药长必安体外抗人大肠癌细胞的研究

为了解中药长必安的抗肠癌作用，发明人用自建的两株人大肠癌细胞系HR-8348、Hce-8693，进行了体外细胞实验，探讨中药长必安的抗肠癌细胞作用。

1、细胞实验方法：人直肠低分化腺癌细胞系HR-8348和人盲肠未分化腺癌细胞系Hce-8693，由浙江省肿瘤医院，分别于1985年和1987年建立，常规培养传代。实验时取对数生长期的细胞，分别制成1×10⁵/ml细胞悬液，取1ml细胞悬液接种于25ml的培养瓶中，再加入1ml新鲜培养液培养24小时，随机分成6组。

1)A组：阴性对照组，培养液中不加药物；

2)B组：低浓度长必安组，培养液中加5％的灌胃长必安的小鼠血清(用5g/ml长必安药液，灌喂每只小鼠2ml，2小时后取血，分离血清，所获血清通过双波长(530nm、700nm)薄层扫描，确证血液中黄芪甲甙含量较高的血清样品，经无菌过滤，56℃水浴灭活1小时后放4℃冰箱；备用)。

3)C组：中浓度长必安组，培养液中加10％长必安小鼠血清；

4)D组：高浓度长必安组，培养液中加20％长必安小鼠血清；

5)E组：阳性对照组，培养液中加0.25mg/ml的5-FU(氟脲嘧啶)；

6)F组：联合用药组，10％长必安小鼠血清加0.25mg/ml的5-FU培养液。

各组培养72小时后进行各生物学指标的测定并重复3次以上，所得数据进行统计学处理。

2、观察指标

1.1细胞成活率测定：实验后的细胞用台盼兰染色法，计数各组活细胞数，每组计数5次求得平均值。

2.2细胞上清液中LDH检测：各组细胞实验后取上清液，接种于96孔培养板，每孔100ul，再加100ul LDH反应液，同时设最小释放孔和最大释放孔，每组设5个复孔，按照文献的方法，在Clini Bi0128酶标仪上用492nm波长测定LDH活性(OD值)。并按公式求得自然杀伤率。

2.3细胞上清液中CEA、β2-MG检测：各组实验后的细胞取上清液，按3V诊断技术公司生产的放免药盒说明书进行检测。

2.4细胞周期分析：经中药长必安实验后的细胞，用消化液消化收集细胞，经Hank’s液洗一次，沉淀细胞用75％酒精固定，上机检测前经PI综合染液染色30分钟，在FACS Calibur流色细胞仪上作DNA含量测定，所得数据采用ModFitLT软件计算各期细胞百分率。进行细胞DNA含量分析。

2.5细胞凋亡的分析：实验后的细胞处理及上机前的PI染色同上，在FACSCalibur流色细胞仪上作DNA含量分析的同时，在DNA直方图上，找出GO/1峰前出现的低DNA含量并呈左右对称的细胞峰，进行分析。

3、结果

  2.1细胞存活率，见表1。

表1    长必安对人大肠癌细胞增殖抑制作用的影响

                                      Hce-8693细胞(1×   P值

        HR-8348细胞(1组 别                         P值         10⁵)

        ×10⁵)(X±SX)

                                      (X±SX)A组         38.40±5.47                   51.11±11.22B组         35.40±2.92       ＞0.05      30.60±4.05       ＜0.001C组         26.60±3.31       ＜0.001     23.10±3.61       ＜0.001D组*        24.00±2.37       ＜0.001     14.88±4.84       ＜0.001E组         19.80±2.46       ＜0.001     11.40±1.71       ＜0.001F组**       17.03±9.69       ＜0.001     13.20±3.07       ＜0.001

HR-8348*D组与E比较P＜0.05 **F组与E组比较P＞0.05

Hce-8693*D组与E比较P＞0.05 **F组与E组比较P＞0.05

结果显示：两株细胞系各组细胞数与阴性对照组相比均有不同程度的减少，并随长必安浓度的增加对细胞的增殖抑制成负相关，除HR-8348 B组细胞经统计学处理与A组比较无明显差异外，其他单纯用药各组与A组比较P值均小于0.001，其中高浓度长必安组细胞抑制制作用更强，与5-Fu阳性对照组比较差异无显著性，由此可见单用中药长必安对大肠癌细胞有抑制细胞增殖作用，并随剂量增加抑制作用增强。

3.2细胞上清液中LDH检测结果见表2表2  长必安对人大肠癌细胞LDH的影响

 HR-8348  OD          自 然 杀组                                   Hce--8693  OD          自然杀伤

 值             P值   伤    率                   P值别                                   值(X±SX)              率(％)

 (X±SX)              (％)

 0.0012   ±                                            0.0032     ±A组

 0.0041                          0.0054

 0.0270   ±    ＜0.0               0.0312     ±   ＜0.0B组                       24.2                              28.69

 0.0037         01               0.0038          01

 0.0447   ±    ＜0.0               0.0437     ±   ＜0.0C组                       40.76                             41.52

 0.0065         01               0.0037          01D组  0.0642   ±    ＜0.0               0.0590     ±   ＜0.0

                      59.05                             57.25*    0.0067         01               0.0030          01

 0.0152   ±    ＜0.0               0.0140     ±   ＜0.0E组                       12.94                             11.08

 0.0022         01               0.0029          01F组      0.0294     ±      ＜0.0            0.0274    ±    ＜0.0

                               26.45                       24.83**       0.0031             01           0.0033        01

HR-8348*D组与E比较P＜0.001 **F组与E组比较P＜0.001

Hce-8693*D组与E比较P＜0.001 **F组与E组比较P＜0.001

从LDH检测结果可见，两株大肠癌细胞经中药长必安作用后的LDH含量随长必安浓度的增加而增高，其中高浓度长必安作用后的LDH含量高出阳对照组的4倍，经统计学处理，各实验组与A组比较P值均小于0.001，其中D组与E组比较P＜0.001，显示了高浓高长必安对大肠癌细胞有较强的杀伤作用，其杀伤作用较5-Fu强，从细胞自然杀伤率结果也证实了这一点，长必安浓度增高对细胞的杀伤率越高，其中高浓度组的细胞杀伤率高出阳性对照5-Fu组的5倍。

二、中药长必安体内抗肿瘤作用

长必安对S180肉瘤及Lewis肺癌的抑制作用。雌性ICR小鼠，体重18-22g，用于接种S180肉瘤。雌性C57/6J小鼠，体重18-22g，用于接种Lewis肺癌。肿瘤均接种于前肢腋下，同时设高、中、低三个长必安组及CTX阳性对照和阴性对照组。结果见表3、表4。

表3长必安对S180肉瘤的抑制作用

                      动物数   瘤重(g)         抑瘤率组别及剂量                (只)     X±SD           ％阴性对照组                20       3.20±1.13      -CTX性对照(20mg/kg×               20       1.00±0.51***   693)高剂量长必安(25.5g/kg)    20       2.30±0.67**    28中剂量长必安(12.7g/kg)    20       2.03±0.52**    37低剂量长必安(6.3g/kg)     20       2.34±1.05*     27表4  长必安对Lewis肺癌的抑制作用

                      动物数   瘤重(g)         抑瘤率组别及剂量                (只)     X±SD           ％阴性对照组                18       1.84±0.42      -CTX阳性对照(80mg/kg×            18       0.51±0.12***   723)高剂量长必安           18       1.49±0.55*     19(25.5g/kg)中剂量长必安           18       1.54±0.75      16(12.75g/kg)低剂量长必安           18       1.37±0.51**    26(6.3g/kg)

注*、**、***表示与水对照组比较P＜0.05，0.01，0.001

从表3、表4可以看出，25.5g-6.3g/kg剂量的长必安对S180肉瘤及Lewis肺瘤均有明显的抑制作用。

三、中药长必安抗转移作用的实验研究

1.长必安抗肿瘤血道转移的实验研究。

1.1对小鼠Lewis肺癌血道转移的抑制作用。

取Lewis肺癌实体瘤，剪碎，200目尼龙网上研磨并过滤，生理盐水调正细胞浓度至1×10⁶/m1，每只0.2ml，注入C57/6J小鼠尾静脉，次日分组并灌胃给长必安胶囊25.5g/kg，每日一次，连续20天，环磷酰胺组在接种肿瘤第7、14天腹腔注射100mg/kg的环磷酰胺。实验第21处死动物，取肺计算Lewis肺癌肺转移率。结果见表5。表5长必安胶囊对Lewis肺癌血道转移的影响

               动物数    转移动物    转移率    抑制率分组及剂量

               (只)      数(只)      (％)      (％)水对照组           17        14          82        -环磷酰胺(100mg/kg  10        9           90        8×2)长必安(25.5g/kg)   10        7           70        12

由表5可见，25g/kg剂量的长必安有对Lewis血道肺转移产生一定的抑制作用。

1.2对小鼠B16黑色素瘤血道转移的抑制作用。

取体外培养的B16黑色素瘤细胞株，调整到5×10⁵/ml细胞浓度，取0.2ml/只，注入C57/6J小鼠的尾静脉(即1×10⁵/只小鼠)，次日分组，灌胃给药20天，停药次日处死小鼠，取肺、计数肺转移率及转移灶，动物分组，给药剂量及结果见表6。

表6  长必安胶囊对B16黑色素瘤血道肺转移的影响(X±SD)

             动物数   转移动物   转移灶    抑制率组别及剂量

             (只)     数(只)     (％)      (％)水对照组                             61.9  ±

             10       10                   -

                                 19.6环磷酰胺(100mg/kg                    73.6  ±

             10       10                   -19×2)                                 25.5长必安(13g/kg)   11       11         53.7  ±     13

  (13g/kg)   11       11         19.10     26

                                 45.8  ±

                                    14.91

由表6可见，长必安胶囊二个剂量对B16黑色素瘤的血道转移均有不同程度的抑制作用(抑制率为13-26％)，而环磷酰胺则促使血道肺转移的增加。

四、“长必安胶囊”抗癌转移56例临床小结

一般资料：

资料来源：56例病例分布在浙江省肿瘤医院25例、肿瘤医院分院10例，省中研院门诊部及附院20例，男40例、女16例、其中年龄最小45岁、最大年龄70岁、平均年龄56岁。

病理分布：大肠癌术后30例，均为腺癌(Dukes B期10例、C期20例)胃癌术后10例，均为腺癌，乳腺癌术后12例，均为腺癌。

观察追综时间，服药后1年全部病例均经门诊复查。

治疗方法：

经病理确诊作手术后7-12天开始服用“复方长必安胶囊”，每日三次，每次6丸。服三月为一疗程。

观察指标：

(一)安全性观察

1.一般体检项目

2.血、尿、便常规化验

3.心、肝、肾功能检查

(二)疗效性观察

1.中医病证

2.流式细胞仪检测用药前后免疫细胞亚型：CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、NK、总B细胞。

3.肺、肝、骨、脑等部位X线或B超检查。

(三)付反应观察：恶心、呕吐、胃纳下降、腹泻等症状。疗效判定标准：

(一)症状疗效标准(根据卫生部中药新药临床研究指导原则标准)

1.临床痊愈：症状积分好转90％以上；

2.显效：症状积分好转60％以上。

3.有效：症状积分好转30％以上。

4.无效：症状积分好转小于30％。

(二)半定量积分法：将临床主要症状分为轻、中、重三级、分级记分。无症状：0分；轻症：症状转变或偶尔出现为1分；中度：症状时轻时重或间断出现为2分；重症：症状严重或持续存在为3分。

(三)免疫功能：分提高，稳定、下降。

(四)术后生存期

(五)转移率

结果

(一)症状改善情况：

本组出现中医症状共8种，均为中医气虚，阴虚证候，服药后得到明显改善，见表7。

表7  中医症状服药前后情况表

                       治疗后三月症    状     治疗前积分                  积分好转    疗效判定

                       积分神 疲 乏     112           0             100％       临床痊愈力少 气 懒     112           0             100％       临床痊愈言食 欲 减     112           0             100％       临床痊愈退自           128           10            92％        临床痊愈汗头 晕 眼     92            20            78％        显效花失           72            30            58％        有效眠五 心 烦     56            0             100％       临床痊愈热盗           30            0             100％       临床痊愈汗

(二)免疫功能情况：

本组对20例病人进行了免疫细胞亚群FCM检测，表明服药后患者免疫功能基本稳定，并有提高，见下表8。

表8  免疫功以能服药前后水平表项目                     治疗前平均水平            治疗后平均水平CD3(总T淋巴细            56                        70胞)CD4(辅助T细胞)           30                        60CD8(杀伤T细胞)           20                        30CD4/CD8                  1.5                       2NK(自然杀伤细            10                        25胞)CD19(总B淋巴细           10                        15胞)

(三)术后生存期：

56例病人经一年门诊随访均存活。

(四)转移情况：

56例术后病人一年随访无转移病灶发现。

(五)本组无1例出现付反应，也未出现心、肝，肾功能异常及白细胞等血象变化。

实施例：

原料药：黄芪450g  龟板450g   鳖甲450g   川芎300g    白术300g益母草300g  焦山楂300g

工  艺：1.白术粉碎，过100筛(备用)

        2.龟板、鳖甲加10倍量水先煎煮2h，滤过，滤渣同黄芪、川芎、益母草、焦山楂再加入10倍量水煎煮二次，每次2h，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.85(30℃测)稠膏，加入白术粉，混匀，喷雾干燥，混匀，套胶囊，配制1000粒每粒0.35g即得。

Claims (5)

1、一种具有抗肿瘤及抗癌转移的药物，其特征在于该药物由下列重量份的原料药制成：

黄芪150-900    龟板150-900    鳖甲150-900

川芎100-600    白术100-600    益母草100-600

焦山楂100-600

2、如权利要求1所述的药物，其特征在于该药物是由下列重量份的原料药制成：

黄芪450    龟板450    鳖甲450

川芎300    白术300    益母草300

焦山楂300

3、如权利要求1或2所述的药物，其特征在于该药物可以制成临床上可接受的剂型。

4、如权利要求1或2所述的药物在制备抗大肠癌的药物中的应用。

5、如权利要求1或2所述的药物在制备抗癌转移的药物中的应用。