CN109293670A - 一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法 - Google Patents
一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，包括以下步骤：(1)发酵液加热酸化处理；(2)酸化液板框过滤(3)有机溶剂对滤液进行萃取，收集有机相；(4)有机相经过碱洗，水洗操作；(5)碱洗有机相进入外循环蒸发器减压浓缩，得粗提物；(6)将粗提物上反相柱层析；(7)有机溶剂对反相柱进行梯度洗脱，薄层色谱跟踪检测，收集DAM洗脱液；(8)洗脱液旋蒸至干，进行粗结晶；(9)再结晶；(10)20目制粒干燥；(11)100目制粒干燥；(12)过筛；(13)包装入库。该方法对海洋真菌粘稠的DAM发酵液有效地进行了菌液分离，便于后段工序处理，提高收率，降低生产成本，适用于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于海洋真菌抗肿瘤原料药去乙酰真菌环氧乙酯提取纯化领域，具体涉及一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法。
背景技术
去乙酰真菌环氧乙酯(Deacetyl-mycoepoxydiene)，俗称“南强菌素”，化学名：2-(8-甲基-9-氧杂-双环[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氢-2H-吡喃酮；是从海洋真菌中分离得到的高抗肿瘤活性化合物。
去乙酰真菌环氧乙酯的化学式为：C14H16O4，分子量是248，化学结构式如下：
去乙酰真菌环氧乙酯菌种接种于平皿培养基中，固体发酵培养至结束。加入乙酸乙酯、甲醇和乙酸混合溶剂，收集提取液减压浓缩至膏状，用水分散，萃取至无色，分别得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇相浸膏。再分离，装柱，浓缩，洗脱，收集合并各个组分进行反相硅胶柱分离。取反相硅胶，装柱，洗涤，洗脱，收集每个柱体积的洗脱液，浓缩至干，收集第2个组分进行凝胶柱层析分离，取凝胶，装柱，洗脱，收集各组分。反复洗涤直至晶体表面无色素附着。
抗肿瘤化合物去乙酰真菌环氧乙脂注射剂为纳米混悬剂冻干粉，按质量比的组成为去乙酰真菌环氧乙脂∶表面活性剂∶助悬剂∶冻干保护剂＝1∶(0.5～10)∶(0～10)∶(2～10)。将去乙酰真菌环氧乙脂、表面活性剂、助悬剂置于容器中，加入水后预分散，均质后加入冻干保护剂，搅拌使溶解，分装后冷冻，冻干后，即得抗肿瘤化合物去乙酰真菌环氧乙脂注射剂。
发明内容
本发明目的在于提供一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，该方法对海洋真菌粘稠的去乙酰真菌环氧乙酯发酵液有效地进行了菌液分离，减少下一步过滤、分离、浓缩工序，提高收率，降低生产成本，同时采用两级制粒干燥方式，可连续批量操作，适用于工业化生产。
为了实现本发明目的，本发明提供了一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，提取纯化步骤如下：
1)发酵液预处理：去乙酰真菌环氧乙酯发酵结束后，开启发酵搅拌电机，从夹套进蒸汽对发酵液进行加热处理，然后将其打入酸化罐中酸化处理；
2)板框过滤：酸化液用隔膜板框过滤机过滤。过滤完毕后，用纯水进行顶洗；
3)溶剂萃取：将有机溶剂从滤液罐底阀打入，开启搅拌低速混合萃取，充分混合后静置分层，收集有机相，重复操作多次。
4)碱洗：有机相与碱液混合后，有机相分离后经除水罐除水。除水后的碱洗有机相和软水分别从水洗罐底部和顶部进料，进行水洗，碱洗有机相进入储罐。
5)碱洗浓缩：将碱洗有机相抽入外循环蒸发器进行减压浓缩至干，得到粗提物。
6)反相柱层析：用少量溶剂溶解粗提物成浸膏，上反相柱。洗脱剂进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液。
7)粗结晶：将去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液旋蒸至干，加入结晶溶剂至粗品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂，静置粗结晶。
8)结晶：将粗结晶品加入结晶溶剂至粗结晶品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂，静置结晶。
9)20目制粒干燥：将结晶品投入摇摆颗粒剂粉碎成20目物料，倒入双锥干燥机干燥。
10)100目制粒干燥：将20目干燥品投入摇摆颗粒剂粉碎成100目物料，倒入双锥干燥机干燥。
11)过筛：将100目干燥品投入筛分机筛出细粉。
12)包装入库：去乙酰真菌环氧乙酯细粉按照指定规格进行包装，入库。
本发明发酵液预处理步骤中，所述发酵液加热处理温度为75±2℃，保温30min。
本发明所述酸化罐酸化液为盐酸溶液，发酵液PH值调至3～4.5。
本发明板框过滤步骤中，所述纯水顶洗用量为发酵液的0.3～1倍。
本发明溶剂萃取步骤中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸丁酯、氯仿中的一种或多种。
本发明碱洗步骤中，所述碱洗溶液为氢氧化钠溶液，氢氧化钠浓度为0.5mol/L。
进一步的，所述碱洗溶液流量为有机相流量的0.2～0.8倍。
本发明水洗步骤中，所述水洗流量为碱洗有机相流量的0.2～0.8倍，直至水相检测PH值≤8。
本发明反相柱层析步骤中，所述少量溶剂为甲醇溶剂。
进一步的，所述洗脱剂为甲醇-水系统溶液。
本发明粗结晶和结晶步骤中，所述结晶溶剂为甲醇、异丙醇、甲醇、丙酮中的一种或多种。
进一步的，所述反溶剂为纯水。
更进一步的，所述结晶溶剂与反溶剂比例为2∶1～1∶2。
本发明20目制粒干燥和100目制粒干燥步骤中，所述双锥干燥机干燥过程中，控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为35～45℃，干燥5h。取少量物料检测干燥程度，若水分含量达不到要求，则继续干燥1～2h，至产品送检合格。
本发明的有益效果是：
1、采用夹套加热结合酸化方式处理去乙酰真菌环氧乙酯发酵液，降低发酵液粘稠度，利用隔膜板框过滤机进行过滤，然后纯水对发酵滤渣进行顶洗，改善发酵液过滤效率，同时提高了去乙酰真菌环氧乙酯收率。
2、对提取液进行碱洗水洗，除去很大部分杂质，减少下一步过滤、分离、浓缩工序，减少硅胶的损耗，降低生产成本。
3、采用两级制粒干燥方式，可连续批量干燥去乙酰真菌环氧乙酯原料药，适于工业化生产。
附图说明
图1是本发明的工艺流程示意图。
具体实施方式
以下实施例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。任何等效替换取得的技术方案均在本发明保护的范围内。
实施例中所用去乙酰真菌环氧乙酯发酵液为：
海洋红树植物内生真菌拟茎点霉(Phomopsis sp.保藏编号为CCTCC NO：M206060)A123菌株，在以葡萄糖、酵母浸膏和磷酸二氢钾为主的培养基中，通过发酵工艺控制培养得到的发酵液。
实施例1
一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，包括以下步骤：
1)发酵液预处理：去乙酰真菌环氧乙酯发酵结束后，开启发酵搅拌电机，从夹套进蒸汽对发酵液进行加热至75±2℃，保温30min。然后将其打入酸化罐中，加入盐酸溶液调节pH值为3.0。
2)板框过滤：酸化液用隔膜板框过滤机过滤。过滤完毕后，用发酵液0.3倍的纯水量顶洗；
3)溶剂萃取：将有机溶剂丙酮从滤液罐底阀打入滤液中，开启搅拌低速混合萃取，静置分层2h，收集有机相，重复操作3次。
4)碱洗：有机相与0.5mol/L NaOH溶液充分混合，碱洗溶液流量为有机相流量的0.2倍。有机相分离后经除水罐除水。除水后的碱洗有机相和软水分别从水洗罐底部和顶部进料，进行水洗至水相检测PH值≤8，碱洗有机相流入储罐。
5)碱洗浓缩：将碱洗有机相抽入外循环蒸发器进行减压浓缩至干，得到粗提物。
6)反相柱层析：用少量甲醇溶解粗提物成浸膏，上反相柱。洗脱剂-甲醇-水进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液。
7)粗结晶：将去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液旋蒸至干，加入结晶溶剂-乙醇至粗品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置粗结晶。
8)结晶：将粗结晶品加入结晶溶剂-乙醇至粗结晶品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置结晶。
9)20目制粒干燥：将结晶品投入摇摆颗粒剂粉碎成20目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为35℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
10)100目制粒干燥：将20目干燥品投入摇摆颗粒剂粉碎成100目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为35℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
11)过筛：将100目干燥品投入筛分机筛出细粉。
12)包装入库：去乙酰真菌环氧乙酯细粉按照指定规格进行包装，入库。
实施例2
一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，包括以下步骤：
1)发酵液预处理：去乙酰真菌环氧乙酯发酵结束后，开启发酵搅拌电机，从夹套进蒸汽对发酵液进行加热至75±2℃，保温30min。然后将其打入酸化罐中，加入盐酸溶液调节pH值为3.5。
2)板框过滤：酸化液用隔膜板框过滤机过滤。过滤完毕后，用发酵液0.3倍的纯水量顶洗；
3)溶剂萃取：将有机溶剂乙酸丁酯从滤液罐底阀打入滤液中，开启搅拌低速混合萃取，静置分层2h，收集有机相，重复操作3次。
4)碱洗：有机相与0.5mol/L NaOH溶液充分混合，碱洗溶液流量为有机相流量的0.2倍。有机相分离后经除水罐除水。除水后的碱洗有机相和软水分别从水洗罐底部和顶部进料，进行水洗至水相检测PH值≤8，碱洗有机相流入储罐。
5)碱洗浓缩：将碱洗有机相抽入外循环蒸发器进行减压浓缩至干，得到粗提物。
6)反相柱层析：用少量甲醇溶解粗提物成浸膏，上反相柱。洗脱剂-甲醇-水进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液。
7)粗结晶：将去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液旋蒸至干，加入结晶溶剂-异丙醇至粗品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置粗结晶。
8)结晶：将粗结晶品加入结晶溶剂-异丙醇至粗结晶品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置结晶。
9)20目制粒干燥：将结晶品投入摇摆颗粒剂粉碎成20目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为35℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
10)100目制粒干燥：将20目干燥品投入摇摆颗粒剂粉碎成100目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为35℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
11)过筛：将100目干燥品投入筛分机筛出细粉。
12)包装入库：去乙酰真菌环氧乙酯细粉按照指定规格进行包装，入库。
实施例3
一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，包括以下步骤：
1)发酵液预处理：去乙酰真菌环氧乙酯发酵结束后，开启发酵搅拌电机，从夹套进蒸汽对发酵液进行加热至75±2℃，保温30min。然后将其打入酸化罐中，加入盐酸溶液调节pH值为4.0。
2)板框过滤：酸化液用隔膜板框过滤机过滤。过滤完毕后，用发酵液0.3倍的纯水量顶洗：
3)溶剂萃取：将有机溶剂丙酮从滤液罐底阀打入滤液中，开启搅拌低速混合萃取，静置分层2h，收集有机相，重复操作3次。
4)碱洗：有机相与0.5mol/L NaOH溶液充分混合，碱洗溶液流量为有机相流量的0.8倍。有机相分离后经除水罐除水。除水后的碱洗有机相和软水分别从水洗罐底部和顶部进料，进行水洗至水相检测PH值≤8，碱洗有机相流入储罐。
5)碱洗浓缩：将碱洗有机相抽入外循环蒸发器进行减压浓缩至干，得到粗提物。
6)反相柱层析：用少量甲醇溶解粗提物成浸膏，上反相柱。洗脱剂-甲醇-水进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液。
7)粗结晶：将去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液旋蒸至干，加入结晶溶剂-异丙醇至粗品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置粗结晶。
8)结晶：将粗结晶品加入结晶溶剂-异丙醇至粗结晶品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置结晶。
9)20目制粒干燥：将结晶品投入摇摆颗粒剂粉碎成20目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为40℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
10)100目制粒干燥：将20目干燥品投入摇摆颗粒剂粉碎成100目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.08MPa，夹套温度为35℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
11)过筛：将100目干燥品投入筛分机筛出细粉。
12)包装入库：去乙酰真菌环氧乙酯细粉按照指定规格进行包装，入库。
实施例3
一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，包括以下步骤：
1)发酵液预处理：去乙酰真菌环氧乙酯发酵结束后，开启发酵搅拌电机，从夹套进蒸汽对发酵液进行加热至75±2℃，保温30min。然后将其打入酸化罐中，加入盐酸溶液调节pH值为4.5。
2)板框过滤：酸化液用隔膜板框过滤机过滤。过滤完毕后，用发酵液0.3倍的纯水量顶洗；
3)溶剂萃取：将有机溶剂乙酸丁酯从滤液罐底阀打入滤液中，开启搅拌低速混合萃取，静置分层2h，收集有机相，重复操作3次。
4)碱洗：有机相与0.5mol/L NaOH溶液充分混合，碱洗溶液流量为有机相流量的0.8倍。有机相分离后经除水罐除水。除水后的碱洗有机相和软水分别从水洗罐底部和顶部进料，进行水洗至水相检测PH值≤8，碱洗有机相流入储罐。
5)碱洗浓缩：将碱洗有机相抽入外循环蒸发器进行减压浓缩至干，得到粗提物。
6)反相柱层析：用少量甲醇溶解粗提物成浸膏，上反相柱。洗脱剂-甲醇-水进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液。
7)粗结晶：将去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液旋蒸至干，加入结晶溶剂-丙酮至粗品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置粗结晶。
8)结晶：将粗结晶品加入结晶溶剂-丙酮至粗结晶品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置结晶。
9)20目制粒干燥：将结晶品投入摇摆颗粒剂粉碎成20目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为40℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
10)100目制粒干燥：将20目干燥品投入摇摆颗粒剂粉碎成100目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.08MPa，夹套温度为35℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
11)过筛：将100目干燥品投入筛分机筛出细粉。
12)包装入库：去乙酰真菌环氧乙酯细粉按照指定规格进行包装，入库。
实施例4
一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，包括以下步骤：
1)发酵液预处理：去乙酰真菌环氧乙酯发酵结束后，开启发酵搅拌电机，从夹套进蒸汽对发酵液进行加热至75±2℃，保温30min。然后将其打入酸化罐中，加入盐酸溶液调节pH值为4.0。
2)板框过滤：酸化液用隔膜板框过滤机过滤。过滤完毕后，用发酵液0.3倍的纯水量顶洗；
3)溶剂萃取：将有机溶剂甲醇从滤液罐底阀打入滤液中，开启搅拌低速混合萃取，静置分层2h，收集有机相，重复操作3次。
4)碱洗：有机相与0.5mol/L NaOH溶液充分混合，碱洗溶液流量为有机相流量的0.5倍。有机相分离后经除水罐除水。除水后的碱洗有机相和软水分别从水洗罐底部和顶部进料，进行水洗至水相检测PH值≤8，碱洗有机相流入储罐。
5)碱洗浓缩：将碱洗有机相抽入外循环蒸发器进行减压浓缩至干，得到粗提物。
6)反相柱层析：用少量甲醇溶解粗提物成浸膏，上反相柱。洗脱剂-甲醇-水进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液。
7)粗结晶：将去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液旋蒸至干，加入结晶溶剂-乙醇至粗品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置粗结晶。
8)结晶：将粗结晶品加入结晶溶剂-乙醇至粗结晶品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置结晶。
9)20目制粒干燥：将结晶品投入摇摆颗粒剂粉碎成20目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为45℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
10)100目制粒干燥：将20目干燥品投入摇摆颗粒剂粉碎成100目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.08MPa，夹套温度为45℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
11)过筛：将100目干燥品投入筛分机筛出细粉。
12)包装入库：去乙酰真菌环氧乙酯细粉按照指定规格进行包装，入库。
实施例6
一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，包括以下步骤：
1)发酵液预处理：去乙酰真菌环氧乙酯发酵结束后，开启发酵搅拌电机，从夹套进蒸汽对发酵液进行加热至75±2℃，保温30min。然后将其打入酸化罐中，加入盐酸溶液调节pH值为4.0。
2)板框过滤：酸化液用隔膜板框过滤机过滤。过滤完毕后，用发酵液0.3倍的纯水量顶洗；
3)溶剂萃取：将有机溶剂乙酸丁酯从滤液罐底阀打入滤液中，开启搅拌低速混合萃取，静置分层2h，收集有机相，重复操作3次。
4)碱洗：有机相与0.5mol/L NaOH溶液充分混合，碱洗溶液流量为有机相流量的0.5倍。有机相分离后经除水罐除水。除水后的碱洗有机相和软水分别从水洗罐底部和顶部进料，进行水洗至水相检测PH值≤8，碱洗有机相流入储罐。
5)碱洗浓缩：将碱洗有机相抽入外循环蒸发器进行减压浓缩至干，得到粗提物。
6)反相柱层析：用少量甲醇溶解粗提物成浸膏，上反相柱。洗脱剂-甲醇-水进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液。
7)粗结晶：将去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液旋蒸至干，加入结晶溶剂-丙酮至粗品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置粗结晶。
8)结晶：将粗结晶品加入结晶溶剂-丙酮至粗结晶品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂-纯水，静置结晶。
9)20目制粒干燥：将结晶品投入摇摆颗粒剂粉碎成20目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为45℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
10)100目制粒干燥：将20目干燥品投入摇摆颗粒剂粉碎成100目物料，倒入双锥干燥机干燥。控制真空度≥0.08MPa，夹套温度为45℃，干燥5h后，取样检测干燥程度。若达不到要求继续干燥1～2h。
11)过筛：将100目干燥品投入筛分机筛出细粉。
12)包装入库：去乙酰真菌环氧乙酯细粉按照指定规格进行包装，入库。
Claims (14)
1.一种从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于：提取纯化步骤如下：
1)发酵液预处理：去乙酰真菌环氧乙酯发酵结束后，开启发酵搅拌电机，夹套进蒸汽对发酵液进行加热处理，然后将其打入酸化罐中酸化处理；
2)板框过滤：酸化液用隔膜板框过滤机过滤。过滤完毕后，用纯水进行顶洗；
3)溶剂萃取：将有机溶剂从滤液罐底阀打入，开启搅拌低速混合萃取，充分混合后静置分层，收集有机相，重复操作多次。
4)碱洗：有机相与碱液混合后，有机相分离后经除水罐除水。除水后的碱洗有机相和软水分别从水洗罐底部和顶部进料，进行水洗，碱洗有机相进入储罐。
5)碱洗浓缩：将碱洗有机相抽入外循环蒸发器进行减压浓缩至干，得到粗提物。
6)反相柱层析：用少量溶剂溶解粗提物成浸膏，上反相柱。洗脱剂进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液。
7)粗结晶：将去乙酰真菌环氧乙酯洗脱液旋蒸至干，加入结晶溶剂至粗品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂，静置粗结晶。
8)结晶：将粗结晶品加入结晶溶剂至粗结晶品刚好溶解，再缓慢加入反溶剂，静置结晶。
9)20目制粒干燥：将结晶品投入摇摆颗粒剂粉碎成20目物料，倒入双锥干燥机干燥。
10)100目制粒干燥：将20目干燥品投入摇摆颗粒剂粉碎成100目物料，倒入双锥干燥机干燥。
11)过筛：将100目干燥品投入筛分机筛出细粉。
12)包装入库：去乙酰真菌环氧乙酯细粉按照指定规格进行包装，入库。
2.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，发酵液预处理步骤中，所述发酵液加热处理温度为75±2℃，保温30min。
3.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，发酵液预处理步骤中，所述酸化罐酸化液为盐酸溶液，发酵液PH值调至3～4.5。
4.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，板框过滤步骤中，所述纯水顶洗用量为发酵液的0.3～1倍。
5.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，溶剂萃取步骤中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸丁酯、氯仿中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，碱洗步骤中，所述碱洗溶液为氢氧化钠溶液，氢氧化钠溶度为0.5mol/L。
7.根据权利要求1和权利要求6所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，所述碱洗溶液流量为有机相流量的0.2～0.8倍。
8.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，水洗步骤中，所述水洗流量为碱洗有机相流量的0.2～0.8倍，直至水相检测PH值≤8。
9.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，反相柱层析步骤中，所述少量溶剂为甲醇溶剂。
10.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，反相柱层析步骤中，所述洗脱剂为甲醇-水系统溶液。
11.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，粗结晶和结晶步骤中，所述结晶溶剂为甲醇、异丙醇、甲醇、丙酮中的一种或多种。
12.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，粗结晶和结晶步骤中，所述反溶剂为纯水。
13.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，粗结晶和结晶步骤中，所述结晶溶剂与反溶剂比例为2∶1～1∶2。
14.根据权利要求1所述的从海洋真菌发酵液中提取纯化去乙酰真菌环氧乙酯的方法，其特征在于，20目制粒干燥和100目制粒干燥步骤中，所述双锥干燥机干燥过程中，控制真空度≥0.07MPa，夹套温度为35～45℃，干燥5h。
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| CN1903858A (zh) * | 2006-08-03 | 2007-01-31 | 厦门大学 | 抗肿瘤化合物去乙酰真菌环氧乙酯及其制备方法 |
| CN101665814A (zh) * | 2009-08-07 | 2010-03-10 | 厦门大学 | 去乙酰真菌环氧乙酯的制备方法 |
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