CN109293668A - 一种生物碱的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种石斛生物碱的提取方法，包括以下步骤：1)粉碎：将干燥的石斛粉碎；2)先后采用95‑100％乙醇、75‑80％乙醇回流浸提；3)酸化：减压浓缩，采用3‑8％的稀盐酸分散，离心，取上清液；4)除脂：向上清液中加入石油醚，分液取水相；5)加入浓氨碱化、减压浓缩，冻干；6)溶解：使用氯仿与正丁醇按1:0.5‑2组成的混合液作为共溶剂溶解冻干样品；7)以石油醚、甲醇和氨水由5:2‑3:0.5的体积比组成的展开剂，点样、层析、显色；8)收集：切下硅胶，复溶，冷风循环浓缩，收回石斛生物碱。该提取方法可选择性同步提取水溶性生物碱和油溶性生物碱，减少了溶剂的使用、提高了提取效率。

Description

一种生物碱的提取方法
技术领域
本发明涉及一种天然物质的提取和分离方法，尤其涉及一种生物碱的提取方法。
背景技术
生物碱存在于自然界(主要为植物，但有的也存在于动物)中的一类含氮的碱性有机化合物。大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。
生物碱目前通常采用乙醇回流法提取后再采用大孔树脂分离。其中，提取部分的步骤包括：粉碎、乙醇浸提、浓缩、酸化、除脂、碱化、氯仿及正丁醇饱和水溶液分别萃取、浓缩和冻干。冻干后再采用大孔树脂法分离得到纯的生物碱，处理步骤包括：树脂筛选、静态吸附、静态解吸、动态洗脱和结构鉴定。
但上述乙醇回流法和大孔树脂提纯结合的方法，提取耗时长，效率低、工艺繁琐，提取效果不佳。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种快速、高效的生物碱的提取方法。
本发明的目的采用如下技术方案实现：
一种石斛生物碱的提取方法，包括以下步骤：
1)粉碎：将干燥的石斛粉碎；
2)浸提：采用95％乙醇或无水乙醇回流浸提；再采用75-80％的乙醇回流浸提，离心，收集上清液；
3)酸化：于50-65℃减压浓缩，采用3-8％的稀盐酸分散浓缩物，离心，取上清液；
4)除脂：向上清液中加入1/4-1/2体积的石油醚，分液，取水相；
5)碱化：向水相中加入浓氨水至pH＝9-10，70-80℃浓缩至恒重，于-45℃，20Pa冻干；
6)溶解：使用氯仿与正丁醇按1:0.5-2组成的混合液作为共溶剂，加步骤5)得到的冻干样品配制成5-10mg/mL的上样液；
7)层析：以石油醚、甲醇和氨水由5:2-3:0.5的体积比组成的展开剂，用毛细管吸取样品于硅胶板上点样，置于展开剂中分离；于碘蒸气或紫外灯下显色；
8)收集：于指定Rf值位置切下硅胶，用共溶剂复溶，离心，取上清液，冷风循环浓缩，收回石斛生物碱。
进一步地，步骤1)中，粉碎过80目筛。
进一步地，步骤2)中，95％乙醇或无水乙醇浸提2-3次，每次浸提料液比为1:8-10，每次浸提时间为2-3h。
进一步地，步骤2)中，于4000-5000rpm离心15-20min。
进一步地，步骤3)中，于4000-5000rpm离心15-20min。
进一步地，步骤4)中，向上清液中加入1/3体积的石油醚。
进一步地，步骤6)中，共溶剂中氯仿与正丁醇体积比为1:1。
进一步地，步骤6)中，展开剂中，石油醚、甲醇和氨水的体积比为5:2:0.5。
进一步地，步骤8)中，收集Rf为0.4-0.5、0.8-0.9的组分。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
本发明的提取方法可以在使用较少有机溶剂的基础上，快速、高纯度地提取水溶性和油溶性的石斛生物碱；先使用95％或100％乙醇浸提以提取油溶性的石斛生物碱和部分水溶性的石斛生物碱，再以75-80％乙醇提取渣体中剩余的水溶性生物碱，以提高水溶性生物碱的收率；本方法选用的共溶剂的极性和配比适中，能保证油溶性生物碱、水溶性生物碱的溶出，同时其它杂质的溶出较少。选用的该展开剂组成能使油溶性生物碱和水溶性生物碱在合适的Rf值差值内，油溶性生物碱不拖尾、水溶性生物碱无弥散，分离效果佳。
附图说明
图1为实施例1的层析结果示意图；
图2为实施例2的层析结果示意图；
图3为对比例1的层析结果示意图；
图4为对比例2的层析结果示意图；
图5为对比例3的层析结果示意图。
具体实施方式
下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
一种石斛生物碱的提取方法，包括以下步骤：
1)粉碎：将干燥的石斛粉碎；
2)浸提：采用95％乙醇或无水乙醇回流浸提；再采用75-80％的乙醇回流浸提，离心，收集上清液；
3)酸化：于50-65℃减压浓缩，采用3-8％的稀盐酸分散浓缩物，离心，取上清液；
4)除脂：向上清液中加入1/4-1/2体积的石油醚，分液，取水相；
5)碱化：向水相中加入浓氨水至pH＝9-10，70-80℃浓缩至恒重，于-45℃，20Pa冻干；
6)溶解：使用氯仿与正丁醇按1:0.5-2组成的混合液作为共溶剂，加步骤5)得到的冻干样品配制成5-10mg/mL的上样液；
7)层析：以石油醚、甲醇和氨水由5:2-3:0.5的体积比组成的展开剂，用毛细管吸取样品于硅胶板上点样，置于展开剂中分离；于碘蒸气或紫外灯下显色；
8)收集：于指定Rf值位置切下硅胶，用共溶剂复溶，离心，取上清液，冷风循环浓缩，收回石斛生物碱。
该提取方法与传统的采用氯仿先萃取油溶性油溶性生物碱再采用正丁醇萃取水溶性特征碱不同的是，通过以氯仿与正丁醇作为共溶剂，在石油醚、甲醇和氨水组成的展开剂中，于硅胶板上层析，以快速获得生物碱。收集石斛生物碱时采用冷风浓缩，能有效减少提取过程的损失。
本方法获得的生物碱的浓度相对较高，回收快、收率高，溶剂使用量小。
实施例1：
一种石斛生物碱的提取方法，包括以下步骤：
1)粉碎：将干燥的石斛粉碎过80目筛；
2)浸提：采用95％乙醇回流浸提，浸提3次，每次采用10倍物料，每次浸提3h；再采用10倍物料的75％的乙醇回流浸提2h，4000rpm离心15min，收集上清液；
3)酸化：于60℃减压浓缩，采用10倍体积的5％的稀盐酸分散浓缩物，离心，取上清液；
4)除脂：向上清液中加入1/3体积的石油醚，分液，取水相；
5)碱化：向水相中加入浓氨水至pH＝9-10，75℃减压浓缩至恒重，于-45℃，20Pa冻干；
6)溶解：使用氯仿与正丁醇按1:1组成的混合液作为共溶剂，加步骤5)得到的冻干样品配制成5mg/mL的上样液；
7)层析：以石油醚、甲醇和氨水由5:2:0.5的体积比组成的展开剂，用毛细管吸取样品于硅胶板上点样，置于展开剂中分离；于碘蒸气或紫外灯下显色；
8)收集：于Rf值为0.4-0.5、0.8-0.9的位置切下硅胶，用共溶剂复溶，离心，取上清液，冷风循环浓缩，收回石斛生物碱。
实施例2：
一种石斛生物碱的提取方法，包括以下步骤：
1)粉碎：将干燥的石斛粉碎过80目筛；
2)浸提：采用95％乙醇回流浸提，浸提3次，每次采用10倍物料，每次浸提3h；再采用10倍物料的80％的乙醇回流浸提2h，4000rpm离心15min，收集上清液；
3)酸化：于60℃减压浓缩，采用10倍体积的5％的稀盐酸分散浓缩物，离心，取上清液；
4)除脂：向上清液中加入1/4体积的石油醚，分液，取水相；
5)碱化：向水相中加入浓氨水至pH＝9-10，80℃减压浓缩至恒重，于-45℃，20Pa冻干；
6)溶解：使用氯仿与正丁醇按1:1组成的混合液作为共溶剂，加步骤5)得到的冻干样品配制成5mg/mL的上样液；
7)层析：以石油醚、甲醇和氨水由5:3:0.5的体积比组成的展开剂，用毛细管吸取样品于硅胶板上点样，置于展开剂中分离；于碘蒸气或紫外灯下显色；
8)收集：于Rf值为0.40-0.45、0.87-0.89的位置切下硅胶，用共溶剂复溶，离心，取上清液，冷风循环浓缩，收回石斛生物碱。
对比例1：
对比例1与实施例1的差别在于，使用石油醚、甲醇和氨水由5:1:0.5的体积比组成的展开剂。
对比例2：
对比例2与实施例1的差别在于，使用石油醚、甲醇和氨水由3:1:0.5的体积比组成的展开剂。
对比例3：
对比例3与实施例1的差别在于，使用石油醚、甲醇和氨水由6:1:0.5的体积比组成的展开剂。
图1-图5分别为实施例1-2和对比例1-3步骤7的层析结果示意图；图1中，脂溶性的物料点呈圆点状、集中无拖尾，脂溶性的点Rf值为0.45，而水溶性的点Rf值为0.81，相对集中，两者具有较大的Rf值差异，分离效果佳。
图2中，脂溶性的物料呈椭圆性的点状，水溶性的点Rf值为0.88，两者具有较大的Rf值差异，分离较佳；
图3中，脂溶性的物料点的Rf值大于0.6，水溶性的物料点呈弥散状，分离效果不佳。
图4和图5中，脂溶性的物料点的Rf值间隔较小，脂溶性的物料点与水溶性的物料点之间呈现拖尾交叉，且水溶性的物料点的出现弥散状，分离效果不佳。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (9)

1.一种石斛生物碱的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)粉碎：将干燥的石斛粉碎；
2)浸提：采用95％乙醇或无水乙醇回流浸提；再采用75-80％的乙醇回流浸提，离心，收集上清液；
3)酸化：于50-65℃减压浓缩，采用3-8％的稀盐酸分散浓缩物，离心，取上清液；
4)除脂：向上清液中加入1/4-1/2体积的石油醚，分液，取水相；
5)碱化：向水相中加入浓氨水至pH＝9-10，70-80℃浓缩至恒重，于-45℃，20Pa冻干；
6)溶解：使用氯仿与正丁醇按1:0.5-2组成的混合液作为共溶剂，加步骤5)得到的冻干样品配制成5-10mg/mL的上样液；
7)层析：以石油醚、甲醇和氨水由5:2-3:0.5的体积比组成的展开剂，用毛细管吸取样品于硅胶板上点样，置于展开剂中分离；于碘蒸气或紫外灯下显色；
8)收集：于指定Rf值位置切下硅胶，用共溶剂复溶，离心，取上清液，冷风循环浓缩，收回石斛生物碱。
2.如权利要求1所述的石斛生物碱的提取方法，其特征在于，步骤1)中，粉碎过80目筛。
3.如权利要求1所述的石斛生物碱的提取方法，其特征在于，步骤2)中，95％乙醇或无水乙醇浸提2-3次，每次浸提料液比为1:8-10，每次浸提时间为2-3h。
4.如权利要求1所述的石斛生物碱的提取方法，其特征在于，步骤2)中，于4000-5000rpm离心15-20min。
5.如权利要求1所述的石斛生物碱的提取方法，其特征在于，步骤3)中，于4000-5000rpm离心15-20min。
6.如权利要求1所述的石斛生物碱的提取方法，其特征在于，步骤4)中，向上清液中加入1/3体积的石油醚。
7.如权利要求1所述的石斛生物碱的提取方法，其特征在于，步骤6)中，共溶剂中氯仿与正丁醇体积比为1:1。
8.如权利要求1所述的石斛生物碱的提取方法，其特征在于，步骤6)中，展开剂中，石油醚、甲醇和氨水的体积比为5:2:0.5。
9.如权利要求1所述的石斛生物碱的提取方法，其特征在于，步骤8)中，收集Rf为0.4-0.5、0.8-0.9的组分。
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