CN106349323B

CN106349323B - 水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法

Info

Publication number: CN106349323B
Application number: CN201610728581.XA
Authority: CN
Inventors: 谢冬养; 黄健军; 陆美珍; 叶出良
Original assignee: Guilin Yi Tiancheng Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Guilin Yi Tiancheng Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2016-08-25
Filing date: 2016-08-25
Publication date: 2018-04-10
Anticipated expiration: 2036-08-25
Also published as: CN106349323A

Abstract

本发明公开了一种水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法，包括以下步骤：1)将积雪草总皂苷、十二烷基硫酸钠和NaOH混合，加水溶解，在常温下水解10～15min；2)调节水解液pH值至2～5，静置，过滤，收集沉淀；3)将沉淀溶于乙醇中，过滤，将滤液加水进行结晶，过滤，得到结晶，烘干，即得积雪草皂苷元。该方法在常温常压下即可快速断开糖苷键，水解过程温和，水解彻底，且不会产生积雪草皂苷元的构型变化。

Description

水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法

技术领域

本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法。

背景技术

积雪草(Centella asiatica(L.)Urban)为伞形科积雪草树植物，因其叶子酷似马蹄状或半个铜钱，所以又名马蹄草、连钱草等，民间也有地方称其为胡薄荷、地钱草等。积雪草在许多国家和地区的传统医药领域中的应用历史悠久，我国中医中药对积雪草的内服和外用已有两千年历史，最早被《神农本草经》一书所收载。据《本草纲目》记载，积雪草味苦、辛，性寒，无毒，归肝、脾、肾、胃经，其功效为活血、消肿止痛，并有清热解毒、利尿等。积雪草的化学成分主要有三萜类、黄酮类、多炔烯类和挥发油类等。三萜类主要有三萜皂苷类，主要包括积雪草苷、羟基积雪草苷；和三萜酸类，主要包括积雪草酸、羟基积雪草酸等。一般认为，积雪草中起活性作用的主要是积雪草苷和羟基积雪草苷等三萜皂苷类物质，但近年来也有资料研究表明，生物体内积雪草酸、羟基积雪草酸等苷元的生物利用度明显较其相应的苷类要高。研究表明，积雪草总皂苷在十二指肠和结肠吸收差，在空肠和回肠段吸收略有提高，积雪草总皂苷在大肠部分转化为苷元后吸收则显著增加，而积雪草皂苷元可以直接被吸收进入动物血液中，皂苷则需要现在体内水解成苷元才能被吸收利用。

近年来的研究表明，积雪草酸和羟基积雪草酸等积雪草苷元在抗氧化、抗癌等方面具有一定的作用，而且对于脑缺血也有部分疗效。积雪草苷元在积雪草中的含量比积雪草皂苷低得多，积雪草中皂苷含量一般为1.8～5％，而皂苷元同皂苷的含量比通常为1：2.5，因此通过积雪草皂苷水解来获得积雪草皂苷元是一条有效的途径。常规水解积雪草总皂苷制备积雪草苷元的方法为：将积雪草总皂苷溶于乙醇溶液中，加入1mol/L的NaOH溶液作为催化剂，在80℃下水解2～10h，水解结束后，冷却水解液，调PH值至2，静置沉淀，过滤收集沉淀，将沉淀物溶于乙醇，再加水进行结晶，过滤，即为乳白色结晶。上述方法采用高温水解，会造成积雪草皂苷元发生脱水、环合、双键位移、取代基位移、构型转化等变化，大大降低目标成分的收率和纯度。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法，该方法在常温常压下即可快速断开糖苷键，水解过程温和，水解彻底，且不会产生积雪草酸的构型变化。

本发明提供的技术方案是提供一种水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法，包括以下步骤：

1)将积雪草总皂苷、十二烷基硫酸钠和NaOH混合，加水溶解，在常温下水解10～15min；

2)调节水解液pH值至2～5，静置，过滤，收集沉淀；

3)将沉淀溶于乙醇中，过滤，将滤液加水进行结晶，过滤，得到结晶，烘干，即得积雪草皂苷元。

步骤1)中，十二烷基硫酸钠在混合溶液中的浓度3.44～4.3×10^-2mol/L。由于十二烷基硫酸钠的临界胶团浓度为0.86×10^-2mol/L，当表面活性剂分子的浓度高于其临界胶团浓度时，表面活性剂分子就会在溶液内部形成大量胶团，又由于十二烷基硫酸钠在水中浓度大于临界胶团浓度时，极易形成热力学稳定形状即棒状胶团，当十二烷基硫酸钠的浓度继续提高至临界胶团浓度的4～5倍时，即3.44～4.3×10^-2mol/L时，棒状胶团在水溶液中相互蠕动，进而形成层状胶团结构，可大大提高对疏水基团的包裹作用。

积雪草总皂苷由积雪草苷和羟基积雪草苷组成，这两者为两性物质，是由积雪草酸或羟基积雪草酸与葡萄糖和鼠李糖通过糖苷键结合的物质，葡萄糖和鼠李糖为亲水基团，而积雪草酸和羟基积雪草酸为疏水基团，亲水基团部分存在胶束团表面，而疏水基团则穿插在形成棒状胶束的表面活性剂分子间，由于层状胶团的存在，疏水基团则被完全插入在层状胶团中间，此时，亲水基团露在表面，十分有利于OH^-快速且全面进攻糖苷键，使得糖苷键发生消除反应而开裂苷键，水解快速且彻底。因此，NaOH在混合溶液中的浓度为0.01～0.02mol/L即可水解完全，水解时间仅需10～15min。

步骤2)中，采用HCl调节pH值。

步骤3)中，所述沉淀与乙醇的料液比为1g：5～30ml。所述乙醇的体积浓度为50～70％。

步骤3)中，水的用量为乙醇体积的8～16倍。

与现有技术相比，本发明可在常温常压下即可快速断开糖苷键，水解过程温和，水解彻底，且不会产生积雪草皂苷元的构型变化。

具体实施方式

以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。

以下实施例中积雪草总皂苷,由广西昌洲制药有限公司提供，纯度为80％，其中，羟基积雪草苷含量为52％，积雪草苷含量为28％。

实施例1

1)将1g积雪草总皂苷、3.44×10^-2mol十二烷基硫酸钠和0.01mol NaOH混合，加水至1L，搅拌溶解，得到混合溶液，在常温常压下水解10～15min，得到水解液；

2)采用HCl调节水解液pH值至2，静置，过滤，收集沉淀；

3)将沉淀按料液比为1g：5ml的溶于体积浓度为50％乙醇中，过滤，将滤液加入乙醇体积8倍的水进行结晶，过滤，得到结晶，烘干，即得积雪草皂苷元，称重0.398g,经HPLC分析其纯度为98％。收率为95.0％。

实施例2

1)将1g积雪草总皂苷、4.3×10^-2mol十二烷基硫酸钠和0.02mol NaOH混合，加水至1L，搅拌溶解，得到混合溶液，在常温常压下水解15min，得到水解液；

2)采用HCl调节水解液pH值至5，静置，过滤，收集沉淀；

3)将沉淀按料液比为1g：30ml的溶于体积浓度为70％乙醇中，过滤，将滤液加入乙醇体积16倍的水进行结晶，过滤，得到结晶，烘干，即得积雪草皂苷元，称重0.398g,经HPLC分析其纯度为98.4％。收率为95.29％。

实施例3

1)将1g积雪草总皂苷、3.87×10^-2mol十二烷基硫酸钠和0.015mol NaOH混合，加水至1L，搅拌溶解，得到混合溶液，在常温常压下水解12min，得到水解液；

2)采用HCl调节水解液pH值至3，静置，过滤，收集沉淀；

3)将沉淀按料液比为1g：15ml的溶于体积浓度为60％乙醇中，过滤，将滤液加入乙醇体积12倍的水进行结晶，过滤，得到结晶，烘干，即得积雪草皂苷元，称重0.398g,经HPLC分析其纯度为98.3％。收率为95.16％。

实施例4

1)将1g积雪草总皂苷、3.44×10^-2mol十二烷基硫酸钠和0.02mol NaOH混合，加水至1L，搅拌溶解，得到混合溶液，在常温常压下水解10min，得到水解液；

2)采用HCl调节水解液pH值至5，静置，过滤，收集沉淀；

3)将沉淀按料液比为1g：5ml的溶于体积浓度为70％乙醇中，过滤，将滤液加入乙醇体积8倍的水进行结晶，过滤，得到结晶，烘干，即得积雪草皂苷元，称重0.399g,经HPLC分析其纯度为98.6％。收率为95.72％。

Claims

1.水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将积雪草总皂苷、十二烷基硫酸钠和NaOH混合，加水溶解，使得NaOH在混合溶液中的浓度为0.01～0.02mol/L，在常温下水解10～15min；十二烷基硫酸钠在混合溶液中的浓度3.44～4.3×10^-2mol/L；

2)调节水解液pH值至2～5，静置，过滤，收集沉淀；

2.根据权利要求1所述的水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法，其特征在于：步骤2)中，采用HCl调节pH值。

3.根据权利要求1所述的水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法，其特征在于：步骤3)中，所述沉淀与乙醇的料液比为1g：5～30ml。

4.根据权利要求3所述的水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法，其特征在于：所述乙醇的体积浓度为50～70％。

5.根据权利要求1所述的水解积雪草总皂苷制备积雪草皂苷元的方法，其特征在于：步骤3)中，水的用量为乙醇体积的8～16倍。