CN109276710A - 一种增加骨密度的组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种增加骨密度的组合物及其制备方法和用途。本申请的增加骨密度的组合物由碳酸钙、氨基葡萄糖硫酸钾盐、硫酸软骨素钠、胶原蛋白、维生素D3、巴戟天和姜黄制成。本申请的组合物根据现代科学理论结合中医学理论组方而成，增加骨密度试验和毒理试验表明，该组合物钙吸收率高，能显著增加骨重、骨密度和骨钙含量，并且对生长发育无不良影响。

Description

一种增加骨密度的组合物及其制备方法和用途
技术领域
本申请属于保健品领域，具体涉及一种增加骨密度的组合物及其制备方法和用途。
背景技术
随着经济的发展，社会老龄化现象日益突出，由此带来的骨质疏松症发生率也在逐年攀升。骨质疏松是随年龄增长而出现的一种病理生理现象，也是引起骨折危险性增高的重要因素之一。以低骨密度和骨组织微结构的破坏为特征，导致骨的脆性增加，继而增加骨折的危险性。骨密度全称是骨骼矿物质密度，指骨单位面积的骨质密度，是指骨组织结合的紧密程度，通常指骨矿物含量。骨密度是骨骼强度的一个重要指标，是反映骨质疏松程度，预测骨折危险性的重要依据。骨组织的强度有75％-85％与骨密度有关。骨密度是目前衡量骨质疏松的一个客观的量化的指标，也是反映骨量的一个指标，骨密度越高，骨质强度越好。
随着年龄增加，周身各骨骼的骨密度均呈逐渐下降趋势。骨密度下降的机理是骨代谢失衡。人在35岁前骨代谢旺盛，摄入的钙很快被吸收进入骨骼中沉淀，骨骼生长再生迅速，此时骨最强壮；由于骨骼中成骨细胞的作用，在此期间骨形成大于骨丢失。女性35岁、男性40岁后，由于胃肠功能减弱，骨营养吸收减小而流失增加，骨形成和骨破坏失去平衡，表现为骨结构中骨小梁破坏、变细、断裂、间隙变大、中空，导致骨密度下降。
目前市场上增加骨密度的产品大致可以分为以下几类：一类是含钙的、通过直接补充钙质而达到增加骨密度目的的保健食品；二类是不含钙或者不以补钙为目的，而是通过调整内分泌而促进钙的吸收从而达到增加骨密度这一目的的保健食品。然而，单纯补钙吸收率较低，并且使得骨骼的脆性增加，增加了发生骨痛、骨折的风险。通过调整内分泌而促进钙吸收的产品往往采用雌激素等成分，对于体质较差、容易发生内分泌紊乱的老年人并不合适。
传统中医学理论认为，肾藏精，主骨，生髓。髓藏于骨腔内，滋养骨骼，骨的生长发育依赖肾脏精气的滋养与推动。肾中精气充盈则骨髓生化有源，骨才能得到骨髓的滋养，才能骨密度正常而骨强健有力。此外脾为“气血生化之源”，若脾虚失运化之功则肾精亏虚，骨骼失养。
根据骨密度下降的原因和作用机理的不同，可以选择不同的方法增加骨密度，如可以直接补充钙质、补充维生素D及其活性产物促进钙吸收；如以中医理论为指导，则有补肾壮阳，益气健脾、活血调肝等方法。
现有技术中有一些文献中记载了结合了以上两种方法的增加骨密度的组合物。中国发明专利申请公开CN108065358A公开了一种增加骨密度的大豆异黄酮保健食品，其各组分的重量份数分别为：巴戟天15-30份、大豆异黄酮8-16份、骨碎补4-10份、碳酸钙12-18份、胶原蛋白4-9份、乳矿物盐1-3份、杜仲0.1-0.5份、透明质酸钠0.01-0.03份、维生素D30.0001-0.0004份。中国发明专利CN102698254B公开了一种增加骨密度的组合物，该组合物由以下重量份的原料制成：碳酸钙0.5-35份、硫酸氨基葡萄糖0.5-30份、硫酸软骨素0.05-2份、胶原蛋白0.1-10份、姜黄提取物0.08-5份。中国发明专利申请公开CN107581608A公开了一种增加骨密度的胶囊知己，其组成与配比为：杜仲100-300、骨碎补100-300、鹿骨粉17.5-52.5、股胶原蛋白粉16-48、碳酸钙16.5-49.5、维生素D30.06-0.15。此外，中国发明专利申请公开CN106173614A公开了一种具有增加骨密度功能的组合物，其所含的活性成分为碳酸钙、氨基葡萄糖硫酸钾盐、硫酸软骨素、酪蛋白磷酸肽、杜仲提取物、姜黄提取物。
尽管这些专利文献中记载了一些结合补钙和补肾两种方法的增加骨密度的组合物，然而，目前，并没有这样的产品上市，仍然需要研究并开发这样的增加骨密度的产品。
发明内容
本申请根据现代科学理论结合中医学理论，一方面提供一种增加骨密度的组合物，其由以下重量份的原料制成：碳酸钙100-500份、氨基葡萄糖硫酸钾盐40-200份、硫酸软骨素钠20-150份、胶原蛋白20-150份、巴戟天100-1000份、姜黄100-1000份和维生素D30.1-1份。
在一个实施方案中，所述增加骨密度的组合物由以下重量份的原料制成：碳酸钙150-400份、氨基葡萄糖硫酸钾盐60-150份、硫酸软骨素钠40-100份、胶原蛋白40-100份、巴戟天200-800份、姜黄200-800份和维生素D3 0.2-0.8份。
在一个实施方案中，所述增加骨密度的组合物由以下重量份的原料制成：碳酸钙180-300份、氨基葡萄糖硫酸钾盐70-100份、硫酸软骨素钠50-80份、胶原蛋白50-80份、巴戟天400-600份、姜黄400-600份和维生素D3 0.3-0.7份。
在一个实施方案中，所述增加骨密度的组合物由以下重量份的原料制成：碳酸钙200份、氨基葡萄糖硫酸钾盐80份、硫酸软骨素钠55份、胶原蛋白55份、巴戟天500份、姜黄500份和维生素D3 0.4份。
第二方面，本申请提供一种增加骨密度的包衣片剂，所述片剂由上述增加骨密度的组合物与以下重量份的辅料制成：微晶纤维素100-500份、交联羧甲基纤维素钠20-150份、硬脂酸镁1-10份和薄膜包衣预混剂10-50份。
在一个实施方案中，所述增加骨密度的包衣片剂由上述增加骨密度的组合物与以下重量份的辅料制成：微晶纤维素200-400份、交联羧甲基纤维素钠30-100份、硬脂酸镁2-8份和薄膜包衣预混剂20-40份。
在一个实施方案中，所述增加骨密度的包衣片剂由上述增加骨密度的组合物与以下重量份的辅料制成：微晶纤维素222.6份、交联羧甲基纤维素钠50份、硬脂酸镁4份和薄膜包衣预混剂28份。
在一个实施方案中，所述增加骨密度的片剂为薄膜包衣片剂。
在本申请的增加骨密度的组合物中，各原料具有以下作用或功能：
碳酸钙和维生素D3
骨质疏松是以骨量减少，骨显微结构异常，脆性增加的一种全身性骨骼疾病，易于发生骨折。钙剂作为防治骨质疏松常用保健食品之一，己广泛应用于人们的生活和临床中。己证实补充钙剂能减少绝经后，尤其是绝经≥5年的骨量丢失。在20余项临床研究中，绝经后妇女单纯补充钙剂，骨密度减少0.014％/年，而不服钙剂者丢失为1％/年。钙剂补充4年，其作用能保持。也观察到日摄入元素钙1000mg以上能加强运动对绝经后妇女骨密度的改善，钙剂亦可加强雌激素、选择性雌激素受体调节剂、降钙素和双磷酸盐治疗时对骨密度的改善。国内也有报导单纯补钙剂可以预防骨量的丢失或使骨密度轻度增加(孟迅吾，钙和骨质疏松症第三次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文汇编，2005年，第26-28页)。碳酸钙中的钙含量为40％，大量已获CFDA批准的增加骨密度功能的保健食品以碳酸钙为原料，可见碳酸钙是补钙的重要来源之一。碳酸钙含钙量高，成本低，是使用最广泛的钙补充剂。维生素D3促进钙的吸收。
氨基葡萄糖硫酸钾盐
氨糖(二氨基-2-脱氧-β-D吡喃葡萄糖)，又称为氨基葡萄糖、葡萄糖胺，市面上主要有两类，一类是氨基葡萄糖盐酸盐，一类是氨基葡萄糖硫酸盐。氨基葡萄糖是一种天然氨基单糖的衍生物，是软骨基质和滑液中聚氨基葡萄糖的主要成分。氨基葡萄糖是软骨基质中合成蛋白聚糖所必需的重要成分。蛋白聚糖可以通过抑制胶原纤维的拉伸力来使关节软骨具有吸收冲击力的功能。外源摄入氨基葡萄糖可以刺激软骨细胞合成蛋白多糖，补充软骨基质的丢失成分，并可抑制基质金属蛋白酶的表达，从而促进软骨的修复。在关节退行性疾病的早期，聚集葡萄聚糖的生物合成是增加的，在疾病的后期，则相反。由此导致软骨的弹性不断减弱并逐渐出现关节炎的诸多症状。氨基单糖可刺激软骨细胞产生具有正常多聚体结构的糖蛋白，抑制一些可损害关节软骨的酶(如胶原酶)，防止皮质激素及某些非甾体抗炎药物对软骨细胞的损害及减少损伤细胞的内毒素因子的释放。在关节炎的发展进程中，补充外源性的氨基葡萄糖可能起到有益的作用。在体外试验中，如果补充了氨基葡萄糖，形成软骨的多形细胞就可以合成更多的聚集葡萄聚糖。
杨春娟等，将70例骨质疏松症患者随机分为两组，每组各35例。试验组给予硫酸氨基葡萄糖、钙尔奇D600、骨化三醇胶丸联合鲑降钙素治疗6个月～1年，对照组仅给予鲑降钙素、钙尔奇D600治疗6个月～1年。观察两组的临床疗效、症状体征消失时间、骨密度值。结果表明试验组的总有效率显著高于对照组(p＜0.05)；症状体征消失时间显著短于对照组(p＜0.05)；骨密度值显著优于对照组(p＜0.05)。硫酸氨基葡萄糖、钙尔奇D600、骨化三醇胶丸联合鲑降钙素治疗骨质疏松临床疗效显著(杨春娟、管杰，氨基葡萄糖联合鲑降钙素治疗骨质疏松的临床探析[J]，医学信息，2015(26)：342-342,343)。
硫酸软骨素钠
硫酸软骨素是自哺乳动物气管等软骨提取而得的酸性黏多糖。主要应用于治疗关节疾病，常与氨基葡萄糖配合使用，具有止痛，促进软骨再生，软化骨骼的功效，可以从根本改善关节问题。硫酸软骨素对骨骼的保护，可以预防骨骼变硬变脆，防止钙化加剧，使得僵硬的骨骼恢复柔韧性，对骨质增生的恢复有较大帮助，一定范围的缩小变硬变脆呈现扩张状态的骨骼轮廓。通过增加硫酸软骨素的供应，骨骼硬化减少，紧实柔韧的骨骼比脆弱的骨骼体积减少10％，强度大大增强。
叶礼红等探讨以D-氨基葡萄糖硫酸钾盐、硫酸软骨素、碳酸钙、骨碎补为主要成分的氨糖软骨素片增加骨密度作用。以340mg/kg.bw、680mg/kg.bw、1360mg/kg.bw(相当于人体推荐剂量5、10、20倍)剂量的氨糖软骨素片给大鼠喂饲90d，测定大鼠体重、右股骨重、左股骨密度及右股骨钙含量等指标。结果实验组大鼠右股骨重与对照组比较差异无统计学意义(P﹥0.05)，实验组各剂量组和高剂量碳酸钙组的体重、左股骨密度、右股骨钙含量显著高于对照组(P﹤0.01)，且高剂量组左股骨骨密度、右股骨骨钙含量与高剂量碳酸钙组之间差异无统计学意义(P﹥0.05)。表明该氨糖软骨素片具有增加大鼠骨密度的作用(叶礼红等，氨糖软骨素片增加骨密度动物实验研究[J]，现代预防医学，2013(22)：4239-4241)。
胶原蛋白
胶原蛋白是由动物细胞合成的一种生物性高分子，广泛存在于动物骨、腱、软骨和皮肤及其它结缔组织中，具有支撑器官、保护机体的功能。胶原蛋白可以作为补钙成分用于保健食品，因为血浆中来自胶原蛋白的羟基脯氨酸是将血浆中的钙运输到骨细胞的运载工具，骨细胞中的骨胶原是羟基磷灰石的黏合剂，它与羟基磷灰石共同构成了骨骼的主体(李昀，胶原蛋白在食品和化妆品中的应用[J]，天津农学院学报，2005,12(2)：54-57)。只有当骨骼中黏合剂质量越来越差，数量越来越少，不能有效地将所有的羟基磷灰石分子全部、均匀的粘合起来，并按一定的堆积方式和框架结构固定下来，才会发生骨质疏松，骨钙就会进入血液，造成血钙浓度过高，此时就会有钙排出。因此，骨质疏松的实质是合成新的骨胶原的速度跟不上需要，由此可知，经常、及时地补充结合了钙的胶原蛋白，这样的补钙剂摄入体内后消化吸收比较快(祝徳义、李彦春等，胶原多肽与钙结合性能的研究[J]，中国皮革，2005,12(2)：26-29)，即钙和胶原蛋白配伍使用更为有效。
巴戟天
中药巴戟天味甘、辛，性微温，归肾、肝经，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效，用于阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨痿软。本申请的组合物中所用的是巴戟天提取物，其是茜草科植物巴戟天的干燥根经水提取得到的有效部位。
姜黄
中药姜黄味辛、苦，性温，入肝、脾经，具有破血行气，通经止痛之功效，用于血阏气滞、胸胁刺痛、经闭腹痛、跌打肿痛、风湿疼痛。本申请的组合物中所用的是姜黄提取物，其是姜科植物姜黄的干燥根茎经醇提得到的以姜黄素为主的有效部位。
在本申请的上述增加骨密度的组合物和包衣片剂中，巴戟天通过以下方法制成提取物：将巴戟天饮片置提取罐中，加10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，提取液滤过，得水提取液。将水提取液减压浓缩，得稠浸膏。减压干燥，得干浸膏。
在一个实施方案中，巴戟天通过以下方法制成提取物：将巴戟天饮片置提取罐中，加10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，提取液通过120目不锈钢筛网滤过，得水提取液。将水提取液在温度60-70℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压浓缩至60℃测得的相对密度为1.25-1.35，得稠浸膏。在温度70-80℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压干燥，得干浸膏。
在本申请的上述增加骨密度的组合物和包衣片剂中，姜黄通过以下方法制成提取物：将姜黄饮片置提取罐中，加8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，药液滤过，得醇提取液。将醇提取液减压回收乙醇至无醇味，然后继续减压浓缩，得稠浸膏。减压干燥，得干浸膏。
在一个实施方案中，姜黄通过以下方法制成提取物：将姜黄饮片置提取罐中，加8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，药液通过120目不锈钢筛网滤过，得醇提取液。将醇提取液在温度60-70℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压回收乙醇至无醇味，然后继续在温度60-70℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压浓缩至60℃测得的相对密度为1.25-1.35，得稠浸膏。在温度70-80℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压干燥，得干浸膏。
第三方面，本申请提供上述增加骨密度的包衣片剂的制备方法，其包括以下步骤：
(1)原辅料前处理
将巴戟天、姜黄饮片净选除杂，备用；氨基葡萄糖硫酸钾盐粉碎过80目筛，备用；碳酸钙、硫酸软骨素钠、胶原蛋白、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁分别过80目筛，备用；维生素D3过60目筛，备用；
(2)巴戟天的提取和浓缩
将巴戟天饮片置提取罐中，加10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，提取液滤过，得水提取液；将水提取液减压浓缩，得稠浸膏；
(3)姜黄的提取和浓缩
将姜黄饮片置提取罐中，加8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，药液滤过，得醇提取液；将醇提取液减压回收乙醇至无醇味，然后继续减压浓缩，得稠浸膏；
(4)干燥、粉碎
将巴戟天稠浸膏与姜黄稠浸膏混合均匀后减压干燥，得干浸膏；干浸膏粉碎过80目筛，得干浸膏粉，备用；
(5)配料、混合
将维生素D3与1/10的微晶纤维素等量递增混合后，与干浸膏粉、碳酸钙、氨基葡萄糖硫酸钾盐、硫酸软骨素钠、胶原蛋白、9/10的微晶纤维素混合30min，混合均匀，得混合粉；
(6)制粒、干燥、整粒
取混合粉加入纯化水制成软材，过18目筛制粒，得湿颗粒；将湿颗粒干燥，将干燥好的颗粒过筛整粒，得干颗粒，备用；
(7)总混、压片
称取交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁与上述干颗粒置总混设备中混合20min，将总混颗粒在压片机上进行压片；
(8)包衣
取薄膜包衣预混剂加50％乙醇搅拌溶解，使固含量在8％-10％之间；另取压好的素片置包衣锅包黄色薄膜衣，即得。
在一个实施方案中，所述增加骨密度的包衣片剂的制备方法包括以下步骤：
(1)原辅料前处理
将巴戟天、姜黄饮片净选除杂，备用；氨基葡萄糖硫酸钾盐粉碎过80目筛，备用；碳酸钙、硫酸软骨素钠、胶原蛋白、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁分别过80目筛，备用；维生素D3过60目筛，备用；
(2)巴戟天的提取和浓缩
将巴戟天饮片置提取罐中，加10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，提取液通过120目不锈钢筛网滤过，得水提取液；将水提取液在温度60-70℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压浓缩至60℃测得的相对密度为1.25-1.35，得稠浸膏；
(3)姜黄的提取和浓缩
将姜黄饮片置提取罐中，加8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，药液通过120目不锈钢筛网滤过，得醇提取液；将醇提取液在温度60-70℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压回收乙醇至无醇味，然后继续在温度60-70℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压浓缩至60℃测得的相对密度为1.25-1.35，得稠浸膏；
(4)干燥、粉碎
将巴戟天稠浸膏与姜黄稠浸膏混合均匀后在温度70-80℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压干燥，得干浸膏；干浸膏粉碎过80目筛，得干浸膏粉，备用；
(5)配料、混合
将维生素D3与1/10的微晶纤维素等量递增混合后，与干浸膏粉、碳酸钙、氨基葡萄糖硫酸钾盐、硫酸软骨素钠、胶原蛋白、9/10的微晶纤维素混合30min，混合均匀，得混合粉；
(6)制粒、干燥、整粒
取混合粉加入纯化水制成软材，过18目筛制粒，得湿颗粒；将湿颗粒在60～70℃干燥2-3h，颗粒水分控制在5-7％之间；将干燥好的颗粒过18目筛整粒，得干颗粒，备用；
(7)总混、压片
称取交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁与上述干颗粒置总混设备中混合20min，将总混颗粒在压片机上进行压片；
(8)包衣
取薄膜包衣预混剂加50％乙醇搅拌溶解，使固含量在8％-10％之间；另取压好的素片置包衣锅包黄色薄膜衣，即得。
第四方面，本申请提供所述增加骨密度的组合物在制备用于增加骨密度的保健品中的用途。
本申请的增加骨密度的组合物和包衣片剂具有以下有益效果：
1.含有直接补钙的成分——碳酸钙，以及有助于钙吸收的维生素D3和胶原蛋白，钙吸收率高；
2.含有补肾阳、强筋骨的中药成分——巴戟天的提取物，在补钙治标的同时固本，具有持久的增加骨密度的功效；
3.含有具有抗炎、止痛作用的姜黄提取物，可显著缓解关节疼痛、肿胀等症状；以及
4.含有氨基葡萄糖硫酸钾盐和硫酸软骨素钠，润滑关节并改善关节功能。
本申请的增加骨密度的组合物和包衣片剂中的各组分之间相互协同，钙吸收率高，能有效且持久地增加骨密度，缓解骨疼痛，恢复骨功能，可用于改善骨质疏松、骨疼痛以及骨关节功能丧失等病症。此外，本申请所述组合物的制备方法，工艺简单，操作方便，所制得的组合物质量可靠，适合工业化大生产。
具体实施方式
在下文中更详细地描述了本申请的制备实施例和效果试验例以有助于对本申请的理解。
制备例
本申请的一种增加骨密度的包衣片剂，其配方如下：
制成1000片，每片0.93g。
按照以下方法制备：
(1)原辅料前处理
将巴戟天、姜黄饮片净选除杂，备用；氨基葡萄糖硫酸钾盐粉碎过80目筛，备用；碳酸钙、硫酸软骨素钠、胶原蛋白、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁分别过80目筛，备用；维生素D3过60目筛，备用。
(2)巴戟天的提取和浓缩
将巴戟天饮片置提取罐中，加10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，提取液通过120目不锈钢筛网滤过，得水提取液。将水提取液在温度70℃，真空度-0.06Mpa下减压浓缩至在60℃测得的相对密度为1.25-1.35，得稠浸膏。
(3)姜黄的提取和浓缩
将姜黄饮片置提取罐中，加8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，药液通过120目不锈钢筛网滤过，得醇提取液。将醇提取液在温度60℃，真空度-0.08Mpa下减压回收乙醇至无醇味，然后继续在该温度和真空度下减压浓缩至在60℃测得的相对密度为1.25-1.35，得稠浸膏。
(4)干燥、粉碎
将巴戟天稠浸膏与姜黄稠浸膏混合均匀后在温度70℃、真空度-0.06Mpa下减压干燥，得干浸膏。干浸膏粉碎过80目筛，得干浸膏粉，其水分≤5％，备用。
(5)配料、混合
将维生素D3与1/10的微晶纤维素等量递增混合后，与干浸膏粉、碳酸钙、氨基葡萄糖硫酸钾盐、硫酸软骨素钠、胶原蛋白、9/10的微晶纤维素混合30min，混合均匀，得混合粉。
(6)制粒、干燥、整粒
取混合粉加入纯化水制成软材，过18目筛制粒，得湿颗粒；将湿颗粒在70℃干燥2h，颗粒水分控制在5-7％之间。将干燥好的颗粒过18目筛整粒，得干颗粒，备用。
(7)总混、压片
称取交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁与上述干颗粒置总混设备中混合20min，将总混颗粒在压片机上进行压片，片重0.902g。
(8)包衣
取薄膜包衣预混剂加50％乙醇搅拌溶解，使固含量为10％。另取压好的素片置包衣锅包黄色薄膜衣，即得。
效果例(一)：增加骨密度的试验
1.材料和方法
1.样品
上述制备例的包衣片剂(以下简称为“制备例的片剂”或“受试物”)，在去除包衣后使用。去除包衣后的粉料为黄棕色颗粒，试验时样品均采用纯水配制和稀释。
2.实验动物及饲养
SPF级雌性离乳SD大鼠，由四川省中医药科学院实验动物中心提供(许可证号：SCXK(川)2013-19)。动物饲养：动物在屏障级动物房内饲养(四川省实验动物管理委员会，许可证号SYXK(川)2013-011号)。整个实验过程中，动物自由摄食和饮用去离子水，室温20℃～24℃，相对湿度55％～68％。
3.饲料
低钙饲料，由四川省医学科学院四川省人民医院实验动物研究所养殖研究室提供。低钙饲料配方(克％)：酪蛋白10.0，黄豆粉15.0，小麦粉54.0，花生油4.0，纤维素2.0，AIN-76混合盐2.6，AIN-76混合维生素1.0，氯化胆碱0.2，DL-蛋氨酸0.2，淀粉11.0，加入CaCO3使饲料钙含量达到实测141.0mg/100g，作为低钙饲料。
4.主要仪器与试剂
原子吸收分光光度计、小动物全自动高分辨率X光机(Bruker In-Vivo DXS Pro)、烤箱、电子天平等。
5.实验方法
1.5.1动物分组及剂量设置
大鼠用基础饲料适应性饲喂后，根据体重，随机分为下列五组：低钙对照组，高剂量碳酸钙对照组、制备例的片剂三个剂量组：451mg/kg.bw组、902mg/kg.bw组和2706mg/kg.bw组(分别相当于人体摄入量90.2mg/kg.bw的5、10、30倍)，每组动物10-11只。五组动物均用低钙饲料饲喂。低钙对照组以纯水灌胃；三个剂量组以配制的样品液灌胃(灌胃液的配制：分别取制备例的片剂9.02g、18.04g、54.12g，加纯水定容至200mL，配制成451mg/kg.bw、902mg/kg.bw、2706mg/kg.bw组的灌胃液)；高剂量碳酸钙对照组经口灌入600mg/kg.bw的碳酸钙，该剂量相当于制备例的片剂高剂量组钙水平(制备例的片剂样品钙为200g碳酸钙/902g去包衣样品，高剂量组2706mg/kg.bw中，含钙为240mg/kg.bw，换算成碳酸钙：600mg/kg.bw。灌胃液的配制：取碳酸钙12g加纯水定容至200mL)。所有动物灌胃量均为10mL/kg.bw，每天一次，连续灌胃13周，每周称体重并按体重调整灌胃量。
1.5.2观察指标
1.5.2.1实验期间，第1-4周每周测量记录身长、体重一次。第5-13周每周称体重并按体重调整灌胃量。
1.5.2.2钙吸收试验：试验3周后将动物进行3天钙代谢试验。记录3天进食量，收集72小时粪便，鼠粪样品在80℃烘箱中烘干，置干燥器中冷却后磨细。原子吸收法测定饲料、粪便中钙含量。摄入钙(mg/d)＝饲料中钙含量(mg/g)×饲料消费量(g/d)，粪钙(mg/d)＝粪便中钙含量(mg/g)×粪便排出量(g/d)，钙的表观吸收率＝(摄入钙－粪钙)/摄入钙×100％。
1.5.2.3实验末CO2麻醉安乐死处死动物，取出双侧股骨：右侧股骨放置于105℃烘箱中，烤至恒重、称量骨重；采用原子吸收分光光度计法测定右股骨钙含量。大鼠左股骨样品采用小动物全自动高分辨率X光机测定骨密度(测定条件—exposure time:1min；binning:none；KVP:45；X-RAY Fliter:0.8mm；f-stop:2.51；FOV:120mm；Focal Plane:20mm)。
6.实验数据统计
使用PEMS3.1统计软件包，对受试物各剂量组与对照组间各指标的差异做方差分析，方差不齐则采用非参数检验的秩和检验。两组间比较进行方差齐性分析，方差齐采用t检验，方差不齐采用t’检验。
2.结果
a)对大鼠钙吸收的影响
钙吸收实验开始时，制备例的片剂三个剂量组和碳酸钙对照组的体重和身长与低钙对照组比较均无显著性差异(P>0.05)；试验结束时，受试物三个剂量组的体重与低钙对照组比较均显著性增加(P<0.05，P<0.01)，受试物低、高剂量组的身长与低钙对照组比较显著性增加(P<0.05，P<0.01)。试验结束时，受试物高剂量组体重较碳酸钙对照组显著性增加(P<0.01)。受试物高剂量组和碳酸钙对照组的钙表观吸收率与低钙对照组比较均显著性降低(P<0.01)；受试物低、中剂量组的钙表观吸收率与碳酸钙对照组比较均显著性增加(P<0.01)，故认为该样品钙吸收率较高。实验结果见表1。
表1制备例的片剂对大鼠实验期内钙吸收的影响
备注:与低钙对照组比较:*，P＜0.05；**，P＜0.01；与碳酸钙对照组比较：△△，P＜0.01。
b)对大鼠体重的影响
由表2可见，制备例的片剂三个剂量组和碳酸钙对照组的实验前体重与低钙对照组比较均无显著性差异(P>0.05)，三个剂量组的实验中、实验后体重与低钙对照组比较均显著性增加(P<0.01)，高剂量组的实验中和实验后体重与碳酸钙对照组比较均显著性增加(P<0.01)，这可能与样品中含有巴戟天、胶原蛋白等成分能促进生长发育有关。
表2制备例的片剂对大鼠体重的影响
备注：与低钙对照组比较：**，P＜0.01；与碳酸钙对照组比较：△△，P＜0.01。
c)对大鼠骨重、骨密度及骨钙的影响
由表3可见，受试物各剂量组和碳酸钙对照组的左股骨骨密度、右股骨骨重及骨钙含量与低钙对照组比较均显著性增加(P＜0.01)。受试物高剂量组的右股骨骨重、左股骨骨密度与碳酸钙对照组比较均显著性增加(P＜0.01)，右股骨骨钙含量与碳酸钙对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。
表3制备例的片剂对大鼠骨重、骨密度及骨钙含量的影响
备注：与低钙对照组比较：**，P＜0.01；与碳酸钙对照组比较：△△，P＜0.01。
上述钙吸收实验结果显示，试验结束时受试物三个剂量组的体重与低钙对照组比较均显著增加，受试物低、高剂量组的身长与低钙对照组比较显著增加，受试物高剂量组体重较碳酸钙对照组显著增加。受试物低、中剂量组的钙表观吸收率与碳酸钙对照组比较均显著增加。这表明，本申请的制备例的片剂的钙吸收率较高。
本申请的制备例的片剂三个剂量组的实验中、后体重与低钙对照组比较均显著增加，高剂量组的实验中和实验后体重均较碳酸钙对照组显著增加；受试物各剂量组合碳酸钙对照组的左股骨骨密度、右股骨骨重及骨钙含量与低钙对照组比较均显著增加，受试物高剂量组的右股骨骨重、左股骨骨密度与碳酸钙对照组比较均显著增加。这表明，本申请的制备例的片剂具有增加骨密度的功能。
效果例(二)：毒理学评价试验
1.材料和方法
1.1样品
上述制备例的包衣片剂(简称为“制备例的片剂”或“受试物”)，在去除包衣后使用。去除包衣后的粉料为黄棕色颗粒，试验时样品均采用纯水配制和稀释。
1.2实验动物及饲养
急性毒性试验用的SPF级SD大鼠由四川省医学科学院四川省人民医院实验动物研究所养殖研究室提供，许可证号为：SCXK(川)2013-15；其他试验用的SPF级SD大鼠和KM小鼠由四川省中医药科学院实验动物中心提供，许可证号为SCXK(川)2013-19。动物经适应性喂养后进行实验，整个试验过程中，动物饲养于屏障级动物房(许可证号：四川省实验动物管理委员会SYXK(川)2013-011)，大鼠30天喂养试验中饲料由四川省医学科学院四川省人民医院实验动物研究所养殖研究室提供，其余饲料由成都达硕生物科技有限公司提供。饮水为纯水，整个实验期间动物自由摄食和饮水，动物房温度20℃～24℃，相对湿度50％～69％。
1.3主要仪器与试剂
HR40-IIA2生物安全柜，恒温孵箱，OLYMPUS显微镜，Beckman Coulter(AU480)全自动生化分析仪，Medonic(M-series)全自动血液细胞分析仪等。2,4,7-三硝基-9-芴酮(TNF)为AccuStandard产品，辅酶II为Roche公司产品，叠氮化钠(NaN3)、1,8-二羟基蒽醌(Dan)和2-氨基芴(2-AF)均为Sigma Aldrich公司产品。丝裂霉素C由浙江海正药业股份有限公司生产，环磷酰胺(CP)由江苏盛迪医药有限公司生产。自制的雄性大鼠肝S9，经鉴定合格，液氮保存备用。
1.4试验方法
1.4.1急性毒性试验(MTD法)
SD大鼠(体重200g-220g)20只，雌雄各半。设15g/kg.bw一个剂量组。准确称取受试物90g，加纯水至240mL混悬，按2mL/100g.bw于动物空腹状态下分两次经口灌胃，时间间隔4h，灌胃后观察两周内死亡动物数及一般健康情况，根据最大耐受量判断受试物的急性毒性。
1.4.2遗传毒性试验
1.4.2.1
Ames试验：采用经鉴定符合要求的TA97、TA98、TA100和TA102菌株，进行加与不加大鼠肝S9的标准平皿掺入法试验(S9mix用量为0.5mL/皿)。设五个制备例的片剂剂量：8、40、200、1000和5000μg/皿(准确称取受试物1.0g于玻璃瓶中，加纯水至20mL，充分混匀后即为最高工作浓度50mg/mL，其余浓度用纯水5倍往下稀释获得，配制的受试物最高工作浓度液100μL加入平皿即为最高终浓度5000μg/皿，其余浓度加样量都为100μL。所有配制好的受试物采用0.103MPa 20min高压方式进行灭菌)，同时设自发对照、溶剂对照(灭菌纯水100μL/皿)和阳性对照。不加S9试验的阳性对照为0.2μg/皿的2,4,7-三硝基-9-芴酮(TA97、TA98)，1.5μg/皿的叠氮化钠(TA100)，0.5μg/皿的丝裂霉素C(TA102)；加S9试验的阳性对照为10μg/皿的2-氨基芴(TA97、TA98、TA100)和50μg/皿的1,8-二羟基蒽醌(TA102)。每个试验剂量作三个平行皿，重复试验一次。
1.4.2.2
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：昆明种小鼠(体重25g-30g)随机分为5组，每组10只，雌雄各半，设2.5、5.0和10.0g/kg.bw三个制备例的片剂试验组(各组分别称取2.5、5.0和10.0g受试物，各加纯水至20mL混悬)，另设阴性对照(纯水)、阳性对照(CP 40mg/kg.bw)组。动物分别于第0小时和第24小时按2mL/100g.bw经口灌胃，末次染毒后6小时处死动物，按程序制片。每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，观察含有微核的嗜多染红细胞数，计算微核率(‰)，同时观察200个红细胞PCE和成熟红细胞(NCE)所占数目，计算PCE/NCE比值。
1.4.2.3
小鼠精子畸形试验：昆明种雄性小鼠(体重25g-35g)随机分为5组，每组5只。设阴性对照组(纯水)、阳性对照组(CP 40mg/kg.bw)和2.5、5.0和10.0g/kg.bw三个制备例的片剂剂量组(各组分别称取2.5、5.0和10.0g受试物，各加纯水至20mL混悬)，按2mL/100g.bw经口灌胃，连续5天。于首次灌胃后第35天处死动物，取双侧附睾，按标准程序制片，每只动物观察1000个完整精子，记录各类畸形精子数。
1.4.3大鼠30天喂养试验
断乳SD大鼠按体重随机分为四组，每组20只，雌雄各半。试验设一个对照组(基础饲料)和2.706、6.314和9.02g/kg.bw三个受试物剂量组(分别相当于人体推荐去包衣摄入量的30、70和100倍)。采用拌饲的方式给予受试物，各剂量按体重的10％折算。饲料配制方法：分别称取405.9g、947.1g和1353g样品，并在三个剂量组分别添加酪蛋白101.5g、236.8g、338.3g以调整蛋白水平，各组掺入基础饲料至3kg，充分混匀后，再加12kg基础饲料混匀后配制成15kg饲料，加工成颗粒饲料辐照灭菌后喂饲动物。动物自由摄食，连续30天。每周称一次动物体重、两次给食量和剩食量，并计算摄食量，连续饲养30天后处死动物(处死动物前禁食16h)，进行血液学、血清生化学及组织病理学检查和脏器系数测定，分别按周增重及周摄食量计算周食物利用率(％)，同时计算总食物利用率(％)。
1.5实验数据统计
各实验组与对照组均数比较使用方差分析，若方差不齐采用秩和检验，精子畸形率的比较使用秩和检验，微核率的比较使用泊松分布法。所用软件为PEMS3.1《中国医学百科全书-医学统计学》统计软件包(第三版)。
2.结果
2.1急性毒性试验
制备例的片剂15g/kg.bw剂量经口染毒后，两周内未见动物死亡，亦无明显的中毒症状或不良反应，结果见表4。即本申请的制备例的片剂对雌、雄性SD大鼠的急性经口MTD大于15g/kg.bw，判属无毒级别。
表4制备例的片剂对SD大鼠的经口急性毒性试验结果
2.2遗传毒性试验
2.2.1 Ames试验：无论加与不加S9的试验，自发对照组的每皿平均回变菌落数均在正常值范围内，而阳性对照组诱发的每皿平均回变菌落数均为自发对照组二倍以上，呈明显阳性反应。制备例的片剂各剂量组和溶剂对照组的平均回变菌落数均未超过自发对照组的一倍，呈阴性反应，即本申请的制备例的片剂无诱导试验菌株回复突变的作用。结果见表5和表6。
表5制备例的片剂Ames试验结果(第一次)
表6制备例的片剂Ames试验结果(第二次)
表2.2制备例的片剂Ames试验结果(第二次)
2.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：受试物各剂量组PCE/NCE比值与阴性对照组的差异均在对照组的20％以内，经统计无显著性差异(P>0.05)，提示制备例的片剂对小鼠骨髓细胞增殖无不良影响。泊松分布法结果显示，阳性对照雌、雄动物的微核率均显著高于阴性对照组(P<0.01)，受试物各组的微核率与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05)，提示制备例的片剂在小鼠骨髓细胞微核试验中为阴性结果。结果见表7。
表7制备例的片剂对小鼠骨髓细胞微核发生率的影响
注：剂量“0”为阴性对照；与阴性对照比较**，P＜0.01。
2.2.3小鼠精子畸形试验：秩和检验结果显示，阳性对照组的精子畸形率显著高于阴性对照组(P＜0.01)，制备例的片剂各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)，提示制备例的片剂在小鼠精子畸形试验中为阴性结果。结果见表8。
表8制备例的片剂小鼠精子畸形试验结果
注：“0”为阴性对照；与阴性对照比较**，P＜0.01。
2.3大鼠30天喂养试验
对照组和3个剂量组动物在30天喂养期间，摄食、饮水、大小便正常，生长发育情况和一般表现良好，未观察到明显行为改变和中毒表现。2.3.1对体重和食物利用率的影响：各实验组在整个试验期间的体重和食物利用率结果见表9和10。由表可见，雄鼠高剂量组第一周体重增重显著低于对照组(P＜0.05)，其余受试物各剂量组的动物周体重、周摄食量、周增重、周食物利用率和总增重、总摄食、总食物利用率与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。表明该受试物对体重和食物利用率无不良影响。
表9制备例的片剂对大鼠体重的影响
注：“0”为对照；每组动物数均为10只。
表10制备例的片剂对大鼠食物利用率的影响
2.3.2脏器系数测定结果：表11显示，受试物各剂量组的重要脏器重量和脏器系数(脏器湿重/空腹体重×100)。由表可见，雄鼠高剂量组肝脏系数显著高于对照组(P<0.05)，其余受试物各剂量组的重要脏器重量和脏器系数与对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。
表11制备例的片剂对大鼠脏器重量(g)和系数(％)的影响
注：剂量“0”为对照；每组动物均为10只，与对照比较*，P＜0.05。
2.3.3末期血液学检验结果：表12显示试验末期的常规血液学指标(红细胞、血红蛋白、白细胞及分类)测定结果。从表可见，受试物各剂量组雌、雄鼠的测定指标与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。
表12制备例的片剂对大鼠血液学指标的影响
注：RBC为红细胞，Hb为血红蛋白，WBC为白细胞，GR％为中性粒细胞百分比，LY％为淋巴细胞百分比，MID％为中值细胞百分比；剂量“0”为对照。
2.3.4末期生化指标检验结果：表13显示试验末期的生化指标测定结果，从表可见，雌鼠低剂量组的尿素(UREA)显著低于对照组(P＜0.05)，但该变化在本室历史对照范围之内，无生物学意义。其余受试物各剂量组雌、雄鼠的肝功、肾功、血脂和血糖等生化指标与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。
表13制备例的片剂对大鼠血清生化指标的影响
注：ALT是谷丙转氨酶，AST为谷草转氨酶，TP为总蛋白，ALB为白蛋白，UREA为尿素，CREA为肌酐，GLU为血糖，CHO为总胆固醇，TG为甘油三酯；剂量“0”为对照；每组动物均为10只；与对照比较*，P＜0.05。
2.3.5组织学检查结果：试验结束时对实验动物进行大体检查。大体检查未发现明显病变，因此仅选高剂量组和对照组肝、肾、胃、空肠、脾脏、睾丸和卵巢作组织学检查。组织学检查结果见表14～20，仅发现个别受检动物进行性肾病早期，表现为皮质肾小球旁局灶嗜碱性肾小管，细胞拥挤，基底膜增厚，间质内淋巴细胞浸润；个别受检动物肾盂肾炎急性发作，表现为肾盂上皮细胞增生，上皮下中性粒细胞，淋巴细胞浸润，上皮表面大量中性粒细胞渗出；个别受检动物肝白细胞灶，表现为少量散发性局灶改变，位于门管区或肝小叶内，病灶由淋巴细胞为主的单个核细胞组成；个别受检动物进行性肾病早期，表现为皮质肾小球旁局灶嗜碱性肾小管，细胞拥挤，基底膜增厚；余未见异常。但高剂量组的病变例数与对照组比较无显著性差异，提示所出现的病变与受试物无关，应属动物的自发病变。综上所述，各剂量组动物脏器均未见由受试物引起的损害性改变。
表14制备例的片剂30天喂养试验肝脏组织学观察
*注：大体检查未发现明显病变，因此仅选高剂量组作组织学检查，以下同。
表15制备例的片剂30天喂养试验卵巢组织学观察
表16制备例的片剂30天喂养试验肾组织学观察
表17制备例的片剂30天喂养试验胃的组织学观察
表18制备例的片剂30天喂养试验睾丸组织学观察
表19制备例的片剂30天喂养试验空肠组织学观察
表20制备例的片剂30天喂养试验脾脏组织学观察
以上各项生物学指标的检查结果表明，在大鼠30天喂养试验中，最高剂量为人体推荐摄入量100倍，本申请的制备例的片剂未引起大鼠的整体健康状况、生理生化功能和器官组织形态学等各项重要指标的异常变化，据此初步估计本申请的制备例的片剂的最大未观察到有害作用剂量大于9.02g/kg.bw(人体推荐去包衣摄入量的100倍)。
综合以上毒理学试验结果，急性经口毒性试验结果表明，SD大鼠急性经口MTD大于15g/kg.bw，属于无毒级别；遗传毒性试验结果表明，Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验三项遗传毒性试验结果均为阴性；在大鼠30天喂养试验中，最高剂量为人体推荐摄入量100倍，在该剂量下，未引起大鼠的整体健康状况、生理生化功能和器官组织形态学等各项重要指标的异常变化。
对比效果例：
该对比效果例比较了本申请制备例所制备的包衣片剂(简称为“制备例的片剂”)与现有技术中的增加骨密度的片剂在增加骨密度方面的效果。
对比例1为中国发明专利CN102698254B中记载的增加骨密度的片剂。参照CN102698254B的实施例6(权利要求中最优选的配比)，由以下成分制成：碳酸钙18g、硫酸氨基葡萄糖15g、硫酸软骨素1.5g、胶原蛋白5g、姜黄提取物2.5g、糊精17.3g、玉米淀粉8.1g、硬脂酸镁0.4g、聚乙烯吡咯烷酮2.2g。参照该专利的实施例6的制备方法制成片剂。
对比例2为中国发明专利申请CN106173614A中记载的增加骨密度的片剂。参照CN106173614A的实施例2(权利要求中最优选的配比)，由以下成分制成：碳酸钙100g、氨基葡萄糖硫酸钾盐400g、硫酸软骨素10g、酪蛋白磷酸肽80g、杜仲提取物50g、姜黄提取物50g。参照该专利申请的实施例2的制备方法制成片剂。
对比例3为中国发明专利申请CN108065358A中记载的增加骨密度的大豆异黄酮组合物。参照CN108065358A的实施例2，由以下成分制成：巴戟天20份、大豆异黄酮15份、骨碎补5份、碳酸钙16份、胶原蛋白5份、乳矿物盐2份、杜仲0.2份、透明质酸钠0.03份、维生素D30.0002份。参照该专利申请的实施例2的制备方法制备成颗粒剂。
试验方法参见上述效果例(一)——增加骨密度的试验。各样品的剂量为2706mg/kg.bw。试验结果见表21。
表21制备例的片剂与现有技术的产品对大鼠骨重、骨密度及骨钙含量的影响
经统计学比较，本申请的制备例的片剂分别与对比例1-3比较，右股骨骨重的增加、左股骨骨密度以及右股骨骨钙含量均具有显著性差异(P<0.05)。说明本申请的制备例的片剂较其它同类产品有显著的增加骨密度的作用。
以上描述了本申请的优选实施方式，然而其并不构成对本申请的限制。本领域技术人员在不偏离本申请范畴和精神的情况下对本文公开的实施方案所进行的修改和变化落入本申请的范围之内。

Claims (9)

1.一种增加骨密度的组合物，其由以下重量份的原料制成：碳酸钙100-500份、氨基葡萄糖硫酸钾盐40-200份、硫酸软骨素钠20-150份、胶原蛋白20-150份、巴戟天100-1000份、姜黄100-1000份和维生素D3 0.1-1份；
优选，碳酸钙150-400份、氨基葡萄糖硫酸钾盐60-150份、硫酸软骨素钠40-100份、胶原蛋白40-100份、巴戟天200-800份、姜黄200-800份和维生素D3 0.2-0.8份；
更优选，碳酸钙180-300份、氨基葡萄糖硫酸钾盐70-100份、硫酸软骨素钠50-80份、胶原蛋白50-80份、巴戟天400-600份、姜黄400-600份和维生素D3 0.3-0.7份；
还更优选，碳酸钙200份、氨基葡萄糖硫酸钾盐80份、硫酸软骨素钠55份、胶原蛋白55份、巴戟天500份、姜黄500份和维生素D3 0.4份。
2.根据权利要求1的组合物，其与以下重量份的辅料制成包衣片剂：微晶纤维素100-500份、交联羧甲基纤维素钠20-150份、硬脂酸镁1-10份和薄膜包衣预混剂10-50份；
优选，微晶纤维素200-400份、交联羧甲基纤维素钠30-100份、硬脂酸镁2-8份和薄膜包衣预混剂20-40份；
更优选，微晶纤维素222.6份、交联羧甲基纤维素钠50份、硬脂酸镁4份和薄膜包衣预混剂28份。
3.根据权利要求1或2的组合物，其中巴戟天通过以下方法制成提取物：
将巴戟天饮片置提取罐中，加10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，提取液滤过，得水提取液；将水提取液减压浓缩，得稠浸膏；减压干燥，得干浸膏。
4.根据权利要求1或2的组合物，其中姜黄通过以下方法制成提取物：将姜黄饮片置提取罐中，加8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，药液滤过，得醇提取液；将醇提取液减压回收乙醇至无醇味，然后继续减压浓缩，得稠浸膏；减压干燥，得干浸膏。
5.根据权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述组合物为薄膜包衣片剂。
6.根据权利要求2-5中任一项的组合物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)原辅料前处理
将巴戟天、姜黄饮片净选除杂，备用；氨基葡萄糖硫酸钾盐粉碎过80目筛，备用；碳酸钙、硫酸软骨素钠、胶原蛋白、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁分别过80目筛，备用；维生素D3过60目筛，备用；
(2)巴戟天的提取和浓缩
将巴戟天饮片置提取罐中，加10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，提取液滤过，得水提取液；将水提取液减压浓缩，得稠浸膏；
(3)姜黄的提取和浓缩
将姜黄饮片置提取罐中，加8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，药液滤过，得醇提取液；将醇提取液减压回收乙醇至无醇味，然后继续减压浓缩，得稠浸膏；
(4)干燥、粉碎
将巴戟天稠浸膏与姜黄稠浸膏混合均匀后减压干燥，得干浸膏；干浸膏粉碎过80目筛，得干浸膏粉，备用；
(5)配料、混合
将维生素D3与1/10的微晶纤维素等量递增混合后，与干浸膏粉、碳酸钙、氨基葡萄糖硫酸钾盐、硫酸软骨素钠、胶原蛋白、9/10的微晶纤维素混合30min，混合均匀，得混合粉；
(6)制粒、干燥、整粒
取混合粉加入纯化水制成软材，过18目筛制粒，得湿颗粒；将湿颗粒干燥，将干燥好的颗粒过筛整粒，得干颗粒，备用；
(7)总混、压片
称取交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁与上述干颗粒置总混设备中混合20min，将总混颗粒在压片机上进行压片；
(8)包衣
取薄膜包衣预混剂加50％乙醇搅拌溶解，使固含量在8％-10％之间；另取压好的素片置包衣锅包黄色薄膜衣，即得。
7.根据权利要求6的方法，其中步骤(2)巴戟天的提取和浓缩如下：
将巴戟天饮片置提取罐中，加10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，提取液通过120目不锈钢筛网滤过，得水提取液；将水提取液在温度60-70℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压浓缩至60℃测得的相对密度为1.25-1.35，得稠浸膏。
8.根据权利要求6的方法，其中步骤(3)姜黄的提取和浓缩如下：
将姜黄饮片置提取罐中，加8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，药液通过120目不锈钢筛网滤过，得醇提取液；将醇提取液在温度60-70℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压回收乙醇至无醇味，然后继续在温度60-70℃、真空度-0.06～-0.08Mpa下减压浓缩至60℃测得的相对密度为1.25-1.35，得稠浸膏。
9.根据权利要求1-5中任一项的组合物或者根据权利要求6-8中任一项的方法制备的组合物在用于制备增加骨密度的保健品中的用途。
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