CN109239249B - 一种醒脑静注射液气相指纹图谱的测定方法及其标准气相指纹图谱 - Google Patents

一种醒脑静注射液气相指纹图谱的测定方法及其标准气相指纹图谱 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种醒脑静注射液气相指纹图谱的测定方法及其标准指纹图谱，其中所述测定方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取醒脑静注射液，倾出内容物，混匀，精密吸取适量，通过C8固定相萃取小柱，弃去，加无水乙醇洗脱并定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液，(2)获得气相色谱图：将供试品溶液注入气相色谱仪，测定，并记录色图谱。(3)将所得色谱图和标准指纹图谱对照，相似度大于0.75为合格品，相似度评价采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价。

Description

一种醒脑静注射液气相指纹图谱的测定方法及其标准气相指 纹图谱
技术领域
本发明涉及中药注射剂气相指纹图谱分析方法，具体涉及醒脑静注射液制气相指纹图谱测定方法，及其所得到的醒脑静注射液气相指纹图谱。
技术背景
由于中药化学成分复杂，作用机制不明确，致使现有中药制药技术难以确保中药产品质量稳定性，中药指纹图谱建立的可以全面反映中药内在化学成分的种类与数量，进而反映中药的质量。现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确，采用中药指纹图谱的方式，将有效地表征中药质量。指纹图谱已为国际社会所认可，有利于中药及产品进入国际市场。
醒脑静注射液是一种新型中药复方制剂，由传统中药“安宫牛黄色丸”提炼而成，其主要成分有麝香、冰片和郁金等，具有醒脑开窍、清热解毒等功效。现代研究表明其具有较强的兴奋中枢神经细胞的作用，起效迅速。该品种现行标准是国家食品药品监督管理局国家药品标准WS3-B-3353-98-2003[4]，标准中仅规定醒脑静注射液中龙脑含量不得低于0.7g/l，而未涉及指纹图谱的内容。
现已发表的醒脑静注射液质量控制文献报道，多是通过气相色谱法、气质联用色谱法、高效液相色谱法和紫外分光光度法对醒脑静注射液中主要成分进行测定，如测定麝香的麝香酮，冰片中天然冰片、樟脑，郁金中的吉马酮、莪术二酮、莪术酮等。还有对醒脑静注射剂中麝香、郁金、冰片、栀子四种药材进行指纹图谱的测定法研究。
为全面了解醒脑静注射液的化学成分信息并提升其质量控制水平，本发明提供一种醒脑静注射液气相指纹图谱的检测方法。
该检测方法不仅可以对该制剂中的挥发性成分进行鉴别优劣，同时，可以初步的定量，满足质量控制的需求。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种醒脑静注射液制剂的气相指纹图谱测定方法及其特征气相指纹图谱。
本发明通过对醒脑静注射液气相指纹图谱的研究，提供了一种快速评价该制剂中挥发性成分质量的方法，弥补了现有质量控制技术的不足的缺点，使醒脑静注射液制剂质量控制技术更为完善，也更为科学。
为此，本发明提供一种醒脑静注射液气相色谱标准指纹图谱的建立以及使用该气相指纹图谱对生产和销售中的醒脑静注射液进行测定的方法。
本发明的方法步骤如下：
(1)供试品溶液的制备：取醒脑静注射液，倾出内容物，混匀，精密吸取适量，通过C8固定相萃取小柱，弃去，加无水乙醇洗脱并定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
(2)获得气相色谱图：将供试品溶液注入气相色谱仪，测定，并记录色图谱。
(3)将所得色谱图和标准指纹图谱对照，相似度大于0.75为合格品，相似度评价采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价。
其中，所述气相色谱的色谱条件如下：
5％苯基-95％甲基聚硅氧烷为固定性的毛细管柱；载气为高纯氮气；柱流速1ml/min；进样口温度200～300℃；检测器FID，温度200～300℃；分流进样，分流比：1:1～5:1；进样量：0.5～1μl；升温程序见下表；
升温程序表
Figure BDA0001814142430000021
优选的，其中，供试品制备方法如下：取醒脑静注射液成品适量，倾出内容物，混匀，精密吸取10～100ml,通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml,C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，用5～10ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5～10ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
优选的，其中，气相色谱系统条件如下：5％苯基-95％甲基聚硅氧烷为固定性的毛细管柱；气相毛细管柱的型号为HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm,0.25 μm，柱温为程序升温：初始温度为80℃，保持2分钟，继以每分钟6℃的速率升温至152℃，保持2分钟，继以每分钟3℃的速率升温至240℃，保持8分钟；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃。
本发明进一步提供一种标准指纹图谱建立方法，其特征在于，步骤如下：
取多批次合格的醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml,C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20 ml预洗)，弃去，用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
莪术二酮对照品溶液的配制：取莪术二酮对照品适量，精密称定，置于容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至刻度，作为对照品溶液，所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml；
将供试品溶液注入气相色谱仪，测定，并记录色图谱，根据所得到的多批合格产品的色谱图，用指纹图谱软件归一成一个醒脑静注射液标准指纹图谱，
其中，气相色谱系统条件如下：5％苯基-95％甲基聚硅氧烷为固定性的毛细管柱；气相毛细管柱的型号为HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm,0.25μm，柱温为程序升温：初始温度为80℃，保持2分钟，继以每分钟6℃的速率升温至 152℃，保持2分钟，继以每分钟3℃的速率升温至240℃，保持8分钟；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量 1μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃。
其中程序升温表为：
Figure BDA0001814142430000031
所得标准指纹图谱有14个共有峰，色谱图中，以与莪术二酮对照品峰保留时间相同的色谱峰为参照，计算其它13个共有峰的相对保留时间分别为其相对偏差均为0.3991、0.4217、0.4645、0.6166、0.7293、0.7922、0.9625、0.9734、 1.000、1.1511、1.1613、1.2957、1.5121、1.7913，其相对标准偏差均为±3％。
所述多批次，至少为10批次，优选20批次，30批次，50批次。
本发明通过以上指纹图谱的建立，进一步的确立了醒脑静注射液的分析方法，采用该方法可以准确辨别醒脑静注射液，根据和标准指纹图谱的比较，得出鉴别结论，越和标准指纹图谱接近，产品质量越好，相似度可以使用计算机方法确认，如相似度为0.75 以上为合格，相似度为0.95以上为相符，相似度为0.98以上为相同。
本发明的技术方案是经过筛选获得的，筛选过程如下：
1.仪器与试剂
1.1仪器
十万分之一电子天平(METTLER TOLEDO)、安捷伦7890A气相色谱仪、毛细管柱：HP-5MS UI(30m×0.32mm，0.25μm)
1.2试剂
正己烷(AR，国药)无水乙醇(HPLC，默克)
1.3对照品
莪术二酮(中国药品生物制品检定所，111800-201302)
1.4样品
醒脑静注射液(无锡济民可信山禾药业股份有限公司)
2.气相色谱系统条件的选择：
2.1气相色谱柱的选择
参照相关文献，选取5％苯基-95％甲基聚硅氧烷为固定性的毛细管柱，所用气相毛细管柱的型号为HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm。
2.2程序升温条件的选择
对程序升温条件进行考察调整，在保证出峰完全的情况下，尽可能缩短分析时长。最终确定升温程序条件，程序升温表见下表。
Figure BDA0001814142430000041
3气相色谱条件的确定
综上分析，最终确定醒脑静注射液气相指纹图谱色谱条件如下：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000051
4供试品处理方法的选择
4.1提取方式的选择
4.1.1平行称取本品2份，各50ml，置圆底烧瓶中，加入水300ml，按照挥发油测定法(附录XD)试验，自测定器上端加水使充满刻度部分并溢出流入烧瓶时为止，加正己烷3ml，连续回流冷凝管，加热至沸，保持微沸6h，放冷，将测定器中的正己烷层移至25ml容量瓶中，冷凝管、挥发油测定器内壁及水层再用正己烷多次洗涤并移至容量瓶中，环己烷定容即得样品溶液。过滤，取续滤液，即得。
4.1.2平行取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，用25ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置25ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
4.1.3取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，精密吸取50ml，加乙正己烷萃取5次，每次5ml,合并正己烷层，并定容置25ml容量瓶中，摇匀，即得。
结果分析，萃取法制得的样品乳化比较严重，无法进样，固相小柱萃取法同挥发油测定法所得样品，见附图1一2，由图可以看出，两个不同提取方式所得样品的气相指纹图谱信息相差不大，但考虑到供试品操作的简便性，选择4.1.2项下的提取方式。
4.2提取溶剂用量的选择
4.2.1取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8 固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
4.2.2取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8 固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用10ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置10ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
4.2.3取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8 固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用25ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置25ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
4.2.4取醒脑静注射液成品15只，倾出内容物，混匀，各精密吸取100ml，通过 C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
结果分析，随着进样浓度的升高，色谱峰逐渐变大，郁金挥发油类成分众多，峰面积比较小，选取进样浓度大的进行，但100ml醒脑静过C8固相小柱时由于量比较多，导致载样量过载，导致过滤时间较长，结果见附图3-6。考虑到气相指纹图谱信息的整体性及供试品操作的简便性，选择4.2.5项下的提取溶剂用量。
5.供试品处理方法的确定
取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作即得。
6.醒脑静注射液指纹图谱试验的方法学验证
6.2精密度试验
取同一份供试品溶液，连续重复进样6针，考察精密度。结果表明，共有峰相对保留时间RSD均小于0.03％，相对峰面积RSD均不大于3％，重复进样6针间的相似度均为1.000，精密度良好。表1、表2为精密度考察结果。
表1精密度试验结果(相对保留时间)
Figure BDA0001814142430000061
Figure BDA0001814142430000071
表2精密度试验结果(相对峰面积)
Figure BDA0001814142430000072
Figure BDA0001814142430000081
5.3重复性
称取同一批供试品6份，按照供试品溶液制备方法，平行操作，考察重复性。结果表明，共有峰相对保留时间RSD均小于0.1％，相对峰面积RSD均不大于3.57％，6 份样品间的相似度均为1.000，重复性良好。表3、表4为重复性考察结果。
表3重复性试验结果(相对保留时间)
Figure BDA0001814142430000082
表4重复性试验结果(相对峰面积)
Figure BDA0001814142430000083
Figure BDA0001814142430000091
5.4稳定性考察
取同一供试品溶液，分别于0h,2h,4h,6h,8h,10h注入液相色谱仪。结果表明，共有峰相对保留时间RSD均小于0.04％，相对峰面积RSD均小于3.60％，相似度为1.000，供试品溶液在10h内稳定。表5、表6为重复性考察结果。
表5稳定性试验结果(相对保留时间)
Figure BDA0001814142430000092
Figure BDA0001814142430000101
表6稳定性试验结果(相对峰面积)
Figure BDA0001814142430000102
6.气相指纹图谱方法分析
按以上确定的醒脑静注射液供试品处理方法及色谱条件，随机选取10批醒脑静注射液按“5”项下操作，采用“3”项下色谱条件下进行测定，进行分析。
6.1对照气相指纹图谱的建立
选取醒脑静注射液10批，按“5”项下操作,采用“3”项下色谱条件下进行测定，根据10批醒脑静注射液供试品气相图谱所给出的相关参数，醒脑静注射液测定所得的主要色谱峰均在52分钟内出现。比较醒脑静注射液10批样品的色谱图及空白溶剂色谱图，发现有14个色谱峰是各批共有的，见图8。
另将10批样品中14个共有峰的相对保留时间进行分析，以莪术二酮(9)为参照峰，计算其它13个共有峰的相对保留时间，则11批样品的共有峰平均相对保留时间(峰号)依次为0.3990(1)、0.4214(2)、0.4644(3)、0.6163(4)、0.7294(5)、 0.7923(6)、0.9626(7)、0.9737(8)、1.0000(9)、1.1511(10)、1.1612 (11)、1.2959(12)、1.5124(13)、1.7918(14)其相对偏差均在±3％以内。见表7。
表7 11批样品相对保留时间数据表
Figure BDA0001814142430000111
6.2对照气相指纹图谱的拟合
以上述批样品的指纹图谱中14个峰为共有峰，利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统版，拟合确定醒脑静注射液对照气相指纹图谱，见图9。
6.3指纹图谱的标准限定
根据以上考察结果,确定醒脑静注射液的气相指纹图谱相似度在以上即为合格。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1、本发明通过尝试多种色谱条件及供试品处理方法，最终确定了程序升温法对醒脑静注射液进行气相指纹图谱分析的色谱条件，考察确定了14个共有峰的对照气相指纹图谱，方法简便、快速、重复性好，经方法学验证满足相关要求。
2、应用本发明建立的一种醒脑静注射液的气相指纹图谱分析方法，对批样品进行了气相指纹图谱分析，结果与对照指纹图谱进行比对计算相似度均在0.90以上，表明本发明建立的该方法适用于产品的质量控制要求。
3、本发明建立的一种醒脑静注射液的气相指纹图谱分析方法适用性强,能够更全面反映产品的质量状况。
4、与现有技术相比，本发明建立的醒脑静注射液标准指纹图谱，方法简便、快速、重复性好，既适用于醒脑静注射液成品，又可以对醒脑静中间产品进行质量控制，实现一个方法多种用途，从而全面了解醒脑静注射液的化学成分信息并提升其质量控制水平。
5、该方法可快速、准确地鉴别产品的真伪优劣。
下面结合实施例和附图对本发明做进一步的说明。
附图说明
图1供试品提取方式1色谱图
图2供试品提取方式2色谱图
图3供试品提取溶剂用量1色谱图
图4供试品提取溶剂用量2色谱图
图5供试品提取溶剂用量3色谱图
图6供试品提取溶剂用量4色谱图
图7莪术二酮色谱图
图8 10批样品共有峰比较图
图9 10批样品共有峰局部放大比较图
图10拟合对照指纹图谱
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步地说明，以便对本发明作更详细的了解。
实施例1醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180205
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000131
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例2醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180206
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000132
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例3醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180207
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000141
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例4醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180208
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000142
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例5醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180209
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000151
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例6醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180304
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000161
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例7醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180305
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000162
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例8醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180306
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000171
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例9醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180307
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000172
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例10醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180308
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000181
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例11醒脑静注射液气相指纹图谱测定
取醒脑静注射液，批号为180309
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000191
在此条件下分析供试品溶液，得到醒脑静注射液的指纹图谱。
实施例12标准醒脑静注射液对照气相指纹图谱的制备
步骤(1)供试品溶液制备方法为：取醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，各精密吸取50ml，通过C8固定相萃取小柱(100mg/l ml，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗)，弃去，分别用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
步骤(2)对照品溶液制备浓度分别为：所述莪术二酮对照品浓度为48.3μg/ml。
步骤(3)将供试品溶液，对照品溶液注入色谱仪，得到色谱图。
气相色谱系统条件：
色谱仪：Agilent 7890A；色谱柱HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm，0.25μm；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1 μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃；升温程序表见下表：
Figure BDA0001814142430000192
对11批醒脑静注射液的气相指纹图谱进行分析比较，确定14个共有峰，色谱图中，，以莪术二酮(9)为参照峰，计算其它13个共有峰的相对保留时间，则11批样品的共有峰平均相对保留时间(峰号)依次为0.3990(1)、0.4214(2)、0.4644(3)、0.6163 (4)、0.7294(5)、0.7923(6)、0.9626(7)、0.9737(8)、1.0000(9)、 1.1511(10)、1.1612(11)、1.2959(12)、1.5124(13)、1.7918(14)其相对偏差均在±3％以内。

Claims (4)

1.一种醒脑静注射液气相指纹图谱测定方法，其特征在于，步骤如下：
(1)供试品溶液的制备：取醒脑静注射液，倾出内容物，混匀，精密吸取适量，通过分别用无水乙醇和水预洗的C8固定相萃取小柱，弃去，加无水乙醇洗脱并定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
(2)获得气相色谱图：将供试品溶液注入气相色谱仪，测定，并记录色图谱；
(3)将所得色谱图和标准指纹图谱对照，相似度大于0.75为合格品，相似度评价采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价；
其中，所述气相色谱的色谱条件如下：
5％苯基-95％甲基聚硅氧烷为固定性的毛细管柱；气相毛细管柱的型号为HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm,0.25μm，柱温为程序升温：初始温度为80℃，保持2分钟，继以每分钟6℃的速率升温至152℃，保持2分钟，继以每分钟3℃的速率升温至240℃，保持6分钟；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃。
2.根据权利要求1所述的气相指纹图谱测定方法，其特征在于：
其中，供试品制备方法如下：取醒脑静注射液成品适量，倾出内容物，混匀，精密吸取10～100ml,通过100mg/lml、先分别用20ml无水乙醇和20ml水预洗的C8固定相萃取小柱，弃去，用5～10ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5～10ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3.一种醒脑静注射液标准指纹图谱建立方法，其特征在于，步骤如下：
取多批次合格的醒脑静注射液成品8只，倾出内容物，混匀，精密吸取50ml，通过100mg/lml的C8固定相萃取小柱,其中，C8小柱先分别用20ml无水乙醇和水20ml预洗，弃去，用5ml无水乙醇洗脱，收集洗脱液，置5ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
莪术二酮对照品溶液的配制：取莪术二酮对照品适量，精密称定，置于容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至刻度，作为对照品溶液，所述莪术二酮对照品溶液浓度为48.3μg/ml；
将对照品溶液、供试品溶液注入气相色谱仪，测定，并记录色图谱，根据所得到的多批合格产品的色谱图，用指纹图谱软件归一成一个醒脑静注射液标准指纹图谱，
其中，气相色谱系统条件如下：5％苯基-95％甲基聚硅氧烷为固定性的毛细管柱；气相毛细管柱的型号为HP-5MS UI，规格为30m×0.32mm,0.25μm，柱温为程序升温：初始温度为80℃，保持2分钟，继以每分钟6℃的速率升温至152℃，保持2分钟，继以每分钟3℃的速率升温至240℃，保持6分钟；载气为高纯氮气，柱流速1ml/min；检测器FID；分流进样，分流比：5:1，进样量1μl；气相色谱进样口温度为250℃，检测器温度为270℃。
4.根据权利要求3所述的建立方法，其特征在于：
所述标准指纹图谱有14个共有峰，色谱图中，以与莪术二酮对照品峰保留时间相同的色谱峰为参照，计算其它13个共有峰的相对保留时间分别为0.3991、0.4217、0.4645、0.6166、0.7293、0.7922、0.9625、0.9734、1.1511、1.1613、1.2957、1.5121、1.7913，其相对标准偏差均为±3％。
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