CN110927311A - 一种罗布麻叶药材uplc特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法 - Google Patents
一种罗布麻叶药材uplc特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110927311A CN110927311A CN201911222654.8A CN201911222654A CN110927311A CN 110927311 A CN110927311 A CN 110927311A CN 201911222654 A CN201911222654 A CN 201911222654A CN 110927311 A CN110927311 A CN 110927311A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medicinal material
- mobile phase
- changed
- volume fraction
- leaf medicinal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 101
- 241000722949 Apocynum Species 0.000 title claims abstract description 72
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 title claims abstract description 17
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 title claims abstract description 17
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 title claims abstract description 17
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims abstract description 49
- FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N Hyperosid Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC=C(O)C(O)=C1 FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 241000185686 Apocynum venetum Species 0.000 claims abstract description 31
- OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N Hyperin Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N 0.000 claims abstract description 19
- OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N quercetin 3-O-beta-D-galactopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N 0.000 claims abstract description 19
- BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N quercetin-7-o-galactoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- OVSQVDMCBVZWGM-IDRAQACASA-N Hirsutrin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)C1=C(c2cc(O)c(O)cc2)Oc2c(c(O)cc(O)c2)C1=O OVSQVDMCBVZWGM-IDRAQACASA-N 0.000 claims abstract description 18
- GXMWXESSGGEWEM-UHFFFAOYSA-N isoquercitrin Natural products OCC(O)C1OC(OC2C(Oc3cc(O)cc(O)c3C2=O)c4ccc(O)c(O)c4)C(O)C1O GXMWXESSGGEWEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- OVSQVDMCBVZWGM-QSOFNFLRSA-N quercetin 3-O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-QSOFNFLRSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 111
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 25
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 21
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 19
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 17
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 15
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 13
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 13
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 10
- NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N hyperoside Natural products OC[C@H]1O[C@@H](OC2=C(Oc3cc(O)cc(O)c3[C@H]2O)c4ccc(O)c(O)c4)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 7
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 6
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 abstract description 2
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 abstract description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 abstract description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 9
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 4
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 description 3
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 description 3
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 description 3
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 description 3
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GYFFKZTYYAFCTR-JUHZACGLSA-N 4-O-trans-caffeoylquinic acid Chemical compound O[C@@H]1C[C@](O)(C(O)=O)C[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 GYFFKZTYYAFCTR-JUHZACGLSA-N 0.000 description 2
- GYFFKZTYYAFCTR-UHFFFAOYSA-N 5-O-(6'-O-galloyl)-beta-D-glucopyranosylgentisic acid Natural products OC1CC(O)(C(O)=O)CC(O)C1OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 GYFFKZTYYAFCTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- GYFFKZTYYAFCTR-LMRQPLJMSA-N cryptochlorogenic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)C(=O)O GYFFKZTYYAFCTR-LMRQPLJMSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 description 2
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 2
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 2
- 241000208327 Apocynaceae Species 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010030302 Oliguria Diseases 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- -1 fatty acid alcohol ester Chemical class 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 208000018997 giddiness Diseases 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002366 mineral element Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- GWTUHAXUUFROTF-UHFFFAOYSA-N pseudochlorogenic acid Natural products C1C(O)C(O)C(O)CC1(C(O)=O)OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 GWTUHAXUUFROTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000002936 tranquilizing effect Effects 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N trans-5-O-caffeoyl-D-quinic acid Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)C[C@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8686—Fingerprinting, e.g. without prior knowledge of the sample components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
- G01N2030/047—Standards external
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/884—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample organic compounds
Landscapes
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及一种罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法及黄酮类成分含量测定，所述的罗布麻叶药材UPLC特征图谱的建立方法包含如下步骤：（1）精密称取罗布麻叶药材粉末，制备得到罗布麻叶药材供试品溶液；（2）将罗布麻叶药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到罗布麻叶药材UPLC特征图谱。本发明建立了罗布麻叶药材UPLC特征图谱，通过对照品峰指认确定了7个共有峰成分，充分展示了罗布麻叶药材的化学成分特征；本发明测定了罗布麻叶药材的金丝桃苷和异槲皮苷含量，进行了快速定性及定量分析。该方法为罗布麻药材的质量评价和控制提供了较为全面、系统、有效的快速评价方法。
Description
技术领域
本发明涉及中药材检测技术领域，具体公开了一种罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法。
背景技术
罗布麻叶为夹竹桃科植物罗布麻Apocynum venetum L.的干燥叶。夏季采收，除去杂质，干燥。具有平肝安神，清热利水的功效，可用于治疗肝阳眩晕、心悸失眠、浮肿尿少。罗布麻叶中主要含黄酮类、鞣质、酸类、脂肪酸醇酯、醇类、甾体类、糖类、氨基酸类、矿物质元素、挥发油等化学成分。其中黄酮类为罗布麻叶的主要活性成分，具有降血压、降血脂、保肝、抗抑郁、抗氧化等功效，具有较高的开发利用价值。
《中国药典》2015版一部仅收载了罗布麻叶金丝桃苷的含量测定，难以全面反映其内在质量。由于中药的成分复杂，有效成分又多随产地、来源、采收季节等情况变化而变化，因此，采用特征图谱技术全面反映药材的整体特征，并进一步与其活性相关联，对于完善目前的质量控制方法，保证临床用药的安全有效是十分必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法，该方法采用UPLC法建立罗布麻叶药材的特征图谱，其同时测定其黄酮类成分含量，以有效控制罗布麻叶药材的整体质量，保证产品的有效性和安全性。
本发明所要解决的上述技术问题，通过如下技术方案予以实现：
一种罗布麻叶药材的UPLC特征图谱的构建方法，其包含如下步骤：
（1）精密称取罗布麻叶药材粉末，制备得到罗布麻叶药材供试品溶液；
（2）将罗布麻叶药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到罗布麻叶药材UPLC特征图谱。
作为一种优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05~0.15％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为320~400nm，流速为0.25~0.35ml/min，柱温为30~40℃，进样量为0.5~1.5ul。
作为一种最优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为360nm，流速为0.3ml/min，柱温为35℃，进样量为1ul。
作为一种优选方案，梯度洗脱条件为：0~7min，流动相A的体积分数变化为6%~12%，流动相B的体积分数变化为94%~88%；7~11min，流动相A的体积分数变化为12%~13%，流动相B的体积分数变化为88%~87%；11~17min，流动相A的体积分数变化为13%~15%，流动相B的体积分数变化为87%~85%；17~20min，流动相A的体积分数变化为15%~19%，流动相B的体积分数变化为85%~81%；20~25min，流动相A的体积分数变化为19%~30%，流动相B的体积分数变化为81%~70%；25~28min，流动相A的体积分数变化为30~60%，流动相B的体积分数变化为70%~40%；28~33min，流动相A的体积分数变化为60%~75%，流动相B的体积分数变化为40%~25%。
作为一种优选方案，所述的供试品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入50%~90%甲醇25~100ml，称定重量，加热回流60~120分钟，放冷，再称定重量，用50%~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
作为一种最优选方案，所述的供试品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
本发明还提供了一种罗布麻叶药材中黄酮类成分含量测定方法，包括如下步骤：
（1）吸取对照品溶液和待测罗布麻叶药材样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定相应峰面积；
（2）通过外标法计算，即得。
作为一种优选方案，所述黄酮类成分为金丝桃苷、异槲皮苷。
作为一种优选方案，所述对照品溶液通过如下方法制备得到：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷80~120μg和异槲皮苷90~130μg的混合溶液，摇匀，即得。
作为一种最优选方案，所述对照品溶液通过如下方法制备得到：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷100.6889μg和异槲皮苷107.3574μg的混合溶液，摇匀，即得。
作为一种优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05~0.15％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为320~400nm，流速为0.25~0.35ml/min，柱温为30~40℃，进样量为0.5~1.5ul。
作为一种最优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为360nm，流速为0.3ml/min，柱温为35℃，进样量为1ul。
作为一种优选方案，梯度洗脱条件为：0~7min，流动相A的体积分数变化为6%~12%，流动相B的体积分数变化为94%~88%；7~11min，流动相A的体积分数变化为12%~13%，流动相B的体积分数变化为88%~87%；11~17min，流动相A的体积分数变化为13%~15%，流动相B的体积分数变化为87%~85%；17~20min，流动相A的体积分数变化为15%~19%，流动相B的体积分数变化为85%~81%；20~25min，流动相A的体积分数变化为19%~30%，流动相B的体积分数变化为81%~70%；25~28min，流动相A的体积分数变化为30~60%，流动相B的体积分数变化为70%~40%；28~33min，流动相A的体积分数变化为60%~75%，流动相B的体积分数变化为40%~25%。
作为一种优选方案，所述的待测罗布麻叶药材样品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入50%~90%甲醇25~100ml，称定重量，加热回流60~120分钟，放冷，再称定重量，用50%~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
作为一种最优选方案，所述的待测罗布麻叶药材样品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
有益效果：（1）本发明建立了罗布麻叶药材UPLC特征图谱，通过对照品峰指认确定了7个共有峰成分，充分展示了罗布麻叶药材的化学成分特征；（2）本发明测定了罗布麻叶药材的金丝桃苷和异槲皮苷含量，进行了快速定性及定量分析。该方法为罗布麻药材的质量评价和控制提供了较为全面、系统、有效的快速评价方法；（3）本发明构建的特征图谱全面的反应样品的特征峰信息，且方法稳定，精密度高，重现性较好。
附图说明
图1为洗脱条件1下的特征图谱。
图2为洗脱条件2下的特征图谱。
图3为16批罗布麻叶药材UPLC图谱叠加图。
图4为罗布麻叶药材UPLC特征图谱。
图5为罗布麻叶药材色谱峰指认的特征图谱。
图中标记：峰1：新绿原酸；峰2：绿原酸；峰3：隐绿原酸；峰4（S）：金丝桃苷；峰5：异槲皮苷；峰6：槲皮素；峰7：山奈酚。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
主要仪器、试剂、试药与来源
主要仪器：Waters H-Class型超高液相色谱仪、Thermo Vanquish型超高效液相色谱仪；XP26百万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司)；ME204E型万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司)；千分之一天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），KQ500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HWS28型恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）；Milli-QDirect 型超纯水系统(默克股份有限公司)。
主要试剂：乙腈（德国merck公司，色谱纯）；甲醇（西陇科学股份有限公司，分析纯）；乙醇（西陇科学股份有限公司，分析纯）；磷酸（天津科密欧化学试剂有限公司，色谱纯）；甲酸（天津科密欧化学试剂有限公司，色谱纯）；水为实验室自制水。
主要试药：金丝桃苷对照品(含量：93.3%)；异槲皮苷对照品(含量：92.9%)；对照品均由中国食品药品检定研究院提供；16批罗布麻叶药材信息详见表1。
实施例1
罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建
1.试验方法
1.1罗布麻叶药材供试品溶液的配制：取罗布麻叶药材粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
1.2对照品溶液：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷100.6889μg和异槲皮苷107.3574μg的混合溶液，摇匀，即得。
1.3色谱条件：以Waters CORTECS UPLC T3（2.1×100mm，1.6μm）；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱条件如下表2；检测波长为360nm，流速为0.3mL/min，柱温为35℃。
表2 梯度洗脱流动相配比
2.供试品溶液制备方法考察
2.1提取溶媒考察
取罗布麻叶药材（S1）适量，取0.5g，精密称定，平行6组，每组2份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇各50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表3。
综合考虑各溶剂的提取能力、色谱峰峰形、峰面积/称样量的值和溶剂效应等，最终采用70％甲醇作为提取溶剂。
表3不同提取溶媒比较
2.2提取方式考察
取罗布麻叶药材（S1）适量，取0.5g，平行两份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟、加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表4。
通过对比超声和回流发现，回流提取时总峰面积/称样量较大，故选择加热回流作为提取方式。
表4 不同提取方式比较
2.3提取时间考察
取罗布麻叶药材（S1）适量，取0.5g，平行三份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟、60分钟、90分钟、120分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表5。
通过对比不同提取时间对罗布麻叶药材特征图谱影响发现，随着时间的增加总峰面积/称样量逐渐增加，但90分钟和120分钟差异不大，为节省时间，故选择加热回流90分钟。
表5 不同提取时间比较
2.4溶媒用量考察
取罗布麻叶药材（S1）适量，取0.5g，精密称定，平行3组，每组2份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入70%甲醇25ml、50ml、100ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。结果见表6。
通过对比溶媒用量的总峰面积/称样量体积，可发现不同提取溶剂用量，色谱图的色谱峰数目与色谱峰峰型一致，色谱图总面积与称样量比值基本一致，说明提取溶剂用量对其影响不大，为保证提取完全，故选择溶剂用量为50ml。
表6 不同溶媒用量比较
根据上述实验结果，供试品的制备方法为：取罗布麻叶药材粉末，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.色谱条件的优化
3.1色谱柱的选择
经比较发现，Waters CORTECS UPLC T3(2.1×100mm，1.6μm)柱分离效果最好，峰型更好，因此，选择Waters CORTECS UPLC T3(2.1×100mm，1.6μm)为色谱柱。
3.2检测波长的选择
采用PDA检测器对样品进行全波长扫描，发现在360nm处基线稳定，峰信息量较大，色谱图基线平稳，各峰峰面积适中，因此，检测波长确定为360nm。
3.3流动相的选择
考察了流动相A为甲醇、乙腈；流动相B为0.1%磷酸、0.1%甲酸、0.1%乙酸以及酸的浓度（0.05%、0.1%、0.2%）时对色谱峰的影响，结果以乙腈（A）-0.1%磷酸（B）为流动相时，色谱峰型较好且分离度较佳。
3.4洗脱条件的优化
洗脱条件1：
以Waters CORTECS UPLC T3色谱柱（2.1×100mm，1.6μm）；流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸水溶液，按下表7中的规定进行梯度洗脱；流速：0.3ml/min；柱温：35℃，图谱见图1。
表7 梯度洗脱表
洗脱条件2：
以Waters CORTECS UPLC T3色谱柱（2.1×100mm，1.6μm）；流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸水溶液，按下表8中的规定进行梯度洗脱；流速：0.3ml/min；柱温：35℃，图谱见图2。
表8 梯度洗脱表
结果显示：洗脱条件1中各峰较紧凑，峰纯度没有达到要求，且分离不合格。洗脱条件2各色谱峰分离效果较好，并且峰纯度也符合要求，故选择优化条件2进行实验。
3.5流速的选择
在拟定的实验条件基础上，分别对流速为0.25mL/min、0.3mL/min、0.35mL/min时进行了考察，结果流速为0.3ml/min时，各色谱峰峰型、分离度较好。
3.6柱温的选择
在拟定的实验条件基础上，分别对柱温为30℃、35℃、40℃时进行考察。结果表明柱温为35℃时，各色谱峰峰型、分离度较好。
4.方法学考察
4.1精密度试验 取罗布麻叶药材（批号：S1）供试品溶液，在规定的色谱条件下连续进样6次，考察共有峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，所得共有峰的相对峰面积与相对保留时间RSD<2%，表明仪器精密度良好。
4.2稳定性试验 取罗布麻叶药材（批号：S1）供试品溶液，在规定的色谱条件下，分别于0、2、4、8、12、24h进样测定，考察共有峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，并计算RSD值。所得共有峰的相对峰面积与相对保留时间RSD<3%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
4.3重复性试验 取罗布麻叶药材（批号：S1），按照供试品制备方法平行制备6份供试品溶液，按上述的色谱条件，进样测定，考察共有峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，并计算RSD值。所得共有峰的相对峰面积RSD<1%，相对保留时间RSD<3%，表明该方法重复性良好。
5.罗布麻叶药材特征图谱的建立
取16批罗布麻叶药材样品，制备供试品溶液，在规定色谱条件下进样测定，进样1μL，记录UPLC图谱。将图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行数据进行数据匹配，建立罗布麻叶药材的特征图谱，叠加图见附图3，生成的共有模式见附图4。
标示出罗布麻叶药材色谱图中的7个共有峰，以4号峰为参照峰S，计算各特征峰相对保留时间RSD值。结果表明，样品各色谱图共有峰的相对保留时间RSD值均小于3.0%；而相对峰面积的RSD值相差较大，见表9、表10。
表9 16批罗布麻叶药材特征图谱相对保留时间
表10 16批罗布麻叶药材特征图谱相对峰面积
分别计算16批罗布麻叶药材样品的相似度，见表11，16批罗布麻叶药材相似度均大于0.90，说明罗布麻叶药材化学成分一致性较好，质量比较稳定。
表11 16批罗布麻叶药材相似度
6.特征图谱峰指认：在规定色谱条件下，分别对供试品溶液和对照品溶液进行检测。通过化合物的色谱峰保留时间及与对照品进行比对，共确定了7个化合物，分别为新绿原酸（峰1）、绿原酸（峰2）、隐绿原酸（峰3）、金丝桃苷（峰4）、异槲皮苷（峰5）、槲皮素（峰6）、山奈酚（峰7）。供试品溶液与7个对照品溶液色谱峰叠加图，见图5。
实施例2
罗布麻叶药材中黄酮类成分含量测定，测量步骤如下：
（1）吸取对照品溶液和待测罗布麻叶药材样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定相应峰面积；
（2）通过外标法计算，即得。
1.色谱条件：以Waters CORTECS UPLC T3（2.1×100mm，1.6μm）；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱条件如表12；检测波长为360nm，流速为0.3mL/min，柱温为35℃。
表12 梯度洗脱条件
2.待测罗布麻叶药材样品溶液制备方法：取罗布麻叶药材粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.对照品溶液：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷100.6889μg和异槲皮苷107.3574μg的混合溶液，摇匀，即得。
4.方法学考察
4.1精密度：分别精密吸取同一待测罗布麻叶药材样品溶液1μl注入液相色谱仪，重复进样6次，记录峰面积。计算金丝桃苷峰面积RSD%为2.08%、异槲皮苷峰面积RSD%为2.09%，表明仪器精密度良好。
4.2线性关系考察：分别精密称取金丝桃苷、异槲皮苷对照品6.325mg、8.153mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，作罗布麻叶药材线性母液。精密量取罗布麻叶药材线性母液0.25、0.5、1、2、4ml置10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，即得罗布麻叶药材线性混合对照品溶液。精密吸取混合上述混合对照品溶液1μl，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以各组分峰面积（Y）和对照品浓度（X）进行回归处理，得各组分回归方程及线性范围，结果见表13。
表13 罗布麻叶药材中6个成分的线性关系考察结果
4.3重复性考察 ：取同一批罗布麻叶药材（批号：S1），按照待测罗布麻叶药材样品溶液平行制备6份待测罗布麻叶药材样品溶液，按照上述色谱条件进行平行测定，计算金丝桃苷含量RSD为0.86%、异槲皮苷含量RSD为0.72%，表明本法重复性良好。
4.4稳定性考察：精密吸取同一待测罗布麻叶药材样品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h后进样，测定峰面积，计算金丝桃苷峰面积RSD为1.57%、异槲皮苷峰面积RSD为1.55%，表明仪器精密度良好。
4.5加样回收率：精密称取已知含量的罗布麻叶药材（批号：S1）共9份，分别精密加入一定量的对照品溶液，按照待测罗布麻叶药材样品溶液的制备方法及色谱条件测定，计算金丝桃苷、异槲皮苷的回收率，结果表明加样回收率良好，见表15。
表15 方法学验证结果汇总表
5.样品测定：将16批罗布麻叶药材制备待测罗布麻叶药材样品溶液在规定色谱条件下测定，通过外标法计算16批罗布麻叶药材中金丝桃苷和异槲皮苷的含量，结果见表15。
表15 16批罗布麻叶药材含量测定结果
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：
（1）精密称取罗布麻叶药材粉末，制备得到罗布麻叶药材供试品溶液；
（2）将罗布麻叶药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到罗布麻叶药材UPLC特征图谱。
2.根据权利要求1所述的罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05~0.15％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为320~400nm，流速为0.25~0.35ml/min，柱温为30~40℃，进样量为0.5~1.5 ul。
3.根据权利要求2所述的罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，梯度洗脱条件为：0~7min，流动相A的体积分数变化为6%~12%，流动相B的体积分数变化为94%~88%；7~11min，流动相A的体积分数变化为12%~13%，流动相B的体积分数变化为88%~87%；11~17min，流动相A的体积分数变化为13%~15%，流动相B的体积分数变化为87%~85%；17~20min，流动相A的体积分数变化为15%~19%，流动相B的体积分数变化为85%~81%；20~25min，流动相A的体积分数变化为19%~30%，流动相B的体积分数变化为81%~70%；25~28min，流动相A的体积分数变化为30~60%，流动相B的体积分数变化为70%~40%；28~33min，流动相A的体积分数变化为60%~75%，流动相B的体积分数变化为40%~25%。
4.根据权利要求1所述的罗布麻叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的供试品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入50%~90%甲醇25~100ml，称定重量，加热回流60~120分钟，放冷，再称定重量，用50%~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.一种罗布麻叶药材中黄酮类成分含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）吸取对照品溶液和待测罗布麻叶药材样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定相应峰面积；
（2）通过外标法计算，即得。
6.根据权利要求5所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，所述黄酮类成分为金丝桃苷、异槲皮苷。
7.根据权利要求5所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分含量测定方法，其特征在于，所述对照品溶液通过如下方法制备得到：加甲醇制成每1ml含金丝桃苷80~120μg和异槲皮苷90~130μg的混合溶液，摇匀，即得。
8.根据权利要求5所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05~0.15％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为320~400nm，流速为0.25~0.35ml/min，柱温为30~40℃，进样量为0.5~1.5 ul。
9.根据权利要求8所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，梯度洗脱条件为：0~7min，流动相A的体积分数变化为6%~12%，流动相B的体积分数变化为94%~88%；7~11min，流动相A的体积分数变化为12%~13%，流动相B的体积分数变化为88%~87%；11~17min，流动相A的体积分数变化为13%~15%，流动相B的体积分数变化为87%~85%；17~20min，流动相A的体积分数变化为15%~19%，流动相B的体积分数变化为85%~81%；20~25min，流动相A的体积分数变化为19%~30%，流动相B的体积分数变化为81%~70%；25~28min，流动相A的体积分数变化为30~60%，流动相B的体积分数变化为70%~40%；28~33min，流动相A的体积分数变化为60%~75%，流动相B的体积分数变化为40%~25%。
10.根据权利要求5所述的罗布麻叶药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，所述的待测罗布麻叶药材样品溶液制备方法为：取罗布麻叶药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入50%~90%甲醇25~100ml，称定重量，加热回流60~120分钟，放冷，再称定重量，用50%~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911222654.8A CN110927311B (zh) | 2019-12-03 | 2019-12-03 | 一种罗布麻叶药材uplc特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911222654.8A CN110927311B (zh) | 2019-12-03 | 2019-12-03 | 一种罗布麻叶药材uplc特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110927311A true CN110927311A (zh) | 2020-03-27 |
| CN110927311B CN110927311B (zh) | 2022-04-01 |
Family
ID=69847311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911222654.8A Active CN110927311B (zh) | 2019-12-03 | 2019-12-03 | 一种罗布麻叶药材uplc特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110927311B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112730688A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-30 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种罗布麻叶配方颗粒特征图谱鉴别方法 |
| CN114354811A (zh) * | 2022-01-11 | 2022-04-15 | 吉林化工学院 | 一种罗布麻叶中三种黄酮类化学成分含量测定方法 |
| CN116399972A (zh) * | 2023-04-18 | 2023-07-07 | 国药集团广东环球制药有限公司 | 一种复方罗布麻颗粒uplc特征图谱的建立及检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020090403A1 (en) * | 2000-11-01 | 2002-07-11 | Sansei Nishibe | Antidepressant |
| CN1749263A (zh) * | 2004-09-16 | 2006-03-22 | 新疆医科大学 | 大花罗布麻叶的几个标识化合物 |
| CN104237416A (zh) * | 2014-09-27 | 2014-12-24 | 中国人民解放军兰州军区乌鲁木齐总医院 | 同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的hplc方法 |
-
2019
- 2019-12-03 CN CN201911222654.8A patent/CN110927311B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020090403A1 (en) * | 2000-11-01 | 2002-07-11 | Sansei Nishibe | Antidepressant |
| CN1749263A (zh) * | 2004-09-16 | 2006-03-22 | 新疆医科大学 | 大花罗布麻叶的几个标识化合物 |
| CN104237416A (zh) * | 2014-09-27 | 2014-12-24 | 中国人民解放军兰州军区乌鲁木齐总医院 | 同时测定大花罗布麻叶中6种黄酮类成分含量的hplc方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 宋建平 等: "罗布麻叶HPLC指纹图谱的研究", 《南京中医药大学学报》 * |
| 李慕春 等: "罗布麻和白麻叶中主要化学成分的统计分析", 《中国实验方剂学杂志》 * |
| 郝旭亮 等: "罗布麻总黄酮高效液相色谱指纹图谱研究", 《中国中药杂志》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112730688A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-30 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种罗布麻叶配方颗粒特征图谱鉴别方法 |
| CN114354811A (zh) * | 2022-01-11 | 2022-04-15 | 吉林化工学院 | 一种罗布麻叶中三种黄酮类化学成分含量测定方法 |
| CN114354811B (zh) * | 2022-01-11 | 2023-07-07 | 吉林化工学院 | 一种罗布麻叶中三种黄酮类化学成分含量测定方法 |
| CN116399972A (zh) * | 2023-04-18 | 2023-07-07 | 国药集团广东环球制药有限公司 | 一种复方罗布麻颗粒uplc特征图谱的建立及检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110927311B (zh) | 2022-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110927311B (zh) | 一种罗布麻叶药材uplc特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法 | |
| CN104950052B (zh) | 一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法 | |
| CN105467059A (zh) | 一种治疗血尿的中药组合物的质量检测方法 | |
| CN109490437B (zh) | 白芍的指纹图谱检测方法 | |
| CN109406682A (zh) | 生姜药材的uplc特征图谱构建方法和检测方法 | |
| CN112782308B (zh) | 一种杜仲补天素丸的hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN109374785A (zh) | 淡竹叶药材uplc特征图谱的构建方法和检测方法 | |
| CN102068549A (zh) | 中药制剂清热凉血丸的质量控制方法 | |
| CN113759035A (zh) | 小承气汤指纹图谱的构建方法 | |
| CN110806457B (zh) | 四君甘露饮指纹图谱的检测方法 | |
| CN105301123A (zh) | 一种良附类制剂的hplc检测方法 | |
| CN102707006B (zh) | 穿破石配方颗粒的质量检测方法 | |
| CN109709222B (zh) | 一种感冒灵和复方感冒灵的成分检测方法 | |
| CN115097040B (zh) | 一种木鳖子的uplc特征图谱构建方法及应用 | |
| CN115524424A (zh) | 一种荠菜样品质量控制方法 | |
| CN111505156B (zh) | 一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法 | |
| CN113759011B (zh) | 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法 | |
| CN111024875B (zh) | 一种鸡骨草酰胺类成分液相色谱指纹图谱的构建方法 | |
| CN104597168B (zh) | 桑枝精制饮片含量测定方法 | |
| CN105974025A (zh) | 一种治疗胃病的中药制剂的检测方法 | |
| CN107941940B (zh) | 一种山萮菜药材的hplc-dad指纹图谱质量测定方法 | |
| CN113049704A (zh) | 一种抗宫炎软胶囊uplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN110118841A (zh) | 一种肝胆双清口服液的hplc特征图谱的构建方法 | |
| CN112180022B (zh) | 一种炒蒺藜或蒺藜中蒺藜皂苷k含量的测定方法 | |
| CN109001307B (zh) | 三金制剂的hplc特征图谱及其构建方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A method for constructing a UPLC characteristic map and determining the content of flavonoids in Apocynum venetum leaves Effective date of registration: 20231225 Granted publication date: 20220401 Pledgee: Bank of China Limited by Share Ltd. Foshan branch Pledgor: GUANGDONG YIFANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2023980073969 |