CN109239214B - 一种沙库比曲钠中沙库比曲异构体检验方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物分析技术领域，涉及一种沙库比曲钠中沙库比曲异构体的检测方法。该方法利用方便快捷的高效液相色谱法，对沙库比曲异构体进行检测，可用于监测沙库比曲钠原料药及制剂的质量，对沙库比曲异构体的色谱峰分离度高、具有较高的系统适用性，同时具有准确度高、精密度高、重现性好、稳定性好、专属性强等特点。本发明弥补了目前检测该杂质方法的空缺，且测定方法操作简单，所用时间比较短，成本低，耗时短，确保了沙库比曲钠的原料及制剂的质量可控性。
Description
技术领域
本发明涉及一种沙库比曲钠中沙库比曲异构体检验方法，属于药物分析技术领域。
背景技术
沙库比曲，英文通用名：sacubitril，又名：AHU-377,化学名： 4-{[(2S,4R)-1-([l，l' -联二苯]-4-基）-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊-2-基]氨 基}-4-氧代丁酸，结构如式I所示
，是一种脑啡肽酶抑制剂。
沙库比曲钠的手性构型为（S,R），其手性异构体为（S,S）、（R,R）、（R,S）型，分子式分别为：、
、
沙库比曲钠手性异构体（S,S）、（R,R）、（R,S）由起始物料相应的手性异构体在合成过程中带入并可能存在于沙库比曲钠（S,R）中。沙库比曲钠的异构体（S,S）、（R,R）、（R,S）[以下简称SCB(S,S)、SCB(R,R) 、SCB(R,S)]测定是通过高效液相色谱法进行的。
目前，少有报道沙库比曲钠中沙库比曲异构体的检测方法，作为医药行业，严格控制产品中的杂质含量是非常必要的，对物料杂质的研究有助于药物的合成工艺优化和质量控制，研究沙库比曲钠中沙库比曲异构体的检验方法，为评价沙库比曲钠及其合成中间体的质量提供了较好的参考，也为优化沙库比曲钠合成工艺提供技术依据，对确定沙库比曲钠中沙库比曲异构体所引起的不良反应具有重大意义。本发明为解决沙库比曲钠中沙库比曲异构体的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种沙库比曲钠中沙库比曲异构体检验方法，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、专属性、精密度、定量限、检测限、线性和范围、准确度和耐用性等方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于沙库比曲钠原料药的质量控制。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种沙库比曲钠中沙库比曲异构体检验方法，包括以下步骤：
（1）配制溶液，分别配制空白溶液、系统适用性溶液、参比溶液和测试溶液；所述空白溶液包括稀释液；所述系统适用性溶液包括杂质储备液、稀释液、沙库比曲钠对照品；所述参比溶液包括沙库比曲钠储备溶液和稀释液；所述测试溶液包括沙库比曲钠样品和稀释液；
（2）测定方法：待系统稳定后，分别将空白溶液、系统适用性溶液、参比溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图,色谱条件如下: 色谱柱：以直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)衍生物为填充剂；流速1.0±0.1mL/min；柱温：25±2℃；进样量：10μl；运行时间：35min；检测波长：254nm；流动相为正己烷：乙醇：异丙醇：三氟乙酸体系。
所述系统适用性溶液的配制步骤为：精密称定沙库比曲钠对照品于容量瓶中，加稀释液适量使其溶解（必要时进行超声），再精密量取杂质储备液至容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。
所述参比溶液：精密量取沙库比曲钠储备溶液置于容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。
所述测试溶液：精密称定沙库比曲钠样品置于容量瓶中，加稀释液溶解（必要时进行超声）并稀释至刻度，摇匀。
所述稀释液为正己烷、乙醇、异丙醇、三氟乙酸的混合液；
所述正己烷为HPLC；
所述乙醇为AR及以上；
所述异丙醇为HPLC；
所述三氟乙酸为AR及以上；
所述杂质储备液：包括SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液。
所述杂质储备液是用稀释液分别溶解沙库比曲钠异构体SCB(S,S)对照品、SCB(R,R)对照品、SCB(R,S)对照品制得；
所述沙库比曲钠储备溶液是用稀释液溶解沙库比曲钠对照品制得；
所述色谱柱可为CHIRALPAK AD-H 250×4.6mm 5um。
所述稀释液和流动相中分别含有体积比为75%~95%的正己烷、6%~18%的乙醇、2%~4%的异丙醇和0.1%~0.3%的三氟乙酸。
优选的，所述稀释液为正己烷：乙醇：异丙醇：三氟乙酸=800:160:40:1（V/V/V/V）。
优选的，所述流动相为正己烷：乙醇：异丙醇：三氟乙酸=800:160:40:1（V/V/V/V）。
更优选的，本发明所述的测定方法，包括以下步骤：
（1）配制溶液，空白溶液、系统适用性溶液、参比溶液和测试溶液；
所述系统适用性溶液的配制步骤为：精密称定沙库比曲钠对照品约25mg，置于25ml容量瓶中，加稀释液适量使溶解（必要时进行超声），再精密量取SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液各1.0ml，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：沙库比曲钠1.0mg/ml、SCB(S,S) 1.5μg/ml、SCB(R,R) 1.5μg/ml、SCB(R,S)1.5μg/ml）
所述杂质储备液：
SCB(S,S)储备液：取SCB(S,S)对照品约15mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：37.5μg/ml）
SCB(R,R)储备液：取SCB(R,R)对照品约15mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：37.5μg/ml）
SCB(R,S)储备液：取SCB(R,S)对照品约15mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：37.5μg/ml）
所述参比溶液：精密量取沙库比曲钠储备溶液1.0ml，置10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1μg/ml）
所述沙库比曲钠储备溶液：精密称定沙库比曲钠对照品约25mg，置于25ml量瓶中，加稀释液适量使溶解（必要时进行超声）并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：10μg/ml）
所述测试溶液：精密称定沙库比曲钠样品约25mg，置于25ml容量瓶中，加稀释液溶解（必要时进行超声）并稀释至刻度，摇匀。（浓度：1mg/ml）
（2）测定方法：待系统稳定后，分别将空白溶液、系统适用性溶液、参比溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图,色谱条件如下: 色谱柱：以直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)衍生物为填充剂；流速1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μl；运行时间：35min；检测波长：254nm；流动相为正己烷：乙醇：异丙醇：三氟乙酸体系。
（3）异构体含量%=(Ru/Rs)×(Cs/Cu)×100
其中：Ru--测试溶液中异构体SCB(S,S)、SCB(R,R)或SCB(R,S)的峰面积；
Rs--5针参比溶液中沙库比曲钠的平均峰面积；
Cs--参比溶液中沙库比曲钠的浓度（mg/ml）；
Cu--测试溶液中沙库比曲钠的浓度（mg/ml）。
所述的沙库比曲钠中沙库比曲异构体检验方法还包括在检测之前的方法验证，该方法验证为按照正式检测的色谱条件，测定结果为:
有益效果
由以上技术方案可知，本发明所述的检测方法对沙库比曲异构体的色谱峰分离度高、具有较高的系统适用性，同时在专属性、精密度、定量限、检测限、准确度、线性和范围和耐用性都符合标准。本发明利用方便快捷的高效液相色谱法，对沙库比曲异构体的检测，可用于监测沙库比曲钠原料药及制剂的质量。本发明首次提出了沙库比曲钠中沙库比曲异构体的检测方法，具有准确度高、精密度高、重现性好、稳定性好、专属性强等特点，同时本发明的测定方法操作简单，所用时间比较短，成本低，耗时短。
附图说明
图1为沙库比曲钠中沙库比曲异构体检测空白溶液的液相色谱图；
图2为沙库比曲钠中沙库比曲异构体检测系统适用性溶液的液相色谱图；
图3为沙库比曲钠中沙库比曲异构体检测参比溶液的液相色谱图；
图4为沙库比曲钠中沙库比曲异构体检测SCB(S,S)定位溶液的液相色谱图；
图5为沙库比曲钠中沙库比曲异构体检测SCB(R,R)定位溶液的液相色谱图；
图6为沙库比曲钠中沙库比曲异构体检测SCB(R,S)定位溶液的液相色谱图；
图7为沙库比曲钠中沙库比曲异构体检测沙库比曲钠定位溶液的液相色谱图；
图8为沙库比曲钠中沙库比曲异构体检测沙库比曲钠样品溶液的液相色谱图；
图9为沙库比曲钠中沙库比曲异构体检测选择性溶液的液相色谱图；
图10为SCB(S,S)线性关系图；
图11为SCB(R,R)线性关系图；
图12为SCB(R,S)线性关系图。
具体实施方式
下面用具体实施例来进一步解释和说明本发明，但并不以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
(1)实验材料与仪器条件
仪器：高效液相色谱仪：Agilent 1260；色谱柱：CHIRALPAK AD-H 250×4.6mm5um；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样量：10μl；运行时间：35min；检测波长：254nm，流动相：正己烷：乙醇：异丙醇：三氟乙酸=800:160:40:1（V/V/V/V）；
（2）实验步骤
稀释液：正己烷：乙醇：异丙醇：三氟乙酸=800:160:40:1（V/V/V/V）；
空白溶液：稀释液；
杂质储备液：
SCB(S,S)储备液：取SCB(S,S)对照品约15mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：37.5μg/ml）
SCB(R,R)储备液：取SCB(R,R)对照品约15mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：37.5μg/ml）
SCB(R,S)储备液：取SCB(R,S)对照品约15mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：37.5μg/ml）
杂质混合溶液：精密量取SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液各1.0ml，置25ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（各杂质浓度：1.5μg/ml）
SCB(S,S)定位溶液：精密量取SCB(S,S)储备液1.0ml，置25ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1.5μg/ml）
SCB(R,R)定位溶液：精密量取SCB(R,R)储备液1.0ml，置25ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1.5μg/ml）
SCB(R,S)定位溶液：精密量取SCB(R,S)储备液1.0ml，置25ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1.5μg/ml）
系统适用性溶液：取沙库比曲钠对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液适量使溶解（必要时进行超声），再精密量取杂质储备液（SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液）各1.0ml，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：沙库比曲钠1.0mg/ml、SCB(S,S) 1.5μg/ml、SCB(R,R) 1.5μg/ml、SCB(R,S)1.5μg/ml）
沙库比曲钠储备溶液：取沙库比曲钠对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液适量使溶解（必要时进行超声）并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：10μg/ml）
参比溶液：精密量取沙库比曲钠储备溶液1.0ml，置10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1μg/ml）
测试溶液：取沙库比曲钠样品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液溶解（必要时进行超声）并稀释至刻度，摇匀。（浓度：1mg/ml）
选择性溶液：取沙库比曲钠样品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液适量溶解（必要时进行超声），再精密量取SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液各1.0ml，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（沙库比曲钠浓度：1mg/ml，各杂质浓度：1.5μg/ml）
沙库比曲钠样品溶液：取沙库比曲钠样品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液溶解（必要时进行超声）并稀释至刻度，摇匀。（浓度：1mg/ml）
沙库比曲钠定位溶液：取沙库比曲钠对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1mg/ml）
准确度-100%储备液：取沙库比曲钠样品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液适量溶解（必要时进行超声），再精密量取SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液各1.0ml，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（沙库比曲钠浓度：1mg/ml，各杂质浓度：1.5μg/ml）
测试溶液（加标）：取沙库比曲钠供试品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液溶解（必要时进行超声），精密量取SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液各1.0ml，加稀释液稀释至刻度，摇匀。同法配制6份。（沙库比曲钠浓度：1mg/ml、SCB(R,R)浓度：1.5μg/ml、SCB(R,S)浓度：1.5μg/ml）
测试溶液（a）：精密量取SCB(S,S)储备液0.85ml、SCB(R,R)储备液和SCB(R,S)储备液各2.0ml，置150ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。
LOQ溶液：根据测试溶液(a)所测得的信噪比，调整稀释比例，使各杂质信噪比达到S/N≈10的要求；同法配制6份。
准确度-LOQ储备液：参考LOQ溶液的最终浓度，配制成含沙库比曲钠约1mg/ml、各杂质浓度为LOQ浓度的溶液。
LOD溶液：精密量取LOQ溶液3.0ml，置10ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀。
线性-50%溶液：精密量取杂质储备液（SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液）各1.0ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（各杂质浓度：0.75μg/ml）
线性-80%溶液：精密量取杂质储备液（SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液）各2.0ml，置25ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（各杂质浓度：1.2μg/ml）
线性-100%溶液：精密量取杂质储备液（SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液）各1.0ml，置10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（各杂质浓度：1.5μg/ml）
线性-120%溶液：精密量取杂质储备液（SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液）各3.0ml，置25ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（各杂质浓度：1.8μg/ml）
线性-150%溶液：精密量取杂质储备液（SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液）各3.0ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（各杂质浓度：2.25μg/ml）
准确度-150%溶液：取沙库比曲钠样品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀释液适量溶解（必要时进行超声），精密量取杂质储备液（SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液）各3.0ml，置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。同法配制3份。（沙库比曲钠浓度：1mg/ml，各杂质浓度：2.25μg/ml）
待系统稳定后，进空白溶液1针，系统适用性溶液1针，参比溶液5针、测试溶液1针，记录色谱图。
异构体含量%=(Ru/Rs)×(Cs/Cu)×100
其中：Ru--测试溶液中异构体SCB(S,S)、SCB(R,R)或SCB(R,S)的峰面积；
Rs--5针参比溶液中沙库比曲钠的平均峰面积；
Cs--参比溶液中沙库比曲钠的浓度（mg/ml）；
Cu--测试溶液中沙库比曲钠的浓度（mg/ml）。
实施例2本发明所述检测方法系统适用性试验
系统适用性是通过测定系统适用性溶液中沙库比曲钠与SCB（S,S）峰的分离度、5针参比溶液中沙库比曲钠峰面积的RSD而实现的，5针参比溶液中沙库比曲钠峰面积的RSD应≤2.0%；系统适用性溶液中沙库比曲钠与SCB（S,S）峰的分离度≥1.5。如实施例1所述配制空白溶液、系统适用性溶液、参比溶液，在实施例1所述色谱条件下，进空白溶液1针，系统适用性溶液1针，参比溶液5针，记录色谱图，如图1、图2、图3，根据公式换算结果如下表所示：
实施例3本发明所述检测方法专属性试验
专属性是通过测定空白溶液对检测有无干扰；选择性溶液中各相邻杂质峰之间的分离度及各杂质的回收率而实现的，要求空白溶液对检测应无干扰；杂质混合溶液中各相邻杂质峰的分离度应不小于1.5；选择性溶液中各相邻杂质峰之间的分离度应不小于1.5。如实施例1所述配制空白溶液、测试溶液、SCB(S,S)定位溶液、SCB(R,R)定位溶液、SCB(R,S)定位溶液、沙库比曲钠定位溶液、杂质混合溶液、选择性溶液。待系统平衡后，进空白溶液1针、各定位溶液各1针、测试溶液1针、杂质混合溶液3针、选择性溶液3针，记录色谱图，如图1、图4、图5、图6、图7、图8、图9，得出专属性检测结果如下。
实施例4本发明所述检测方法精密度试验
（1）重复性：精密度重复性是通过测定6份测试溶液（加标）测定结果值之间的RSD而实现的，6份测试溶液（加标）中测定结果RSD≤10.0%。如实施例1所述配制空白溶液、参比溶液和6份测试溶液（加标）；待系统平衡后，进空白溶液1针，参比溶液1针，6份测试溶液（加标）各1针，记录色谱图，根据公式换算得出结果如下表所示：
（2）中间精密度：中间精密度是通过考察另一名检验员在不同时间，不同仪器上测定6份测试溶液（加标）测定结果的RSD而实现的，5针参比溶液中沙库比曲钠峰面积的RSD≤2.0%；系统适用性溶液中沙库比曲钠与SCB（S,S）峰的分离度≥1.5；6份测试溶液（加标）中测定结果RSD≤10.0%；重复性与中间精密度12次测定结果的RSD≤10.0%。如实施例1所示配制空白溶液、系统适用性溶液、参比溶液、测试溶液（加标）。待系统平衡后，进空白溶液1针，系统适用性溶液1针，参比溶液5针，6份测试溶液（加标）各1针，记录色谱图，得出如下结果：
实施例5本发明所述检测方法的定量限和检测限
最低检测限是通过检测其响应信号与噪声之比约为3:1而得到；最低定量限是通过检测其响应信号与噪声之比约为10:1而得到的。在该浓度水平，重复考察6份最低定量限溶液，LOQSCB（S,S）≤0.05%、LOQSCB（R,S）≤0.05%、LOQSCB（R,R）≤0.05%，LOD应≈
LOQ，来证实定量限测定结果具有一定的精密度。如实施例1所述配制空白溶液、测试溶液（a）、LOQ溶液、LOD溶液。待系统稳定后，进空白溶液、测试溶液（a）、6份LOQ溶液、LOD溶液各1针，记录色谱图，得出如下结果。
实施例6本发明所述检测方法的线性和范围
在LOQ～150%浓度范围内，取6个浓度点，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标画曲线，在LOQ～150%浓度范围内呈线性，线性回归系数R2≥0.99。如实施例1所述配制LOQ溶液、线性-50%溶液、线性-80%溶液、线性-100%溶液、线性-120%溶液、线性-150%溶液的配制；
待系统稳定后，进各LOQ溶液各1针，线性-50%溶液、线性-80%溶液、线性-100%溶液、线性-120%溶液、线性-150%溶液各3针，记录色谱图，得出如下结果：
实施例7本发明所述检测方法的准确度
准确度是考察被测组分实测浓度与理论浓度之间的回收率而实现的，要求各浓度点各杂质的的回收率应符合可接受标准。如实施例1所述配制空白溶液、杂质混合溶液、准确度-LOQ溶液、准确度-100%溶液、准确度-150%溶液。
待系统稳定后，进空白溶液1针，杂质混合溶液1针，准确度-LOQ溶液各1针，准确度-100%溶液各1针，准确度-150%溶液各1针，记录色谱图，得到如表16、表17、表18所示结果。
实施例8本发明所述检测方法的耐用性
考察系统适用性溶液、参比溶液及测试溶液在室温下放置0天、1天、2天后进样，检测结果随时间变化的规律，为检测时系统适用性溶液、参比溶液及测试溶液的放置时间提供依据，要求检测结果应符合可接受标准。如实施例1所述配制空白溶液、系统适用性溶液、参比溶液、测试溶液，分别在0天、1天、2天配制系统适用性溶液、参比溶液、测试溶液各一份。
待系统平衡后，进系统适用性溶液0天、1天、2天，参比溶液0天、1天、2天各1针，测试溶液0天、1天、2天各1针，记录色谱图，得到如表19、表20所示结果。
实施例9 本发明所述检测方法的参数变化
各试验条件参数变化后，各检测结果应符合可接受标准。如实施例1所述配制空白溶液、系统适应性溶液、测试溶液、杂质混合溶液、选择性溶液，待系统平衡后，进空白溶液1针，系统适用性溶液1针，杂质混合溶液1针，测试溶液1针，选择性溶液1针，记录色谱图，得到如表21、表22所示结果。
以上实施例仅为本发明的优选实施方案，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种沙库比曲钠中沙库比曲异构体检验方法，包括以下步骤：
(1)配制溶液，分别配制空白溶液、系统适用性溶液、参比溶液和测试溶液；所述空白溶液包括稀释液；所述系统适用性溶液包括杂质储备液、稀释液、沙库比曲钠对照品；所述参比溶液包括沙库比曲钠储备溶液和稀释液；所述测试溶液包括沙库比曲钠样品和稀释液；
(2)测定方法：待系统稳定后，分别将空白溶液、系统适用性溶液、参比溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图,色谱条件如下:色谱柱：以直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)衍生物为填充剂；流速1.0±0.1mL/min；柱温：25±2℃；进样量：10μl；运行时间：35min；检测波长：254nm；流动相为正己烷：乙醇：异丙醇：三氟乙酸V/V/V/V＝800:160:40:1。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述系统适用性溶液的配制步骤为：
精密称定沙库比曲钠对照品于容量瓶中，加稀释液适量使其溶解,必要时进行超声，再精密量取杂质储备液至容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；
所述参比溶液：精密量取沙库比曲钠储备溶液置于容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；
所述测试溶液：精密称定沙库比曲钠样品置于容量瓶中，加稀释液溶解,必要时进行超声,并稀释至刻度，摇匀；
所述稀释液为正己烷、乙醇、异丙醇、三氟乙酸的混合液；所述正己烷为HPLC；所述乙醇为AR及以上；所述异丙醇为HPLC；所述三氟乙酸为AR及以上；所述杂质储备液：包括SCB(S,S)储备液、SCB(R,R)储备液、SCB(R,S)储备液；所述杂质储备液是用稀释液分别溶解沙库比曲钠异构体SCB(S,S)对照品、SCB(R,R)对照品、SCB(R,S)对照品制得；所述沙库比曲钠储备溶液是用稀释液溶解沙库比曲钠对照品制得；所述色谱柱可为CHIRALPAK AD-H 250×4.6mm 5um。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述稀释液为正己烷：乙醇：异丙醇：三氟乙酸V/V/V/V＝800:160:40:1。
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