CN109233995A - 一种从金枪鱼眼部提取高epa和dha含量鱼油的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，该方法采用超声波辅助酶解金枪鱼眼部的方法制备鱼油，从原料源头斩断了脂质含量低和饱和脂肪酸含量高的原料，保证了鱼油的高品质，采用超声波辅助酶解法，大大缩短了酶解时间，提高了酶解效率，保证了鱼油的质量，丰富了我国鱼油产业和市场。

Description

一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，具体涉及一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法。
背景技术
金枪鱼是国际营养学会推荐的世界三大营养鱼类之一，年捕捞量超过600万吨，产量超过公海渔业总产量的70％。在金枪鱼加工中产生超过金枪鱼总质量50％以上的下脚料，包括鱼头、内脏、鱼皮、红肉等。在这些下脚料中，鱼头部位含有丰富的脂肪资源，尤其是眼睛部位的生物活性脂质含量非常丰富，包括磷脂、高不饱和脂肪酸等。
目前，从金枪鱼中制备的鱼油主要是利用酶解法获得。例如专利“金枪鱼下脚料综合利用的方法”，专利号CN201410542202.9，是利用碱性蛋白酶酶解法酶解金枪鱼下脚料，分离出蛋白质和脂类物质，其优点是综合利用了金枪鱼下脚料，但对于获得的蛋白质和脂类物质分离效果不佳、得率较低，因此只能用于低值的鱼粉生产加工等；例如专利“一种利用金枪鱼下脚料制备鱼油的方法”，专利号CN201210430705.8，首先利用固定化脂肪酶进行初步酶解，再利用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶进行复合酶解而获得金枪鱼鱼油的方法，其优点是大大提高了鱼油的得率，但由于是利用金枪鱼下脚料制备鱼油，原料中脂质含量较低的部位也被实施于方案中，因此获得的鱼油DHA和EPA含量较低、工作量大，另外，提取方法是利用二步酶解法进行，操作较繁琐、酶解时间过长导致了部分不饱和脂肪酸的氧化而影响了鱼油的品质。因此，寻找一种简便、得率较高、DHA和EPA含量较丰富的，专门针对脂质含量较高的金枪鱼眼部进行鱼油制备的方法，对人类的身体健康和高品质金枪鱼深海鱼油的开发具有积极的意义。
发明内容
本发明目的是：提供一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，以解决上述问题。
本发明的技术方案是：
一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，该方法包括如下步骤：
(1)以金枪鱼眼部为原料，低温匀浆后，以木瓜蛋白酶和胰蛋白酶进行复合酶解，并利用超声波间歇式辅助酶解反应，低温离心，获得上层脂质层和下层溶液；
(2)将所述下层溶液经增加盐度沉降蛋白的方法进一步分离蛋白和脂质，低温离心二次获得脂质成分；
(3)合并所述上层脂质层和所述脂质成分得到高EPA和DHA含量的鱼油。
进一步的，步骤(1)中所述原料为从金枪鱼鱼眼中心至金枪鱼鱼眼直径的10-15倍部分，并且去除鱼骨。
进一步的，步骤(1)中所述低温匀浆是指：在所述原料中加入0.5mol/L的NaCl溶液，在温度为4℃的条件下匀浆15-20min。
进一步的，所述原料的重量与NaCl溶液的体积之比为1:10-1:15。
进一步的，步骤(1)中所述以木瓜蛋白酶和胰蛋白酶进行复合酶解，并利用超声波间歇式辅助酶解反应包括：在原料中加入木瓜蛋白酶进行酶解，pH值为5.0-8.0，酶解时间为2h，酶解温度为40-55℃，酶解期间每隔30min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为5-10min，超声声场强度为40-60W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min；降至室温后，加入胰蛋白酶进行酶解，pH值为7.0-10.0，酶解时间为3h，酶解温度为40-55℃，酶解期间每隔60min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为10-20min，超声声场强度为60-80W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min。
进一步的，步骤(1)中所述木瓜蛋白酶为5000-8000U/g，胰蛋白酶为9000-12000U/g。
进一步的，步骤(1)中所述低温离心为在温度为4℃条件下以8000r/min的转速离心20min。
进一步的，步骤(2)中所述将所述下层溶液经增加盐度沉降蛋白的方法为：在所述下层溶液中加入NaCl，使浓度达到35-40％以沉淀蛋白质。
进一步的，步骤(2)中所述低温离心的温度为4℃，转速为8000r/min，离心时间为20min。
进一步的，步骤(3)中在合并所述上层脂质层和所述脂质成分时，加入无水Na2SO4，合并后的脂质的质量与无水Na2SO4的体积之比为1:5。
本发明提供了一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，该方法采用超声波辅助酶解金枪鱼眼部的方法制备鱼油，从原料源头斩断了脂质含量低和饱和脂肪酸含量高的原料，保证了鱼油的高品质，采用超声波辅助酶解法，大大缩短了酶解时间，提高了酶解效率，保证了鱼油的质量，丰富了我国鱼油产业和市场。
具体实施方式
本发明提供一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，包括以下步骤：
以金枪鱼眼部为原料，低温匀浆后，以木瓜蛋白酶和胰蛋白酶进行复合酶解，并利用超声波间歇式辅助酶解反应，低温离心，获得上层脂质成分；
下层溶液经增加盐度沉降蛋白的方法进一步分离蛋白和脂质，低温离心二次获得脂质成分；
合并两次的脂质成分得高EPA和DHA含量的鱼油。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，包括：
步骤一：以金枪鱼眼部为原料，低温匀浆后，以木瓜蛋白酶和胰蛋白酶进行复合酶解，并利用超声波间歇式辅助酶解反应，低温离心，获得上层脂质层和下层溶液；
该步骤可以具体如下执行：选取金枪鱼鱼眼中心至金枪鱼鱼眼直径的10-15倍部分，并且去除鱼骨作为原料，在所述原料中加入0.5mol/L的NaCl溶液，所述原料的重量与NaCl溶液的体积之比为1:10-1:15，在温度为4℃的条件下匀浆15-20min后，在原料中加入5000-8000U/g木瓜蛋白酶进行酶解，pH值为5.0-8.0，酶解时间为2h，酶解温度为40-55℃，酶解期间每隔30min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为5-10min，超声声场强度为40-60W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min；降至室温后，加入9000-12000U/g胰蛋白酶进行酶解，pH值为7.0-10.0，酶解时间为3h，酶解温度为40-55℃，酶解期间每隔60min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为10-20min，超声声场强度为60-80W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min，在温度为4℃条件下以8000r/min的转速离心20min，获得上层脂质层和下层溶液。
步骤二：将所述下层溶液经增加盐度沉降蛋白的方法进一步分离蛋白和脂质，低温离心二次获得脂质成分；
该步骤可以具体如下执行：在所述下层溶液中加入NaCl，使浓度达到35-40％以沉淀蛋白质，在温度为4℃条件下，转速为8000r/min，离心时间为20min，二次获得脂质成分。
步骤三：合并所述上层脂质层和所述脂质成分得到高EPA和DHA含量的鱼油。
该步骤可以具体如下执行：在合并所述上层脂质层和所述脂质成分时，加入无水Na2SO4，合并后的脂质的质量与无水Na2SO4的体积之比为1:5，得到高EPA和DHA含量的鱼油。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合实施例进一步说明本发明的技术方案。但是本发明不限于所列出的实施例，还应包括在本发明所要求的权利范围内其他任何公知的改变。
此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
实施例1
本实施案例按如下步骤展示一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法：
取金枪鱼眼部(金枪鱼鱼眼直径的13倍部分)，去除鱼骨，加入0.5mol/L的NaCl溶液(鱼眼部重量：溶液体积为1:10)，4℃匀浆15min，加入木瓜蛋白酶(5000U/g原料)进行酶解，pH 5.0，酶解时间2h，酶解温度40℃，酶解期间每隔30min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为5min，超声声场强度为40W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min；降至室温后，加入胰蛋白酶(9000U/g原料)进行酶解，pH7.0，酶解时间3h，酶解温度40℃，酶解期间每隔60min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为10min，超声声场强度为60W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min。4℃下8000r/min离心20min，取上层油脂层；下层溶液加入NaCl，使浓度达到35％以沉淀蛋白质，4℃下8000r/min离心20min，取上层油脂层；合并两次的脂质成分，加入无水Na2SO4(质量体积比为1:5)除去油脂中多余的水分，得到高EPA/DHA含量的鱼油。
上述方法所制得的鱼油中甘油三酯比例为49.9％，磷脂含量为38.6％，胆固醇含量为5.5％。EPA占总脂肪酸质量比为38.2％，DHA占总脂肪酸质量比为49.7％。
实施例2
本实施案例按如下步骤展示一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法：
取金枪鱼眼部(金枪鱼鱼眼直径的10倍部分)，去除鱼骨，加入0.5mol/L的NaCl溶液(鱼眼部重量：溶液体积为1:13)，4℃匀浆18min，加入木瓜蛋白酶(7000U/g原料)进行酶解，pH7.0，酶解时间2h，酶解温度45℃，酶解期间每隔30min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为8min，超声声场强度为50W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min；降至室温后，加入胰蛋白酶(10000U/g原料)进行酶解，pH8.0，酶解时间3h，酶解温度45℃，酶解期间每隔60min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为15min，超声声场强度为70W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min。4℃下8000r/min离心20min，取上层油脂层；下层溶液加入NaCl，使浓度达到38％以沉淀蛋白质，4℃下8000r/min离心20min，取上层油脂层；合并两次的脂质成分，加入无水Na2SO4(质量体积比为1:5)除去油脂中多余的水分，得到高EPADHA含量的鱼油。
上述方法所制得的鱼油中甘油三酯比例为51.7％，磷脂含量为39.2％，胆固醇含量为5.4％。EPA占总脂肪酸质量比为38.5％，DHA占总脂肪酸质量比为50.3％。
实施例3
本实施案例按如下步骤展示一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法：
取金枪鱼眼部(金枪鱼鱼眼直径的15倍部分)，去除鱼骨，加入0.5mol/L的NaCl溶液(鱼眼部重量：溶液体积为1:15)，4℃匀浆20min，加入木瓜蛋白酶(8000U/g原料)进行酶解，pH8.0，酶解时间2h，酶解温度55℃，酶解期间每隔30min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为10min，超声声场强度为60W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min；降至室温后，加入胰蛋白酶(12000U/g原料)进行酶解，pH10.0，酶解时间3h，酶解温度55℃，酶解期间每隔60min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为20min，超声声场强度为80W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min。4℃下8000r/min离心20min，取上层油脂层；下层溶液加入NaCl，使浓度达到40％以沉淀蛋白质，4℃下8000r/min离心20min，取上层油脂层；合并两次的脂质成分，加入无水Na2SO4(质量体积比为1:5)除去油脂中多余的水分，得到高EPADHA含量的鱼油。
上述方法所制得的鱼油中甘油三酯比例为49.4％，磷脂含量为37.3％，胆固醇含量为5.8％。EPA占总脂肪酸质量比为37.8％，DHA占总脂肪酸质量比为49.6％。
下述表1为三个实施例与现在技术的对比，具体如下：
表1
与现有技术相比，本发明的有益效果是：保证了鱼油的高品质，采用超声波辅助酶解法，大大缩短了酶解时间，提高了酶解效率，保证了鱼油的质量，鱼油中甘油三酯比例为49.4-51.7％，磷脂含量为37.3-39.2％，胆固醇含量为5.4-5.8％。EPA占总脂肪酸质量比为37.8-38.5％，DHA占总脂肪酸质量比为49.6-50.3％。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
(1)以金枪鱼眼部为原料，低温匀浆后，以木瓜蛋白酶和胰蛋白酶进行复合酶解，并利用超声波间歇式辅助酶解反应，低温离心，获得上层脂质层和下层溶液；
(2)将所述下层溶液经增加盐度沉降蛋白的方法进一步分离蛋白和脂质，低温离心二次获得脂质成分；
(3)合并所述上层脂质层和所述脂质成分得到高EPA和DHA含量的鱼油。
2.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于：步骤(1)中所述原料为从金枪鱼鱼眼中心至金枪鱼鱼眼直径的10-15倍部分，并且去除鱼骨。
3.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于，步骤(1)中所述低温匀浆是指：在所述原料中加入0.5mol/L的NaCl溶液，在温度为4℃的条件下匀浆15-20min。
4.根据权利要求3所述的一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于：所述原料的重量与NaCl溶液的体积之比为1:10-1:15。
5.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于，步骤(1)中所述以木瓜蛋白酶和胰蛋白酶进行复合酶解，并利用超声波间歇式辅助酶解反应包括：在原料中加入木瓜蛋白酶进行酶解，pH值为5.0-8.0，酶解时间为2h，酶解温度为40-55℃，酶解期间每隔30min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为5-10min，超声声场强度为40-60W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min；降至室温后，加入胰蛋白酶进行酶解，pH值为7.0-10.0，酶解时间为3h，酶解温度为40-55℃，酶解期间每隔60min进行超声波辅助酶解处理，超声波处理时间为10-20min，超声声场强度为60-80W/cm2，超声频率为25kHz，酶解结束后，100℃灭酶10min。
6.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于：步骤(1)中所述木瓜蛋白酶为5000-8000U/g，胰蛋白酶为9000-12000U/g。
7.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于：步骤(1)中所述低温离心为在温度为4℃条件下以8000r/min的转速离心20min。
8.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于，步骤(2)中所述将所述下层溶液经增加盐度沉降蛋白的方法为：在所述下层溶液中加入NaCl，使浓度达到35-40％以沉淀蛋白质。
9.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于：步骤(2)中所述低温离心的温度为4℃，转速为8000r/min，离心时间为20min。
10.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部提取高EPA和DHA含量鱼油的方法，其特征在于：步骤(3)中在合并所述上层脂质层和所述脂质成分时，加入无水Na2SO4，合并后的脂质的质量与无水Na2SO4的体积之比为1:5。
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