CN109212229A - 一种定量检测血管紧张素ii含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法,属于化学发光体外诊断技术领域。本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,包括:链霉亲和素磁微粒、生物素标记的血管紧张素II类似物和化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体。本发明还提供定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备方法。本发明解决了现有血管紧张素II检测试剂盒测试耗时长,重复性差,稳定性差,灵敏度差,准确度差等问题。与现有技术相比,本发明的优点是测试速度快,测试结果重复性好,试剂性能稳定,灵敏度高,测试结果准确等。
Description
技术领域
本发明属于化学发光体外诊断技术领域,具体涉及一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法。
背景技术
血管紧张素是一类具有极强的缩血管和刺激肾上腺皮质分泌醛固酮等作用的肽类物质,参与血压及体液的调节。可分为血管紧张素Ⅰ-Ⅶ。
因失血引起循环血量减少或肾疾病导致肾血流量减少等,可促进肾小球旁器的球旁细胞分泌肾素(一种酸性蛋白酶),进入血液后,使血中由肝生成的血管紧张素原(属α球蛋白)水解为血管紧张素Ⅰ(10肽),它随血液流经肺循环时,受肺所含的转化酶作用,被水解为8肽的血管紧张素Ⅱ,部分血管紧张素Ⅱ受血浆和组织液中血管紧张素酶A的作用,被水解为7肽的血管紧张素Ⅲ。
肾素是肾小球旁器的近球细胞分泌的一种蛋白水解酶。当动脉血压降低,循环血量减少,交感神经兴奋时,分泌增加。肾素在血液内存活约1小时,这期间催化血浆中的血管紧张素原(由肝脏合成后进入血浆)不断生成血管紧张素Ⅰ(10肽),血管紧张素Ⅰ可刺激肾上腺髓质释放肾上腺素和具有较弱的缩血管作用。血管紧张素Ⅰ形成几秒钟之内,被血液和肺组织中的血管紧张素转换酶降解,生成血管紧张素Ⅱ(8肽),在血液内存活约1分钟,就被氨基肽酶水解为血管紧张素Ⅲ(7肽)。后者促进醛固酮分泌,并对肾血管有收缩作用,它随即被血液和组织内的血管紧张素酶所灭活。血管紧张素Ⅱ、Ⅲ的生物活性较强,而血中血管紧张素Ⅲ的浓度较低。故以血管紧张素Ⅱ的活性最强,使微动脉收缩,外周阻力升高;使静脉收缩,回心血量增多,心室充盈压增高,有利心脏射血;它刺激肾上腺皮质球状带分泌醛固酮,后者又可促进远曲小管和集合管对钠和水的重吸收,增加细胞外液量,从而恢复循环血量;这两方面的作用使血压回升,在严重失血时,它使动脉压至少回升到正常的半程。它还直接作用于脑,增强交感缩血管紧张活动;引起渴觉和饮水行为;并能刺激抗利尿激素和促肾上腺皮质激素的分泌。肾素-血管紧张素约需20分钟才能发挥完全作用,但持续时间较长。血浆中经常存在血管紧张素原和转换酶等,肾素的释放是决定血浆中血管紧张素浓度的关键性条件。肾素、血管紧张素、醛固酮三者是一个相连的作用系统,称为肾素-血管紧张素系统或肾素-血管紧张素-醛固酮系统。
目前市场上血管紧张素II检测试剂盒普遍为酶联免疫吸附测定试剂盒,包括:酶标板,酶标板包括固相载体和包被层,所述的固相载体上设置多个微孔,包被层附着在固相载体的微孔表面,包被层是由抗血管紧张素II抗体和牛血清白蛋白依次涂布在固相载体的微孔表面形成的复合层,通常采用TMB为显色底物。反应过程中,待测物与生物素化的血管紧张素II竞争与血管紧张素II抗体结合在酶标板上,再通过亲和素化辣根过氧化物酶(HRP)放大信息,以3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)及硫酸分别作为底物及终止液,完成检测。这种方法的缺点是:(1)以酶标板作为固相载体时,由于载体表面的检测物与样品中的待测物无法充分接触,导致反应效率较低,反应时间较长,通常在60min以上,有些甚至达到3小时以上。(2)由于酶的生物活性会随着环境条件(温度、pH等)发生变化,导致同样数量的酶在不同条件下产生的光量有明显的区别,无法得到稳定的结果。
发明内容
本发明要解决现有技术中的技术问题,提供一种高效率、高稳定性的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒及其制备方法。
为了解决上述技术问题,本发明的技术方案具体如下:
一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,包括:链霉亲和素磁微粒、生物素标记的血管紧张素II类似物和化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体。
在上述技术方案中,所述链霉亲和素磁微粒浓度>0.03%,所述生物素标记的血管紧张素II类似物浓度≥0.1μg/mL,所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体浓度≥0.05μg/mL。
在上述技术方案中,所述链霉亲和素磁微粒中的磁微粒的粒径为1-3μm。
在上述技术方案中,所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中的化学发光物质为吖啶酯或吖啶酯衍生物。
在上述技术方案中,所述生物素标记的血管紧张素II类似物中的生物素与血管紧张素II类似物的摩尔比为1:1-10:1。
在上述技术方案中,所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中化学发光物质与血管紧张素II单克隆抗体的摩尔比为1:1-10:1。
在上述技术方案中,还包括:血管紧张素II校准品和血管紧张素II质控品。
在上述技术方案中,所述血管紧张素II校准品浓度为2-30pg/mL,体积为1mL。
在上述技术方案中,所述血管紧张素II质控品浓度为2-30pg/mL,体积为1mL。
一种上述所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
步骤1、链霉亲和素磁微粒制备
取链霉亲和素磁颗粒溶液,加入TBST溶液充分混匀后,放置于磁分离器上,直至上清无混浊,弃上清,留取磁颗粒,重复清洗3次后,用磁珠稀释缓冲液稀释后得到链霉亲和素磁微粒溶液;
步骤2、生物素标记的血管紧张素II类似物的制备:
取血管紧张素II类似物,用超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,进行离心;加入生物素原液,混匀,进行标记;
标记反应结束后,加入封闭缓冲液;封闭后用超滤离心管进行超滤离心,超滤结束后,得到生物素标记的血管紧张素II类似物;
步骤3、化学发光物质标记的血管紧张素II抗体的制备:
取血管紧张素II单克隆抗体,用超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,进行离心;加入吖啶酯原液,混匀,进行标记;
标记反应结束后,加入封闭缓冲液;封闭后用超滤离心管进行超滤离心,超滤结束后,得到化学发光物质标记的血管紧张素II抗体;
步骤4、分装步骤1-3制备的试剂,组装成所述试剂盒。
本发明的有益效果是:
本发明解决了现有血管紧张素II检测试剂盒测试耗时长,重复性差,稳定性差,灵敏度差,准确度差等问题。与现有技术相比,本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的优点是测试速度快,测试结果重复性好,试剂性能稳定,灵敏度高,测试结果准确等。具体的说:
1、本发明提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具,完成血管紧张素II的检测。经过实验,本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒检测灵敏度<2pg/mL,检测精度较高。
2、本发明提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒使用化学发光法检测血管紧张素II,检测速度快,重复性好。
3、本发明提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒使用生物素-亲和素体系,避免了类似物直接包被磁珠导致的磁珠凝集,解决了稳定性的问题。生物素-亲和素体系是通过链霉亲和素-生物素之间特异性相互作用,将生物素标记的类似物连接到磁微粒上。这一结合过程是在检测样本时发生的,试剂盒在使用之前,链霉亲和素包被的磁珠和生物素标记的类似物是分开存放的,因此可以避免类似物直接包被磁珠导致的磁珠凝集。
4、本发明提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒采用吖啶酯直接发光,提高了灵敏度。
5、本发明提供的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒使用的校准品和质控品,均溯源到国际标准物质,保证了测试结果的准确度。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1为用国际标准物质绘制的标准曲线。
图2为用迪瑞校准品绘制标准曲线。
1.用迪瑞试剂(迪瑞血管紧张素II校准品)测试国际标准物质的光量与国际标准物质理论浓度为横纵坐标,绘制标准曲线,曲线如图1所示:
国际标准物质理论浓度 | 迪瑞试剂测试光量 |
pg/mL | RLU |
0.00 | 1009109 |
2.00 | 928930 |
10.00 | 734674 |
50.00 | 323633 |
100.00 | 178074 |
200.00 | 89686 |
500.00 | 37930 |
1000.00 | 16446 |
2.用标准物质给主校准品赋值,再用主校准品给产品校准品和产品质控品赋值。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合附图和具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中描述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进,因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
针对现有技术存在的缺陷,本发明的目的是提供一种高效率、高稳定性的化学发光微粒子免疫测试剂盒。
本发明使用生物素-亲和素体系,避免了类似物直接包被磁珠导致的磁珠凝集,解决了稳定性的问题。生物素-亲和素体系是通过链霉亲和素-生物素之间特异性相互作用,将生物素标记的类似物连接到磁微粒上。这一结合过程是在检测样本时发生的,试剂盒在使用之前,链霉亲和素包被的磁珠和生物素标记的类似物是分开存放的,因此可以避免类似物直接包被磁珠导致的磁珠凝集。
本发明采用吖啶酯直接发光,提高了灵敏度。
本发明中使用的校准品和质控品,均溯源到国际标准物质,保证了测试结果的准确度。
本发明提供一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,包括:链霉亲和素磁微粒、生物素标记的血管紧张素II类似物和化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体。优选所述链霉亲和素磁微粒浓度>0.03%,所述生物素标记的血管紧张素II类似物浓度≥0.1μg/mL,所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体浓度≥0.05μg/mL。优选所述链霉亲和素磁微粒中的磁微粒的粒径为1-3μm。优选,所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中的化学发光物质为吖啶酯或吖啶酯衍生物。优选所述生物素标记的血管紧张素II类似物中的生物素与血管紧张素II类似物的摩尔比为1:1-10:1。优选所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中化学发光物质与血管紧张素II单克隆抗体的摩尔比为1:1-10:1。
本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒还包括:血管紧张素II校准品和血管紧张素II质控品。所述血管紧张素II校准品浓度为2-30pg/mL,体积为1mL。所述血管紧张素II质控品浓度为2-30pg/mL,体积为1mL。
本发明还提供一种上述所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
步骤1、链霉亲和素磁微粒制备
取链霉亲和素磁颗粒溶液,加入TBST溶液充分混匀后,放置于磁分离器上,直至上清无混浊,弃上清,留取磁颗粒,重复清洗3次后,用磁珠稀释缓冲液稀释后得到链霉亲和素磁微粒溶液;
步骤2、生物素标记的血管紧张素II类似物的制备:
取血管紧张素II类似物,用超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,进行离心;加入生物素原液,混匀,进行标记;
标记反应结束后,加入封闭缓冲液;封闭后用超滤离心管进行超滤离心,超滤结束后,得到生物素标记的血管紧张素II类似物;
步骤3、化学发光物质标记的血管紧张素II抗体的制备:
取血管紧张素II单克隆抗体,用超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,进行离心;加入吖啶酯原液,混匀,进行标记;
标记反应结束后,加入封闭缓冲液;封闭后用超滤离心管进行超滤离心,超滤结束后,得到化学发光物质标记的血管紧张素II抗体;
步骤4、分装步骤1-3制备的试剂,组装成所述试剂盒。
本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒用于血管紧张素II检测时,利用全自动化学发光免疫分析仪对血管紧张素II主校准品进行检测,绘制主校准曲线(参见图1和2),内置于射频卡;接着测试两点校准,对主校准曲线进行校准;接着测试质控品,质控品测试结果落在靶值范围内认为校准合格。测试实际样本,根据样本发光值计算样本浓度;最后对血管紧张素II全自动化学发光免疫分析系统进行性能(灵敏度、线性、精密度、干扰性)的评价。
本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具,完成血管紧张素II的检测。经过实验,本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒检测灵敏度<2pg/mL,检测精度较高。
此外,本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒还具有以下优点:
1.使用化学发光法检测血管紧张素II,检测速度快,重复性好。
2.使用生物素-亲和素体系,避免了类似物直接包被磁珠导致的磁珠凝集,解决了稳定性的问题。生物素-亲和素体系是通过链霉亲和素-生物素之间特异性相互作用,将生物素标记的类似物连接到磁微粒上。这一结合过程是在检测样本时发生的,试剂盒在使用之前,链霉亲和素包被的磁珠和生物素标记的类似物是分开存放的,因此可以避免类似物直接包被磁珠导致的磁珠凝集。
3.采用吖啶酯直接发光,提高了灵敏度。
4.本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒中使用的校准品和质控品,均溯源到国际标准物质,保证了测试结果的准确度。
实施例1
本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备:
(1)链霉亲和素磁微粒制备
取链霉亲和素磁颗粒溶液,加入TBST溶液充分混匀后,放置于磁分离器
上,直至上清无混浊,弃上清,留取磁颗粒,重复清洗3次后,用磁珠稀
释缓冲液稀释后得到浓度为0.05%的链霉亲和素磁微粒溶液;(2)生物素标
记的血管紧张素II类似物的制备:
取500μg血管紧张素II类似物,用30KDa超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,离心机转速为9000rpm,离心时间为30min。标记缓冲液为20mmol/L PB,150mmol/L NaCl,pH8.0。
按照生物素:血管紧张素II类似物摩尔比为10:1加入生物素原液,混匀,37℃,标记4h。
标记反应结束后,加入封闭缓冲液,封闭时间为1h。封闭缓冲液为20mmol/LPB,150mmol/L NaCl,10%赖氨酸,pH8.0。
封闭后用30KDa超滤离心管进行超滤离心,除去未偶联的生物素分子。超滤结束后,测定蛋白浓度,作为中间品保存。用于试剂配制。
取适量的中间品和试剂缓冲液,配制成抗体浓度为0.5μg/mL的R3试剂。
(3)化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体的制备:
取500μg血管紧张素II单克隆抗体,用30KDa超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,离心机转速为9000rpm,离心时间为30min。标记缓冲液为20mmol/L PB,150mmol/L NaCl,pH8.0。
按照吖啶酯:血管紧张素II单克隆抗体摩尔比为10:1加入吖啶酯原液,混匀,37℃,标记4h。
标记反应结束后,加入封闭缓冲液,封闭时间为1h。封闭缓冲液为20mmol/L PB,150mmol/L NaCl,10%赖氨酸,pH8.0。
封闭后用30KDa超滤离心管进行超滤离心,除去未偶联的吖啶酯分子。超滤结束后,测定蛋白浓度,作为中间品保存。用于试剂配制。
取适量的中间品和试剂缓冲液,配制成抗体浓度为0.5μg/mL的试剂。
实施例2
血管紧张素II化学发光免疫检测方法
以全自动化学发光免疫分析仪(CM-180)为检测工具,方法学模式为竞争法,即仪器依次加入20μL的样品、50μL的化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体,反应10min后,再加50μL的生物素标记的血管紧张素II类似物、40μL链霉亲和素磁微粒,反应10min后,进行磁分离,加入清洗液清洗5次,仪器将反应复合物送入检测器,依次加入预激发液和激发液进行发光反应,采集光信号,记录发光值。
实施例3
实施例1制备的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒性能评价
灵敏度的检测:
参照CLSI EP17-A文件推荐实验方案,计算定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的灵敏度,求得的灵敏度<2pg/mL。
线性的检测:
对浓度为0pg/mL、2.00pg/mL、10.00pg/mL、50.00pg/mL、100.00pg/mL、200.00pg/mL、500.00pg/mL、1000.00pg/mL标准品做线性分析,计算线性相关系数,r=0.999,另外,该试剂盒对血管紧张素II样品检测的线性范围为10-1000pg/mL。
精密度测定:
取浓度为50pg/mL的低浓度血管紧张素II样品和200pg/mL高浓度血管紧张素II样品,每个样本每个浓度各做3次平行测试,用3批试剂盒进行检测,计算试剂盒批内及批间差,结果表明该试剂盒批内及批间差均<5%。
干扰性实验:
取混合血清分别添加干扰物,包括:胆红素、血红蛋白、甘油三酯、人白蛋白,其中胆红素浓度为30mg/dL,血红蛋白浓度为500mg/dL,甘油三酯浓度为3000mg/dL,人白蛋白浓度为12g/L,分别测定添加干扰物质的血清和未添加干扰物质的血清,计算测试偏差,偏差<±15%。结果表明,本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒干扰性均达到NCCLS的文件标准,可用于临床实验室血管紧张素II状况的准确评估。
实施例4
本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备:
(1)链霉亲和素磁微粒制备
取链霉亲和素磁颗粒溶液,加入TBST溶液充分混匀后,放置于磁分离器
上,直至上清无混浊,弃上清,留取磁颗粒,重复清洗3次后,用磁珠稀
释缓冲液稀释后得到浓度为0.1%的链霉亲和素磁微粒溶液;
(2)生物素标记的血管紧张素II类似物的制备:
取500μg血管紧张素II类似物,用30KDa超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,离心机转速为9000rpm,离心时间为30min。标记缓冲液为20mmol/L PB,150mmol/L NaCl,pH8.0。
按照生物素:血管紧张素II类似物摩尔比为1:1加入生物素原液,混匀,37℃,标记4h。
标记反应结束后,加入封闭缓冲液,封闭时间为1h。封闭缓冲液为20mmol/L PB,150mmol/L NaCl,10%赖氨酸,pH8.0。
封闭后用30KDa超滤离心管进行超滤离心,除去未偶联的生物素分子。超滤结束后,测定蛋白浓度,作为中间品保存。用于试剂配制。
取适量的中间品和试剂缓冲液,配制成抗体浓度为0.1μg/mL的试剂。
(3)化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体的制备:
取500μg血管紧张素II单克隆抗体,用30KDa超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,离心机转速为9000rpm,离心时间为30min。标记缓冲液为20mmol/L PB,150mmol/L NaCl,pH8.0。
按照吖啶酯:血管紧张素II单克隆抗体摩尔比为1:1加入吖啶酯原液,混匀,37℃,标记4h。
标记反应结束后,加入封闭缓冲液,封闭时间为1h。封闭缓冲液为20mmol/L PB,150mmol/L NaCl,10%赖氨酸,pH8.0。
封闭后用30KDa超滤离心管进行超滤离心,除去未偶联的吖啶酯分子。超滤结束后,测定蛋白浓度,作为中间品保存。用于试剂配制。
取适量的中间品和试剂缓冲液,配制成抗体浓度为0.05μg/mL的试剂。
本实施例的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具,完成血管紧张素II的检测。经过实验,本发明的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒检测灵敏度<2pg/mL,检测精度较高
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,包括:链霉亲和素磁微粒、生物素标记的血管紧张素II类似物和化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,所述链霉亲和素磁微粒浓度>0.03%,所述生物素标记的血管紧张素II类似物浓度≥0.1μg/mL,所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体浓度≥0.05μg/mL。
3.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,所述链霉亲和素磁微粒中的磁微粒的粒径为1-3μm。
4.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中的化学发光物质为吖啶酯或吖啶酯衍生物。
5.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,所述生物素标记的血管紧张素II类似物中的生物素与血管紧张素II类似物的摩尔比为1:1-10:1。
6.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,所述化学发光物质标记的血管紧张素II单克隆抗体中化学发光物质与血管紧张素II单克隆抗体的摩尔比为1:1-10:1。
7.根据权利要求1所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,还包括:血管紧张素II校准品和血管紧张素II质控品。
8.根据权利要求7所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,所述血管紧张素II校准品浓度为2-30pg/mL,体积为1mL。
9.根据权利要求7所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒,其特征在于,所述血管紧张素II质控品浓度为2-30pg/mL,体积为1mL。
10.一种权利要求1-6任意一项所述的定量检测血管紧张素II含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1、链霉亲和素磁微粒制备
取链霉亲和素磁颗粒溶液,加入TBST溶液充分混匀后,放置于磁分离器上,直至上清无混浊,弃上清,留取磁颗粒,重复清洗3次后,用磁珠稀释缓冲液稀释后得到链霉亲和素磁微粒溶液;
步骤2、生物素标记的血管紧张素II类似物的制备:
取血管紧张素II类似物,用超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,进行离心;加入生物素原液,混匀,进行标记;
标记反应结束后,加入封闭缓冲液;封闭后用超滤离心管进行超滤离心,超滤结束后,得到生物素标记的血管紧张素II类似物;
步骤3、化学发光物质标记的血管紧张素II抗体的制备:
取血管紧张素II单克隆抗体,用超滤离心管进行超滤离心,将缓冲液置换为标记缓冲液,进行离心;加入吖啶酯原液,混匀,进行标记;
标记反应结束后,加入封闭缓冲液;封闭后用超滤离心管进行超滤离心,超滤结束后,得到化学发光物质标记的血管紧张素II抗体;
步骤4、分装步骤1-3制备的试剂,组装成所述试剂盒。
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