CN111505304A - 一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒及使用方法 - Google Patents

一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒及使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明适用于生物技术领域，具体涉及一种化学发光法检测半乳糖凝集素‑3的试剂盒，其特征在于，包括：包被有抗Galectin‑3单克隆抗体的发光板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin‑3单克隆抗体溶液、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、发光液A、发光液B、标准品稀释液以及检测抗体稀释液。本发明实施例提供的试剂盒灵敏度较高、均一性良好，稳定性高、特异性好，可实现对临床血清样本中Galectin‑3的快速定量检测，以满足判断心力衰竭严重程度，分期或预测疾病后果，或监视用药效果等临床或科研需要。

Description

一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒及使用方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒。
背景技术
心力衰竭是由于心脏结构或功能异常导致心室充盈和(或)射血能力障碍为特征的一种临床综合征。临床主要表现为呼吸困难、乏力以及水钠潴留(肺淤血、外周水肿)。调查显示，心力衰竭已成为我国心血管疾病首要死亡原因(59％)，因此探索诊断心力衰竭的新的生化标志物检测指标具有重要意义。在心室重构中，心脏和心脏以外组织器官分泌的一些物质与心力衰竭的进展和不良预后密切相关，有的甚至起着决定性作用。因此寻找精确、有效的标志物来诊断心力衰竭，对心力衰竭患者的预后具有重要临床价值。半乳糖凝集素-3(Galectin-3)是近年来发现的新兴标志物，他们可以对传统标志物，比如B型利钠肽(BNP)等诊断心力衰竭具有一定的补充作用，可为临床对心力衰竭的危险评估和精确评估提供一些线索。
Galectins，即β-半乳糖血凝素超家族，是一类钙非依赖性的糖结合蛋白，具有高度保守性。目前，已发现该家族有14个成员，根据发现的先后顺序依次编号为1-14。Galectins家族的每个成员都具有以下特性：(1)具有特征性的氨基酸序列：每个Galectin家族成员至少包含一个由约130个氨基酸组成的糖识别结构域(CRD)；(2)具有对β-半乳糖苷的亲和性。根据Galectins的分子结构特点，可以将其分为3组：(1)原型，即含有一个CRD的单体，以单体(Galectin-5，-7，-10)或二聚体(Galectin-1，-2，-11，-13，-14)的形式存在；(2)嵌合体型，由一个糖基与一个非糖基配体交联结合而成(Galectin-3)；(3)串联重复型，由两个CRD串联融合而成(Galectin-4，-6，-8，-9，-12)。
Galectin-3，是Galectins家族唯一的嵌合体成员，由一个糖基与一个非糖基配体交联结合而成，分子量为32KD，在人类基因组中由单个基因编码，位于14号染色体q21-22位点，总长约17KD。Galectin-3包括3个结构域，NH2末端结合域，即1个糖结构识别域和1个特有的富含甘氨酸、脯氨酸和酪氨酸重复序列的结构域；NH2末端结合域包括控制细胞靶向的12个氨基酸残基，为与具有糖轭合物的细胞表面结合时发挥多种功能所必需；羧基末端的糖结合域可被胰蛋白酶裂解为包含140个氨基酸残基的糖结构识别域。
作为一种多功能的蛋白，Galectin-3广泛分布于心脏、肾脏、肝脏、肺脏以及肠道等组织器官以及成骨细胞、上皮细胞和肠组织等各种组织和细胞中，并在激活的巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞等血液细胞中高表达。根据细胞类型，Galectin-3可存在于细胞浆、细胞核、细胞膜或细胞外基质，其在细胞内的分布依赖于细胞的增值状态。在静止期细胞，Galectin-3主要分布在胞浆；在增殖期细胞，Galectin-3主要分布在细胞核。Galectin-3可通过非经典分泌途径分泌到细胞外，与细胞表面受体和糖蛋白相互作用，参与跨膜信号转导。
Galectin-3可参与细胞生长、细胞黏附、细胞凋亡、炎性反应、免疫调节、新血管形成、肿瘤分化转移等各种生理和病理过程。研究表明，Galectin-3作为一种重要的促有丝分裂原能在旁分泌方式下通过凝集素-碳水化合物相互作用来刺激肌成纤维细胞的增值和胶原合成。Galectin-3表达与上皮细胞以及包括巨噬细胞，嗜中性细胞和肥大细胞等在内的免疫细胞相关。Galectin-3参与心力衰竭(HF)相关的多种重要的生物学过程，如肌成纤维细胞增生、纤维化、组织修复、心脏重塑和炎症反应等。
多项研究显示，随着心力衰竭程度的加重，血浆Galectin-3的表达水平呈逐步升高趋势，与健康对照组比较，差异具有统计学意义。心力衰竭组心功能Ⅲ级、Ⅳ级患者血浆Galectin-3水平较健康对照组升高，提示Galectin-3水平的升高可能提示心力衰竭失代偿，可能成为评价心功能分级的新的生物学标志物和治疗新靶点。由于血液或血清等体液中Galectin-3的含量能够反映人体的疾病状况，所以准确定量Galectin-3可以用来鉴定或预测疾病，满足评估疾病的严重程度，分期或预测疾病后果，或监视用药效果等临床或科研需要。
目前，Galectin-3常用的检测方法为酶联免疫法(ELISA)，酶联免疫法检测的准确度较高，但是检测过程繁琐，耗时较长。
胶乳增强透射免疫比浊检测(PETIA)技术是在胶乳凝集定性试验基础上发展建立的一种非放射性均相免疫测定法，可以对各种微量的抗原物质和小分子半抗原进行精确的定量测定，目前越来越多的应用到临床实验室中。与ELISA技术相比，PETIA有效的提高检测速度和降低检测成本。然而，半乳糖凝集素-3的定量检测分析需要较高的灵敏度，因此需要对PETIA技术参数进行优化以达到检测要求。
由于Galectin-3与其它14种哺乳动物半乳糖凝集素，特别是在保守的糖类识别结构域(CRD)中共有高度的序列相似性，目前还没有检测方法可将Galectin-3与其它半乳糖凝集素相区别。而且由于Galectin-3有结合不同的蛋白质、糖类、核酸和脂质的倾向性，阻碍了开发特异性、可重现的检测方法。
综上，亟待提供一种特异性好、稳定性高的定量人血清中Galectin-3的检测方法，以满足判断心力衰竭严重程度，分期或预测疾病后果，或监视用药效果等临床或科研的需要。
发明内容
本发明实施例提供一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，采用该试剂盒进行半乳糖凝集素-3临床检测，特异性好、稳定性高。
本发明实施例提供的一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，包括：包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体溶液、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、发光液A、发光液B、标准品稀释液以及检测抗体稀释液。
本发明实施例还提供一种上述化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒的使用方法，包括：
(1)配制如下溶液：
用检测抗体稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体，使辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体与抗体稀释液比例为1:30000；
用标准品稀释液溶解标准品，得到多个浓度梯度变化的标准品溶液；
将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水按照1:20的体积比稀释得到洗涤液。
(2)绘制标准曲线
在包被有抗H-FABP单克隆抗体的酶标板的相应孔中分别加入校准品溶液25μL，然后每孔加入样本稀释液150μL，轻轻振荡混匀；
封板膜封板后置37℃温育30分钟，将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
每孔分别加入辣根过氧化物酶标记的抗Galectin-3单克隆抗体100μL，轻轻振荡混匀；
用封板膜封板后置37℃温育30分钟，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
每孔加入发光液A、B液各25μL，轻轻振荡混匀；
用空白孔调零点后，使用发光仪测定各孔光密度值；
使用双对数log-log线性拟和方式进行数据处理，以各校准品的光密度值的对数为纵坐标，各校准品的浓度的对数为横坐标作图，得到标准曲线；
(3)待测样本检测
在包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板的相应孔中分别加入待测样品25μL，，然后每孔加入样本稀释液150μL，轻轻振荡混匀；
用封板膜封板后置37℃温育30分钟，将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
加入辣根过氧化物酶标记的抗Galectin-3单克隆抗体100μL，轻轻振荡混匀；
用封板膜封板后置37℃温育30分钟，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
加入发光液A、B液各25μL，轻轻振荡混匀；
用空白孔调零点后，使用发光仪测定各孔光密度值；
将待测样本溶液的光密度值代入标准曲线，得到待测样本溶液中Galectin-3的含量。
本发明实施例提供的试剂盒灵敏度较高，试剂盒的最低检测限低至0.03ng/mL；均一性良好，稳定性高，批内变异系数小于10％，批间变异系数都小于5％；特异性好，试剂盒与血清中易干扰测试的可溶性ST2、N末端B型利钠肽原(NTproBNP)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)交叉反应很低，不会对Galectin-3的测量造成干扰；可实现对临床血清样本中Galectin-3的快速定量检测，以满足判断心力衰竭严重程度，分期或预测疾病后果，或监视用药效果等临床或科研需要。
附图说明
图1是本发明实施例提供标准曲线示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，包括：包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体溶液、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、发光液A、发光液B、标准品稀释液以及检测抗体稀释液。
在本发明实施例中，所述包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板按照如下方法制备：将抗Galectin-3单克隆抗体溶于缓冲液中，至抗Galectin-3单克隆抗体浓度为2μg/mL，得到混合液；将所述混合液加入微孔板的孔中，每孔100μL；加盖板膜，2-8℃放置18-24小时，用0.5％Tween20-PBS洗涤1次；向每孔中加入封闭液，每孔110μL；在2-8℃放置18-24小时，扣干；置25-35℃干燥间内，湿度<30％，干燥时间20-24小时，铝箔袋封装板子，2～8℃保存，即得；所述缓冲液为100mmol/L、PH＝9.6CB的碳酸盐缓冲液；所述封闭液的溶剂是20mmol/L、pH＝7.4的酸盐缓冲液，溶质及其在所述封闭液中的浓度如下：质量分数为3％的BSA、质量分数为0.5％的酪蛋白、质量分数为8％的蔗糖、150mmol/L的NaCl以及质量分数为0.1％的防腐剂Proclin-300。
在本发明实施例中，抗Galectin-3单克隆抗体，优选上海瑞齐生物科技有限公司生产的。
在本发明实施例中，所述辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体溶液按照如下方法制备：抗Galectin-3单克隆抗体纯化、定量后，在0.01mol/L、pH＝9.0-9.5的碳酸盐缓冲溶液中透析，的到终浓度为5mg/mL的抗Galectin-3单克隆抗体溶液；取辣根过氧化物酶溶解于水，制得终浓度为5mg/mL的辣根过氧化物酶水溶液；向所述辣根过氧化物酶水溶液中加入NaIO4，NaIO4的浓度为37.5mg/mL，室温避光搅拌20min，得到氧化后的酶液；所述氧化后的酶液在1mmol/L、pH＝4.4的醋酸盐缓冲液中、4℃透析过夜，换液3次；取出透析袋中溶液，加入0.2mol/L的Na2CO3缓冲溶液，调至pH＝9.0-9.5，并迅速与所述抗H-FABP单克隆抗体溶液按照体积比1:1混合，室温避光轻微搅拌2h；加入新配的6mg/mL NaBH4溶液100ul，混匀，4℃反应2h，于0.15mol/L、pH＝7.4碳酸盐缓冲溶液中、4℃透析过夜，换液3次；加入牛血清白蛋白使牛血清白蛋白终浓度为2-3mg/mL，在转速为10000rpm下混合3min，收集上清，分装冻存，即得。
在本发明实施例中，所述标准品为Galectin-3抗原(牛Galectin-3蛋白)，优选上海瑞齐生物科技有限公司生产的。
在本发明实施例中，所述样本稀释液的组成：所述样本稀释液的溶剂是20mmol/L、pH＝6.0的碳酸盐缓冲溶液，溶质及其在所述样本稀释液中的浓度如下：质量分数0.2％的明胶、质量分数0.2％的酪蛋白、150mmol/L的NaCl、质量分数0.01％的Tween-20、质量分数5％的蔗糖、质量分数0.5/万的溴钾酚紫以及质量分数0.1％的防腐剂Proclin-300。
在本发明实施例中，浓缩洗涤液的组成：浓缩洗涤液的组成的溶剂是水，溶质及其在所述浓缩洗涤液中的浓度如下：116g/L的Na2HPO4·12H2O、11.84g/L的NaH2PO4·2H2O、180g/L的NaCl、5mL/L的吐温20以及1mL/L的防腐剂Proclin-300。
在本发明实施例中，所述发光液A的溶剂为pH＝8.0、0.2mol/L的Tri s-HCl缓冲液，所述溶质及其在所述发光液A中的浓度如下：鲁米诺3mg/mL、对碘苯酚3mg/mL以及四苯硼钠0.5mg/mL；所述发光液B的溶剂为pH＝8.0、0.2mol/L的Tri s-HCl缓冲液，所述溶质及其在所述发光液B中的浓度如下：过氧化脲0.5mg/mL。
在本发明实施例中，标准品稀释液的组成：所述标准品稀释液的溶剂是20mmol/L、pH＝7.4的碳酸盐缓冲溶液，溶质及其在所述标准品稀释液中的浓度如下：质量分数1％的酪蛋白、质量分数8％的海藻糖、质量分数3％的甘露醇、1mmol/L的EDTA、质量分数0.5％的甘氨酸、150mmol/L的NaCl以及质量分数0.1％的防腐剂Proclin-300。
在本发明实施例中，检测抗体稀释液的组成：所述检测抗体稀释液的溶剂是20mmol/L、pH＝7.4的碳酸盐缓冲溶液，溶质及其在所述检测抗体稀释液中的浓度如下：质量分数2％的牛血清白蛋白、质量分数0.1％的酪蛋白、150mmol/L的NaCl、质量分数0.01％的吐温20、质量分数5/1万的氨基比啉、质量分数1/20万的染料以及质量分数0.1％的防腐剂Proclin-300。
在本发明实施例中，所述染料优选为食品红。
如下，本发明实施例提供一种标准曲线的绘制方法，将待测样本溶液的光密度(OD，optical density)值代入标准曲线，即可得到待测样本溶液中心型脂肪酸结合蛋白的含量。
(1)配制如下溶液：
用检测抗体稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体，使辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体与抗体稀释液比例为1:30000；
用标准品稀释液溶解标准品，得到标准品溶液的浓度分别为0ng/mL、2ng/mL、6ng/mL、12ng/mL、25ng/mL、50ng/mL；
将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水按照1:20的体积比稀释得到洗涤液。
(2)绘制标准曲线
在包被有抗H-FABP单克隆抗体的酶标板的相应孔中分别加入校准品溶液25μL，然后每孔加入样本稀释液150μL，轻轻振荡混匀；
封板膜封板后置37℃温育30分钟，将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
每孔分别加入辣根过氧化物酶标记的抗Galectin-3单克隆抗体100μL，轻轻振荡混匀；
用封板膜封板后置37℃温育30分钟，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
每孔加入发光液A、B液各25μL，轻轻振荡混匀；
用空白孔调零点后，使用发光仪测定各孔光密度值；为了保证检测效果，优选的，加入发光液后的5分钟内完成观密度值测定。
使用双对数log-log线性拟和方式进行数据处理，以各校准品的光密度值的对数为纵坐标，各校准品的浓度的对数为横坐标作图，得到标准曲线；如图1所示，标准曲线的方程式为y＝0.9707x+4.6749，相关系数为0.9994。
如下，本发明实施例还提供一种待测样本溶液中H-FABP的含量检测方法。
在包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板的相应孔中分别加入待测样品25μL，，然后每孔加入样本稀释液150μL，轻轻振荡混匀；
用封板膜封板后置37℃温育30分钟，将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
加入辣根过氧化物酶标记的抗Galectin-3单克隆抗体100μL，轻轻振荡混匀；
用封板膜封板后置37℃温育30分钟，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
加入发光液A、B液各25μL，轻轻振荡混匀；
用空白孔调零点后，使用发光仪测定各孔光密度值；为了保证检测效果，优选的，加入发光液后的5分钟内完成观密度值测定。
将待测样本溶液的光密度值代入标准曲线，得到待测样本溶液中Galectin-3的含量。
待测样本为新鲜血清或是新鲜血浆样本，静脉采血后24小时内分离。血清血浆样本在4℃储存时间不得超过1周。如果无法在采血后1周内进行测定，则将血清样本密封后，置于-20℃以下，避免反复冻融。严重溶血、脂血样本不得用于检测。
通过如下方法，对本发明实施例提供的试剂盒进行性能测试。分别选取三个批次的试剂盒，批次一、批次二和批次三，进行性能测试。
一：最低检测限
取包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板，每孔加入25μL标准品和150μL样品稀释液，轻轻振荡混匀；置37℃温育30分钟，洗板5次，每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体溶液100μL，置37℃温育30分钟，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；每孔加入25μL发光液A和25μL发光液B，使用发光仪进行测定各孔发光值。
其中，每个待测试剂盒，空白标准品溶液设置20个复孔，其它标准品设置为双孔，各孔的发光值见表1。
表1：
Figure BDA0001965673350000091
Figure BDA0001965673350000101
根据各校准点OD值及相应浓度使用双对数log-log线性拟和方式进行数据处理。计算20孔25μL S0溶液相应的发光值的平均值(Mean)和标准差(SD)，由拟合方程计算出发光值为Mean+2×SD时的浓度值为最低检测限。
三个批次的试剂盒的最低检测限均在0.03ng/mL以下。
二、重复性和批间差
重复性是用同一批试剂盒测定一份样本得到的变异系数(CV)，每个标准品需在一块板内随机做10孔精密性测定，计算测定结果的平均浓度(Mean)与标准差(SD)，批内变异系数(CV)＝SD/Mean×100％。
批间差是不同批次试剂盒间的重复性，随机抽取三批试剂盒，用这些试剂盒测定标准品3次，计算测定结果的平均浓度(Mean)与标准差(SD)，批间变异系数(CV)＝SD/Mean×100％。标准品为Galectin-3。
具体检测过程如下：
取包被有被抗Galectin-3单克隆抗体的发光板，每孔加入25μL特定溶液和150μL样品稀释液，轻轻振荡混匀；置37℃温育30分钟，洗板5次；每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体溶液100μL，置37℃温育30分钟，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；每孔加入25μL发光液A和25μL发光液B，使用发光仪进行测定各孔发光值。
特定溶液为特定溶液甲或特定溶液乙。
特定溶液甲为S0溶液(标准品的浓度为0ng/mL)、S1溶液(标准品的浓度为2ng/mL)、S2溶液(标准品的浓度为6ng/mL)、S3溶液(标准品的浓度为12ng/mL)、S4溶液(标准品的浓度为25ng/mL)、S5溶液(标准品的浓度为50ng/mL)。每个待测试剂盒，每种特定溶液甲设置两个复孔。
特定溶液乙为与特定溶液甲不同浓度的标准品溶液。
标准品溶液的制备方法：将质控品溶于20mmol/L、pH＝7.4的PBS缓冲液，得到6ng/mL的低浓度标准品溶液溶液(QC1)和25ng/L的高浓度标准品溶液溶液(QC2)。每个待测试剂盒，每种特定溶液乙设置10个复孔。
采用特定溶液甲时，各孔的发光值见表2。
表2：
Figure BDA0001965673350000111
Figure BDA0001965673350000121
采用特定溶液乙时，各孔的发光值见表3。
表3：
QC1 QC2 QC1 QC2 QC1 QC2
复孔1 291125 1174580 293160 1275835 290755 1171110
复孔2 292055 1071520 288855 1174605 288810 1079430
复孔3 285835 1179270 304975 972500 291380 1149305
复孔4 296010 1145560 291915 1175875 275205 1171270
复孔5 287930 1176085 291035 1072530 288020 1179110
复孔6 282420 1177725 261100 1178540 301670 1253940
复孔7 292980 1098490 288810 1191865 293100 1178225
复孔8 291160 1176330 275900 1178425 289180 1178490
复孔9 275395 1175440 292485 1103410 291295 1101160
复孔10 292150 1235850 288220 1174145 288055 976345
使用双对数log-log线性拟和方式进行数据处理，根据标准曲线计算特定溶液乙中的Galectin-3浓度，结果见表4和表5，三个批次的试剂盒测定高浓度和低浓度两个质控，批内变异系数都小于10％，表明试剂盒的均一性良好，结果具有重复性。
表4：
Figure BDA0001965673350000122
Figure BDA0001965673350000131
表5：
QC1 QC2
第一批 6.13 25.39
第二批 6.04 24.75
第三批 6.18 25.04
平均值 6.12 25.06
SD 0.073 0.321
CV 1.20％ 1.28％
用三批试剂盒测定高浓度和低浓度两个质控品，批间变异系数都小于5％，表明不同批次的试剂盒之间变异很小，测量结果具有重复性。
综上所述，本发明提供的试剂盒的主要性能指标的标准如下：
最低检测限：不高于0.03ng/mL；
重复性：批内变异系数不高于10％；
批间差：批间变异系数不高于5％。
三、特异性
取包被有被抗Galectin-3单克隆抗体的发光板，每孔加入25μL特定溶液和150μL样品稀释液，轻轻振荡混匀；置37℃温育30分钟，洗板5次；每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测用抗H-FABP单克隆抗体溶液100μL，置37℃温育30分钟，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；每孔加入25μL发光液A和25μL发光液B，使用发光仪进行测定各孔发光值。
特定溶液为S0溶液(标准品的浓度为0ng/mL)、S1溶液(标准品的浓度为2ng/mL)、S2溶液(标准品的浓度为6ng/mL)、S3溶液(标准品的浓度为12ng/mL)、S4溶液(标准品的浓度为25ng/mL)、S5溶液(标准品的浓度为50ng/mL)、可溶性ST2、N末端B型利钠肽原(NTproBNP)以及高敏C反应蛋白(hs-CRP)。每个待测试剂盒，每种特定溶液设置两个复孔。
其中，可溶性ST2为3pg/mL的ST2标本溶液、N末端B型利钠肽原(NTproBNP)为10ng/mL的NTproBNP标本溶液以及高敏C反应蛋白(hs-CRP)为10ng/mL的hs-CRP标本溶液。
根据各校准点发光值及相应浓度作双对数Log-Log线性拟合。根据标准曲线计算各交叉反应物质的Galectin-3测值，此浓度为本试剂与ST2、NTproBNP以及hs-CRP的交叉值。
各孔的发光值和反推浓度见表6。
Figure BDA0001965673350000141
Figure BDA0001965673350000151
特异性是为了检测血液中其它物质对试剂盒测量的干扰，在人血液中容易对Galectin-3的测量造成干扰的物质有可溶性ST2、N末端B型利钠肽原(NTproBNP)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)，用高浓度的这些物质进行实验，参考表6和表7，试剂盒与这些物质的交叉反应很低，不会对Galectin-3的测量造成干扰。
表7：
Figure BDA0001965673350000152
综上所述，本发明试剂盒灵敏度较高，试剂盒的最低检测限低至0.03ng/mL；均一性良好，稳定性高，批内变异系数小于10％，批间变异系数都小于5％；特异性好，试剂盒与血清中易干扰测试的可溶性ST2、N末端B型利钠肽原(NTproBNP)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)交叉反应很低，不会对Galectin-3的测量造成干扰；可实现对临床血清样本中Galectin-3的快速定量检测，以满足判断心力衰竭严重程度，分期或预测疾病后果，或监视用药效果等临床或科研需要。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，包括：
包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体溶液、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、发光液A、发光液B、标准品稀释液以及检测抗体稀释液。
2.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，所述包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板按照如下方法制备：
将抗Galectin-3单克隆抗体溶于缓冲液中，至抗Galectin-3单克隆抗体浓度为2μg/mL，得到混合液；
将所述混合液加入微孔板的孔中，每孔100μL；加盖板膜，2-8℃放置18-24小时，用0.5％Tween20-PBS洗涤1次；向每孔中加入封闭液，每孔110μL；在2-8℃放置18-24小时，扣干；置25-35℃干燥间内，湿度<30％，干燥时间20-24小时，铝箔袋封装板子，2～8℃保存，即得；
所述缓冲液为100mmol/L、PH＝9.6CB的碳酸盐缓冲液；
所述封闭液的溶剂是20mmol/L、pH＝7.4的酸盐缓冲液，溶质及其在所述封闭液中的浓度如下：质量分数为3％的BSA、质量分数为0.5％的酪蛋白、质量分数为8％的蔗糖、150mmol/L的NaCl以及质量分数为0.1％的防腐剂Proclin-300。
3.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体溶液按照如下方法制备：
抗Galectin-3单克隆抗体纯化、定量后，在0.01mol/L、pH＝9.0-9.5的碳酸盐缓冲溶液中透析，得到终浓度为5mg/mL的抗Galectin-3单克隆抗体溶液；
取辣根过氧化物酶溶解于水，制得终浓度为5mg/mL的辣根过氧化物酶水溶液；
向所述辣根过氧化物酶水溶液中加入NaIO4，NaIO4的浓度为37.5mg/mL，室温避光搅拌20min，得到氧化后的酶液；
所述氧化后的酶液在1mmol/L、pH＝4.4的醋酸盐缓冲液中、4℃透析过夜，换液3次；
取出透析袋中溶液，加入0.2mol/L的Na2CO3缓冲溶液，调至pH＝9.0-9.5，并迅速与所述抗H-FABP单克隆抗体溶液按照体积比1:1混合，室温避光轻微搅拌2h；
加入新配的6mg/mL NaBH4溶液100ul，混匀，4℃反应2h，于0.15mol/L、pH＝7.4碳酸盐缓冲溶液中、4℃透析过夜，换液3次；
加入牛血清白蛋白使牛血清白蛋白终浓度为2-3mg/mL，在转速为10000rpm下混合3min，收集上清，分装冻存，即得。
4.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，所述标准品为Galectin-3抗原。
5.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液的组成：所述样本稀释液的溶剂是20mmol/L、pH＝6.0的碳酸盐缓冲溶液，溶质及其在所述样本稀释液中的浓度如下：质量分数0.2％的明胶、质量分数0.2％的酪蛋白、150mmol/L的NaCl、质量分数0.01％的Tween-20、质量分数5％的蔗糖、质量分数为0.5/万的溴钾酚紫以及质量分数0.1％的防腐剂Proclin-300。
6.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，浓缩洗涤液的组成：浓缩洗涤液的组成的溶剂是水，溶质及其在所述浓缩洗涤液中的浓度如下：116g/L的Na2HPO4·12H2O、11.84g/L的NaH2PO4·2H2O、180g/L的NaCl、5mL/L的吐温20以及1mL/L的防腐剂Proclin-300。
7.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，所述发光液A的溶剂为pH＝8.0、0.2mol/L的Tri s-HCl缓冲液，所述溶质及其在所述发光液A中的浓度如下：鲁米诺3mg/mL、对碘苯酚3mg/mL以及四苯硼钠0.5mg/mL；所述发光液B的溶剂为pH＝8.0、0.2mol/L的Tri s-HCl缓冲液，所述溶质及其在所述发光液B中的浓度如下：过氧化脲0.5mg/mL。
8.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，标准品稀释液的组成：所述标准品稀释液的溶剂是20mmol/L、pH＝7.4的碳酸盐缓冲溶液，溶质及其在所述标准品稀释液中的浓度如下：质量分数1％的酪蛋白、质量分数8％的海藻糖、质量分数3％的甘露醇、1mmol/L的EDTA、质量分数0.5％的甘氨酸、150mmol/L的NaCl以及质量分数0.1％的防腐剂Proclin-300。
9.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，检测抗体稀释液的组成：所述检测抗体稀释液的溶剂是20mmol/L、pH＝7.4的碳酸盐缓冲溶液，溶质及其在所述检测抗体稀释液中的浓度如下：质量分数2％的牛血清白蛋白、质量分数0.1％的酪蛋白、150mmol/L的NaCl、质量分数0.01％的吐温20、质量分数5/1万的氨基比啉、质量分数1/20万的染料以及质量分数0.1％的防腐剂Proclin-300。
10.一种如权利要求1-9任一权利要求所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制如下溶液：
用检测抗体稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体，使辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体与抗体稀释液比例为1:30000；
用标准品稀释液溶解标准品，得到多个浓度梯度变化的标准品溶液；
将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水按照1:20的体积比稀释得到洗涤液。
(2)绘制标准曲线
在包被有抗H-FABP单克隆抗体的酶标板的相应孔中分别加入校准品溶液25μL，然后每孔加入样本稀释液150μL，轻轻振荡混匀；
封板膜封板后置37℃温育30分钟，将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
每孔分别加入辣根过氧化物酶标记的抗Galectin-3单克隆抗体100μL，轻轻振荡混匀；
用封板膜封板后置37℃温育30分钟，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
每孔加入发光液A、B液各25μL，轻轻振荡混匀；
用空白孔调零点后，使用发光仪测定各孔光密度值；
使用双对数log-log线性拟和方式进行数据处理，以各校准品的光密度值的对数为纵坐标，各校准品的浓度的对数为横坐标作图，得到标准曲线；
(3)待测样本检测
在包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板的相应孔中分别加入待测样品25μL，然后每孔加入样本稀释液150μL，轻轻振荡混匀；
用封板膜封板后置37℃温育30分钟，将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
加入辣根过氧化物酶标记的抗Galectin-3单克隆抗体100μL，轻轻振荡混匀；
用封板膜封板后置37℃温育30分钟，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；
加入发光液A、B液各25μL，轻轻振荡混匀；
用空白孔调零点后，使用发光仪测定各孔光密度值；
将待测样本溶液的光密度值代入标准曲线，得到待测样本溶液中Galectin-3的含量。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112062832A (zh) * 2020-09-24 2020-12-11 河南赛诺特生物技术有限公司 Galectin-3抗原表位肽、抗原、抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒
CN115746134A (zh) * 2021-10-15 2023-03-07 深圳市睿盟创新生物科技有限公司 半乳糖凝集素-3的免疫测定
CN112014567B (zh) * 2020-08-20 2023-11-17 金华科生物技术河北有限公司 超敏c反应蛋白测定试剂盒

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020076738A1 (en) * 2000-10-30 2002-06-20 Zarita Biotech Co., Ltd. Method and kit for predicting cancer
CN1687751A (zh) * 2005-05-25 2005-10-26 段虎 一种高稳定性增强化学发光底物
CN101819203A (zh) * 2010-03-26 2010-09-01 吉林大学 一种检测相思子毒素的化学发光试剂盒及其制备方法
CN102495211A (zh) * 2011-12-07 2012-06-13 河北省科学院生物研究所 β-呋喃果糖苷酶酶联免疫检测试剂盒
WO2013096845A2 (en) * 2011-12-21 2013-06-27 Integrated Diagnostics, Inc. Compositions, methods and kits for diagnosis of lung cancer
CN103487588A (zh) * 2013-09-18 2014-01-01 福建医科大学附属第一医院 Galectin-4蛋白在制备巨大肝癌术后预后评估试剂盒中的应用
CN103513038A (zh) * 2013-05-16 2014-01-15 武汉生之源生物科技有限公司 半乳糖凝集素3检测试剂盒及制备方法
CN104515855A (zh) * 2013-10-05 2015-04-15 倪润洲 检测Galectin-3的纳米磁珠分选-时间分辨免疫荧光试剂盒
CN104838271A (zh) * 2012-12-04 2015-08-12 霍夫曼-拉罗奇有限公司 心力衰竭疗法的选择中的生物标记物
CN106370835A (zh) * 2016-08-29 2017-02-01 中山大学孙逸仙纪念医院 皮肤离体样本的免疫组织化学染色检测galectin‑3 辅助诊断银屑病的方法
CN106771258A (zh) * 2017-02-16 2017-05-31 广州赛太特生物医学科技有限公司 一种半乳糖凝集素‑3结合蛋白的检测试剂盒及其方法和应用
CN107383192A (zh) * 2017-07-19 2017-11-24 深圳市倍诺博生物科技有限公司 半乳糖凝集素‑3检测试剂盒
CN107703303A (zh) * 2017-08-22 2018-02-16 广州恒泰生物科技有限公司 用于乳腺癌早中期快速诊断化学发光试剂盒

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020076738A1 (en) * 2000-10-30 2002-06-20 Zarita Biotech Co., Ltd. Method and kit for predicting cancer
CN1620612A (zh) * 2000-10-30 2005-05-25 自利他生物技术有限责任公司 预诊癌症的方法和试剂盒
CN1687751A (zh) * 2005-05-25 2005-10-26 段虎 一种高稳定性增强化学发光底物
CN101819203A (zh) * 2010-03-26 2010-09-01 吉林大学 一种检测相思子毒素的化学发光试剂盒及其制备方法
CN102495211A (zh) * 2011-12-07 2012-06-13 河北省科学院生物研究所 β-呋喃果糖苷酶酶联免疫检测试剂盒
WO2013096845A2 (en) * 2011-12-21 2013-06-27 Integrated Diagnostics, Inc. Compositions, methods and kits for diagnosis of lung cancer
CN104838271A (zh) * 2012-12-04 2015-08-12 霍夫曼-拉罗奇有限公司 心力衰竭疗法的选择中的生物标记物
CN103513038A (zh) * 2013-05-16 2014-01-15 武汉生之源生物科技有限公司 半乳糖凝集素3检测试剂盒及制备方法
CN103487588A (zh) * 2013-09-18 2014-01-01 福建医科大学附属第一医院 Galectin-4蛋白在制备巨大肝癌术后预后评估试剂盒中的应用
CN104515855A (zh) * 2013-10-05 2015-04-15 倪润洲 检测Galectin-3的纳米磁珠分选-时间分辨免疫荧光试剂盒
CN106370835A (zh) * 2016-08-29 2017-02-01 中山大学孙逸仙纪念医院 皮肤离体样本的免疫组织化学染色检测galectin‑3 辅助诊断银屑病的方法
CN106771258A (zh) * 2017-02-16 2017-05-31 广州赛太特生物医学科技有限公司 一种半乳糖凝集素‑3结合蛋白的检测试剂盒及其方法和应用
CN107383192A (zh) * 2017-07-19 2017-11-24 深圳市倍诺博生物科技有限公司 半乳糖凝集素‑3检测试剂盒
CN107703303A (zh) * 2017-08-22 2018-02-16 广州恒泰生物科技有限公司 用于乳腺癌早中期快速诊断化学发光试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M.ÁLVARO BERBÍS等: "Peptides derived from human galectin-3 N-terminal tail interact with its carbohydrate recognition domain in a phosphorylation-dependent manner" *
张春和 等: "健康成年人半乳糖凝集素-3参考范围调查" *
施雪莺;王瑛;彭健;高咏;: "Galectin-3检测在心力衰竭患者中的应用" *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112014567B (zh) * 2020-08-20 2023-11-17 金华科生物技术河北有限公司 超敏c反应蛋白测定试剂盒
CN112062832A (zh) * 2020-09-24 2020-12-11 河南赛诺特生物技术有限公司 Galectin-3抗原表位肽、抗原、抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒
CN115746134A (zh) * 2021-10-15 2023-03-07 深圳市睿盟创新生物科技有限公司 半乳糖凝集素-3的免疫测定
WO2023061388A1 (zh) * 2021-10-15 2023-04-20 深圳市睿盟创新生物科技有限公司 半乳糖凝集素-3的免疫测定

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