CN109187842A - 一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种沙棘中5‑羟色胺提取检验与含量测定的方法，涉及沙棘中吲哚衍生物的提取检验与含量测定领域，以沙棘果皮、果枝为原料，以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，加入无水乙醇，超声波微波提取，离心过滤，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合萃取浓缩，加乙酸乙酯溶解，充分溶解后加入超纯水，分液，取乙酸乙酯相浓缩至干，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，蒸发结晶测定熔点。本发明方法省时省力，分离效果较好，纯度高，结果准确，是一种操作简单、效率高的提取检验与含量测定的方法。

Description

一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法
技术领域
本发明涉及沙棘中吲哚衍生物的提取检验与含量测定领域，具体为一种沙棘中5-羟色胺的提取纯化与检验方法。
背景技术
沙棘，胡颓子科沙棘属，其化学成分主要有维生素类、蛋白质和氨基酸类、油和脂肪酸类、挥发油类、有机酸类、糖类、5-羟色胺、微量元素类、黄酮类、萜类及甾醇类等，生物活性物质有300种之多，其中，5-羟色胺以游离态和化合态存在于沙棘的根皮、茎皮和果实中。
5-羟色胺又名血清素，分子式为C10H12N2O，简称5-HT，广泛存在于哺乳动物组织中，特别在大脑皮层质及神经突触内含量很高，它是一种抑制性的神经递质，是一种吲哚衍生物。5-羟色胺对人类的身体健康至关重要，能增强大脑记忆力，并能保护神经元免受“兴奋神经毒素”的损害。5-羟色胺是一种能产生愉悦情绪的信使，几乎影响到大脑活动的每一个方面：从调节情绪、精力、记忆力到塑造人生观。5-羟色胺水平较低的人群更容易发生抑郁、冲动行为、酗酒、自杀、攻击及暴力行为。
5-羟色胺种类繁多，存在于动植物中。从加纳籽中提取分离5-HTP的方法在国内外已有很多报道，但这些方法普遍存在着操作步骤繁琐，有机溶剂用量大，不利于环境保护，溶剂和树脂单体残留等缺点。
为解决沙棘中5-羟色胺的提取检验与含量测定操作繁琐，避免了手动刮点、萃取、重组，进而在质谱上注射分析获取质谱图的过程耗时耗力，含量测定结果易受到干扰而不准确的问题，本发明提供了一种省时省力、易于操作的可快速从沙棘中提取检测5-羟色胺并测定含量的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，用以克服上述技术缺陷。
本发明是通过如下技术方案来实现的：一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，以沙棘果皮、果枝为原料，采用超声波微波萃取对5-羟色胺进行粗提取，经薄层层析法分离，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，测定旋光度、比旋光度和熔点；具体为：以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，离心过滤，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合萃取浓缩，加乙酸乙酯溶解，充分溶解后加入超纯水，分液，取乙酸乙酯相浓缩至干，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，分别获得果皮样品溶液、果枝样品溶液，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，蒸发结晶测定熔点。
进一步地，具体过程为：
步骤a，以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，取粉末分别加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，超声波功率恒定，获得提取液，以5000r/min离心，过滤，重复3次，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合后萃取，取甲醇相浓缩至固态，乙酸乙酯溶解，待充分溶解后再加入超纯水，待分液取乙酸乙酯相浓缩至干，获得5-羟色胺衍生物，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，备用；
步骤b，L-5-羟色胺标准品加乙醇溶解，定容，充分溶解后得到0.02mg/mL的L-5-羟色胺标准品溶液，并将其置于2～4℃的冰箱中保存备用；
步骤c，将层析板加热活化并冷却后，吸取样液，均匀点样，以正丁醇：冰醋酸：水=6:3:1(v/v)为沙棘果皮样品的展开剂，以正丁醇：冰醋酸：水=7:1:2(v/v)为沙棘果枝样品的展开剂，展开剂润洗倒入层析缸，保温20min，上行展开，待展开剂前沿距层析板顶端0.8～1.2cm处时，取出晾干，选取0.2％茚三酮乙醇溶液为显色剂，喷在晾干的层析板上，105℃保持4～5min，待其显色后取出，放入薄层色谱成像系统，于紫外波长254nm下，调节相应的曝光时间，光圈值，曝光率，观察层析情况，系统拍照，并标志；
步骤d，分别吸取25uL5-羟色胺标准品溶液、样品溶液，点样，5-羟色胺标准品溶液点样数量为2，点样量为4uL、5uL，样品溶液点样数量为3，点样量为3uL，利用TLC反射扫描法测得3组样品中5-羟色胺的含量，并计算提取率；
步骤e，将层析板放入TLC-CMS接口中，激光对准斑点中心处，各选样品和标准品色谱斑点进行检测，比对确定样品的分子信息；
步骤f，待测斑点加入无水乙醇溶解，过滤取滤液，打开傅里叶红外光谱仪选择相应的工作界面，用擦镜纸擦干净点样中心处，测试背景，待测液点于中心处，测试样品，对谱图界面出现的红外谱图进行处理分析。
步骤g，取待测液分别测定旋光度和比旋光度，记录数据并计算平均值；
步骤h，将待测液加热蒸发至样品结晶，测量熔点。
与现有技术相比较本发明的有益效果在于：采用超声波微波粗提取5-羟色胺，薄层层析保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率快，一般仅需15～20分钟；既适用于只有0.01μg的样品分离，又能分离大于500mg的样品作制备用，而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂，能实现对5-羟色胺的分离纯化，使得5-羟色胺准确分离，本发明采用Plate ExpressTM技术可直接从TLC薄层板上获取质谱图，其优点是不经过样品前处理，可快速从复杂混合物中获得目标物分子质量信息，并对其进行鉴定，是一种省时省力、易于操作的可快速从沙棘中提取检测5-羟色胺并测定含量的方法。
附图说明
图1为本发明的含量测定的流程图。
图2为沙棘果皮样品TLC图像，图中A为L-5-羟色胺标准品所在斑点位置，B为沙棘样液所在斑点位置，C为未知斑点。
图3为沙棘果枝样品TLC图像，图中A为L-5-羟色胺标准品所在斑点位置，B为沙棘样液所在斑点位置，C为未知斑点。
图4为5-羟色胺标准品质谱图。
图5为棘果皮样品质谱图。
图6为沙棘果枝样品质谱图。
图7为5-羟色胺标准品的红外光谱图。
图8为沙棘果皮样品的红外光谱图。
图9为沙棘果枝样品的红外光谱图。
图10为L-5-羟色胺的结构式。
图11为沙棘样品中5-羟色胺含量。
具体实施方式
以下结合附图，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。
一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，以沙棘果皮、果枝为原料，采用超声波微波萃取对5-羟色胺进行粗提取，经薄层层析法分离，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，测定旋光度、比旋光度和熔点；具体为：以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，离心过滤，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合萃取浓缩，加乙酸乙酯溶解，充分溶解后加入超纯水，分液，取乙酸乙酯相浓缩至干，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，分别获得果皮样品溶液、果枝样品溶液，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，蒸发结晶测定熔点。
请参阅图1所示，具体过程为：
步骤a，以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，取粉末分别加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，超声波功率恒定，获得提取液，以5000r/min离心，过滤，重复3次，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合后萃取，取甲醇相浓缩至固态，乙酸乙酯溶解，待充分溶解后再加入超纯水，待分液取乙酸乙酯相浓缩至干，获得5-羟色胺衍生物，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，备用；
步骤b，L-5-羟色胺标准品加乙醇溶解，定容，充分溶解后得到0.02mg/mL的L-5-羟色胺标准品溶液，并将其置于2～4℃的冰箱中保存备用；
步骤c，将层析板加热活化并冷却后，吸取样液，均匀点样，以正丁醇：冰醋酸：水=6:3:1(v/v)为沙棘果皮样品的展开剂，以正丁醇：冰醋酸：水=7:1:2(v/v)为沙棘果枝样品的展开剂，展开剂润洗倒入层析缸，保温20min，上行展开，待展开剂前沿距层析板顶端0.8～1.2cm处时，取出晾干，选取0.2％茚三酮乙醇溶液为显色剂，喷在晾干的层析板上，105℃保持4～5min，待其显色后取出，放入薄层色谱成像系统，于紫外波长254nm下，调节相应的曝光时间，光圈值，曝光率，观察层析情况，系统拍照，并标志；
步骤d，分别吸取25uL5-羟色胺标准品溶液、样品溶液，点样，5-羟色胺标准品溶液点样数量为2，点样量为4uL、5uL，样品溶液点样数量为3，点样量为3uL，利用TLC反射扫描法测得3组样品中5-羟色胺的含量，并计算提取率；
步骤e，将层析板放入TLC-CMS接口中，激光对准斑点中心处，各选样品和标准品色谱斑点进行检测，比对确定样品的分子信息；
步骤f，待测斑点加入无水乙醇溶解，过滤取滤液，打开傅里叶红外光谱仪选择相应的工作界面，用擦镜纸擦干净点样中心处，测试背景，待测液点于中心处，测试样品，对谱图界面出现的红外谱图进行处理分析；
步骤g，取待测液分别测定旋光度和比旋光度，记录数据并计算平均值；
步骤h，将待测液加热蒸发至样品结晶，测量熔点。
下面通过实施例进行说明。
实施例：
步骤a，5-羟色胺的粗提取：
将沙棘果皮、枝条阴干，粉碎，过40目筛筛选，装入玻璃器皿中保存。准确称取10g粉末分别加入无水乙醇，料液比为1:20(w/v)。超声波微波萃取仪分三阶段提取，时间为2min、3min、5min，温度为60℃、70℃、80℃，超声波功率恒定，微波功率为450W，超声波功率为700W，获得提取液。将提取液以5000r/min离心10min，过滤，重复3次并合并滤液。设置温度为77℃，转速30浓缩至1/4，加入200mL甲醇溶解，再加入200mL正己烷混合后萃取，取甲醇相于66℃，转速30浓缩至固态，加100mL乙酸乙酯溶解，待充分溶解后再加入100mL超纯水，待分液取乙酸乙酯相浓缩至干，获得5-羟色胺衍生物，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，分别获得果皮样品溶液、果枝样品溶液备用。
步骤b，5-羟色胺标准品的制备：
精确称量2mg的5-羟色胺标准品，加乙醇溶解，充分溶解后定容到100mL，得到0.02mg/mL的5-羟色胺标准品溶液，并将其置于2～4℃的冰箱中保存备用。
步骤c，薄层层析分离纯化5-羟色胺：
点样：活化后的100x100mm层析板冷却后，用玻璃毛细管（内径0.9-1.1mm，壁厚0.10-0.15mm）吸取样液，均匀点样。
展开：以正丁醇：冰醋酸：水=6:3:1(v/v)为沙棘果皮样品的展开剂，展开剂润洗薄层层析缸，将展开剂分别倒入层析缸中，密封摇晃均匀，于25℃恒温箱中保温20min。将点样后的层析板放入层析缸，待展开剂前沿跑到距离层析板约1cm处时，取出层析板晾干。
以正丁醇：冰醋酸：水=7:1:2(v/v)为沙棘果枝样品的展开剂，展开剂润洗薄层展开缸，将层析剂分别倒入层析缸中，密封摇晃均匀，于25℃恒温箱中保温20min。将点样后的层析板放入层析缸，待展开剂前沿跑到距离层析板约1cm处时，取出层析板晾干。
显色：选取0.2％茚三酮乙醇溶液为显色剂，将显色剂以雾状喷在晾干的层析板上，于105℃恒温保持4～5min，待其显色后取出。
检视：将显色的层析版放入薄层色谱成像系统，于紫外波长254nm下，调节相应的曝光时间，光圈值，曝光率，观察层析情况，在紫外灯下用铅笔画出待测品层析板中跑开各物质，系统拍照，并标志。
步骤d，反射扫描测定含量及提取率：
反射扫描测定含量：吸取25uL5-羟色胺标准品溶液，在10mm×10mm的层析板上点样，点样数量为2，点样量为4uL、5uL。吸取果皮样品溶液25uL，点样数量为3，点样量为3uL。利用TLC反射扫描法测得3组样品中5-羟色胺的含量。
计算提取率：
提取率=（沙棘果皮质量-乙醇浸提量-蒸干所得残渣质量）/沙棘果皮质量×100%；
其中：乙醇浸提量=沙棘果皮质量-乙醇浸提后蒸干的残渣质量；
步骤e，质谱检测：
将已显色供试品层析板放入TLC-CMS接口中，激光对准斑点中心处，各选样品和标准品色谱斑点进行检测，通过二者质谱图的比对确定样品的分子信息。
步骤f，红外检测：
用小刀轻刮层析板上待测斑点置于烧杯中，在烧杯中加入无水乙醇溶解，过滤取滤液，制得待测液，打开傅里叶红外光谱仪选择相应的工作界面，用擦镜纸擦干净点样中心处，测试背景，用毛细管吸取少量的待测液于点样中心处，测试样品，对谱图界面出现的红外谱图进行处理分析。
步骤g，比旋度、旋光度的测定：
比旋度的测定：将自动旋光仪调至模式2，设置参数，长度为1.0，浓度为1.000，复测次数6次，波长为1（589.3），开始测定，得出6组数据并计算平均值。
将自动旋光仪调至模式1，测定旋光度。设置参数，长度为1.0，比旋度为测量平均值，复测次数6次，波长为1（589.3），开始测定，得出6组数据并计算平均值。
步骤h，熔点的测定；
将样品倒入不同的坩埚中，用不锈钢电热板加热结晶，将待测液完全蒸发结晶，分别放入特制毛细管中，置入熔点仪中分别测量熔点，分别记录融化时温度。
结果分析：
1. 5-羟色胺薄层色谱分析：
将5-羟色胺标准品溶液、果皮样品溶液，使用层析板展开，以正丁醇：冰醋酸：水=6:3:1(v/v)为展开剂，使用0.2％茚三酮乙醇溶液显色后，呈现出淡黄色，在紫外光下，如图2，果皮样品TLC图像展开效果良好，出现2个色谱斑点，且图像清晰。斑点A与斑点B在层析板上的位置一致，基本判断色谱斑点B为沙棘果皮样品溶液中神经酸单体。斑点C显色后与斑点B颜色相同，其位置和极性与斑点B也比较接近，分析可能是神经酸衍生物或其它类似物等。
将5-羟色胺标准品溶液、沙棘果枝样品溶液，使用层析板展开，以正丁醇：冰醋酸：水=7:1:2(v/v)展开剂，使用0.2％茚三酮乙醇溶液显色后，斑点A与斑点B呈现出淡黄色，在紫外光下，如图3，果枝样品TLC图像展开效果良好，出现2个色谱斑点，且图像清晰。斑点A与B在薄层板上位置一致，基本判断色谱斑点B为沙棘果枝样液中神经酸单体。斑点C显色后呈红色，可能是氨基酸或含胺的化合物等。
2. 5-羟色胺质谱检测分析：
5-羟色胺标准品的质谱检测分析：
如图4，5-羟色胺标准品进入质谱仪后被打碎成许多碎片，其准离子峰m/z176.5，与现有技术所知的相对分子质量为176.22相差不大。
沙棘果皮样品的质谱检测分析：
如图5，沙棘果皮样品的准离子峰m/z174.5，对比图4，与前测得的5-羟色胺标准品准离子峰m/z176.5接近。满足讨论范围内最强峰、氮律、碎片丢失等三个必要条件，根据图5，相邻的碎片离子峰m/z156.4，推测为被轰掉一个H2O后的碎片离子峰，即[M-H2O]，符合正常的碎片丢失。
沙枝果皮样品的质谱检测分析：
由图6，沙棘果枝样品准离子峰m/z174.4，对比图4，与前测得的5-羟色胺标准品准离子峰m/z176.5接近。其满足讨论范围内最强峰、氮律、碎片丢失等三个必要条件，由图6，相邻的碎片离子峰m/z157.1，所以被轰掉一个NH3后的碎片离子峰，即[M-NH3]，符合正常的碎片丢失。
对比沙棘果皮样品、沙棘果枝样品与5-羟色胺标准品质谱图可知，其准离子峰m/z174.5和m/z174.4与标准品m/z176.5相差不大，认定沙棘果皮样品、果枝样品中含有5-羟色胺类物质。
3. 5-羟色胺红外检测分析：
由图7和图8可以看出，沙棘果皮样品与5-羟色胺标准品红外光谱图的波峰范围在2974mm（烷烃类，CH伸，反称）、2885mm（烷烃类，CH伸，反称）、1416mm（OH弯，面内）、1380mm（酚类OH弯，面内）、1087mm（C-O伸）、1046mm（仲醇饱和，OH弯，面内）、880mm（脂环酮）900mm（OH弯，面外）都具有特征峰。
由图7和图9可以看出，沙棘果枝样品与5-羟色胺标准品红外光谱图的峰值在2974mm、2885mm、1680mm、1416mm、1380mm、1087mm、1045mm、880mm处。
同沙棘果皮样品波峰范围对比，并结合图10，发现沙棘果皮样品、沙棘果枝样品都具有与5-羟色胺特征波峰，确定沙棘提取液中可能存在5-羟基色氨酸。
4. 反射扫描测定含量及提取率：
TLC反射扫描法测出样品含量的三组数据分别为0.0199mg/mL、0.0200mg/mL、0.0204mg/mL，测得平均值得到样品含量为0.0201mg/mL。实验前沙棘果皮质量为10g，乙醇浸提量为9.42g，蒸干所得残渣质量为0.33g，通过提取率公式测得，沙棘中5-羟色胺的粗提取率为2.5％。
5. 5-羟色胺的旋光度、比旋光度分析：
参考表1、表2，测得沙棘果皮样品的旋光度为-31.7°，沙棘果枝样品的旋光度为-31.2°，测得沙棘果皮样品的比旋光度为-32.4°，沙棘果枝样品的比旋光度为-31.4°，沙棘果皮样品、沙棘果枝样品的旋光度、比旋光度基本一致。
表1 旋光度
次数 1 2 3 4 5 6 平均值
果皮 -30.3° -30.3° -29.8° -29.6° -34.5° -33.0° -31.7°
果枝 -29.3° -35.1° -30.0° -29.8° -30.8° -32.0° -31.2°
表2 比旋光度
次数 1 2 3 4 5 6 平均值
果皮 -32.1° -33.1° -32.4° -31.8° -32.8° -32.0 -32.4°
果枝 -32.0° -30.5° -31.2° -30.7° -32.4° -31.4 -31.4°
6. 5-羟色胺的熔点分析：
将色谱斑点溶解后进行多次过滤，放入特质的毛细管中，使用熔点测定仪分别测出熔点，其中沙棘果皮样品熔点为292℃，沙棘果枝样品熔点为266℃。
结论：
本发明是以沙棘果皮、果枝为原料，加入料液比为1:20(w/v)的无水乙醇，于微波超声波组合萃取仪处理，获得从沙棘果皮与枝条提取液。以正丁醇：冰醋酸：水（6:3:1,v/v）和正丁醇：冰醋酸：水（7:1:2,v/v）为展开剂，经薄层分离纯化后，展开效果良好，图像清晰，得到清晰的斑点，与5-羟色胺标准品所展开的斑点对比之后发现沙棘果皮样品溶液、沙棘果枝样品溶液和5-羟色胺标准品有位于同一高度的斑点。果皮样品在174.5处出现准分子离子峰，且在156.4含有符合碎片离子丢失的基峰；果枝样品在174.4处出现准分子离子峰，且在157.1含有符合碎片离子丢失的基峰。对比红外光谱图，5-羟色胺标准品波峰范围1626.9000~1572.4100，与果皮和果枝样品波峰范围1652.9300~1599.2500基本相符。TLC反射扫描法测出样品含量为0.02mg/mL，测得提取率为2.5％。沙棘果皮和果枝样品的旋光度、比旋光度和熔点分别为-31.7°、-32.4°，-31.2°、-31.4°和292℃、266℃。可证明了从沙棘果皮与枝条提取的物质为5-羟色胺。
本发明是以沙棘果皮、果枝为原料，采用集分离、纯化和检测于一体的TLC-CMS技术，省去了从层析板上手动刮点、萃取、重组，在质谱上注射分析，耗时耗力获取质谱图的过程。Plate ExpressTM技术可直接从TLC薄层板上获取质谱图，不经过样品前处理，可快速从复杂混合物中获得目标物分子质量信息，并对其进行鉴定。采用回流法结合微波超声波组合萃取仪辅助处理从沙棘中获得5-羟色胺提取液，再经过质谱仪检测，红外光谱仪检测，使用自动旋光仪，熔点仪等进行检验。提取率高，分离效果较好，纯度高，结果准确，是一种有效的提取沙棘中5-羟色胺的方法。

Claims (3)

1.一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，其特征在于，以沙棘果皮、果枝为原料，采用超声波微波萃取对5-羟色胺进行粗提取，经薄层层析法分离，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，测定旋光度、比旋光度和熔点；具体为：以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，离心过滤，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合萃取浓缩，加乙酸乙酯溶解，充分溶解后加入超纯水，分液，取乙酸乙酯相浓缩至干，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，分别获得果皮样品溶液、果枝样品溶液，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，蒸发结晶测定熔点。
2.根据权利要求1所述的一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，其特征在于，该具体过程为：
步骤a，以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，取粉末分别加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，超声波功率恒定，获得提取液，以5000r/min离心，过滤，重复3次，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合后萃取，取甲醇相浓缩至固态，乙酸乙酯溶解，待充分溶解后再加入超纯水，待分液取乙酸乙酯相浓缩至干，获得5-羟色胺衍生物，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，备用；
步骤b，L-5-羟色胺标准品加乙醇溶解，定容，充分溶解后得到0.02mg/mL的L-5-羟色胺标准品溶液，并将其置于2～4℃的冰箱中保存备用；
步骤c，将层析板加热活化并冷却后，吸取样液，均匀点样，以正丁醇：冰醋酸：水=6:3:1(v/v)为沙棘果皮样品的展开剂，以正丁醇：冰醋酸：水=7:1:2(v/v)为沙棘果枝样品的展开剂，展开剂润洗倒入层析缸，保温20min，上行展开，待展开剂前沿距层析板顶端0.8～1.2cm处时，取出晾干，选取0.2％茚三酮乙醇溶液为显色剂，喷在晾干的层析板上，105℃保持4～5min，待其显色后取出，放入薄层色谱成像系统，于紫外波长254nm下，调节相应的曝光时间，光圈值，曝光率，观察层析情况，系统拍照，并标志；
步骤d，分别吸取25uL5-羟色胺标准品溶液、样品溶液，点样，利用TLC反射扫描法测得3组样品中5-羟色胺的含量，并计算提取率；
步骤e，将层析板放入TLC-CMS接口中，激光对准斑点中心处，各选样品和标准品色谱斑点进行检测，比对确定样品的分子信息；
步骤f，待测斑点加入无水乙醇溶解，过滤取滤液，打开傅里叶红外光谱仪选择相应的工作界面，用擦镜纸擦干净点样中心处，测试背景，待测液点于中心处，测试样品，对谱图界面出现的红外谱图进行处理分析；
步骤g，取待测液分别测定旋光度和比旋光度，记录数据并计算平均值；
步骤h，将待测液加热蒸发至样品结晶，测量熔点。
3.根据权利要求2所述的一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，其特征在于，所述步骤d中TLC反射扫描时，5-羟色胺标准品溶液点样数量为2，点样量为4uL、5uL，果皮样品溶液点样数量为3，点样量为3uL。
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