CN109182214A - 用于烟草青枯病防治的增效生防菌及其制备、使用方法 - Google Patents

用于烟草青枯病防治的增效生防菌及其制备、使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于烟草青枯病防治的增效生防菌及其制备、使用方法。所述增效生防菌按照重量份数计，包括米糠40～50份、玉米芯粉44～46份和枯草芽孢杆菌6～14份，该增效生防菌可提高芽孢杆菌的成活率及其在土壤中的定殖，植烟土壤中青枯菌数量明显减少，发病程度明显减轻，适宜大面积推广。基于所述增效生防菌，本发明还公开了其制备方法和使用方法，所述制备方法操作简单，易被广大农民掌握；使用时更是安全友好，效果显著。

Description

用于烟草青枯病防治的增效生防菌及其制备、使用方法
技术领域
本发明属于烟草青枯病生物防治技术领域，具体涉及一种用于烟草青枯病防治的增效生防菌及其制备、使用方法。
背景技术
由劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的细菌性青枯病是烟草(Nicotianatabacum)上最严重的土传病害。在诸多防治烟草青枯病的措施中，由于生物防治具有无毒、无害、无污染、不易产生抗药性等优点，越来越受到人们的重视。
在生物防治中，针对青枯病已分离筛选获得了一些高效拮抗微生物，取得了一定的防治成效，其中以芽孢杆菌的防治作用较为显著。芽孢杆菌通过成功定殖在植物根际、体表或体内，同病原菌竞争植物周围的营养、分泌抗菌物质抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，从而达到生防的目的。因此，芽孢杆菌在植物根际定殖能力的强弱是决定其生防效果的关键。然而，由于土壤和生态环境的复杂性，芽孢杆菌在田间应用时，往往不能很好地定殖和扩繁，从而降低甚至丧失应有的生防功能。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明一方面提供了一种用于烟草青枯病防治的增效生防菌，它能显著促进芽孢杆菌芽孢的快速萌发，有效控制烟草青枯病的发生与蔓延，促进芽孢杆菌在土壤中的定殖，从而提高芽孢杆菌对青枯病的防效。
本发明所述用于烟草青枯病防治的增效生防菌按照重量份数计，包括米糠40～50份、玉米芯粉44～46份和枯草芽孢杆菌6～14份。
优选地，所述用于烟草青枯病防治的增效生防菌按照重量份数计，由50份米糠、44份玉米芯粉和6份枯草芽孢杆菌组成；或者由45份米糠、45份玉米芯粉和10份枯草芽孢杆菌组成，或者由40份米糠、46份玉米芯粉和14份枯草芽孢杆菌组成。
优选地，所述枯草芽孢杆菌中活芽孢数不低于1×108cfu/g；所述玉米芯粉的细度小于0.2mm。
另一方面，本发明提供了一种前述用于烟草青枯病防治的增效生防菌的制备方法，其包括以下步骤，
(1)将米糠和玉米芯粉进行灭菌；
(2)将灭菌后的米糠和玉米芯粉与枯草芽孢杆菌进行混合，得到物料I；
(3)将混合物I与水拌匀，得到物料II；
(4)将物料II进行发酵，得到增效生防菌。
优选地，所述灭菌为湿热灭菌，灭菌条件为0.1MPa、120℃，20min～40min。
优选地，所述物料I与水的重量比为3:1。
优选地，所述发酵的发酵温度为20℃～25℃、发酵时间为20天～25天。
又一方面，本发明提供了一种前述用于烟草青枯病防治的增效生防菌的使用方法，所述增效生防菌按照20公斤/亩的用量于烟草移栽阶段和移栽后40天各围兜施用一次。
优选地，所述增效生防菌施用时需先与培嫁土混匀制成增效生防菌培嫁土混合物，其中所述增效生防菌与培嫁土的重量比为1:25～1:30。
优选地，所述每株烟苗每次围兜施用增效生防菌培嫁土混合物0.25kg～0.30kg。
本发明的有益效果：
1、本发明所述用于烟草青枯病防治的增效生防菌可显著促进芽孢杆菌芽孢的快速萌发，提高芽孢杆菌数量。
2、本发明所述用于烟草青枯病防治的增效生防菌对烟草青枯病的防效高于70％，明显高于药剂对照(54％左右)；根际土壤青枯菌数量极显著低于药剂对照。
3、本发明用于制备增效生防菌的材料简单易得、成本低廉，其中枯草芽孢杆菌为市售产品，活芽孢数不低于1×108cfu/g。米糠是稻谷加工的副产品，玉米芯粉由玉米芯粉碎后得到。
4、本发明所述增效生防菌是将米糠、玉米芯、枯草芽孢杆菌按照一定比例复配后发酵得到，操作方便，制备简单，易被广大农民掌握。
5、本发明对人畜无毒、对环境安全，米糠、玉米芯粉作为芽孢杆菌的营养介质，可提高枯草芽孢杆菌的成活率及其在土壤中的定殖。与常规施用芽孢杆菌相比，施用本发明后土壤中芽孢杆菌的成活率提高1.31～2.06倍。
附图说明
图1为本发明实施例1、实施例2、实施例3和对照1的芽孢杆菌数量对比图；
图2为本发明实施例1、实施例2、实施例3、对照1和对照2的烟株根际土壤中青枯菌数量对比图；
图3为本发明实施例1、实施例2、实施例3和对照1的烟苗移栽后50天时土壤中芽孢杆菌成活率对比图；
图中：不同大写字母表示各实施例间的差异达到极显著水平(p≤0.01)。
具体实施方式
以下结合附图详细说明本发明的实施情况，但它们不构成对本发明的限定，仅作举例而已。同时通过具体实施例对本发明作进一步的详细描述。
实施例1增效生防菌(A)的制备和使用
1.1增效生防菌(A)的制备
将玉米芯粉碎为细度小于0.2mm的玉米芯粉。称量7.50kg米糠和6.60kg玉米芯粉，并将它们置于高压蒸汽灭菌锅内进行湿热灭菌，灭菌条件为0.1MPa，120℃，20min。灭菌后，将米糠和玉米芯粉与0.90kg枯草芽孢杆菌混匀，得到物料I。将物料I与水按照重量比3:1的比例搅拌至均匀度达到95％，得到物料II。将物料II盖上薄膜，在22.5℃下发酵22天，得到增效生防菌(A)。
1.2增效生防菌(A)的使用
1.2.1烟草移栽阶段时施用
将增效生防菌(20kg/亩)与陪嫁土按照1：25～1：30的比例混匀制成增效生防菌培嫁土混合物，于烟草移栽时围兜施用，每株烟苗围兜施用增效生防菌培嫁土混合物0.25～0.30kg。
1.2.2烟草移栽后40天时施用
于烟草移栽后40天时进行增效生防菌培嫁土混合物的围兜施用，每株烟株围兜施用0.25～0.30kg。
实施例2增效生防菌(B)的制备
1.1增效生防菌(B)的制备
将玉米芯粉碎为细度小于0.2mm的玉米芯粉。称量6.75kg米糠和6.75kg玉米芯粉，并将它们置于高压蒸汽灭菌锅内进行湿热灭菌，灭菌条件为0.1MPa，120℃，30min。灭菌后，将米糠和玉米芯粉与1.50kg枯草芽孢杆菌混匀，得到物料I。将物料I与水按照重量比3:1的比例搅拌至均匀度达到95％，得到物料II。将物料II盖上薄膜，在25℃下发酵20天，得到增效生防菌(B)。
1.2增效生防菌(B)的使用
1.2.1烟草移栽阶段时施用
将增效生防菌(20kg/亩)与陪嫁土按照1：25～1：30的比例混匀制成增效生防菌培嫁土混合物，于烟草移栽时围兜施用，每株苗围兜施用增效生防菌培嫁土混合物0.25～0.30kg。
1.2.2烟草移栽后40天时施用
于烟草移栽后40天时进行增效生防菌培嫁土混合物的围兜施用，每株植株围兜施用0.25～0.30kg。
实施例3增效生防菌(C)的制备
1.1增效生防菌(C)的制备
将玉米芯粉碎为细度小于0.2mm的玉米芯粉。称量6.00kg米糠和6.90kg玉米芯粉，并将它们置于高压蒸汽灭菌锅内进行湿热灭菌，灭菌条件为0.1MPa，120℃，40min。灭菌后，将米糠和玉米芯粉与2.10kg枯草芽孢杆菌混匀，得到物料I。将物料I与水按照重量比3:1的比例搅拌至均匀度达到95％，得到物料II。将物料II盖上薄膜，在20℃下发酵25天，得到增效生防菌(C)。
1.2增效生防菌(C)的使用
1.2.1烟草移栽阶段时施用
将增效生防菌(20kg/亩)与陪嫁土按照1：25～1：30的比例混匀制成增效生防菌培嫁土混合物，于烟草移栽时围兜施用，每株苗围兜施用增效生防菌培嫁土混合物0.25～0.30kg。
1.2.2烟草移栽后40天时施用于烟草移栽后40天时进行增效生防菌培嫁土混合物的围兜施用，每株植株围兜施用0.25kg～0.30kg。
实施例4对照1和对照2的制备
4.1对照1的制备
烟叶移栽时，采用陪嫁土围兜(0.25kg/株～0.30kg/株)后，施用芽孢杆菌菌剂0.75kg/亩，加水稀释后灌根；烟叶移栽后40天同样采用相同用量的陪嫁土围兜和施用相同用量的芽孢杆菌菌剂灌根。
4.2对照2的制备
烟叶移栽时和移栽后40天陪嫁土围兜后用清水灌根。
实施例1～实施例4的防控效果测试
本发明人对上述实施例中所述的增效生防菌对烟草青枯病的防控效果进行了测定。试验地点为湖北省恩施州宣恩县椒园镇凉风村(海拔高度890m)。试验区连续种烟20年，烟草青枯病发生严重，种植烟草品种为云烟87。试验采用大区对比的方式，每区种植烤烟200株。
本发明人对上述实施例和2个对照进行了如下指标测定：
(1)在各实施例中增效生防菌制备完成后，在每个实施例和对照1中采取随机抽样的方式抽取三个样品，采用平板计数法测定实施例中芽孢杆菌数量，具体结果如图1所示。
从图1可以看出，实施例1、实施例2和实施例3的芽孢杆菌数量极显著高于对照1，是对照1的1.79～3.04倍。可见，采取本发明实施例1至3所述方法制备的增效生防菌可显著促进芽孢杆菌芽孢的快速萌发，提高芽孢杆菌数量，其中以实施例2的生防菌成活率最高。
(2)在烟草青枯病初发时开始进行病害调查，此后每隔30天调查一次大区内所有烟株青枯病发生情况，计算防治效果。实施例1至3、对照1对烟草青枯病防治效果见表1。
表1实施例对烟草青枯病的大田防治效果
从表1可以看出，在烟草大田生长期内，共进行病害调查3次。可以看出，与对照2(清水)相比，本发明中的实施例对烟草青枯病的发生均具有较好的防治效果，烟叶移栽后不同时期防效均高于70％，其中以实施例2的防效最高(均高于80％)；而对照1的防效为54％左右，明显低于本发明中的实施例。
(3)于最后一次调查(移栽后108天)时，在每个大区内采用五点取样法，采集各实施例和对照中烟株根际土壤，测定土壤中青枯菌数量，具体结果如图2所示。
从图2可以看出，施用本发明中的实施例1至3后，根际土壤青枯菌数量极显著低于对照1和对照2，较对照2降低87.20％～90.72％，较对照1降低72.40％～79.99％。可见，采取本发明实施例1至3所述方法制备的增效生防菌可明显降低土壤中青枯菌数量，其中以实施例2的根际土壤中青枯菌数量最低。
(4)对芽孢杆菌进行分子标记，于最后一次调查(移栽后108天)时，在本发明中的实施例和对照1的每个大区内采用五点取样法，采集烟株根际土壤，采用显微镜荧光检测法测定芽孢杆菌数量，计算芽孢杆菌成活率，具体结果如图3所示。
从图3中可以看出，施用本发明中的实施例1至3后，芽孢杆菌成活率极显著高于对照1，是对照1的1.31～2.06倍，表明采用本发明实施例1至3所述方法制备的增效生防菌可显著提高芽孢杆菌施入土壤后的成活率，增强其在土壤中的定殖，其中以实施例2的生防菌成活率最高。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.用于烟草青枯病防治的增效生防菌，其特征在于：按照重量份数计，包括米糠40～50份、玉米芯粉44～46份和枯草芽孢杆菌6～14份。
2.根据权利要求1所述的用于烟草青枯病防治的增效生防菌，其特征在于：按照重量份数计，由50份米糠、44份玉米芯粉和6份枯草芽孢杆菌组成，或者由45份米糠、45份玉米芯粉和10份枯草芽孢杆菌组成，或者由40份米糠、46份玉米芯粉和14份枯草芽孢杆菌组成。
3.根据权利要求1或2所述的用于烟草青枯病防治的增效生防菌，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌中活芽孢数不低于1×108cfu/g；所述玉米芯粉的细度小于0.2mm。
4.权利要求1～3中任一项所述用于烟草青枯病防治的增效生防菌的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，
(1)将米糠和玉米芯粉进行灭菌；
(2)将灭菌后的米糠和玉米芯粉与枯草芽孢杆菌进行混合，得到物料I；
(3)将物料I与水拌匀，得到物料II；
(4)将物料II进行发酵，得到增效生防菌。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述灭菌为湿热灭菌，灭菌条件为0.1MPa、120℃，20min～40min。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述物料I与水的重量比为3:1。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述发酵的发酵温度为20℃～25℃、发酵时间为20天～25天。
8.权利要求1～3中任一项所述用于烟草青枯病防治的增效生防菌的使用方法，其特征在于：所述增效生防菌按照20公斤/亩的用量于烟草移栽阶段和移栽后40天各围兜施用一次。
9.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于：所述增效生防菌施用时需先与培嫁土混匀制成增效生防菌培嫁土混合物，其中所述增效生防菌与培嫁土的重量比为1:25～1:30。
10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征在于：每株烟苗每次围兜施用增效生防菌培嫁土混合物0.25kg～0.30kg。
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