CN109170438A - 一种富含γ-氨基丁酸的藜麦发酵饮料及其制备方法 - Google Patents
一种富含γ-氨基丁酸的藜麦发酵饮料及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种富含γ‑氨基丁酸的藜麦发酵饮料及其制备方法。包括:将藜麦种子磨粉,过筛,得到藜麦粉;将藜麦粉与水混合,磨浆,将经过磨浆的藜麦汁糊化、液化、糖化,得到酶解液;将藜麦酶解液灭菌,接种短乳杆菌和乳酸乳球菌,保温发酵,得到藜麦发酵液;对所述藜麦发酵液进行调味,即得。本发明将藜麦与益生菌发酵相结合,加工出方便携带、有益生菌活性的藜麦发酵饮品,营养健康、风味独特。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域,具体涉及一种富含γ-氨基丁酸的藜麦发酵饮料及其制备方法。
背景技术
藜麦的营养价值丰富,藜麦中蛋白质的含量平均为16%(最高可达22%),富含人体必需的8种氨基酸和婴幼儿必需的1种氨基酸,尤其值得一提的是一般谷物中缺乏的赖氨酸含量很高(赖氨酸是人体组织生长及修复所必需的)。藜麦蛋白质的品质和含量可以与脱脂奶粉及肉类媲美,是素食者的最佳选择,同时也是大米等谷物的优质替代品。藜麦比其他谷物含有更多的钙、镁、铁、铜、锌,尤其铁的含量很高。磷和镁位于藜麦籽实胚中,钙和钾位于果皮中,藜麦籽实的矿质元素含量高于燕麦、大麦,尤其钾、镁和钙含量较高,100g藜麦籽实中所含的铁、铜、镁和锰,可以满足婴儿和成人每天对矿质元素的需要,100g藜麦籽实中磷和锌的量足以满足儿童每日需求。藜麦富含维生素B1、叶酸和维生素C,是良好的维生素原料。
γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,简称GABA)是一种四碳原子组成的非蛋白质氨基酸,主要由谷氨酸经谷氨酸脱羧酶(GAD)催化转化而来。其在哺乳动物中枢神经系统中作为抑制性神经递质、参与脑循环生理活动,具有降血压、抗心律失常、利尿、镇痛和缓解焦虑等功能。还有研究发现,GABA与创伤后应激障碍(PTSD)、精神分裂症、肌纤维痛和其他中枢性疼痛综合征存在密切关联,并且GABA功能障碍与躁郁症的产生存在联系。此外,有研究指出,GABA能改善氧化应激与甲状腺激素的功能,并减轻体重,可控制肥胖。
目前,生物化学途径富集谷物GABA的方法主要有植物代谢法和微生物发酵法,在微生物中,GABA代谢是通过GABA支路完成的,利用微生物体内较高的GAD活性,将谷氨酸脱羧形成GABA,GABA进入下游的分解过程生成琥珀酸半醛、琥珀酸参与微生物的生理代谢。微生物富集GABA就是通过对培养基的优化以及菌株的改良使其具有较高的GAD活性,谷氨酸经谷氨酸脱羧酶催化转化生成GABA,增加GABA合成率,降低分解率来实现的。目前,大量研究已证明GAD在原核到真核微生物中都有存在,此外,利用微生物中GAD脱羧形成GABA不受资源、环境和空间的限制,与其他方法相比具有显著的优势。
发明内容
本发明的目的是提供一种以藜麦为原料经过益生菌发酵制备得到的富含γ-氨基丁酸的饮料。本发明研制出一种新的藜麦发酵饮品,原料丰富,低糖低脂,口感香浓顺滑,更加适宜于大众人群的需求。
本发明所提供的富含γ-氨基丁酸的藜麦发酵饮料通过包括下述步骤的方法制备得到:
(1)原料预处理:将藜麦种子磨粉,过筛,得到藜麦粉;
(2)酶解液的制备:将藜麦粉与水混合,磨浆,将经过磨浆的藜麦汁糊化、液化、糖化,得到酶解液;
(3)发酵液的制备:将藜麦酶解液灭菌,接种短乳杆菌和乳酸乳球菌,保温发酵,得到藜麦发酵液;
(4)对所述藜麦发酵液进行调味,得到藜麦发酵饮料。
上述方法步骤(1)中,所述藜麦种子为新鲜、饱满的藜麦种子。
所述过筛为过60目筛。
步骤(2)中,所述水可为45-55℃的蒸馏水。
藜麦粉与水的配比可为1:10-15g/mL;具体可为1:12g/mL。
所述磨浆的时间可为5min。
所述糊化的操作为:将经过磨浆的藜麦汁于80℃糊化30min。
所述液化的操作为:将经过糊化的藜麦汁于65℃温度下,加入α-淀粉酶8U/g,液化40min。
所述糖化的操作为:将经过液化的藜麦汁于65℃温度下,加入β-淀粉酶1400U/g,糖化85min。
步骤(3)中,所述灭菌为:将发酵液于121℃灭菌10min。
所述短乳杆菌具体可为:短乳杆菌(Lactobacillus breris)CGMCC 1.214;
所述乳酸乳球菌具体可为:乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)CGMCC 1.62。
所述短乳杆菌和乳酸乳球菌按体积比3∶1-1∶3(优选为1∶1-1∶2,更优选为1∶1),以3%-4%(优选为3.6%)(基于总发酵液体积)的接种量接种。
所述保温发酵的操作为:在30-34℃温度下发酵培养20-24h,具体可为在31℃温度下发酵培养22h。
步骤(4)中,所述调味的操作为:先将果胶、CMC和单甘脂作为稳定剂,添加木糖醇调节口味,混合均匀,灭菌,得到配料液;然后将藜麦发酵液和配料液混合,加入柠檬酸调节酸度,均质,得到藜麦发酵饮料。
其中,果胶的添加量可为:0.2-0.3%(基于藜麦发酵液的体积,下同)、CMC的添加量可为:0.15-0.25%、单甘脂的添加量可为:0.05-0.1%;木糖醇的添加量可为:1%-2%。
由上述方法制备得到的藜麦发酵饮料也属于本发明的保护范围。
所述藜麦发酵饮料的γ-氨基丁酸含量为:0.681mg/mL。
本发明所述的藜麦乳酸菌饮料在常规冷藏条件下保存,最适保存温度为2~8℃。
本发明为益生菌发酵藜麦汁富集GABA的最优发酵条件,以藜麦汁为原料,选取产GABA含量较高且活性较好菌种,进行配比,进一步考察接菌量、发酵温度、发酵时间对藜麦发酵液中GABA含量及活菌数的影响,用响应面法优化藜麦发酵液中GABA含量和活菌数的最优条件,为藜麦功能性食品研究提供新的理论依据。
本发明将藜麦与益生菌发酵相结合,加工出方便携带、有益生菌活性的藜麦发酵饮品,营养健康、风味独特。
附图说明
图1为不同菌种对GABA产量的影响。
图2为不同菌种对活菌数的影响。
图3为菌种比例对GABA产量的影响。
图4为菌种比例对活菌数的影响。
图5为接菌量对GABA含量及活菌数的影响。
图6为发酵温度对GABA含量及活菌数的影响。
图7为发酵时间对GABA含量及活菌数的影响。
图8为三因素交互作用对GABA含量的影响,其中,a为接菌量与发酵温度对GABA含量影响的响应面图及等高线图;b为接菌量与发酵时间对GABA含量影响的响应面图及等高线图;c为发酵温度与发酵时间对GABA含量影响的响应面图及等高线图。
图9三因素交互作用对活菌数的影响,其中,a为接菌量与发酵温度对活菌数影响的响应面图及等高线图;b为接菌量与发酵时间对活菌数影响的响应面图及等高线图;c为发酵温度与发酵时间对活菌数影响的响应面图及等高线图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明,但本发明并不局限于此。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法;下述实施例中所用的试剂、材料等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1
1材料与方法
1.1材料与试剂
藜麦由河北张家口农科院提供;
短乳杆菌(Lactobacillus breris)CGMCC 1.214;乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)CGMCC 1.62;植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)ATCC14917;均为中国普通微生物菌种保藏中心;GABA标准品美国Sigma公司;其余试剂均为分析纯。
MRS培养基:酪蛋白胨10.0g;牛肉膏10.0g;酵母提取物10.0g;葡萄糖5.0g;乙酸钠5.0g;柠檬酸三胺2.0g;吐温80 1.0g;K2HPO4 2.0g;MgSO4·7H2O 0.2g;MnSO4·H20 0.05g;琼脂15.0g;蒸馏水1.0L;pH6.8。
1.2仪器与设备
BSA224S型电子分析天平;德尔CG001干磨机;HH-S数显恒温水浴锅;HZS-H水浴振荡器;SW-CJ-1D单人单面垂直净化工作台;Blue pard生化培养箱;立式压力蒸汽灭菌锅;Shimadzu LC-20AD液相色谱;DH-101型电热恒温鼓风干燥箱。
1.3实验方法
1.3.1藜麦发酵液的工艺流程
藜麦种子→磨粉、过60目筛→磨浆→糊化→液化、糖化→灭菌→冷却→接菌→保温培养→成品
1.3.2工艺操作要点
藜麦种子:要求新鲜、饱满。
磨浆:用藜麦粉与50℃蒸馏水以1∶12g/mL比例混合,磨浆5min。
糊化:将经过磨浆的藜麦汁置于80℃水浴锅中糊化30min。
液化:将经过糊化的藜麦汁置于65℃水浴锅中,加入α-淀粉酶8U/g,液化40min。以DE值为指标得到最佳的液化工艺,在此条件下的到的DE值达到19.87%。
糖化:将经过液化的藜麦汁置于65℃水浴锅中,加入β-淀粉酶1400U/g,液化85min。以DE值为指标得到最佳的液化工艺,在此条件下的到的DE值达到45.92%。
灭菌、冷却:将经过液化糖化的藜麦酶解液121℃灭菌10min,待冷却。
接种:将短乳杆菌和乳酸乳球菌按体积比1∶1,以2%的接种量接种。
保温培养:在32℃恒温恒湿培养箱中进行发酵培养,培养时间24h。
1.3.3指标测定
1.3.3.1GABA测定
柱前衍生化处理:将样品置于50mL离心管中离心,准确移取上清液1ml置于2mL小离心管中,加入50μL的邻苯二甲醛(o-phthaldialdehyde,OPA)衍生液充分振荡,静置5min,用0.22μm有机滤膜过滤,待测。
色谱条件:根据QB/T 4587-2013采用OPA柱前衍生紫外检测高效液相色谱法测定藜麦发酵液中GABA含量。色谱柱:TC-C18(150mm×4.6mm,5μm);流动相:流动相A为0.02mmol/L乙酸钠溶液,流动相B为纯乙腈;流速:1.0mL/min;检测波长:338nm;柱温:30℃;进样量:10μL;梯度洗脱程序如表1所示。
表1梯度洗脱程序
标准曲线的绘制:准确配制0.0、10.0、30.0、50.0、100.0、200.0mg/L的GABA标准溶液,分别用OPA衍生后进行色谱分析,根据色谱图中峰面积计算GABA含量,实验重复3次,计算平均值,以色谱图中峰面积为纵坐标,以待测样品质量浓度为横坐标绘制标准曲线。回归方程为y=22411x+76112(R2=0.9962),数据显示曲线拟合性良好。
1.3.3.2活菌数的测定
将发酵菌株接种到藜麦酶解液中,发酵到一定时间取1.0mL菌悬液用9.0mL灭菌生理盐水稀释至适当倍数后,采用MRS固体培养基,37℃需氧培养48h,计算其活菌数。
1.3.4单因素试验
以GABA含量和活菌数为指标,考察接种量(1%、2%、3%、4%、5%)、发酵温度(28℃、30℃、32℃、34℃、36℃)和发酵时间(12h、16h、20h、24h、28h)3个因素对发酵效果的影响。采用控制变量法,其中发酵的初始条件为接种量2%、发酵温度30℃、发酵时间24h。
1.3.5响应面优化试验
基于单因素试验结果,依据Box-Behnken试验设计原理,考察因素之间的交互作用并得到最佳发酵工艺条件。以GABA含量和活菌数为响应值,设计三因素三水平的试验见表2。
表2响应面试验因素及水平
1.4数据处理
每组实验重复3次,数据均以平均值表示。实验图表采用Excel 2007绘制,响应面试验设计与分析采用Design-Expert 8.0软件。
2结果与分析
2.1菌种选择
图1为不同菌种对GABA产量的影响。
由图1可知,在48h内,用单一菌种发酵产GABA,GABA含量均为上升趋势,在第24h时达到平稳状态。单一菌种发酵产GABA的能力排序为短乳杆菌>乳酸乳球菌>植物乳杆菌,从产GABA能力上来看,植物乳杆菌与其他两菌种相比明显不占优势,考虑放弃使用。
图2为不同菌种对活菌数的影响。
由图2可知,在48h内,活菌数均为先上升后下降的趋势,活菌数排序为短乳杆菌>乳酸乳球菌>植物乳杆菌,在12h菌达到活菌数最大值,在第24h三种菌种活菌数相近。
由此选择第24h时对短乳杆菌和乳酸乳球菌混合进行发酵。
2.2菌种比例选择
图3为菌种比例对GABA产量的影响。
由图3可知,对短乳杆菌和乳酸乳球菌进行不同比例混合发酵后,发现混合发酵比单一发酵产GABA含量高,在短乳杆菌:乳酸乳球菌在1:1和2:1含量达到最高。。其原因可能为短乳杆菌可将葡萄糖转化为果糖,乳酸乳球菌可用果糖继续发酵,使发酵更充分,产生更多的GABA。
图4为菌种比例对活菌数的影响。
由图4可知,混合菌种发酵不仅提高GABA产量,对活菌数也产生影响。混合菌种发酵比单一菌种发酵的活菌数高,在短乳杆菌:乳酸乳球菌1:1时,活菌数含量最高,验证两种菌互相影响,共同促进发酵的进行。综合菌种比例对两指标的影响,选择短乳杆菌与乳酸乳球菌比例为1:1进行后续发酵优化试验。
2.3单因素实验结果
2.3.1接菌量对发酵的影响
接菌量会影响发酵时间与发酵进程,合适的接菌量更利于发酵过程的进行。
图5为接菌量对GABA含量及活菌数的影响。
由图5可知,当接菌量≥2%时,发酵后活菌数较多,随着接菌量的增加,活菌数呈略向下趋势,说明过多的接菌量会对菌的生长有干扰作用。随着接菌量的增加,GABA含量呈不断上升趋势,当接菌量达3%之后,接菌量对GABA含量影响趋势减小。根据接菌量对GABA含量和活菌数的影响,选择接菌量为3%进行后续实验。
2.3.2发酵温度对发酵的影响
适当的发酵温度有利于发酵进行。
图6为发酵温度对GABA含量及活菌数的影响。
由图6可知,温度达到32℃时,活菌数含量最高,说明此温度为最适发酵条件,在此温度下GABA含量为最大,也可说明此温度下,益生菌生长状况最为良好。综合这两因素,选择发酵温度为32℃为最适发酵温度,进行后续实验。
2.3.3发酵时间对发酵的影响
图7为发酵时间对GABA含量及活菌数的影响。
由图7可知,GABA含量随是发酵时间的延长而逐渐增加,当发酵时间达20h时,上升幅度逐渐减少。而在12h至28h内活菌数呈不断下降趋势,这是由于菌群生长进入稳定期,繁殖速度不断下降所导致的。因此选择GABA含量较大且活菌数高的时刻作为发酵时间,因此选择第20h作为发酵时间进行后续实验。
2.4藜麦汁发酵条件响应面优化结果
2.4.1响应面实验设计与结果
为了确定藜麦芽发酵乳最佳发酵条件,选择接菌量、发酵温度与发酵时间3个因素,以GABA含量和活菌数为评价指标进行响应面回归分析,Box-Behnken试验设计及结果如表3所示。
表3响应面实验设计及结果
2.4.2回归方程及参数分析
利用Design-Expert 8.0软件对表的数据进行二次多元回归拟合,分别得到各个因素对样品GABA含量和活菌数两个指标的二次回归方程分别如下:
Y1=0.64+0.063A-0.023B+0.025C+2.250×10-3AB+0.013AC-0.024BC-0.030A2-0.029B2-0.036C2
Y2=9.47+0.23A-0.28B-0.53C-0.44AB+0.042AC-0.69BC-0.83A2-0.82B2+0.027C2
表4回归方程方差分析
注:*.P<0.05,差异显著;**.P<0.01,差异极其显著。
由表4可知,模型的PY1值<0.000 1、PY2=0.0002,表示该模型高度显著;失拟项PY1=0.7282>0.05、PY2=0.0637>0.05均为不显著,说明该回归模型预测值与实测值拟合度较好;该模型回归系数R2为98.99%、97.69%,校正后R2 Adj为97.69%、92.53%,表明模型拟合程度良好且试验误差较小,该模型成立,可以用此模型进行分析和预测[22]。模型方差分析显示BC、A2、B2、C2对发酵液中GABA含量有极显著影响(P<0.01),AC对发酵液中GABA含量有显著影响(P<0.01);AB、BC、A2、B2对发酵液中活菌数有极显著影响(P<0.05),其余均为影响不显著。根据F值大小判断各因素对两指标影响:影响发酵液中GABA含量因素主次为接菌量、发酵时间、发酵温度,影响发酵液中活菌数因素主次为发酵温度、发酵时间、接菌量。
2.4.3响应面优化及分析
2.4.3.1三因素交互作用对GABA含量的影响
由图8a可知,在发酵时间为20h时,当接菌量较少时,发酵温度对GABA含量影响较小,当接菌量较多时,发酵温度对GABA含量影响较大,当温度在31℃时,GABA含量达最大值。由图8b可知,当发酵温度为32℃时,随着接菌量和发酵时间的增加,GABA含量成上升的趋势。图8c中,当接菌量固定为3%时,发酵时间较短时,发酵温度对GABA含量影响较小,随着发酵时间的延长,发酵温度越低,GABA含量越高,当发酵温度为31℃,GABA含量最高。等高线图呈椭圆形,表明发酵温度和发酵时间交互作用显著。接菌量的增加,会使接种液中菌液浓度不断升高,物料得到充分快速的发酵,产生较多的GABA。同理,适宜的发酵温度会促进菌的发酵,产生更多的GABA。随着发酵时间的延长,有助于GABA的富集。
2.4.3.2三因素交互作用对活菌数的影响
如图9a所示,当发酵时间为20h时,活菌数随着接菌量和发酵温度的增加呈先增加后减小的趋势,两因素交互作用显著。从图9b中可以看出,当温度为32℃时,随时间增加,活菌数呈下降趋势;随着接菌量的加大,活菌数为先上升后下降。图9c中,当接菌量控制在3%时,随发酵温度上升,活菌数呈先上升后下降趋势;随发酵时间的延长,活菌数不断下降,响应面图较陡,说明发酵时间对活菌数影响较大。适宜的接菌量有助于菌的生长,过少会造成发酵不完全,过多会抑制菌的后期生长,从而影响活菌数;发酵时间过长,菌活性下降,活菌数减少。
2.4.3.3最佳发酵工艺条件的确定
通过Design-Expert 8.0软件分析,得到发酵最佳工艺条件为:在短乳杆菌:乳酸乳球菌=1:1的情况下,接菌量3.61%、发酵温度为30.86℃、发酵时间达22.12h,在该工艺条件下,藜麦汁发酵GABA含量理论值可达0.684mg/mL,活菌数可达9.27lg(CFU/mL)。考虑到试验实际操作,将最优工艺条件调整为:在短乳杆菌:乳酸乳球菌=1:1的情况下,接菌量3.6%、发酵温度为31.0℃、发酵时间为22h。为验证经调整后的最优发酵工艺条件可行性,经过3次平行试验,实际测得GABA含量为0.681mg/mL,活菌数为9.176lg(CFU/mL),其相对误差≤1%,证明该模型拟合度较高,具有使用价值。
3结论
以短乳杆菌和乳酸乳球菌对藜麦汁进行混合发酵,考察发酵后的GABA含量及活菌数的变化。结果表明:综合GABA含量和活菌数两指标,短乳杆菌:乳酸乳球菌=1:1为较优菌种比例。以此比例为条件,通过响应面试验得到乳酸菌发酵藜麦汁发酵最优条件为接菌量3.6%、发酵温度为31.0℃、发酵时间为22h,高效液相色谱法测得发酵液中GABA含量为0.681mg/mL,平板计数法测得活菌数为9.176lg(CFU/mL)。
实施例2、藜麦发酵饮料加工方法
原料预处理:筛选藜麦种子,去除霉变空壳,磨粉,过60目筛;
酶解液的制备:选适量的粉,按1:12料水比加入去离子水,在80℃糊化30min。添加α-淀粉酶8U/g,65℃,40min;添加糖化酶1300U/g,65℃,85min;
发酵液的制备:藜麦酶解液经过121℃灭菌10min,添加基于总发酵液体积3.6%的短乳杆菌Lactobacillus breris)CGMCC 1.214和乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)CGMCC1.62混合物(其中,短乳杆菌和乳酸乳球菌按体积比1∶1),在31℃恒温恒湿培养箱中进行发酵培养22h,获得藜麦发酵液;
调味:0.25%(基于藜麦发酵液的体积,下同)果胶、0.2%CMC、0.05%单甘脂作为稳定剂,添加2%木糖醇调节口味,121℃灭菌5s,冷却后得配料液;
将所得的藜麦发酵液和所得配料液均匀,加入柠檬酸调节酸度,均质,即得。
按照1.3.3.1GABA测定方法进行检测。
将所测藜麦发酵饮料的色谱峰积分面积代入标准曲线,计算得出γ-氨基丁酸含量,每个样品重复测定两次,计算平均值。
经计算,实施例2样品中γ-氨基丁酸的含量为0.681mg/mL。
Claims (9)
1.一种制备藜麦发酵饮料的方法,包括如下步骤:
(1)原料预处理:将藜麦种子磨粉,过筛,得到藜麦粉;
(2)酶解液的制备:将藜麦粉与水混合,磨浆,将经过磨浆的藜麦汁糊化、液化、糖化,得到酶解液;
(3)发酵液的制备:将藜麦酶解液灭菌,接种短乳杆菌和乳酸乳球菌,保温发酵,得到藜麦发酵液;
(4)对所述藜麦发酵液进行调味,得到藜麦发酵饮料。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述过筛为过60目筛;
步骤(2)中,所述水为45-55℃的蒸馏水;
藜麦粉与水的配比为1:10-15g/mL;
所述磨浆的时间为5min。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤(2)中,所述糊化的操作为:将经过磨浆的藜麦汁于80℃糊化30min;
所述液化的操作为:将经过糊化的藜麦汁于65℃温度下,加入α-淀粉酶8U/g,液化40min;
所述糖化的操作为:将经过液化的藜麦汁于65℃温度下,加入β-淀粉酶1400U/g,糖化85min。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:步骤(3)中,所述短乳杆菌为:短乳杆菌Lactobacillus breris CGMCC 1.214;
所述乳酸乳球菌为:乳酸乳球菌Lactococcus lactis CGMCC 1.62;
所述短乳杆菌和乳酸乳球菌按体积比3∶1-1∶3,以3%-4%的接种量接种。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其特征在于:所述保温发酵的操作为:在30-34℃温度下发酵培养20-24h。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其特征在于:步骤(4)中,所述调味的操作为:先将果胶、CMC和单甘脂作为稳定剂,添加木糖醇调节口味,混合均匀,灭菌,得到配料液;然后将藜麦发酵液和配料液混合,加入柠檬酸调节酸度,均质,得到藜麦发酵饮料。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:基于藜麦发酵液的体积,果胶的添加量为:0.2-0.3%、CMC的添加量为:0.15-0.25%、单甘脂的添加量为:0.05-0.1%;木糖醇的添加量为:1%-2%。
8.由权利要求1-7中任一项所述方法制备得到的藜麦发酵饮料。
9.根据权利要求9所述的藜麦发酵饮料,其特征在于:所述藜麦发酵饮料的γ-氨基丁酸含量为:0.681mg/mL。
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